Bộ giáo dục đào tạo Trường đại học bách khoa hµ néi Luận văn thạc sỹ khoa học Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc tế bào loài hải miên Gellius varius NGàNH: CÔNG NGHệ HOá HọC Mà số: Nguyễn Thị Kim Thuý Người hướng dẫn: ts Trần thu hương Hà nội 2007 Lời cảm ơn Luận văn thực Bộ môn Hoá Hữu cơ, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội phòng Xúc tác Hữu cơ, Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Trong suốt trình thực luận văn này, đà nhận giúp đỡ tận tình thầy cô, anh chị bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc, xin trân trọng gửi lời cảm ơn chân thành tới: TS Trần Thu Hương, trường đại học Bách Khoa Hà Nội, người đà giao đề tài, tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ hoàn thành luận văn GS.TS Châu Văn Minh, Phó Chủ tịch Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, TS Phan Văn Kiệm, Th.s Nguyễn Xuân Cường, anh chị bạn phòng Xúc tác Hữu cơ, Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, đà tạo điều kiện giúp đỡ trình thực luận văn Xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè người thân đà luôn giúp đỡ, cổ vũ kịp thời động viên thời gian học tập, công tác để hoàn thành luận văn Hà Nội, tháng 10 năm 2007 Nguyễn Thị Kim Thúy Mục lục Trang Mở đầu Chương I Tổng Quan I.1 Tổng quan loài Hải miên gellius varius I.1.1 Tổng quan I.1.2 Thành phần hoá học I.2 Tổng quan phương pháp chiết I.2.1 Đặc điểm chung chiết I.2.2 Cơ sở trình chiết I.2.3 Quá trình chiết I.3 Tổng quan phương pháp sắc ký I.3.1 Sắc ký cét 11 I.3.2 S¾c ký líp máng 12 I.4 Tổng quan phương pháp xác định 13 cấu trúc hợp chất hữu I.4.1 Phổ hồng ngoại: IR (Infrared Spectroscopy) 13 I.4.2 Phổ khối lượng: MS (Mass Spectroscopy) 14 I.4.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: NMR 15 (Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) Chương II đối tượng phương pháp nghiên cứu 18 II.1 Mẫu Hải miên 18 II.2 Phương pháp phân lập hợp chất 18 II.2.1 S¾c ký líp máng (TLC) 18 II.2.2 S¾c ký lớp mỏng điều chế 19 II.2.3 Sắc ký cột (CC) 19 II.3 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học hợp chất 19 II.3.1 Điểm nóng chảy (Mp) 19 II.3.2 Phỉ khèi lỵng (ESI-MS) 19 II.3.3 Phỉ céng hëng từ nhân (NMR) 19 II.4 Phương pháp xác định hoạt tính gây độc tế bào Chương III Thực nghiệm kết 20 22 III.1 Thu mẫu xử lý mẫu 22 III.2 Phân lập hợp chất 22 III.3 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất 24 III.3.1 Hợp chất 1: Cholest-7-ene-3,5,6-triol 24 III.3.2 Hỵp chÊt 2: 6β-Methoxycholest-7-ene-3β,5α-diol 25 III.3.3 Hỵp chÊt 3: 5,8-Epidioxycholest-6-en-3-ol 26 III.3.4 Hỵp chÊt 4: trans-Phytol 26 III.3.5 Hỵp chÊt 5: 1-O-palmitoyl-3-O-[α-D-galactopyranosyl 27 (1→6)- β-D-galactopyranosyl]-sn-glycerol III.3.6 Hỵp chÊt 6: Mi natri cđa (2S)1-O-Hexadecanoyl- 28 3-O-(6-sulfo-α-D-quinovopyranosyl) Glycerol III.3.7 Hỵp chÊt 7: (2S)1,2-di-O-palmitoyl-3-O-(6-sulfo-- 28 D-quinovopyranosyl) glycerol Chương IV Thảo luận 30 IV.1 Xác định cấu trúc hoá học hợp chÊt 30 IV.1.1 Hỵp chÊt 1: Cholest-7-ene-3β,5α,6β-triol 30 IV.1.2 Hỵp chÊt 2: 6β-Methoxycholest-7-ene-3β,5α-diol 38 IV.1.3 Hỵp chÊt 3: 5,8-Epidioxycholest-6-en-3-ol 43 IV.1.4 Hỵp chÊt 4: trans-Phytol 48 IV.1.5 Hỵp chÊt 5: 1-O-palmitoyl-3-O-[α-D-galactopyranosyl 52 (1→6)-β- D-galactopyranosyl]-sn-glycerol IV.1.6 Hỵp chÊt 6: Mi natri cđa (2S)1-O-Hexadecanoyl-3-O- 60 (6-sulfo-α-D-quinovopyranosyl) Glycerol IV.1.7 Hỵp chÊt 7: (2S)1,2-Di-O-palmitoyl-3-O- 68 (6-sulfo--D-quinovopyranosyl) glycerol IV.2 Kết thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào 76 Chương V kết luận 77 Tài liệu tham khảo 78 Phụ lục Những chữ viết tắt cc Sắc ký cột Column Chromatography []D Độ quay cùc Specific Optical Rotation 13 C NMR Phæ céng hëng từ hạt nhân cacbon 13 Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer 2D-NMR Phæ céng hëng từ hạt nhân hai chiều Two-Dimensional NMR EI-MS Phổ khối lượng va chạm electron Electron Impact Mass Spectrometry H-1H COSY H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence H NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Proton Magnetic Resonance Spectroscopy IR Phỉ hång ngo¹i Infrared Spectroscopy Me Nhãm metyl MS Phổ khối lượng Mass Spectroscopy TLC Sắc ký lớp mỏng Thin Layer Chromatography Danh mục bảng Trang Bảng I.1: Các hợp chất đà phân lập từ loài Hải miên G varius Bảng I.2 Độ phân cực dung môi thông dụng 10 Bảng IV KÕt qu¶ phỉ NMR cđa 33 B¶ng IV KÕt qu¶ phỉ NMR cđa 40 B¶ng IV Các số liệu phổ NMR 45 Bảng IV.4 KÕt qu¶ phỉ NMR cđa 51 B¶ng IV.5: KÕt phổ cộng hưởng từ hạt nhân 54 Bảng IV.6 Kết phổ cộng hưởng từ hạt nhân 63 Bảng IV.7: Các kết phổ NMR 70 Bảng IV.8 Bảng tổng hợp hợp chất đà phân lập 75 Bảng IV.9 Giá trị CS chất 1-7 dòng tế bào 76 KB, FL HepG-2 Danh mục hình sơ đồ Trang Hình 1: Hải miên Gellius varius Sơ đồ 1: Sơ đồ chiết phân đoạn dịch chiết metanol loài 22 Hải miên G varius Sơ đồ 2: Sơ đồ phân lập hợp chất 1- từ loài Hải miên G varius 23 Sơ đồ 3: Sơ đồ phân lập hợp chất 5-7 từ Hải miên G varius 23 Hình IV.1.1.a Phổ 1H-NMR 30 H×nh IV.1.1.b CÊu tróc hãa häc cđa 30 H×nh IV.1.1.c Phỉ 1H-NMR d·n réng cđa 31 H×nh IV.1.1.d Phỉ 13C-NMR cđa 31 H×nh IV.1.1.e Phỉ 13C-NMR d·n réng cđa 32 H×nh IV.1.1.f Phỉ 13C-NMR phổ DEPT 33 Hình IV.1.1.g Phổ HSQC cđa 35 H×nh IV.1.1.h Phỉ HMBC d·n réng cđa 35 H×nh IV.1.1.i Phỉ HMBC cđa 36 Hình IV.1.1.j Phổ khối lượng ESI-MS 37 Hình IV.1.1.k Một số tương tác HMBC 37 H×nh IV.1.2.a Phỉ 1H-NMR cđa 38 H×nh IV.1.2.b Phỉ 1H-NMR d·n réng cđa 39 H×nh IV.1.2.c CÊu tróc hãa häc cđa 39 H×nh IV.1.2.d Phỉ 13C-NMR cđa 41 H×nh IV.1.2.e Phỉ 13C-NMR d·n réng cđa 42 Hình IV.1.2.f phổ 13C-NMR phổ DEPTcủa 42 Hình IV.1.2.g Phổ khối lượng ESI-MS 43 H×nh IV.1.3.a Phỉ 1H-NMR cđa 44 H×nh IV.1.3.b CÊu tróc hãa häc cđa 44 H×nh IV.1.3.c Phỉ 1H-NMR d·n réng cđa 45 H×nh IV.1.3.d Phỉ 13C-NMR cđa 47 H×nh IV.1.3.e Phỉ 13C-NMR d·n réng cđa 47 Hình IV.1.3.f Phổ 13C-NMR phổ DEPT 48 H×nh IV.1.4.a Phỉ 1H-NMR cđa 49 H×nh IV.1.4.b Phỉ 1H-NMR d·n réng cđa 49 H×nh IV.1.4.c CÊu tróc hãa häc cđa 50 H×nh IV.1.4.d Phỉ 13C-NMR 50 Hình IV.1.4.e Phổ 13C-NMR phỉ DEPT cđa 51 H×nh IV.1.5.a Phỉ 1H-NMR cđa 52 H×nh IV.1.5.b Phỉ 1H-NMR d·n réng cđa 53 H×nh IV.1.5.c: CÊu tróc hãa häc cđa 53 H×nh IV.1.5.d Phỉ 13C-NMR cđa 54 H×nh IV.1.5.e Phỉ 13C-NMR d·n réng cđa 55 H×nh IV.1.5.f Phỉ 13C-NMR phổ DEPT 56 Hình IV.1.5.g Phổ HSQC cđa 57 H×nh IV.1.5.h Phỉ HSQC d·n réng cđa 57 H×nh IV.1.5.i Phỉ HMBC cđa 58 H×nh IV.1.5.j Phỉ HMBC d·n réng cđa 59 H×nh IV.1.5.k Một số tương tác HMBC 59 H×nh IV.1.5.h Phỉ ESI-MS cđa 60 H×nh IV.1.6.a Phỉ 1H-NMR cđa 61 H×nh IV.1.6.b Phỉ 1H-NMR d·n réng cđa 61 H×nh IV.1.6.c CÊu tróc hãa häc cđa 62 H×nh IV.1.6.d Phỉ 13C-NMR cđa 62 H×nh IV.1.6.e Một số tương tác HMBC 63 Hình IV.1.6.f Phổ 13C-NMR phổ DEPT 64 H×nh IV.1.6.g Phỉ HSQC cđa 65 H×nh IV.1.6.h Phỉ HSQC d·n réng cđa 65 H×nh IV.1.6.i Phỉ HMBC cđa 66 H×nh IV.1.6.j Phỉ HMBC d·n réng cđa 67 H×nh IV.1.6.k Phỉ ESI-MS cđa 68 Hình: IV.1.7.a Cấu trúc hợp chất 68 Hình IV.1.7.b Phỉ 1H-NMR cđa 69 H×nh IV.1.7.c Phỉ 13C-NMR 70 Hình IV.1.7.d Phổ 13C-NMR phổ DEPT cđa 71 H×nh IV.1.7.e Phỉ HSQC cđa 72 H×nh IV.1.7.f Phỉ HMBC cđa 73 H×nh IV.1.7.g Một số tương tác HMBC 73 Hình IV.1.7.h Phỉ ESI-MS cđa 74 67 H×nh IV.1.6.j Phỉ HMBC dÃn rộng Để xác định vị trí c¸c nhãm thÕ cịng nh cÊu tróc tỉng thĨ cđa toàn phân tử, đà tiến hành đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều HMBC Trên phổ này, xuất píc tương tác proton anomer H-1’ víi C-3 vµ proton H-3 víi cacbon anomer C-1’ đà khẳng định vị trí gốc đường C-3 Phân tích chi tiết tương tác phổ HMBC (Hình IV.1.6.d Bảng IV.6) cho phép dự đoán công thức hóa học đưa Hình IV.1.6.b Các kết phân tích nêu mang so sánh với kiện phổ đà công bố hợp chất muối natri (2S)1-O-Hexadecanoyl-3-O-(6sulfo--D-quinovopyranosyl) Glycerol [8] Sự trùng khớp hoàn toàn giá trị phổ tương ứng cho phép khẳng định muối natri (2S)1-OHexadecanoyl-3-O-(6-sulfo--D-quinovopyranosyl) Glycerol Hợp chất đà phân lập từ loài cầu gai Anthocidaris crassispina dạng hỗn hợp với đồng phân chứa axit béo axit myristic với tỷ lệ 96/4 Tuy nhiên 68 lần phân lập dạng đơn chất từ loài Hải miên thuộc chi Gellius Hình IV.1.6.k Phỉ ESI-MS cđa IV.1.7 Hỵp chÊt 7: (2S)1,2-Di-O-palmitoyl-3-O-(6-sulfo-α-Dquinovopyranosyl) glycerol Hợp chất nhận dạng chất bột màu trắng Trên phổ khối lượng ESI-MS xuất píc ion phân tử m/z 793,6 [M-H]+ Cùng với phổ NMR cho phép xác định công thức phân tử cđa lµ C41H78O12S 6' CH2SO3H 5' 4' OH O 1' OH 2' 3' OH O CH2 HC 1'" O CH2 O C 16'" (CH2)14CH3 O 1" 16" C (CH2)14CH3 O Hình: IV.1.7.a Cấu trúc hợp chất 69 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H-NMR) đặc trưng cho hợp chất glycolipit với xuất tín hiệu đặc trưng nhóm oximetin oximetilen 3,1 - 4,5 Sự xuất tín hiệu nhóm metyl δ 0,89 (6H, t, J = 6,5Hz), c¸c tÝn hiƯu proton mạch bon no dài 1,30 (46H, br s), c¸c tÝn hiƯu proton cđa hai nhãm metilen gắn với nhóm cacbonyl 2,33 (4H, m) nhóm -metinlen 1,61 (4H, m) khẳng định có mặt nhánh axit béo no Hình IV.1.7.b Phổ 1H-NMR Sự khác biệt lớn đặc trưng độ chuyển dịch hóa học proton metilen vị trí C-1 phản ánh vị trí đơn vị đường axit béo tương ứng hai vị trí Hằng số tương tác tách vạch proton đơn vị đường tương tự đường glucose độ chun dÞch hãa häc ë mét sè vÞ trÝ cã thay đổi Cụ thể là, proton metilen C-6 nhận 3,14 3,33 khẳng định có mặt nhóm sulphonyl vị trí C-6 gốc ®êng lµ sulphoquinovose [14] Sù xt hiƯn tÝn hiƯu cacbon 53,59 phổ 13C-NMR lần khẳng định kết luận 70 Hình IV.1.7.c Phổ 13C-NMR Bảng IV.7: Các kết phổ NMR cña C δC [16] δCa, b 63,0 t 63,45 t 70,1 d 70,84 d 67,3 t 66,68 t 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 98,9 d 71,4 d 72,7 d 73,4 d 67,8 d 99,28 d 72,22 d 73,97 d 73,58 d 68,77 d 6’ 53,6 d 53,59 d 1” 2” 3” 4”13” 14” 15” 16” 1”’ 174,2 s 34,4 t 25,0 t 174,46* s 34,66# t 25,22$ t 29,45 29,94 t 32,17 t 22,87 t 14,11 q 174,27* s 29,2-29,8 t 31,9 t 22,7 t 14,1 q 174,2 s δHa,c (J, Hz) 4,20 (dd, 7,0, 12,0) 4,43 (dd, 3,0, 12,0) 5,31 (m) 3,62 (dd, 6,5, 11,0) 3,98 (dd, 5,0, 11,0) 4,83 (d, 3,5) 3,51 (dd, 3,5, 9,5) 3,65 (dd, 9,0, 9,5) 3,38 (dd, 9,0, 9,5) 4,02(m) 3,14 (dd, 6,0, 14,5) 3,33 (dd, 4,0, 14,5) 2,33 (m) 1,61 (m) HMBC (H - C) C-2, 3, 1” C-2, 1, 1’ C-3, 3’, 5’ C-1’ C3’, 6’ C-1’ C5’ C-1”, 3” C-1”, 2” 1,30 (br s) 1,30 (br s) 1,30 (br s) 0,89 (t, 6,5) - C-14”, 15” 71 2”’ 3”’ 4”’13”’ 14”’ 15”’ 16”’ 34,46# t 25,18$ t 29,45 29,94 t 32,17 t 22,87 t 14,11 q 34,4 t 25,0 t 29,2-29,8 t 31,9 t 22,7 t 14,1 q 2,33 (m) 1,61 (m) 1,30 (br s) 1,30 (br s) 1,30 (br s) 0,89 (t, 6,5) ®o CDCl3+MeOD, 125 MHz, 500 MHz, a b c C-14”’, 15”’ giá trị có ký hiệu đổi chỗ cho *, #, $ Trên phổ 13C-NMR xuất tín hiệu đặc trưng cacbon anomer 99,28, tín hiệu glyceryl bị hoàn toàn 63,45; 70,84 66,68 Sự xuất hai nhóm metyl 14,11 (nhân 2), hai nhóm cacbonyl 174,27 174,46, hai nhóm -metinlen 22,87 (nhân 2), hai nhóm metilen gắn với nhóm cacbonyl 34,46 34,66 lần khẳng định tồn nhánh axit béo Hình IV.1.7.d Phổ 13C-NMR phổ DEPT 72 Để xác định độ chuyển dịch hóa học tương ứng cacbon proton, phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều HSQC đà đo Các giá trị chi tiết bảng IV.7 H×nh IV.1.7.e Phỉ HSQC cđa 73 H×nh IV.1.7.f Phỉ HMBC Để xác định vị trí nhóm cấu trúc tổng thể toàn phân tử, đà tiến hành đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều HMBC Trên phổ này, xuất píc tương tác proton anomer H-1 với C-3 proton H-3 với cacbon anomer C-1 đà khẳng định vị trí gốc đường C-3 Phân tích chi tiết tương tác phổ HMBC (hình IV.1.7.g bảng IV.7) cho phép dự đoán công thức hóa học đưa hình IV.1.7.a 6' CH2SO3H O 5' 4' OH 1' OH 2' 3' OH O CH2 HC O CH2 O 1'" C O1" C O 16'" CH2CH2(CH2)12CH3 16" CH2CH2(CH2)12CH3 H×nh IV.1.7.g Một số tương tác HMBC 74 Các kết phân tích mang so sánh với kiện phổ hợp chất (2S)1,2-di-O-palmitoyl-3-O-(6-sulfo--D-quinovopyranosyl) glycerol [16] Sự trùng khớp hoàn toàn giá trị phổ tương ứng cho phép khẳng định hợp chất lµ (2S) 1, - di -O- palmitoyl -3- O- (6 – sulfo – α - Dquinovopyranosyl) glycerol Hỵp chÊt đà phân lập từ loài tảo nâu Ishige okamurai Sargassum parivesiculosum Tuy nhiên lần hợp chất phân lập từ chi Gellius Hình IV.1.7.h Phổ ESI-MS 75 Bảng IV 8: Bảng tổng hợp hợp chất đà phân lập ®ỵc 21 22 26 20 18 25 15 10 13 19 15 10 OH OR O HO 1R= H O R = CH3 HO OH 4" 17 18 19 20 6" 5" O 1" OH 6' O 2" 3" 5' OH OH 11 15 27 17 11 O O CH2 OH 4' OH 16 1' HC 2' 3' OH 1'" CH2 O OH C 16'" (CH2)14CH3 O 6' 6' CH2SO3Na 5' 4' OH CH2SO3H 5' O 1' OH 2' 3' OH O 26 25 18 HO 20 13 19 22 21 27 17 11 4' CH2 HC OH 1' OH 2' 3' OH OH CH2 O O 1" C O CH2 HC 16" (CH2)14CH3 CH2 O O 1'" O C O 1" 16" C (CH2)14CH3 O 16'" (CH2)14CH3 76 IV.2 Kết thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào Các chất tiến hành đánh giá hoạt tính gây độc tế bào theo phương pháp mô tả mục II.4 Trước tiên, chất tiến hành xác định giá trị CS Kết chi tiết IV.9 Bảng IV.9 Giá trị CS chất 1-7 dòng tế bào KB, FL Hep-G2 Ký hiệu Dòng tế bào - Tỷ lệ sống sót (CS %) KÕt luËn KB FL Hep-G2 DMSO 100.0 ± 0.0 100.0 ± 0.0 100.0 ± 0.0 Chøng d¬ng 2.2 ± 0.0 1.5 ± 0.0 3.0 ± 0.01 72 ± 0.6 92.7 ± 1.1 83.6 ± 0.5 ©m tÝnh 90.2 ± 0.3 77.6 ± 0.5 82.5± 1.1 ©m tÝnh 30.1 ± 1.0 27.3 ± 1.2 24.2± 1.5 d¬ng tÝnh dòng 92.7 0.7 90.4 1.7 88.3 ± 1.3 ©m tÝnh 78.3 ± 0.5 85.7 ± 0.9 86.7 ± 0.9 ©m tÝnh 93.7 ± 1.1 79.3 ± 0.3 89.7 ± 1.2 ©m tÝnh 88.5 0.5 76.7 0.9 69.8 0.6 âm tính Kết thư nghiƯm cho thÊy, chØ cã hỵp chÊt thĨ hoạt tính gây độc tế bào cao nhiều dòng tế bào ung thư dòng KB (tế bào ung thư biểu mô, IC50 = 2,0g/ml), FL (tế bµo ung th mµng tư cung, IC50 = 3,93μg/ml) vµ Hep-G2 (tÕ bµo ung th gan, IC50 = 2,4μg/ml) 77 Chương V kết luận Đà thu thập lượng lớn mẫu Hải miên xác định tên khoa học Gellius varius Bằng phương pháp sắc ký kết hợp, hợp chất đà phân lập từ dịch chiết metanol loài Hải miên Gellius varius, là: Cholest-7-ene-3,5,6-triol (1) 6-Methoxycholest-7-ene-3,5-diol (2) 5,8-Epidioxycholest-6-en-3-ol (3) trans-Phytol (4) 1-O-Palmitoyl-3-O-[α-D-galactopyranosyl(1→6)-β-D-galactopyranosyl] -sn-glycerol (5) Muèi natri cña (2S)1-O-Hexadecanoyl-3-O-(6-sulfo-α-D-quinovopyranosyl) glycerol (6) (2S)1,2-di-O-palmitoyl-3-O-(6-sulfo-α-D-quinovopyranosyl) glycerol (7) Trong hợp chất 1, 2, 5, lần phân lập từ chi Gellius Cấu trúc hợp chất xác định nhờ vào phương pháp phổ đại phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT 135 vµ DEPT 90), hai chiỊu (HSQC, HMBC), phổ khối lượng phun mù điện tử (ESI-MS) Đà thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào in vitro chất phân lập Kết cho thấy, có hợp chất thể hoạt tính gây độc tế bào cao ba dòng tế bào ung thư nghiên cứu là: KB (tế bào ung thư biểu mô, IC50 = 2,0g/ml), FL (tế bµo ung th mµng tư cung, IC50 = 3,93μg/ml) vµ Hep-G2 (tÕ bµo ung th gan, IC50 = 2,4μg/ml) 78 Tài liệu tham khảo Tài liệu Tiếng Việt: Từ Văn Mặc (2000), Phân tích hoá lý - Phương pháp phổ nghiệm nghiên cứu cấu trúc phân tử, nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr125-126 Tài LiÖu TiÕng Anh: Bifulco G., Bruno I., Riccio R., Canignano A., and Debitus C (1994), “(+/-)-Gelliusines A and B, two diastereomeric brominated tris-indole alkaloids from a deep water new caledonian marine sponge (Gellius or Orina sp.)”, Journal of Natural Products57(9), pp1294-1299 Bifulco G., Bruno I., Riccio R., Lavayre J., and Bourdy G.(1995), “Further brominated bis- and tris-indole alkaloids from the deep-water New Caledonian marine sponge Orina sp”, Journal of Natural Products58(8), pp1254-1260 Brown G D (1994), “Phytene-1,2,-diol from Artemisia annua”, Phytochemistry36(6), pp1553-1554 Cannell R J P (1998), Natural Products Isolation, pp343-353 Gallimore W A., Kelly M., and Scheuer P J (2001), “Gelliusterols AD, new acetylenic sterols from a sponge, Gellius species”, Journal of Natural Products64, pp741-744 Harborne J B (1984), Phytochemical methods - A guide to modern techiques of plant analysis, 2nd edition, Chapman and Hall, Isao Kitagawa, Yishihiro Hamamoto and Motosama Kobayshi (1979), “Sulfonoglycolipid from the sea urchin Anthiocidaris crassispina A Agassiz”, Chem Pharm Bull 27(8), pp1934-1937 Ju Sun Kim, Sang Hee Sim, Sanghyun Lee, Sungwook Chae, Sang Jun Han, Sam Sik Kang, Yeon Sil Lee, Sang Hoon Jung, and Kuk Hyun 79 Shin (2004), “A monoacyldigalactosyl glycerol from the green alga Enteromorpha prolifera”, Natural Product Sciences10(6), pp341-343 10 L J Goad and T Akihisa (1997), Analysis of sterols, Academic Press, First edition, pp363 - 366 11 Likhitwitayawuid K., Angerhofer C K., Cordell G A and Pezzuto J M (1993), “Cytotoxic and antimalarial bisbenzylisoquinoline alkaloids from Stephania erecta”, J Nat Prod 56(1), pp30-38 12 Maria I., Luigi M., Raffele R., Lee J S., and Yasumoto T (1988), “Polar steroids from the marine scallop Patinopecten yessoensis”, Journal of Natural Products 51(6), pp1098-1103 13 Minh C V., Kiem P V., Huong L M and Kim Y H (2004), “Cytotoxic constituents of Diadema setosum”, Arch Pharm Res 27(7), pp734-737 14 Rastrelli L., Tommasi N D., Berger I., Caceres A., Saravia A., and Simone F D (1997), “Glycolipids from Byronima crassifolia” Phytochemistry45(4), pp647-650 15 Robert M S., Francis X W., and David K (2004), Spectroscopic identification of organic compounds, 7th edition, John Wiley & Sons, Inc 16 Shu-Hua Qi, Si Shang, Jian-She Huang, Zhi-Hui Xiao, Jun Wu and LiJuan Long (2004), Chem Pharm Bull52(8), pp986-988 17 Yamaguchi Y., Nakanishi Y., Shimokawa T., Hashiguchi S., and Hayashi A (1992), “Structure elucidation of oxygenated sterols from eggs of sea hare, Aplysia juliana”, Chemistry Letters 21(9), pp17111713 18 Yong C N (2005), Structural identification of organic compounds with spectroscopic techniques, Wiley-VCH Verlaf GmbH&KgaA Publisher phơ lơc C¸c Công trình liên quan đến luận văn Nguyen Xuan Cuong, Nguyen Hai Dang, Do Cong Thung, Tran Thu Huong, Nguyen Thi Kim Thuy, Phan Van Kiem, and Chau Van Minh, “Isoprenoids from the sponge Gellius varius living in Vietnamese sea”, Vietnamese Journal of Chemistry, 2007 (accepted) ... tài nghiên cứu Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc tế bào loài Hải miên Gellius varius lựa chọn nghiên cứu Mục tiêu luận văn nhằm đóng góp vào việc nghiên cứu thành phần hoá học loài. .. gồm: Phân lập số hợp chất từ loài Hải miên Gellius varius Xác định cấu trúc hóa học hợp chất đà phân lập Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập số dòng tế bào ung thư người 3 Chương... quan loài hải miên gellius varius I.1.1 Tổng quan Hải miên (Bọt biển) động vật đa bào trung gian gồm cá thể đa bào không tổ chức thành mô hay quan Điều nói lên thể đa bào tế bào kết hợp lại thành