Nghiên cứu căn nguyên Escherichia Coli gây nhiễm trùng trên bệnh nhân điều trị tại Bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên 2006 2007

Nghiên cứu căn nguyên Escherichia Coli gây nhiễm trùng trên bệnh nhân điều trị tại Bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên 2006 2007 Nghiên cứu căn nguyên Escherichia Coli gây nhiễm trùng trên bệnh nhân điều trị tại Bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên 2006 2007 luận văn tốt nghiệp thạc sĩ

ĐẠI HỌC THÁI N G U Y ÊN K H O A K H O A H Ọ C T ự N H IÊ N VÀ XÃ H Ộ I N G U Y Ễ N V IỆ T V Ư Ơ N G NGHIÊN CỨU CÃN NGUYÊN ESCHERICHIA COLI GÂY NHIẼM TRÙNG TRÊN BỆNH NHÂN ĐIỂU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA TRUNG ƯƠNG THÁI NGUYÊN (2006 - 2007 ) L U Ậ N VÃN T Ố T N G H IỆ P Đ Ạ I H Ọ C NGÀNH CƠNG NGHỆ SINH HỌC Chun ngành: VíỀsinh vật học G iá o viên hư ó n g d ả n : T S B S L u T h ị K im T h a n h ,_Ĩ L — ỈÍ , O Ạ I H Ọ C TH Ất N G U Y Ẽ N KHOA KHOA HỌC Tự NHIẼN VÀ XẢ HỘI THƯ VIỆN T H Á I N G U Y Ê N - 2007 Lời cảm ơn ! Bằng lòng biết ơn sâu sắc, xin trân trọng cảm ơn tiến s ĩ - bác s ĩ Lưu Thị Kim Thanh trưởng khoa vi sinh, bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Ngun tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi trình thực đê tài Xin trân trọng cảm ơn ban lãnh đạo khoa KHTN&XH , giảng viên môn sinh học cho kiến thức bổ ích vê chuyên ngành, tạo điều kiện thuận lợi đ ể tơi học tập hồn thành đê tài Qua đây, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới cán bộ, kỹ thuật viên phòng xét nghiệm vi sinh, bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên giúp đỡ tơi hồn thành đề tài Xin cảm ơn gia đình bạn bè ln động viên, khích lệ tơi, giúp tơi tự tin thực đê tài Thái Nguyên, ngày 20 - 05 - 2007 Sinh viên Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC MỞ Đ Ầ U .1 Đặt vấn đ ể Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên u .2 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ế Lịch sử nghiên c ứ u .3 l ễ2 Hình thái, cấu tạo sinh sản vi khuẩn l ế3 Đặc điểm hoá sinh 1.4 Cấu trúc kháng nguyên 10 1.5ễ Khả tồn t i 10 1.6 Khả gây bệnh vi sinh vật 10 1.7 Chất kháng sinh 17 Chương 2: Đ ố i TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u 20 2.1 Đối tượng nghiên u 20 2.2 Các thiết bị, hóa chất 20 2.3 Các mơi trường ni cấy, phân lập, xác định tính chất hóa sinh làm kháng sinh đ .21 2.4 Phương pháp nghiên c ứ u 24 Chương 3: KẾT q u ả v t h ả o l u ậ n .34 3.1 Kết nuôi cấy 34 3.2 Kết phân lập 35 3.3 Kết xác định độ nhạy cảm E coli vói chất kháng sin h 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN N G H Ị 44 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC TỪ V IẾT TẮT E coli: Escherichia coli NTDT: Nhiễm trùng đường tiểu AM: Ampicillin CF: Cefalotin CTX: Cefotaxime CN: Cefalexin CAZ: Ceftazidime CRO: Ceftriaxon PIP: Piperacillin TE: Tetracycline DO: Doxycycline GM: Gentamixin AN: Amikaxin TM: Tobramyxin NET:Netilmicin NOR: Norfloxacin CIP: Ciprofloxacin SXT: Co - trixazol C: Chloramphenicol Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn TÓM TẮT NGHIÊN c ứ u Tên đề tài “Nghiên cứu nguyên Escherichia coli gây nhiễm trùng bệnh nhân điều trị bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên (2006- 2007)” Đối tượng nghiên cứu + 340 bệnh phẩm, bao gồm: bệnh phẩm phân, nước tiểu, dịch âm đạo cổ tử cung bệnh nhân điều trị nhiễm trùng bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên + Các chủng vi khuẩn E coli phân lập bệnh phẩm Mục tiêu nghiên cứu 3.1 Xác định tỉ lệ nhiễm khuẩn vi khuẩn E coli bệnh phẩm phân, tiết niệu, đường sinh dục nữ 3.2 Phát tính nhạy cảm với kháng sinh vi khuẩn E coli qua kĩ thuật kháng sinh đồ Kết thu Trong số 340 bệnh phẩm nghiên cứu: 4.1 Căn nguyên gây bệnh E coli chiếm 23,67% trường hợp nhiễm trùng vi khuẩn mà chúng tơi phát 4.2 Tính nhạy cảm với kháng sinh E coli: + Vi khuẩn E coli nhạy cảm vói kháng sinh cefotaxime (79,41%) + Nhạy cảm cao với kháng sinh ceftriaxon, ceftazidim, norfloxacin, netilmicin (62,86% - 70,27%) + Nhạy cảm từ 47,37% - 58,33% kháng sinh tobramyxin, amikacin, gentamyxin, Ciprofloxacin + Kháng cao với kháng sinh tetracycline (100%), kháng s in h a m p ic illin , d o x y c y c lin e , c e fa lo tin , c e fa le x in , CO - tr ix a z o l, piperacillin, tỉ lệ kháng 75% - 84,62% Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Chuyên ngành vi sinh vật Luận văn tốt nghiệp MỞ ĐẨU Đặt vấn đề Vi sinh vật y học môn học vi sinh vật gây bệnh cho người Chính vậy, mơn ứng dụng rộng rãi, mang lại nhiều hữu ích chẩn đốn, phịng chống bệnh tật vi sinh vật gây Vi khuẩn loại vi sinh vật có khả gây nhiều bệnh tật cho người, từ mức độ nhẹ trầm trọng, tuỳ thuộc vào lồi vi khuẩn tính chất bệnh lí Hiện giới phân lập, phát hiện, thống kê nhiều loại vi khuẩn gây bệnh khác Vi khuẩn Escherichia coli (E coll) số loài vi sinh vật gày bệnh điển hình cho người cho lồi động vật nói chung Bình thường, chúng có lợi ích khơng thể phủ nhận (tham gia hệ vi khuẩn chí ruột tạo nên hàng rào vi sinh vật, bảo vệ thể đây, tổng hợp số vitamin cho thể, ứng dụng kĩ thuật di truyền ) Song, vi khuẩn E coli cãn nguyên gây nhiều bệnh tật cho số quan thể người (như gây bệnh ruột cho quan khác ngồi ruột: da, đường hơ hấp, đường sinh dục, tiết niệu ) Một sơ' E coli gây co thắt bụng, sốt ỉa chảy, suy giảm chức thận, mù lồ, liệt chí dẫn đến tử vong Trong năm gần đây, E coỉi số vi khuẩn hàng đầu gây nên bệnh tật cho người Hiện chưa có vacxin phịng bệnh đặc hiệu cho trường hợp nhiễm khuẩn E coli Người ta thường sử dụng thuốc kháng sinh điều trị bệnh, nhiên xuất nhiều chủng E coli kháng lại thuốc kháng sinh Đây thực khó khăn, thách thức lớn bác sĩ lựa chọn thuốc kháng sinh phù hợp cho người bệnh Tính chất gây bệnh phố biến E coli cộng với khó khăn mắc phải điều trị bệnh vi khuẩn kháng thuốc kéo theo nhiều tác động xấu, ảnh hưởng đến đời sống xã hội người Các bệnh nhàn phải chịu áp lực tâm lí s v Nguyền Việt Vương _ Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Luán vân tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật nặng nề nhiễm bệnh, bên cạnh phải tốn nhiều tiền để tìm sản xuất loại kháng sinh m ói Việc phát sớm trường hợp nhiễm khuẩn E coli xác định độ nhạy cảm chúng với chất kháng sinh có ý nghĩa điều trị bệnh cho bệnh nhân Xuất phát từ vấn đề thực tiễn đó, chúng tơi định chọn đề tài “Nghiên cứu nguyên Escherichia coli gây nhiễm trùng bệnh nhân điều trị bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên (2006- 2007)” Mục tiêu nghiên cứu 2.1 Xác định tỉ lệ nhiễm khuẩn vi khuẩn E coli bệnh phẩm phân, tiết niệu, đường sinh dục nữ 2.2 Phát tính nhạy cảm với kháng sinh vi khuẩn E coli qua kĩ thuật kháng sinh đồ Nội dung nghiên cứu 3.1 Phân lập E colỉ từ số bệnh phẩm khác nhau: Bệnh phẩm phân, bệnh phẩm dịch âm đạo - cổ tử cung bệnh phẩm nước tiểu 3.2 Đánh giá độ nhạy cảm với kháng sinh chủng E coli phân lập s y Nguyền Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Chuyên ngành vi sinh vật Luận văn tốt nghiệp CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀ I LIỆU l l ẽ Lịch sử nghiên cứu Năm 1885, Munich, Theodor Escherich - bác sĩ nhi khoa trẻ quan tâm đến phát quan trọng Louis Pasteur Robert Kock vi khuẩn Cùng với việc nghiên cứu bệnh tiêu chảy, qua nhiều thí nghiệm, Escherich tỏ rõ lưu ý tới vi sinh vật đường ruột trẻ em Vi khuẩn Escherich phát từ tã lót trẻ em công bố với tên gọi Bacterium coli commune Chỉ năm sau, năm 1889, loại vi khuẩn giới chuyên môn đổi tên thành Escherich nhằm tri ân người có cơng khám phá Năm 1895, người ta lại gọi tên Bacillus coli Năm 1896, gọi thành Bacterium coli Sau nhiều kiểu gọi, đến năm 1991, vi khuẩn định danh thống toàn cầu Escherichia coli [23], 1.2 Hình thái, cấu tạo sinh sản vi khuẩn l ệ2ẳl Cấu trúc tê bào vi khuẩn Qua kính hiển vi điện tử thấy cấu trúc vi khuẩn gồm phận sau: - Nhân: Nhân máy di truyền tế bào vi khuẩn, chất DNA Vì có axit nên giải thích tính chất ưa kiềm loại thuốc nhuộm kiềm Nhưng nguyên sinh chất vi khuẩn có nhiều ARN, nghĩa ưa kiềm Vì nhuộm vi khuẩn thuốc nhuộm thơng thường phàn biệt đâu nhân, đâu chất nguyên sinh mà phải dùng phương pháp nhuộm riêng biệt RNA phát nhân vi khuẩn Nhân chuỗi DNA, khơng có màng nhân song có cấu tạo rõ ràng hình cầu, hình que hay hình tạ Vi khuẩn có nhân, trừ giai đoạn phát thấy - nhân Nhân gồm sợi DNA xoắn kép vào tạo thành vịng trịn khép kín Nếu kéo dài nhân có kích thước dài xấp xỉ lm m [14] sv Nguyên Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật - Nguyên sinh chất: Nguyên sinh chất tế bào vi khuẩn thường đơn giản so với tế bào khác Ngun sinh chất đồng có hạt, đơi có hạt vùi, khơng có dịng chuyển động, v ề cấu tạo hóa học, người ta thấy hạt ribôsom cấu tạo protein RNA Các ribosom xếp thành đám gọi polyribosom, có chức tổng hợp protein Còn hạt vùi kho dự trữ cacbon, photphat lượng Mạc thể chỗ phình màng nguyên tương nối liền với nhân vi khuẩn Ở vi khuẩn Gram (+) mạc thể phát triển Ở vi khuẩn Gram (-) mạc thể nếp nhãn đơn giản Mạc thể có hệ thống permease giúp cho việc điều hịa chất hữu vào tế bào vi khuẩn - Màng nguyên tương: Bằng phương pháp đặc biệt, người ta thấy màng nguyên tương gồm lớp; lớp sáng lớp đục Lớp sáng cấu tạo lipit, lớp đục protein Màng nguyên tương chiếm 20% trọng lượng tế bào vi khuẩn Màng có nhiệm vụ thẩm thấu chọn lọc nơi chứa men, đặc biệt men chuyển hóa, hơ hấp Màng nòng cốt kháng nguyên thân Màng giữ cho vi khuẩn có hình thể định giúp cho vi khuẩn không bị ly giải áp lực thẩm thấu Màng tham gia đạo phân chia tế bào vi khuẩn Màng nguyên tương có chức chủ yếu sau đây: + Khống chế qua lại chất dinh dưỡng, sản phẩm trao đổi chất + Duy trì áp suất thẩm thấu bình thường tế bào + Là nơi sinh tổng hợp thành phần thành tế bào polyme bao nhày (capsule) + Là nơi tiến hành q trình photphoryl oxy hóa photphoryl quang hợp (ở vi khuẩn quang tự dưỡng) + Là nơi tổng hợp nhiều enzym, protein cùa chuỗi hô hấp + Cung cấp lượng cho hoạt động tiên mao - Bao nhày sv Nguyén Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận vãn tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật Bao nhầy hay giáp mạc (capsule) gặp số loài vi khuẩn với mức độ khác nhau: + Bao nhầy mỏng (vi giáp mạc, microcapssule) + Bao nhầy (giáp mạc, capsule) + Khối nhầy: (zooglea) muốn quan sát bao nhầy thường lên tiêu với mực tàu, bao nhày có màu trắng lên tối Thành phần chủ yếu bao nhầy polysaccarid, ngồi có polypeptid protein Trong thành phần polysaccarid ngồi glucose cịn có glucozamin, ramnoza, acid 2-keto-3-deoxygalacturonic, acid uronic, acid pyruvic, acid axetic Ễ Ý nghĩa sinh học bao nhầy là: + Bảo vệ vi khuẩn điều kiện khô hạn, bảo vệ vi khuẩn tránh bị thực bào (trường hợp Phế cầu khuẩn - Diplococcus pneumotĩiae) + Cung cấp chất dinh dưỡng cho vi khuẩn thiếu thức ăn + Là nơi tích luỹ số sản phẩm trao đổi chất (dextran, xantan ) + Giúp vi khuẩn bám vào giá thể ( trường hợp vi khuẩn gây sâu rãng Streptococcus salivarrius, Streptococcus mutans ) - Vách: vách màng cứng bao bọc xung quanh vi khuẩn màng nguyên tương Ở vi khuẩn Gram (+), vách có cấu tạo đơn giản dày; vi khuẩn Gram (-), vách mỏng nhiều có cấu tạo phức tạp Nhiệm vụ vách: vách đóng vai trị học bảo vệ vi khuẩn giữ cho hình thể không thay đổi, chống lại ly giải thẩm thấu Vách có vai trị nhuộm gram, tất vi khuẩn Gram (+) làm vách thành vi khuẩn Gram (-) Vách tự tái sản sinh, hình thành vách ngang phân chia Vận chuyển chọn lọc chất cho màng nguyên tương Ngoài ra, vách có vai trị miễn dịch phần lớn kháng nguyên vách Vách tham gia gây bệnh chứa nội độc tố, ví dụ vi khuẩn Gram (-) chẳng hạn sv Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Chuyên ngành vi sinh vật Luận văn tốt nghiệp CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1ẻ Kết nuôi cấy Tiến hành nuôi cấy 340 mẫu bệnh phẩm để xác định nguyên gây bệnh vi khuẩn hiếu khí ta thu kết sau: Dương tính Loại bệnh phẩm Âm tính Tổng Phân Dịch âm đạo Nước tiểu Tổng n % n 37 92,5 7,5 40 115 55,27 105 44,73 220 17 21,25 63 78,75 80 169 % 171 340 Bảng 3.1: Kết nuôi cấy bệnh phẩm Tỳ lệ 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% Phân Dịch âm N ước tiểu Bệnh phẩm đạo Hình 3.1ẽ Tỉ lệ nhiễm trùng loại bệnh phẩm Nhận xét: Qua bảng kết ni cấy hình 3.1 ta thấy: Tỉ lệ ni cấy dương tính bệnh phẩm phân lớn (92,5%), loại bệnh phẩm có tỉ lệ s v Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN 34 http://www.lrc-tnu.edu.vn Chuyên ngành vi sinh vật Luận văn tốt nghiệp nhiễm trùng thấp nước tiểu (21,25%) Tỉ lệ ni cấy dương tính bệnh phẩm dịch âm đạo 55,27% Bàn luận: Tỉ lệ vi khuẩn gây nhiễm trùng bệnh phẩm mà nghiên cứu cao (21,25% - 92,75%), số 340 bệnh phẩm mà nghiên cứu có đến 169 bệnh phẩm bị nhiễm khuẩn (49,71%) Kết cho thấy gần nửa số bệnh nhân bị nhiễm khuẩn tống số bệnh nhân có biểu nhiễm trùng khám điều trị bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên Với X2 = 55,79% > ỵ 22 (a= 0.05) = 5,99 chứng tỏ nguyên vi khuẩn gây nhiễm trùng mẫu bệnh phẩm nghiên cứu khác Các trường hợp kết luận âm tính xảy nhiều ngun nhân Ngồi vi khuẩn ngun gây bệnh, cịn có nhiều cãn nguyên gây bệnh khác vi rus, nấm, vi khuẩn kị khí, kí sinh trùng, sơ' lồi vi khuẩn mọc điều kiện ni cấy đặc biệt: Chlamydia, M ycoplasma Nhưng giới hạn mà đề tài đặt ra, tiến hành nuôi cấy môi trường dễ mọc vi khuẩn hiếu khí nên khơng phát loại vi sinh vật 3.2 Kết phân lập Bảng 3ễ2: Kết quà phân lập E.coli Loại bệnh E coli Vi khuẩn khác Tổng phẩm n % n % Phân 11 29,73 26 70,27 37 Dịch âm đạo 19 16,52 96 83,48 115 Nước tiểu 10 58,82 41,18 17 Tổng 40 sv Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN 129 169 35 http://www.lrc-tnu.edu.vn Chuyên ngành vi sinh vật Luận văn tốt nghiệp Tỳ lệ 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% E coli Vi khuân khác v ik h u ẳ n Hình 3.2: Tỉ lệ E coli vi khuẩn khác bệnh phẩm N hận xét: Qua bảng kết phân lập biểu đồ hình 3.2 cho ta thấy: E coli cãn n guyên gây nhiễm trùng lớn bệnh phẩm nước tiểu (58.82%), tỉ lệ E coli phân lập bệnh phẩm phân 29,73% Trong bệnh phẩm này, tỉ lệ E coli phân lập từ bệnh phẩm dịch âm đạo thấp (16,52%) Bàn luận: Với X2 = 15,63 > x 22 (a - 0.05) chứng tỏ cãn nguyên E coli gây nhiễm trùng mẫu bệnh phẩm có khác Tỉ lệ E co li phân lập từ bệnh phẩm mà nghiên cứu lớn (16,52% - 58,82%) Từ 169 bệnh phẩm, tiến hành phân lập 40 chủng E coli, tỉ lệ E coli trung bình có bệnh phẩm 23,67% Điều chứng tỏ vi khuẩn E coli nguyên gây bệnh hàng đầu bệnh phẩm Đây thực lời cảnh báo cho cộng đồng nói chung bác sĩ nói riêng sv Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN 36 http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật phải đặc biệt lưu tâm đến loại vi khuẩn chẩn đoán điều trị bệnh nhiễm trùng vi khuẩn E coli chiếm 80% số lượng vi khuẩn hiếu khí sống ruột, bình thường chúng khơng gây bệnh Nhưng điều kiện môi trường thay đổi (diễn thể người) theo hướng có lợi cho vi khuẩn, chúng có khả gây nhiễm khuẩn đường ruột làm cho bệnh nhân bị tiêu chảy, đau bụng quặn thắt Chúng nghiên cứu phát thấy 29,73% trường hợp gây bệnh có cãn nguyên E coli bệnh phẩm phân, tỉ lệ tương đối cao Cần phải ý giữ gìn vệ sinh ăn uống để tránh bị rối loạn tiêu hóa dẫn đến rối loạn vi hệ ruột gây nhiễm khuẩn ruột E coli số loại vi khuẩn khác Có thể nhận thấy rằng, bệnh phẩm nước tiểu, bệnh phẩm dịch âm đạo - cổ tử cung lấy quan gần gũi mật giải phẫu với phần cuối ống tiêu hoá, nơi vi khuẩn E coli thường giải phóng Như vậy, vi khuẩn E coli cuối đường ống tiêu hoá cãn nguyên gây bệnh cho quan chứa bệnh phám mà nghiên cứu Để khẳng định điều cần phải làm nghiên cứu sâu nữa, đặc biệt nhờ vào kĩ thuật gen Nhưng dù chãng nữa, thực tế lời nhắc nhở tất người phải ý đến vấn đề vệ sinh để phịng bệnh tích cực Đặc biệt phụ nữ - người dễ mắc loại bệnh phải biết cách giữ gìn vệ sinh an tồn khoa học, hạn chế mức tối đa bị nhiễm khuẩn Trong loại bệnh phẩm, tỉ lệ E coli phân lập từ bệnh phẩm nước tiểu lớn (58,82%) Điều giải thích ngun nhân E coli có hội cao xâm nhập vào đường tiết niệu nói Ở đường ruột E coli không gây bệnh, vào đường tiểu nguy để chúng gây bệnh cao.Phụ nữ người dễ mắc bệnh lỗ niệu đạo nằm gần với nguồn vi khuẩn từ phía sau (hậu mơn, âm đạo), ngồi sv Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN 37 http://www.lrc-tnu.edu.vn Chuyên ngành vi sinh vật Luận văn tốt nghiệp niệu đạo phụ nữ (3- cm) ngắn nam giới nên vi khuẩn E coli dẻ xâm nhập vào bàng quang để gây bệnh Tỉ lệ E coli nhiễm khuẩn bệnh phẩm dịch âm đạo thấp (16,52%) so với bệnh phẩm nước tiểu phân Âm đạo quan dễ bị nhiễm khuẩn nhiều loại vi khuẩn gây ra, E coli số vi khuẩn Nếu xét chung, tỉ lệ E coli gây nhiễm trùng loại bệnh phẩm mức tương đối cao 3.3 Kết xác định độ nhạy cảm E.coli với chất kháng sinh Bảng 3.3: Độ nhạy cảm với kháng sinh E.coli Kháng sinh Số chủng thử n = 17 nghiệm Nhạy cảm(S) Trung gian(I) Kháng (R) (%) (% ) (%) AM 39 5,13 10,26 84,62 CF 16 18,75 81,25 CTX 34 79,41 8,82 11,76 CN 36 13,89 5,56 80,56 CAZ 35 68,57 14,29 17,14 CRO 37 70,27 10,81 18,91 PIP 36 25 75 TE 15 0 100 DO 38 15,79 84,21 GM 35 57,14 8,57 34,29 AN 36 50 36,11 13,89 TM 38 47,37 5,26 47,37 NET 35 62,86 22,86 14.29 NOR 35 69,44 11,11 19.44 CIP 36 58,33 8,33 33,33 SXT 22 22,73 77,27 c 34 38,24 11.76 50 sv Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN 38 http://www.lrc-tnu.edu.vn Luán văn tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật Tỳ lệ (%) 80 70 60 50 40 30 20 10 AM CF CTX CN CAZ CRO PIP TE DO GM AN TM NET NOR CIP SXT c K h n g sinh Hình 3.3: Tỉ lệ nhạy cảm với kháng sinh E.coli Nhận xét: Qua bảng 3.3 hình 3.3 ta thấy: chủng E coli nhạy cảm với CTX (79,41%) Các kháng sinh khác mà E coli mẫn cảm CRO, CAZ, NOR, NET (62,86% - 70,27%) E.coli có tỉ lệ kháng cao kháng sinh TE (100%) Bàn luận: Nhìn vào bảng kết biểu đồ hình 3.3 cho ta thấy: Vi khuẩn E coli có tỉ lệ kháng cao với nhiều loại thuốc kháng sinh Tuy nhiên, có loại kháng sinh mà E coli nhạy cảm với tỉ lệ tương đối cao, loại thuốc nên dùng để điều trị bệnh cho bệnh nhân Đối vói thuốc kháng sinh họ p - lactam: Chúng ta sử dụng thảy thuốc kháng sinh họ kĩ thuật kháng sinh đồ Các kháng sinh sử dụng AM, CF, CTX, CN, CAZ, CRO, PIP Theo bảng kết quả, tỉ lệ vi khuẩn E coli kháng lại kháng sinh AM cao (84,62%); tỉ lệ cao so với tỉ lệ kháng E coli với kháng sinh AM bệnh viện trung ương Huế (71,63%) theo nghiên cứu Nguyễn Thị Nam Liên cộng năm 2001 Như vậy, mức độ kháng thuốc E coli với loại kháng sinh AM có khác khu vực Thái Nguyên khu vực tinh Thừa Thiên s v Nguyền Việt Vương _ 39 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật Huế (2001) Tỉ lệ kháng kháng sinh AM tăng lên vi khuẩn E coli AM loại kháng sinh dùng thời gian tương đối dài, kháng thuốc có tỉ lệ cao vi khuẩn kháng sinh điều hoàn toàn dễ hiểu Có lẽ vi khuẩn E coli thích ứng điều kiện mơi trường có kháng sinh AM Cơ chế tượng kháng thuốc đa dạng, xảy theo nguyên nhân khác Một nguyên nhân quan trọng để vi khuẩn E coli kháng lại kháng sinh AM vi khuẩn tiết p - lactamase phổ rộng làm bất hoạt loại kháng sinh qua v iệ c h u ỷ h o i v ò n g p - la c ta m c ủ a c h ấ t k h n g sin h Trong thuốc kháng sinh thuộc họ p - lactam, kháng sinh AM bị kháng nhiều nhất, kháng sinh CF, CN, PIP, bị kháng với tỉ lệ cao (75% - 81,25%) Đây chất kháng sinh sản xuất sau so với kháng sinh AM nên tỉ lệ kháng thấp chút loại kháng sinh vừa nêu nên sử dụng khơng sử dụng điều trị bệnh cho bệnh nhân Các kháng sinh sử dụng họ p - lactam phải kể đến CTX, CAZ, CRO, vi khuẩn E coli có độ nhạy cảm tương đối cao với thuốc kháng sinh (68,57% - 79,41%) E coli mẫn cảm kháng sinh CTX (79,41%), tỉ lệ nhạy cảm thấp so với kết nghiên cứu Nguyễn Thị Kim Anh cộng (92,2%) khoa vi sinh bệnh viện Đà Nẵng năm 2000 Điều chứng tỏ vi khuẩn E coli có mức độ kháng khác với kháng sinh CTX vùng địa lí xa Viêt Nam Nếu xét thời gian, nhận thấy vi khuẩn E coli có xu hướng tăng sức đề kháng với kháng sinh CTX Nhưng nhìn chung CTX giải pháp tốt lựa chọn thuốc kháng sinh cho bệnh nhân nhiễm khuẩn E coli CTX kháng sinh bán tổng hợp hệ 3, chúng chống lại tác động enzym p - lactam nên tỉ lệ kháng vi khuẩn với kháng sinh thấp (11,76%) Ngồi kháng sinh CTX, cịn có thê sử dụng kháng sinh s v Nguyễn Việt Vương 40 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Chuyên ngành vi sinh vật Luận văn tốt nghiệp CAZ, CRO điểu trị, tỉ lệ kháng E coli với loại kháng sinh tương đối thấp (17,14% - 18,91%) Điều mà cần phải lưu tâm đến kháng sinh t h u ộ c h ọ p - l a c t a m r ấ t đ ộ c k h i sử d ụ n g c h o b ệ n h n h â n ; c h ín h v ì lẽ đ ó p h ả i ln biết cách gìn giữ, sử dụng cách hợp lí loại thuốc kháng sinh họ mà nhiều tác dụng với vi khuẩn E coli CTX, CRO, CAZ nhằm giảm đến mức thấp kháng thuốc vi khuẩn sử dụng thuốc kháng sinh lâu dài Đối với kháng sinh thuộc nhóm tetraxilin (TE, DO), E coli có tỉ lệ kháng cao (84,21% - 100%) Đặc biệt E coli kháng hoàn tàn với kháng sinh TE (100%), tỉ lệ tương đương so với mức kháng thuốc tính chung cho khu vực miền Bắc Việt Nam (100%) Điều chứng tỏ kháng sinh TE tác dụng với chủng E coli TE loại thuốc kháng sinh sản xuất từ lâu sử dụng rộng rãi cho người Ngồi ra, TE cịn bổ sung vào chế biến thức ăn cho gia súc, gia cầm nhằm mục đích lấy thịt, trứng, sữa Kết người tiêu dùng sử dụng sản phẩm thực phẩm này, mặt họ phải tiếp nhận phần dư lượng chất kháng sinh, mặt khác nguy hiểm tiếp nhận loài vi sinh vật kháng thuốc có thực phẩm hay ngồi mơi trường vật ni đào thải Các lồi vi sinh vật kháng thuốc sau xàm nhập vào thể, chúng truyền khả nãng kháng thuốc cho vi sinh vật gây bệnh Đây có lẽ lí làm cho vi khuẩn E coli gây bệnh kháng lại kháng sinh TE với mức độ cao Kháng sinh DO sản xuất sau kháng sinh TE nên chúng chút hiệu so với TE (độ nhạy cảm 15,79%) Tuy khó khăn để chọn lựa DO điều trị bệnh tỉ lệ kháng E coli với kháng sinh mức cao tương đương với AM (84,21%) sv Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN 41 http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật Mức độ kháng thuốc vi khuẩn E coli với kháng sinh nhóm aminozid thấp so với nhóm tetraxilin (13,89% - 47,37%) Hai loại kháng sinh lựa chọn để điều trị bệnh nhóm AN NET Tỉ lệ kháng thuốc E.coli với AN 13,89%, cao so với tỉ lệ kháng thuốc E coli với AN tính chung cho toàn miền Bắc Việt Nam năm 2001 (7,1%), E coli có xu hướng kháng cao với AN Với kháng sinh NET việc không diễn vậy; ta so sánh tỉ lệ kháng kháng sinh E coli với NET tính chung cho tồn khu vực tỉnh phía Bắc Việt Nam (23,4%) với mức độ kháng khu vực Thái Nguyên- nơi nghiên cứu thấy mức độ kháng thấp (14,29%) Nếu sử dụng hai loại kháng sinh GM, TM điều trị cho kết thất thường bới mức độ kháng thuốc cao (34,29% - 47,37%), mức độ kháng thấp so sánh với mức độ kháng thuốc E coli với kháng sinh GM, TM theo kết nghiên cứu thạc sĩ Chu Thị Nga bệnh viên Việt Tiệp Hải Phòng năm 2001 (53% - 55,7%) Cần phải theo dõi sát diễn biến loại thuốc kháng sinh sử dụng cho bệnh nhân để định tiếp tục sử dụng hay ngưng sử dụng Đối với kháng sinh nhóm quinolon (ĐOR, CIP): E coli có tỉ lệ kháng thấp với kháng sinh NOR (19,44%), NOR giải pháp tốt lựa chọn thuốc kháng sinh điều trị nhiễm khuẩn E coli Kháng sinh CIP dùng điều trị cho loại vi khuẩn cho kết thất thường tí lệ kháng E coli vói CIP cao (33,33%) E coli có tỉ lệ kháng cao với SXT (77,27%), loại kháng sinh thuộc nhóm sulfamid Với kháng sinh c , E coli có mức kháng 50%, người ta sử dụng kháng sinh gây tác động đến sức khỏe người (gây suy tủy) Nói tóm lại việc sử dụng chất kháng sinh hợp lí có ý nghĩa đời sống xã hội, góp phần đẩy lùi bệnh tật cho người E coli nói riêng s v Nguyễn Việt Vương _ 42 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật loại vi khuẩn khác nói chung kháng lại nhiều loại kháng sinh mà trước chúng nhạy cảm Đây lời cảnh báo cho người học hỏi, nâng cao hiểu biết để hạn chế tối đa mức kháng thuốc vi khuẩn qua việc dùng thuốc kháng sinh cách Làm góp phần làm cho đời sống xã hội tốt đẹp hơn, chất kháng sinh sử dụng thời gian dài mà hiệu Đối với bác sĩ, nên lựa chọn cẩn thận thuốc kháng sinh dùng cho bệnh nhân qua việc sử dụng kĩ thuật kháng sinh đồ sv Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN 43 http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn tốt nghiệp Chuyên ngành vi sinh vật KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trong số 340 bệnh phẩm nghiên cứu: Căn nguyên gây bệnh E coli chiếm 23,67% trường hợp nhiễm trùng vi khuẩn mà phát Tính nhạy cảm vói kháng sinh E coli: + Vi khuẩn E coli nhạy cảm vói kháng sinh cefotaxime (79,41%) + Nhạy cảm cao với kháng sinh ceftriaxon, ceftazidim, norfloxacin, netilmicin (62,86% - 70,27%) + Nhạy cảm từ 47,37% - 58,33% kháng sinh tobramyxin, amikacin, gentamyxin, Ciprofloxacin + Kháng cao với kháng sinh tetracycline (100%), kháng sin h a m p ic illin , d o x y c y c lin e , c e fa lo tin , c e f a le x in , CO - tr ix a z o l, piperacillin, tỉ lệ kháng 75% - 84,62% KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu nguyên gây nhiễm trùng E coli số lượng bệnh nhân lớn điều trị bệnh viện Đa khoa Trung ương Thái Nguyên để tăng thêm độ xác Giám sát thường xuyên tính nhạy cảm với kháng sinh E coli nói riêng vi khuẩn gây bệnh nói chung Việc điểu trị kháng sinh phải theo kết kháng sinh đồ sv Nguyễn Việt Vương Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN 44 http://www.lrc-tnu.edu.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Đình Bảng, Hồng Ngọc Hiển, Phạm Lê Hùng, Đàm Viết Cương Vi sinh vật y học NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội (1992) Đái Duy Ban, Lương Thị Hồng Vân Kỹ thuật công nghệ sinh học ứng dụng Nông - Sinh - Y NXB Nông Nghiệp (2004) Nông Thị Bái, Nguyễn Thị Thuỷ Tình hình kháng thuốc s ố vi khuẩn gây bệnh hai năm (1997- 1998) Bệnh viện đa khoa Trung ương Thái Nguyên M ột s ố cơng trình nghiên cứu độ nhạy cảm vi khuẩn với thuốc kháng sinh (1997- 1998) Viện YHLSCBNĐ, Hà Nội Tr 69-73 (1999) Ngơ Đình Quang Bính Vi sinh vật học công nghiệp Trung tâm khoa học tự nhiên công nghệ quốc gia, Hà Nội (2005) Nguyễn Văn Cách Công nẹhệ lên men chất kháng sinh NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội (2004) Lê Huy Chính (chủ biên) cộng Vi sinh vậty học NXB Y học, Hà Nội (2001) Nguyễn Thị Chính, Trương Thị Hồ Vi sinh vật ỵ học NXB Đại học quốc gia Hà Nội (2005) Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Dương Đức Tiến Vi sinh vật học NXB Giáo dục (2003) Nguyễn Thành Đạt C sở sinh học vi sinh vật NXB Giáo dục (1999) 10 Lê Đăng Hà Cộng Tính kháng thuốc kháng sinh 10 loại vi khuẩn thường ạặp Việt Nam năm 1998 M ột s ố cơng trình nẹhiên cứu độ nhạy cảm vi khuẩn với thuốc kháng sinh (1997-1998) Viện YHLSCBNĐ (1999) Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn 11 Lê Đăng Hà, Phạm Văn Ca Cộng Kết giám sát mức độ kháng thuốc chủng vi khuẩn gây bệnh khu vực phía Bắc Việt năm 2000 Thơng tin kháng thuốc vi khuẩn NXB Y học (2001) 12 Nguyễn Thị Nam Liên, Bùi Thị Như Lan, Trần Vãn Hưng, Lê Đăng Hà, Phạm Văn Ca Cộng Mức độ kháng kháng sinh chủng vi khuẩn gây bệnh phân lập bệnh viện TW H u ế năm 2000 Thông tin: Kháng thuốc vi khuẩn NXB Y học, Hà Nội (2001) 13 Hoàng Thủy Long Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh y học NXB Văn hoá (1991) 14 Đoàn Thị Nguyên Vi sinh vật y học NXB Y học, Hà Nội (2004) 15 Mai Phương, Lê Đăng Hà, Nguyễn Xuân Quang, Phạm Văn Ca, Đặng Lan Anh Cộng M ột sơ'cơng trình nghiên cứu độ nhạy cảm vi khuẩn với thuốc kháng sinh (1997 -1998) Viện YHLSCBNĐ, Hà Nội (1999) 16 Bùi Xuân Vĩnh Cộng Thuốc khánq sinh cách sử dụng NXB Y học, Hà Nội (1998) 17 Cao Văn Viên Kháng kháng sinh - Vai trò phối hợp kháng sinh ß- Lactam / chất ức ch ế men ß - Lactamase Viện YHLSCBNĐ, Hà Nội (2004) 18 Bộ y tế M ột sơ' cơng trình nghiên cứu độ nhạy cảm vi khuẩn với thuốc kháng sinh (1999 - 2001) NXB Y học (2002)ể TÀI LIỆU TIẾNG ANH 19 c Sam Iể Tomquist, Bjom Wenngren, Nguyen Thi Kim Chuc, Mattias Larsson, Einar Magnusson, Nguyen Thanh Do, Pham Van Ca, Le Dang Ha Antibiotic resistance in Viet Nam: An epidemiological indicator of inefficient and inequitable use of health resources Efficient, equityiooriented sta teỹes fo r health international perspectives - Focus on Vietnam CIMH Melbourne (2000) Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn 20 Jana M swens Janet A Hindler and lance R peterson Special phenotypic methods fo r detecting antibacterial resistance Manual of clinical microbiology (1999) 21 Todar's online Textbook o f Bacteriology, Antimicrobial Agents Used in Treatment o f infectious disease Kenneth todar university of Winconsin Madison department of bacteriology (2002) 22 W Michael scheld, Robert A.clark, David T Durack Medical knowledge s e lf Assessment program in the subspecialty o f infections diseases Book 1: syhabus and selft - Asesesment test NXB: Developed by infections Diseases society of Amerian college of physicians (2001) Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐH TN http://www.lrc-tnu.edu.vn PHỤ LỤC Atibiotic Antibio ticcode HR Amikacin Ampicillin Azlocillin Azthreonam Benzylpenicillin Carbenicillin Cefaclor Cefadroxil Cefalotin2 Cefalexin Cefoxitin Cefiiroxime Cefotaxime Cftazidime Chloramphenilcol Clindamycin3 Doxycycline4 Erythromycin Fusidic acid Gentamicin Imipenem Kanamycin Mecillinam Vleci/Ampi5 Mezlocillin Nalidixic acid6 Netilmicin Nitrofurantoin Norfloxacin Penicillin V Piperacillin Sulfisomidine Ietrcycline Tobramycin [rim/sulfa7 rrimethoprim Rifampicin vleticillin8 )xacillin8 / ancomycin Solistin ’olymyxin B AN AM AL AT PG CA CS DX CE cx FX XM CT TZ CL CM DC EM FU GM IP KM MM MA ML NA NC NI NX PV PP SU TC Hg 30 10 30 30 10 100 30 30 30 30 30 30 30 30 30 15 30 15 50 30 10 30 10 10+10 30 30 30 100 10 10 30 250 30 TM TS 30 TR RI ME ox VA CO PO MIC breakpoint (ng/ml) Disc content 1.2+23.8 s I R < > 64 < > 16 < > 64 < > 16 < > < 16 > 128 < > 16 < > 16 < > 16 < > 16 < > 16 < > 16 < > 16 < > 16 < > < > < > < 05 > < > < > 16 < > 16 < > 64 < > 16 < 2+2 > 6+16 < > 64 < > 32 < > 16 < 32 > 32 < > 16 < 0.25> < > 64 256 < > < > 16 < > 32 < 10 10 30 30 10 > Imhibi zone limits (mm) s > 16 > 22 > 20 > 25 > 27 > 23 > 25 >24 >23 >26 >26 >26 >24 >24 >24 >24 >24 >25 >25 >18 >19 >17 >18 >19 >20 >22 >17 >18 >22 >29 >19 >15 >28 >19 >22 >17 >20 >10 >10 >14 >10 >10 I 15-11 21-11 19-10 24-20 26-16 22-13 24-19 23-16 22-17 25-18 25-19 25-20 23-20 23-19 23-17 23-19 24-18 17-15 18-13 16-9 17-8 18-8 19-11 21-14 16-14 21-11 28-16 18-10 27-22 18-14 21-16 R