DƢƠNG THỊ THUẤN NGHIÊN cứu bào CHẾ THUỐC TIÊM hỗn DỊCH CHỨA PHỨC hợp LIPID AMPHOTERICIN b LUẬN văn THẠC sĩ dƣợc học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI DƢƠNG THỊ THUẤN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC TIÊM HỖN DỊCH CHỨA PHỨC HỢP LIPID AMPHOTERICIN B LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI, 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI DƢƠNG THỊ THUẤN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC TIÊM HỖN DỊCH CHỨA PHỨC HỢP LIPID AMPHOTERICIN B LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ 60720402 Người hướng dẫn khoa học: TS Trần Thị Hải Yến PGS.TS Phạm Thị Minh Huệ HÀ NỘI, 2016 LỜI CÁM ƠN Đầu tiên, xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc đến : TS Trần Thị Hải Yến PGS.TS Phạm Thị Minh Huệ Là người tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Nhờ giúp đỡ q báu mà tơi hồn thành mục tiêu đề tài đặt Tơi xin gửi lời cám ơn đến tồn thể thầy cô, anh chị kỹ thuật viên môn Bào chế-Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ thời gian nghiên cứu thực nghiệm Cuối cùng, xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè ln quan tâm khích lệ giúp tơi hồn thành luận văn Hà Nội, tháng năm 2016 Học viên Dương Thị Thuấn MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Amphotericin B 1.1.1.Cơng thức hóa học 1.1.2 Đặc tính lý hóa 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.1.4 Dược động học 1.1.5 Chỉ định 1.1.6 Tác dụng không mong muốn (thường gặp) 1.1.7 Liều dùng 1.1.8 Một số chế phẩm tiêm AMB thị trường 1.2 Phức hợp phospholipid chứa amphotericin B 1.2.1 Nguyên lý hình thành phức hợp phospholipid amphotericin B 1.2.2 Tá dược tạo phức 1.2.3 Độ ổn định 1.2.4 Ưu, nhược điểm 1.2.5 Bào chế phức hợp lipid chứa AMB 10 1.2.6 Phương pháp đánh giá cấu trúc phức hợp lipid 12 1.3 Một số nghiên cứu phức hợp lipid AMB 18 1.4 Lợi ích phƣơng pháp bào chế tạo phức hợp với lipid .19 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1.Đối tƣợng nghiên cứu, nguyên vật liệu, phƣơng tiện nghiên cứu 22 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Phương pháp bào chế phức hợp lipid AMB 23 2.2.2 Phương pháp chứng minh phức hợp lipid AMB 24 2.2.3 Phương pháp đánh giá hỗn dịch chứa phức hợp lipid AMB .27 2.2.4 Phương pháp đánh giá thuốc tiêm hỗn dịch chứa phức hợp lipid AMB 28 Chƣơng KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 29 3.1 Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng AMB 29 3.1.1 Khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc kí 29 3.1.2 Độ đặc hiệu 29 3.1.3 Tính tuyến tính 30 3.1.4 Độ lặp lại 31 3.2 Nghiên cứu xây dựng công thức bào chế phức hợp lipid AMB 32 3.2.1 Khảo sát môi trường phân tán 32 3.2.2 Khảo sát dung mơi hịa tan dược chất 35 3.2.3 Khảo sát tỉ lệ dược chất/lipid .36 3.2.4 Khảo sát biện pháp bốc dung môi 37 3.2.5 Khảo sát phương pháp làm giảm KTTP 39 3.2.6 So sánh mẫu bào chế với chế phẩm thương mại Ampholip 44 3.3 Kết chứng minh phức hợp lipid AMB .46 3.3.1 Phân tích nhiệt vi sai 46 3.3.2 Phổ hấp thụ hồng ngoại (IR) 47 3.3.3 Hình thái tiểu phân 48 3.3.4 Phổ nhiễu xạ tia X 50 3.4 Đề xuất qui trình bào chế thuốc tiêm hỗn dịch chứa phức hợp lipid AMB 5mg/ml .53 3.5 Đề xuất tiêu chuẩn sở cho thuốc tiêm hỗn dịch chứa phức hợp lipid AMB 5mg/ml .56 Chƣơng BÀN LUẬN 58 4.1 Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng 58 4.2 Xây dựng công thức qui trình bào chế phức hợp 58 4.2.1 Sử dụng tá dược HSPC DSPG 58 4.2.2 Về môi trường phân tán 59 4.2.3 Về dung mơi hịa tan dược chất 59 4.2.4 Về phương pháp làm giảm kích thước tiểu phân .60 4.2.5 Về biện pháp bốc dung môi 61 4.2.6 Về qui trình bào chế phức hợp lipid AMB 61 4.3 Phương pháp chứng minh phức hợp .62 4.3.1 Phương pháp quét nhiệt vi sai 62 4.3.2 Phương pháp chụp ảnh qua kính hiển vi điện tử 62 4.3.3 Phương pháp phổ IR 63 4.3.4 Phương pháp phổ nhiễu xạ tia X 63 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT .64 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 So sánh ưu nhược điểm liposome phức hợp lipid AMB Bảng 2.2 Nguyên liệu 22 Bảng 3.3 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc kí 29 Bảng 3.4 Mối tương quan nồng độ AMB diện tích peak .30 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại 31 Bảng 3.6 Thành phần công thức khảo sát môi trường phân tán 32 Bảng 3.7 Phân bố KTTP mẫu sau chu kỳ đồng .34 Bảng 3.8 Thành phần công thức khảo sát dung mơi hịa tan AMB .36 Bảng 3.9 Thành phần công thức khảo sát tỉ lệ dược chất/lipid 37 Bảng 3.10 KTTP phân bố KTTP hai biện pháp bốc dung môi 38 Bảng 3.11 KTTP phân bố KTTP mẫu CT6 CT10 39 Bảng 3.12 Đặc tính phức hợp sau làm giảm KTTP phương pháp đồng hóa tốc độ cao .41 Bảng 3.13 KTTP làm nhỏ phương pháp siêu âm 42 Bảng 3.14 KTTP phân bố KTTP sau đồng hóa áp suất cao kết hợp đùn qua màng 43 Bảng 3.15 KTTP phân bố KTTP mẫu bào chế chế phẩm Ampholip 45 Bảng 3.16 pH hàm lượng mẫu bào chế chế phẩm Ampholip .46 Bảng 3.17 Số sóng gốc (RO)2PO2- phân tử lipid mẫu .47 Bảng 3.18 Đỉnh nhiễu xạ mẫu đo .50 Bảng 3.19 Chất lượng thuốc tiêm hỗn dịch chứa phức hợp lipid AMB (n=3) 56 Bảng 3.20 Tiêu chuẩn sở đề xuất cho thuốc tiêm hỗn dịch chứa phức hợp lipid AMB 5mg/ml .57 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc giả định phức hợp lipid AMB Hình 1.2 Phân tử HSPC DSPG Hình 1.3 Cấu trúc màng phospholipid nhiệt độ chuyển pha 14 Hình 1.4 Biểu đồ tượng trưng cho pha phospholipid phổ 31P-NMR tương ứng a: pha phospholipid kép; b: pha phospholipid lục giác; c: pha xảy chuyển động đẳng hướng .15 Hình 1.5 Phổ hấp thụ hồng ngoại tamoxifen (A), phospholipid (B), hỗn hợp vật lý (C) phức hợp lipid tamoxifen (D) 16 Hình 1.6 Phổ nhiễu xạ tia X vinorelbine (A), phospholipid (B), hỗn hợp vật lý (C) mẫu phức hợp lipid vinorelbine (D) .17 Hình 1.7 Phổ nhiễu xạ rifampicin (A), hỗn hợp vật lý (B), phospholipid (C), phức hợp lipid rifampicin (D) .17 Hình 1.8 Nồng độ AMB tìm thấy mẫu xét nghiệm tử thi 19 Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ AMB diện tích peak 31 Hình 3.10 Hỗn dịch phức hợp lipid AMB nồng độ 50 mol % .34 Hình 3.11 Hỗn dịch phức hợp lipid AMB nồng độ 100 mol % .34 Hình 3.12 Đồ thị biểu diễn KTTP phân bố KTTP mẫu nhóm I II 35 Hình 3.13 Mẫu CT10.1 CT10.2 sau đồng hóa lần 38 Hình 3.14 Đồ thị biểu diễn KTTP mẫu CT6 CT10 qua lần đồng 40 Hình 3.15 Đồ thị biểu diễn KTTP phân bố KTTP mẫu CT6 40 Hình 3.16 Đồ thị biểu diễn KTTP phân bố KTTP mẫu CT10 40 Hình 3.17 Biểu đồ KTTP phân bố KTTP sau đồng tốc độ 4.000vòng/phút 41 Hình 3.18 Biểu đồ KTTP phân bố KTTP sau siêu âm 50Hz/50W 42 Hình 3.19 Biểu đồ KTTP phân bố KTTP sau đồng chu kỳ kết hợp đùn 44 Hình 3.20 Mẫu bào chế mẫu Ampholip 45 Hình 3.21 Biểu đồ KTTP phân bố KTTP mẫu bào chế Ampholip 45 Hình 3.22 Phổ đồ DSC mẫu HSPC, DSPG, AMB, mẫu liposome AMB mol%, mẫu phức hợp lipid AMB 25 mol% 100 mol% 46 Hình 3.23 Phổ hồng ngoại của mẫu đo 48 Hình 3.24 Hình thái mẫu quan sát KHV điện tử truyền qua 49 Hình 3.25 Phổ nhiễu xạ tia X mẫu AMB (a), hỗn hợp vật lý (b), mẫu trắng (c), liposome AMB 5mol% (d), phức hợp lipid AMB100mol% (e) 52 Hình 3.26 Sơ đồ bào chế thuốc tiêm hỗn dịch chứa phức hợp lipid AMB 5mg/ml 56 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT TT Viết tắt AMB Amphotericin B DMPC α – Dimyristoylphosphatidylcholin DMPG 1- α-Dimyristoylphosphatidylglycerol DMSO Dimethyl sufoxide DSPG Distearoylphosphatidylglycerol DSC HSPC KTTP Kích thước tiểu phân KHV Kính hiển vi 10 LTT Lọc tiếp tuyến 11 NSX Nhà sản xuất 12 31 P-NMR Từ/cụm từ đầy đủ Nhiệt quét vi sai (Differential Scanning Calorimetry) Phosphatidylcholin đậu nành hydrogen hóa (Hydrogenated soy phosphatidylcholine) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân phospho đồng vị 31 (Phosphorus –31 Nuclear magnetic Resonance ) 13 TKHH Tinh khiết hóa học 14 TKPT Tinh khiết phân tích 15 TLTK Tài liệu tham khảo KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận : Nghiên cứu đạt kết sau : Đã xây dựng công thức bào chế phức hợp lipid AMB sử dụng hai tá dược HSPC DSPG với tỉ lệ :3, môi trường phân tán dung dịch natri clorid 0,9%, dung mơi hịa tan dược chất ethanol, tỉ lệ dược chất/lipid 100 mol% Phương pháp bào chế phức hợp sử dụng thay đổi dung môi Phức hợp tạo có kích thước < 5µm với số phân bố tiểu phân span