Góp phần nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ streptomyces 155 29​

BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ HỮU NGHỊ GĨP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỞNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 155.29 KHĨA ḶN TỚT NGHIỆP DƯỢC SI HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỢI LÊ HỮU NGHỊ GĨP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 155.29 KHĨA ḶN TỚT NGHIỆP DƯỢC SI Người hướng dẫn: TS Bùi Quang Phúc ThS Lê Thị Thu Hương Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh& Sinh học Trường Đại họọ̣c Dược Hà Nợi Viện sốt rét -KST-CT TW HÀ NỢI - 2013 LỜỜ̀I CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến Thạc sĩ Lê Thị Thu Hương Tiếế́n sĩ Bùi Quang Phúc đã tận t ình hướng dẫn từ những bước đầu tiên cho đến hoan thiện khóa luận Tôi xin chân cảm ơn các thầy cô giáo , các cán bộ, kỹ thuật viên giảng day, công tác tai Bộ môn Vi sinh - Sinh học, Bộ môn Công nghiệp dược trường Đai học Dược Ha Nội, Việệ̣n sốt rét KST-CT TW đã giúp đỡ thời gian lam thực nghiệm Cũng nhân dip cung xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu toan thể các thầy cô giáo trường Đai học Dược Ha N ội đã day dỗ va tao mọi điều kiện thuận lợi cho thời gian học tập tai trường Va cuôi la lời cảm ơn gửi tới gia đình va ban bè đã động viên , giup đỡ suôt thời gian thực hiện khóa luận Do thời gian lam thực nghiệm cung kiến thức của bản thân có han , khóa luận còn có nhiều thiếu sót Tôi rất mong nhận được sự góp ý của các thầy cô , ban bè để khóa luận được hoan thiện Tôi xin chân cảm ơn! Ha Nội, ngày 15, tháng 5, năm 2013 Sinh viên Lê Hữữ̃u Nghị MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔỔ̉NG QUAN 1.1 Đại cương kháng sinh 1.1.1 Định nghĩa kháng sinh 1.1.2 Phân loại kháng sinh 1.1.3 Sơ đồ tổng quát sinh tổng hợp kháng sinh 1.1.4 Cơ chế tác dụng kháng sinh 1.1.5 Khái niệệ̣m tính kháng kháng sinh 1.1.6 Các ứng dụng kháng sinh 1.2 Đại cương xạ khuẩn 1.2.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn 1.2.2 Phân loại xạ khuẩn 1.2.3 Đặc điểm xạ khuẩn chi streptomyces 1.3 Tuyển chọn, cải tạo bảo quản giống xạ khuẩn 1.3.1 Mục đích 1.3.2 Chọn chủng có HTKS cao phép chọn lọc ngẫẫ̃u nhiên 1.3.3 Đột biến cải tạo giống 1.3.4 Bảo quản giống xạ khuẩn 1.4 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh 1.4.1 Khái niệệ̣m lên men 1.4.2 Các phương pháp lên men 10 1.4.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 11 1.5 Chiết tách tinh chế kháng sinh từ dịch lên men .11 1.5.1 Mục đích 11 1.5.2 Các phương pháp chiết tách 12 1.6 Bướớ́c đầu nghiên cứu cấu trúc kháng sinh 13 1.6.1 Phổ hồng ngoại 13 1.6.2 Phổ tử ngoại 13 1.6.2 Phổ khối 13 1.7 Một số nghiên cứu liên quan 14 1.7.1 Quy định phân tử sinh tổng hợp kháng sinh Streptomyces 14 1.7.2 Một chủng đầy hứa hẹn streptomyces sp vớớ́i đặc điểm thúc đẩy tăng trưởng quản lý dịch bệệ̣nh nông nghiệệ̣p 14 1.7.3 Nghiên cứu mớớ́i sản xuất kháng sinh từ S hygroscopius D1.5 .15 CHƯƠNG II: ĐỐớ́I TƯỢệ̣NG VÀỜ̀ PHƯƠNG PHÁớ́P NGHIÊN CỨớ́U 16 2.1 Nguyên vật liệệ̣u, thiết bị 16 2.1.1 Nguyên vật liệệ̣u 16 2.1.2 Máy móc thiết bị 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.2.1 Chọn lọc, cải tạo giống 19 2.2.2 Lên men, chiết tách kháng sinh tối thích 19 2.2.3 Sơ xác định số tính chất kháng sinh thu 20 2.3 Phương pháp thựệ̣c nghiệệ̣m 2.3.1 Nuôi cấy giữ giống xạ khuẩn 2.3.2 Đ 2.3.3 Sàng lọc ngẫẫ̃u nhiên 2.3.4 Đ 2.3.5 Lên men chìm tổng hợp kháng sinh 2.3.6 Xác định độ bền kháng sinh dịch lên men 2.3.7 Chiết kháng sinh từ dịch lên men dung môi hữu 2.3.8 Tách thành phần kháng sinh sắc ký lớớ́p mỏng 2.3.9 Thu kháng sinh thô phương pháp cất quay 2.3.10 Tinh chế kháng sinh thô sắc ký cột 2.3.11 Sơ xác định kháng sinh tinh khiết thu CHƯƠNG III: KÊớ́T QUẢ THỰC NGHIỆệ̣M VÀ NHẬệ̣N XÉT 3.1 Kết sàng lọc ngẫẫ̃u nhiên 3.2 Kết đột biến cải tạo giống lầ 3.3 Kết đột biến cải tạo giống lầ 3.4 Kết đột biến cải tạo giống b 3.5 Kết lên men sinh tổng hợp 3.5.1 Kết chọn mơi trườỜ̀ng lên men chìm 3.5.2 Kết chọn chủng lên men 3.6 Kết đánh giá ảnh hưởng củ kháng sinh dịch lọc 3.7 Kết chọn dung môi pH chiết .33 3.8 Kết sắc ký lớớ́p mỏng chọn hệệ̣ dung môi 34 3.9 Kết sắc ký cột 34 3.10 Kết đo nhiệệ̣t độ nóng chảy biệệ̣n giải phổ xác định sơ nhóm chức đặc trưng kháng sinh thu 36 KÊớ́T LUẬệ̣N VÀ KIÊớ́N NGHỊ 37 DANH MỤC CÁC CHỮ VIÊớ́T TẮT ADN Acid 2’- deoxyribonucleic CW Thành tếế́ bào- Cell wall DMHC Dung môi hữữ̃u ĐB1 Độệ̣t biếế́n ĐB2 Độệ̣t biếế́n Gr Gram IR Hồng ngoại- Infrared ISP Chương trìì̀nh Streptomyces quốc tếế́- International Streptomyces Project KS Kháng sinh MS Phổ khối- Mass Spectrometry MT Mơi trườì̀ng MT2dt Mơi trườì̀ng dịch thểể̉ SLNN Sàng lọệ̣c ngẫữ̃u nhiên TB Tếế́ bào TĐC Trao đổi chấế́t VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vậệ̣t UV Tửể̉ ngoại- Ultraviolet DANH MỤC CÁC BẢNG Bảể̉ng 1: Phân loại các chấế́t kháng sinh dựệ̣a theo cấế́u trúc hóa họệ̣c Bảể̉ng 2.1: Cáế́c vi khuẩn kiểể̉m định Bảể̉ng 2.2: Cáế́c MT nuôi cấế́y xạ khuẩn Bảể̉ng 2.3: Các MT nuôi cấế́y VSV kiểể̉m định Bảể̉ng 2.4: Cáế́c dung môi đãữ̃ sửể̉ dụng Bảể̉ng 3.1: Kếế́t quảể̉ thửể̉ HTKS sàng lọệ̣c ngẫữ̃u nhiên Bảể̉ng 3.2: Kếế́t quảể̉ thửể̉ HTKS độệ̣t biếế́n lầì̀n Bảể̉ng 3.3: Kếế́t quảể̉ thửể̉ HTKS đợệ̣t biếế́n lầì̀n Bảể̉ng 3.4: Kếế́t quảể̉ thửể̉ HTKS đợệ̣t biếế́n hóa họệ̣c Bảể̉ng 3.5: Kếế́t quảể̉ chọệ̣n mơi trườì̀ng lên men (trên P.mirabilis) Bảể̉ng 3.6: Kếế́t quảể̉ chọệ̣n chủể̉ng lên men chìm Bảể̉ng 3.7: Ảnh hưởng củể̉a pH đếế́n đợệ̣ bềì̀n kháng sinh (trên P.mirabilis) Bảể̉ng 3.8: Ảnh hưởng củể̉a nhiệệ̣t đợệ̣ đếế́n đợệ̣ bềì̀n kháng sinh (trên P.mirabilis) Bảể̉ng 3.9: Kếế́t quảể̉ chọệ̣n dung môi pH chiếế́t (trên P.mirabilis ) Bảể̉ng 3.10: Kếế́t quảể̉ chọệ̣n hệệ̣ dung môi chạy sắế́c ký Bảể̉ng 3.11: Kếế́t quảể̉ chạy sắế́c kí cợệ̣t lầì̀n (trên P.mirabilis ) Bảể̉ng 3.12: Kếế́t quảể̉ chạy sắế́c kí cợệ̣t lầì̀n (trên P.mirabilis ) Bảể̉ng 3.13: Phổ IR DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1: Sơ đô tông quát sinh tông hợp sảể̉n xuấế́t kháng sinh Hình 2: Khuẩn lạc xạ khuẩn Hình 3: Sơ bợệ̣ phân loại xạ khuẩn Hình 4: Đườì̀ng cong sinh trưởng phát triểể̉n củể̉a xạ khuẩn Hình P1: Thửể̉ HTKS phương pháế́p khối thạch Hình P2: Thửể̉ HTKS phương pháế́p giếế́ng thạch Hình P3: Thửể̉ HTKS phương pháế́p khoanh giấế́y lọệ̣c Hình P4: Phát hiệệ̣n vếế́t sắế́c ký phương pháp hiệệ̣n hình VSV Hình P5: Tinh chếế́ kháng sinh sắế́c ký cộệ̣t Hình P6: Phổ tửể̉ ngoại củể̉a kháng sinh Hình P7: Phổ hồng ngoại củể̉a kháng sinh Hình P8: Phổ khối (MS) 34 3.8 Kết sắc ký lớớ́p mỏng chọn hệệ̣ dung mơi Dịch chiếế́t dung mơi hữữ̃u đượệ̣c dùì̀ng đểể̉ chạy sắế́c ký Tiếế́n hành sắế́c ký lớế́p mỏng, thửể̉ triểể̉n khai vớế́i hệệ̣ dung môi Phát hiệệ̣n vếế́t hiệệ̣n hình VSV (Vi khuẩn sửể̉ dụng P mirabilis) Thành phầì̀n các hệệ̣ dung mơi kếế́t quảể̉ thửể̉ đượệ̣c thểể̉ hiệệ̣n bảể̉ng 3.10 Bảng 3.10: Kết chọn hệệ̣ dung môi chạy sắc ký Dung môi Nhận xét: Cảể̉ hệệ̣ đềì̀u cho kếế́t quảể̉ có vếế́t kháng sinh Hệệ̣ có khảể̉ táế́ch tốt cảể̉ vì vếế́t hiệệ̣n hình VSV có dạng vếế́t kéo dài, vớế́i các hệệ̣ 1, 2, vếế́t gầì̀n hình tròn 3.9 Kết sắc ký cột Mục đích: Tinh chếế́, loại tạp nhằm thu lấế́y kháng sinh tinh khiếế́t Dịch lọệ̣c củể̉a dịch lên men gộệ̣p lại đượệ̣c khoảể̉ng 5,5 lít, đem chiếế́t ethylacetat pH thu đượệ̣c 820 ml dung môi hữữ̃u Lượệ̣ng dung môi mang cấế́t máy cấế́t quay chân không Buchi Waterbath, thu đượệ̣c 0,7045g bộệ̣t kháng sinh thô Cho lượệ̣ng bộệ̣t chạy qua cộệ̣t Silicagel vớế́i hệệ̣ dung môi Lấế́y 30 phân đoạn, mỗữ̃i phân đoạn 5ml vào ống nghiệệ̣m Thửể̉ HTKS từì̀ng phân đoạn phương pháế́p khoanh giấế́y lọệ̣c (VSV kiểể̉m định P mirabilis) Kếế́t quảể̉ cụ thểể̉ đượệ̣c thểể̉ hiệệ̣n bảể̉ng 3.11 Bảng 3.11: Kết chạy sắc ký cột lần (trên P.mirabilis) Phân đoạn 35 10 11 Nhận xét: Có nhấế́t chấế́t có HTKS bộệ̣t kháế́ng sinh thô thu đượệ̣c Có thểể̉ phân đoạn kháế́ng sinh cáế́c phân đoạn từì̀ 2-10 Gợệ̣p cáế́c phân đoạn lại đem chân không, thu đượệ̣c: 0,5148g bộệ̣t kháế́ng sinh Cho lượệ̣ng bộệ̣t chạy qua cộệ̣t Silicagel vớế́i hệệ̣ dung môi ethylacetat: n-hexan: methanol (15:6:1) Lấế́y 30 phân đoạn, mỗữ̃i phân đoạn 2ml vào ống nghiệệ̣m Thửể̉ HTKS từì̀ng phân đoạn phương pháế́p khoanh giấế́y lọệ̣c (trên P mirabilis) Rf mỗữ̃i phân đoạn Kếế́t quảể̉ cụ thểể̉ đượệ̣c thểể̉ hiệệ̣n bảể̉ng 3.12 Bảng 3.12: Kết chạy sắc ký cột lần (trên P.mirabilis) Phân đoạn HTKS D 10 36 11 12 kếế́t tinh đượệ̣c 0,1748 g KS1 tinh khiếế́t Phân đoạn từì̀ 18-23 đượệ̣c gợệ̣p lại, đem cô chân không, kếế́t tinh thu đượệ̣c 0,0529g KS2 tinh khiếế́t Như vậệ̣y hiệệ̣u suấế́t tinh chếế́ đạt 32,32% 3.10 Kết đo nhiệệ̣t độ nóng chảy biệệ̣n giải phổ xác định sơ nhóm chức đặc trưng kháng sinh thu Nhiệt độ nóng chảy kháng sinh: 232,6ºC Phổ hấế́p thụ hồng ngoại, tửể̉ ngoại củể̉a kháng sinh sinh tổng hợệ̣p Streptomyces 155.29 đượệ̣c giớế́i thiệệ̣u phầì̀n phụ lục hình P6, P7 Phổ tử ngoại (hình P6): Cho cáế́c đỉnh hấế́p thụ ở: 212nm, 239nm 442 nm Từì̀ đóế́, dựệ̣ đoáế́n cấế́u trúế́c KS cóế́ nhân thơm, nối đôi liên hợệ̣p, dị tố O, N, halogen…, kếế́t hợệ̣p cáế́c đặc điểể̉m Phổ hồng ngoại (hình P7): Dựệ̣a vào cáế́c đỉnh hấế́p thụ phổ IR có thểể̉ dựệ̣ đoáế́n cấế́u trúc phân tửể̉ kháng sinh có các nhóm chứế́c amino, hydroxyl, carbonyl, amid, nitro, imin… Cáế́c bướế́c sóng hấế́p thụ cựệ̣c đại các nhóm chứế́c dựệ̣ đoáế́n tương ứế́ng đượệ̣c trình bày bảể̉ng 3.13 -1 λ (cm ) 3442 3057 2964, 2928 1745 1646 1300,1270, 1194, 1097 Phổ khối (hình P8 ): Khối lượệ̣ng phân tửể̉ dựệ̣ kiếế́n củể̉a kháế́ng sinh thu đượệ̣c 1280,1 đvC 37 KÊớ́T LUẬệ̣N VÀ KIÊớ́N NGHỊ KÊớ́T LUẬệ̣N Sau mợệ̣t thờì̀i gian nghiên cứế́u, chúế́ng tơi đãữ̃ bảể̉n hồn thành đượệ̣c mục tiêu ban đầì̀u củể̉a khóa ḷệ̣n tốt nghiệệ̣p Các kếế́t luậệ̣n cụ thểể̉ sau: • Qua lầì̀n đợệ̣t biếế́n UV lầì̀n đợệ̣t biếế́n hóa họệ̣c thì hoạt tính kháng sinh củể̉a Streptomyces 155.29 tăng lên đáế́ng kểể̉ • Tìì̀m đượệ̣c MT ni cấế́y bềì̀ mặt tốt nhấế́t MT2 MT lên men chìm tốt nhấế́t vớế́i chủể̉ng Streptomyces 155.29 MT2dt Chiếế́t kháng sinh từì̀ dịch lên men dung môi ethylacetat pH cho hiệệ̣u quảể̉ tốt nhấế́t • Kháng sinh Streptomyces 155.29 sinh tổng hợệ̣p có mộệ̣t số đặc điểể̉m sau: - Là kháng sinh có phổ tác dụng rộệ̣ng, cảể̉ vi khuẩn Gram(+) vi khuẩn Gram(-), - Tương đối bềì̀n vớế́i nhiệệ̣t đợệ̣, - Bềì̀n vớế́i pH acid trung tính, bềì̀n vớế́i pH base, - Có nhấế́t thành phầì̀n hoạt đợệ̣ng kháế́ng sinh thơ thu đượệ̣c, - Hiệệ̣u suấế́t tinh chếế́ kháế́ng sinh đạt khoảể̉ng 32,32% - Kháng sinh tinh khiếế́t có nhiệệ̣t độệ̣ nóng chảể̉y 232,6ºC, hấế́p thụ ánh sáng tửể̉ ngoại, hồng ngoại Cấế́u trúc phân tửể̉ kháế́ng sinh đượệ̣c dựệ̣ đoáế́n cóế́ thểể̉ chứế́a nhân thơm, nối đôi liên hợệ̣p, dị tố; các nhóm chứế́c có kháng sinh là: ester, alkyl clorid, alkyl flourid, imin, amin, nitro, amid 38 KIÊớ́N NGHỊ Từì̀ nhữữ̃ng kếế́t quảể̉ đãữ̃ thu đượệ̣c, chúế́ng tơi đềì̀ x́ế́t tiếế́p tục phát triểể̉n đềì̀ tài nghiên cứế́u sâu theo cáế́c hướế́ng sau: • Tiếế́n hành giảể̉i trình tựệ̣ gen đểể̉ xáế́c định xác tên khoa họệ̣c củể̉a Streptomyces 155.29 • Tiếế́p tục đợệ̣t biếế́n chủể̉ng Streptomyces 155.29 (bằng UV, hóa chấế́t, phương pháp độệ̣t biếế́n bậệ̣c thang,…) đểể̉ tạo chủể̉ng có khảể̉ siêu sinh tổng hợệ̣p kháng sinh • Khảể̉o sáế́t tìì̀m điềì̀u kiệệ̣n lên men tốt nhấế́t đểể̉ nâng cao hiệệ̣u suấế́t tinh chếế́ tạo kháng sinh tinh khiếế́t • Nghiên cứế́u cáế́c phương pháế́p chiếế́t, táế́ch đểể̉ tạo kháng sinh vớế́i độệ̣ tinh khiếế́t hiệệ̣u suấế́t cao Chiếế́t táế́ch đểể̉ thu lấế́y các kháng sinh phụ nghiên cứế́u sâu • Tiếế́n hành cợệ̣ng hưởng từì̀ hạt nhân, xáế́c định các tính chấế́t lý, hóa,… đểể̉ xáế́c định xác cấế́u trúc hóa họệ̣c củể̉a kháng sinh Streptomyces 155.29 sinh tổng hợệ̣p TÀI LIỆệ̣U THAM KHẢO Tiếế́ng Việệ̣t Trầì̀n Tửể̉ An (2002), Phương pháp chiết ứng dụng kiểm nghiệm độc chất, Trung tâm Thông tin- Thư việệ̣n ĐH Dượệ̣c, Hà Nộệ̣i, tr 40-41, 49-59 Kiềì̀u Hữữ̃u Ảnh (1999), Vi sinh vật học công nghiệp, Nhà xuấế́t bảể̉n Khoa họệ̣c kỹữ̃ thuậệ̣t, Hà Nộệ̣i, tr 167-172 Nguyễn Văn Cáế́ch (2004), Công nghệ lên men chất kháng sinh, Nhà xuấế́t bảể̉n Khoa họệ̣c kỹữ̃ thuậệ̣t, Hà Nộệ̣i, tr 11-16 Lê Huy Chính (2007), Vi sinh vật Y học, Nhà xuấế́t bảể̉n Y họệ̣c, Hà Nộệ̣i, tr 15-16, 50-56 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đìì̀nh Quyếế́n, Phạm Văn Ty (2001), Vi sinh vật học, Nhà xuấế́t bảể̉n Giáo dục, tr 38-67 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Kim Nữữ̃ Thảể̉o (2006), Các nhóm vi khuẩn chủ yếu- Phân loại xạ khuẩn http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/phanloaixakhuan01.htm Bùi Thị Hà (2008), Nghiên cứu xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh chè Thái Nguyên, Luậệ̣n văn thạc sỹữ̃ Sinh họệ̣c, trườì̀ng Đại họệ̣c Sư Phạm, Thái Nguyên, tr.3-16 Từì̀ Minh Koóng (2004), Cơ sở cơng nghệ sinh học sản xuất dược phẩm, Nhà xuấế́t bảể̉n Y họệ̣c, Hà Nợệ̣i, tr.42-54 Đồn Thị Ngụệ̣n (2009), Vi sinh vật, NXB Giáo dục Việệ̣t Nam, tr 7-37 10 Lương Đứế́c Phẩm (1999), Công nghệ vi sinh vật, NXB Nông nghiệệ̣p 11 Hồ Viếế́t Quý (2002), Chiết tách, phân chia, xác định chất dung môi hữu cơ, Nhà xuấế́t bảể̉n Khoa họệ̣c kỹữ̃ thuậệ̣t, Hà Nộệ̣i, tậệ̣p 1, tr.9-27 12 Nguyễn Văn Thạch (2009), Công nghệ sinh học dược, NXB Giáo dục Việệ̣t Nam, tr 35-37 13 Trầì̀n Thị Thanh (2001), Cơng nghệ vi sinh, NXB Giáo dục, tr.40-52 14 Nguyễn Văn Thanh (2009), Công nghệ sinh học dược, Nhà xuấế́t bảể̉n Giáo dục, Hà Nộệ̣i, tr 14-57 15 Trịnh Thị Thịnh (2009), Nghiên cứu sinh tổng hợp kháng sinh từ Streptomyces 80.259, Khóa luậệ̣n tốt nghiệệ̣p Dượệ̣c sĩ, Trườì̀ng ĐH Dượệ̣c Hà Nợệ̣i, Hà Nợệ̣i 16 Mai Tấế́t Tố, Vũ Thị Trâm (2007), Dược lý học, NXB Y họệ̣c, tậệ̣p 17 Bộệ̣ môn Hóa phân tích (2006), Hóa phân tích II, trườì̀ng Đại họệ̣c Dượệ̣c Hà Nộệ̣i, Hà Nộệ̣i, tr 23-69, 125-147, 215-219, 318 18 Bộệ̣ Y tếế́ (2007), Dược lý học, Nhà xuấế́t bảể̉n Y họệ̣c, Hà Nộệ̣i, tậệ̣p 2, tr 130-142 19 Bợệ̣ Y tếế́ (2007), Hóa hữu cơ, Nhà x́ế́t bảể̉n Y họệ̣c, Hà Nộệ̣i, tậệ̣p 2, tr.105-119 20 Bộệ̣ Y tếế́ (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuấế́t bảể̉n Y họệ̣c, Hà Nộệ̣i, tr 68-82, 115-133 21 Bộệ̣ Y tếế́ (2007), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm, Nhà xuấế́t bảể̉n Y họệ̣c, Hà Nộệ̣i, tậệ̣p 2, tr.26-40, 81-93 22 Bộệ̣ Y tếế́ (2008), Vi sinh vật học, Nhà xuấế́t bảể̉n Giáo dục, Hà Nộệ̣i, tr 22-98 Tiếế́ng Anh 23 Barun K Bhattacharyya, Sushil C Pal, Sukanta K Sen (1998), “Antibiotic production by Streptomyces hygroscopius D1.5: cultural efect”, Revista de Microbiologia, 29 (3), pp.37-39 24 Liu G, Chater KF, Chandra G, Niu G, Tan H (2013), Molecular regulation of antibiotic biosynthesis in streptomyces, State Key Laboratoryof Microbial Resources, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing, China 25 Alam M, Dharni S, Abdul-Khaliq, Srivastava SK, Samad A, Gupta MK (2012), A promising strain of Streptomyces sp with agricultural traits for growth promotion and disease management, Department of Plant Pathology, CSIR-Central Institute of Medicinal & Aromatic Plants (CIMAP), Lucknow 226 015, India PHỤ LỤC Hình P1: Thử HTKS phương pháp khối thạch Hình P2: Thử HTKS phương pháp giếng thạch Hình P3: Thử HTKS phương pháp khoanh giấy lọc Hình P4: Phát hiệệ̣n vết sắc ký phương pháp hiệệ̣n hình VSV Hình P5: Tinh chế kháng sinh sắc ký cột Hình P6: Phổ tử ngoại kháng sinh Ten may: GX-PerkinElmer-USA Resolution: 4cm-1 Date: 3/13/2013 103.1 100 90 80 70 60 %T 50 40 30 20 10 0.0 4000.0 Hình P7: Phổ hồng ngoại kháng sinh Hình P8: Phổ khối kháng sinh ... 2.3.4 Đ 2.3.5 Lên men chìm tổng hợp kháng sinh 2.3.6 Xác định độ bền kháng sinh dịch lên men 2.3.7 Chiết kháng sinh từ dịch lên men dung môi hữu 2.3.8 Tách thành phần kháng sinh sắc ký lớớ́p... các nghiên cứế́u vềì̀ sau 3.5 Kết lên men sinh tổng hợp kháng sinh 3.5.1 Kết chọn mơi trườỜ̀ng lên men chìm Vớế́i mục đich chọệ̣n mơi trườì̀ng đểể̉ Streptomyces 155. 29 sinh kháng sinh. .. sinh 1.1.3 Sơ đồ tổng quát sinh tổng hợp kháng sinh 1.1.4 Cơ chế tác dụng kháng sinh 1.1.5 Khái niệệ̣m tính kháng kháng sinh 1.1.6 Các ứng dụng kháng sinh 1.2 Đại cương