Nghiên cứu thu nhận và đánh giá một số đặc tính hóa học của lectin từ rong đỏ betaphycus gelatinus

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH HĨA HỌC CỦA LECTIN TỪ RONG ĐỎ BETAPHYCUS GELATINUS Giảng viên hướng dẫn: TS Lê Đình Hùng Sinh viên thực hiện: Lê Nhật Bình Mã số sinh viên: 56132355 Nha Trang – Năm 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH HĨA HỌC CỦA LECTIN TỪ RONG ĐỎ BETAPHYCUS GELATINUS Giảng viên hướng dẫn: TS Lê Đình Hùng Sinh viên thực hiện: Lê Nhật Bình Mã số sinh viên: 56132355 Nha Trang – Năm 2018 i NHẬN XÉT CỦA GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN ii LỜI CẢM ƠN Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Lê Đình Hùng (Trưởng phịng Cơng nghệ sinh học biển - Viện nghiên cứu ứng dụng công nghệ Nha Trang) ThS Đinh Thành Trung, người tận tình dìu dắt hướng dẫn tơi suốt q trình hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tới Ban lãnh đạo Viện nghiên cứu ứng dụng công nghệ Nha Trang giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Công Nghệ Thực Phẩ m Trường Đại học Nha Trang dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập Trong trình nghiên cứu, quá trình làm luận văn tốt nghiệp, trình độ lý luận kinh nghiệm thực tiễn cịn hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận ý kiến đóng góp của q thầ y Xin chân thành cảm ơn! Nha Trang, ngày tháng Sinh viên Lê Nhật Bình iii năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi bảo thầy cô hướng dẫn giúp đỡ tập thể cán nghiên cứu Phòng Công nghệ sinh học biển - Viện nghiên cứu ứng dụng công nghệ Nha Trang - Viện hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm với lời cam đoan Nha Trang, ngày tháng Sinh viên Lê Nhật Bình iv năm 2018 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN iv MỤC LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix DANH MỤC CÁC HÌNH x MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ RONG BIỂN 1.1.1 Giới thiê ̣u chung về rong biể n 1.1.2 Phân loa ̣i rong biể n 1.1.3 Rong Đỏ Betaphycus gelatinus 1.2 TỔNG QUAN VỀ LECTIN 1.2.1 Lich ̣ sử nghiên cứu lectin 1.2.2 Sự phân bố của lectin sinh giới 10 1.3 LECTIN TỪ RONG BIỂN 12 1.3.1 Tình hình nghiên cứu lectin từ rong biể n nước và nước ngoài 12 1.3.2 Cấ u ta ̣o của lectin từ rong biể n 14 1.3.3 Mô ̣t số tính chấ t lý, hóa sinh học của lectin từ rong biể n 16 1.4 ỨNG DỤNG CỦA LECTIN TỪ RONG BIỂN 19 1.5 PHƯƠNG PHÁP THU NHẬN LECTIN 21 1.5.1 Các kĩ thuật chiết xuất lectin 21 1.5.2 Các kỹ thuật tinh chế lectin 22 CHƯƠNG : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 24 2.2 VẬT LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Vật liệu 24 2.2.2 Hóa chất 24 2.2.3 Thiết bị nghiên cứu 25 v 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.3.1 Xác định hoạt độ lectin phương pháp ngưng kết hồng cầu 26 2.3.2 Xác định hàm lượng protein phương pháp Lowry (1951) 27 2.3.3 Bố trí thí nghiệm thu nhận lectin từ rong biển 29 2.3.4 Phương pháp xác định điều kiện tối ưu để chiết lectin từ rong B gelatinus 30 2.3.5 Khảo sát tác nhân tủa Ethanol nồng độ (%) thích hợp để thu chế phẩm lectin kỹ thuật 34 2.3.6 Tinh bằ ng phương pháp sắ c ký trao đổi ion DEAE-Sepharose 35 2.3.7 Tinh lectin phương pháp sắc ký lọc gel Sephacryl S-200 36 2.3.8 Phương pháp xác định ảnh hưởng tác nhân: nhiệt độ, pH đến hoạt tính NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus 37 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 KẾT QUẢ CÁC ĐIỀU KIỆN TÁCH CHIẾT LECTIN TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 38 3.1.1 Ảnh hưởng dung môi đến hoạt độ NKHC lectin có rong đỏ B gelatinus 38 3.1.2 Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu:dung mơi chiết đến hoạt độ NKHC lectin có rong đỏ B gelatinus 39 3.1.3 Ảnh hưởng thời gian chiết (giờ) đến hoạt độ NKHC lectin có rong đỏ B gelatinus 40 3.2 KẾT QUẢ TINH SẠCH LECTIN TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 41 3.2.1 Khảo sát nồng độ Ethanol để kết tủa lectin 41 3.2.2 Tinh lectin sắc kí trao đổi ion DEAE-sepharose 42 3.2.3 Tinh lectin sắc kí lọc gel Sephacryl S-200 43 3.2.4 Kết tổng hợp trình tinh lectin từ rong đỏ B gelatinus 44 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH TÍNH CHẤT LÝ, HĨA VÀ SINH HỌC CỦA LECTIN TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 47 3.3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus 47 3.3.2 Ảnh hưởng pH đến hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus 48 vi KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC 53 vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT A Absorbance Độ hấp thụ B gelatinus Betaphycus gelatinus CP Chế phẩm CPKT Chế phẩm kỹ thuật DC Dịch chiết HA Hemagglutinin Assay Hoạt độ ngưng kết hồng cầu HC Hồng cầu HĐR Hoạt độ riêng HĐTS Hoạt độ tổng số MAC Minimum Agglutination Concentration NKHC Ngưng kết hồng cầu OD Optical Density Mật độ quang học PB Phosphate Buffer PBS Phosphate Buffered Saline PL Phụ lục viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Phân loại lectin từ động vật chức chúng 11 Bảng 1.2 : Trình tự xếp axit amin đầu tận N chuỗi α số loài rong thuộc chi Eucheuma 15 Bảng 1.3: Nguồn lectin từ rong biển có khả diệt trùng 20 Bảng 2.1: Các thiết bị sử dụng thí nghiệm 25 Bảng 3.1: Ảnh hưởng nồng độ % ethanol đến HĐTS, HĐR hiệu suất thu hồi lectin 41 Bảng 3.3: Kết tinh lectin từ rong đỏ B gelatinus 44 Bảng PL 1: Giá trị mật độ quang OD tương ứng với nồng độ BSA (µg/ml) 53 Bảng PL 2: Ảnh hưởng dung môi chiết đến HĐTS HĐR lectin 53 Bảng PL 3: Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu : dung môi chiết (w/v) đến HĐTS HĐR lectin 54 Bảng PL 4: Ảnh hưởng thời gian chiết (giờ) đến HĐTS HĐR lectin 54 Bảng PL 5: Kết đo A 280nm hoạt độ NKHC phân đoạn sau sắc kí trao đổi ion DEAE-Sepharose 55 Bảng PL 6: Kết đo A 280nm hoạt độ NKHC phân đoạn sau sắc kí lọc gel Sephacryl S-200 56 Bảng PL 7: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus 57 Bảng PL 8: Ảnh hưởng pH đến hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus 57 ix 3.2.3 Tinh lectin sắc kí lọc gel Sephacryl S-200 Đồ thị biểu diễn tương quan giá trị A 280 nm, hoạt độ NKHC thứ tự phân đoạn trình bày bảng PL hình 3.6 0.4 70 60 A 280 nm 0.3 50 0.25 40 0.2 30 0.15 20 0.1 II 0.05 Hoạt độ NKHC (HU/ml) I 0.35 10 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 Phân đoạn A 280 nm Hoạt độ NKHC (HU/ml) Hình 3.6: Đồ thị biễu diễn độ hấp thụ (A 280nm) hoạt độ NKHC phân đoạn q trình sắc kí lọc gel Sephacryl S-200 Từ hình 3.6 chúng tơi ghi nhận peak có số A 280nm cao, lượng protein mẫu chủ yếu tập trung vào peak số I Như vậy, theo dự đoán sơ bộ, hỗn hợp protein qua lọc gel gồm loại protein có khối lượng phân tử khác Cũng dựa kết từ sắc ký đồ, hàm lượng protein thể peak, có peak số I thể hoạt độ NKHC cách rõ rệt nhất, peak II lại khơng thể hoạt độ NKHC Từ đó, dự đốn protein lectin phân bố chủ yếu peak số I nên tiến hành thu hồi phân đoạn này, tiến hành siêu lọc để thu dịch lectin 43 3.2.4 Kết tổng hợp trình tinh lectin từ rong đỏ B gelatinus Tiến hành tinh lectin từ rong đỏ B gelatinus thơng số thích hợp khảo sát Qua bước tinh sạch, tiến hành xác định hàm lượng protein, hoạt độ NKHC, hiệu suất độ tinh thể bảng 3.3 Bảng 3.3: Kết tinh lectin từ rong đỏ B gelatinus Protein tổng (mg) MAC (mg/HU) Dịch chiết thô 705.38 0.0192 Dịch sau kết 103.95 0.0090 tủa Dịch sau sắc kí trao đổi ion 5.06 0.0027 DEAEsepharose Dịch sau sắc kí lọc gel 2.16 0.0017 Sephacryl S200 Qua bước tinh sạch, nhận HĐTS (HU) HĐR (HU/mg) Độ tinh Hiệu suất (%) 36800 52.17 100 11520 110.82 2.12 31.30 1872 370.0 7.09 5.09 1240 574.3 11.01 3.37 thấy, HĐTS protein tổng số chế phẩm thu giảm đáng kể từ 36800 HU 705,38 mg xuống 1240 HU 2,16 mg tương ứng Điều giải thích tổn thất biến tính bất thuận nghịch số phân tử protein suốt trình tinh Kết từ bảng 3.3 cho thấy, tủa protein tác nhân cồn, HĐR protein lectin từ rong B gelatinus tăng lên đáng kể Sau tủa, HĐR CPKT 110,82 HU/mg DC thơ có HĐR 52,17 HU/mg q trình tủa loại bớt số tạp chất Sau đó, qua q trính sắc kí trao đổi ion sắc kí lọc gel, ta thu phân tử protein có hoạt độ NKHC loại bỏ protein hoạt độ NKHC nên HĐR lectin sau tinh hệ số tinh giai đoạn cao (HĐR 574,3 HU/mg; hệ số tinh 11,01 lần) Kết minh chứng rõ hơn, nồng độ protein nhỏ tạo nên đơn vị hoạt độ NKHC giảm dần qua bước tinh sạch: MAC dịch thô 0,0192 mg/HU; sau tủa giảm 0,009 mg/HU sau sắc ký lọc gel giá trị 0,0017 mg/HU 44 Từ kết nghiên cứu trên, đưa quy trình cơng nghệ thu nhận lectin từ rong B gelatinus cụ thể sau: Rong B gelatinus -Dung môi chiết Ethanol 20% -Tỉ lệ nguyên liệu-dung môi chiết 1:6 w/v -Thời gian chiết: - Nhiệt độ chiết: 4oC Xay nhuyễn Chiết lectin Kết tủa lectin - Nồng độ EtOH 70% - Thời gian tủa: - Nhiệt độ tủa: 4oC Sắc kí trao đổi ion DEAE-sephadex Sắc ký lọc gel Sepharyl S-200 Lectin Hình 3.7: Sơ đồ quy trình cơng nghệ thu lectin từ rong B gelatinus ❖ Giải thích quy trình Mẫu rong biển Betaphycus gelatinus rửa sạch, xay nhuyễn thành bột mịn cối xay inox có bổ sung Nitơ lỏng Mẫu rong chiết dung môi ethanol 20% với tỷ lệ nguyên liệu : dung môi (w/v) 1:6 nhiệt độ 4oC Thu hồi dịch chiết lọc thô để loại cặn lẫn DC, sau li tâm 6000 vịng/phút 15 phút, thu phần dịch chuẩn bị cho trình tinh Dịch chiết thô lectin tủa tác nhân ethanol 70% với nhiệt độ tủa 4oC để khoảng thời gian Sau đó, tiến hành ly tâm lạnh 4oC với tốc độ 6000 vòng/phút 30 phút để thu phần kết tủa Hòa tủa dung dịch đệm PBS 45 (0,02M; NaCl 0,15M; pH 7,5) thẩm tích dung dịch PB (0,02M; pH 7,5) để loại bỏ muối Dịch tủa sau thẩm tích li tâm với tốc độ 6000 vòng/phút 30 phút, thu phần dịch Dịch bơm vào cột trao đổi ion DEAE-Sepharose, tiến hành chạy sắc kí trao đổi ion với tốc độ dòng 10 ml/phút Sử dụng pha động dung dịch đệm PB (0,02M; pH 7,5) (de gas) để rửa giải protein màu không liên kết khỏi cột, đến đo A 280nm Sau đó, dùng pha động dung dịch đệm PBS (0,02M; NaCl 0,5M; pH 7,5) (de gas) để rửa giải protein liên kết với cột Tiến hành đo A 280nm xác định hoạt tính NKHC phân đoạn Thu lại phân đoạn có hoạt tính NKHC Các phân đoạn có hoạt tính NKHC đặc phương pháp siêu lọc thẩm tích đệm PBS (0,02M; NaCl 0,15M, pH 7) 4oC để qua đêm, nhằm cân nồng độ muối pH Dịch sau thẩm tích li tâm với tốc độ 6000 vòng/phút 30 phút, thu phần dịch Dịch bơm vào cột gel Sephacryl S-200, tiến hành chạy sắc kí lọc gel với tốc độ 0,8 ml/phút, sử dụng pha động dung dịch đệm PBS (0,02M; NaCl 0,15M; pH 7) (de gas) để rửa giải cột Mỗi phân đoạn thu 2,5 ml Tiến hành đo A 280nm xác định hoạt tính NKHC phân đoạn Thu lại phân đoạn có hoạt tính NKHC Các phân đoạn có hoạt tính NKHC đặc phương pháp siêu lọc Chúng ta tinh thu dịch lectin 46 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH TÍNH CHẤT LÝ, HĨA VÀ SINH HỌC CỦA LECTIN TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 3.3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus Để khảo sát nhiệt độ thích hơp lectin từ rong B gelatinus, lectin ủ mức nhiệt độ khác từ 10oC đến 100oC vịng 30 phút, sau làm lạnh nhanh xác định hoạt độ NKHC lectin với hồng cầu thỏ xử lý trypsin So sánh kết với hoạt độ NKHC dịch chiết thô Kết trình bày bảng PL hình 3.8 Hoạt độ NKHC (HU/ml) 70 60 50 40 30 20 10 10 20 30 40 50 60 Nhiệt độ (oC) 70 80 90 100 Hình 3.8 : Ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus Từ kết hình 3.8, ta thấy nhiệt độ 50oC HĐTS lectin đạt giá trị cực đại Nhưng nhiệt độ vượt 50oC hoạt độ NKHC bắt đầu giảm dần Ở nhiệt độ 90oC, HĐTS HU hoàn toàn nhiệt độ tăng đến 100oC Nguyên nhân nhiệt độ tăng cao làm đứt gãy số liên kết yếu phân tử lectin, đặc biệt cấu trúc trung tâm hoạt động lectin, làm hoạt tính NKHC Theo nghiên cứu Stelio cộng sự, khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt độ NKHC lectin từ rong Pterocladiella capillacea, hoạt độ đạt giá trị cực đại nhiệt độ 600C hoàn toàn hoạt độ nhiệt độ tăng lên 80oC 47 Trong đó, nghiên cứu lồi rong Codium fragile Hypnea japonica, Hori nhận thấy hoạt độ NKHC chúng không bị ảnh hưởng mức nhiệt độ cao 80oC Khả chịu nhiệt điểm khác biệt đặc trưng lectin từ rong biển so với lectin từ thực vật bậc cao động vật Nhiều nghiên cứu cho thấy, hoạt độ NKHC lectin từ thực vật bậc cao hay động vật bị ảnh hưởng mạnh nhiệt độ Theo kết nghiên cứu TS Trương Văn Châu, mức nhiệt độ 60oC hoạt độ NKHC lectin từ mít na giảm 50% hoàn toàn 70oC [1] Theo kết nghiên cứu luận văn cho thấy, giống số lectin từ rong biển khác, lectin từ rong B gelatinus lectin bền nhiệt Khả chịu nhiệt tốt lectin từ rong B gelatinus yếu thuận lợi cho việc nghiên cứu ứng dụng lectin nhiều lĩnh vực khác 3.3.2 Ảnh hưởng pH đến hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus Kết xác định ảnh hưởng pH đến hoạt độ NKHC lectin từ rong B gelatinus trình bày bảng PL hình 3.9 Hoạt độ NKHC (HU/ml) 70 60 50 40 30 20 10 10 pH Hình 3.9 : Ảnh hưởng pH lên hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus 48 Kết nghiên cứu cho thấy, hoạt độ NKHC lectin từ rong B gelatinus không bị ảnh hưởng thay đổi pH, môi trường axit, kiềm trung tính Đây tính chất thú vị lectin từ rong B gelatinus tính chất nhận thấy số loài rong khác Ulva pertusa hoạt động tốt khoảng pH từ đến 10, hay rong Enteromorpha linza không thay đổi hoạt độ khoảng pH từ đến 10 Các nghiên cứu tương đồng với kết nghiên cứu TS Lê Đình Hùng cộng vào năm 2012, tiến hành khảo sát ảnh hưởng pH đến hoạt độ NKHC loài rong thuộc vùng biển Ninh Thuận, Việt Nam Kết từ nghiên cứu cho thấy, hầu hết hoạt độ NKHC lectin không bị ảnh hưởng pH, tiêu biểu rong Boodlea composite rong Dictyosphaeria versluysii hoạt độ chúng không thay đôi khoảng pH từ đến 49 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ❖ KẾT LUẬN Từ kết thu qua thí nghiệm đề tài, chúng tơi xin rút kết luận cho quy trình tách chiết, tinh khảo sát số tính chất lectin từ rong B.Gelatinus sau: Các điều kiện thích hợp để chiết lectin từ rong B gelatinus: • Dung môi chiết: Ethanol 20% • Tỷ lệ nguyên liệu : dung mơi (w/v): 1:6 • Thời gian chiết: • Nhiệt độ chiết: 4oC Tinh lectin phương pháp kết tủa với ethanol, nồng độ Ethanol 70%, nhiệt độ 4oC, thời gian Sắc ký trao đổi ion DEAE-Sepharose thu dịch lectin có HĐTS 1872 HU, HTR 370,0 HU/mg, MAC 0,0027 mg/HU, hiệu suất thu hồi 5,09 %, độ tinh 7,09 lần Sắc kí lọ gel Sephacryl S-200 thu dịch lectin có HĐTS 1240 HU, HĐR 574,3 HU/mg, MAC 0,0017 µg/HU, hiệu suất thu hồi 3,37 % độ tinh 11,01 lần Nghiên cứu bước đầu xác định số tính chất đặc trưng lectin từ rong B gelatinus bao gồm: • Lectin bền nhiệt, khoảng nhiệt độ hoạt động 50oC • Hoạt tính NKHC không thay đổi từ vùng pH đến 10 ❖ KIẾN NGHỊ Để sản phẩm lectin có khả ứng dụng, chúng tơi có kiến nghị sau đây: Đánh giá số hoạt tính sinh học lectin thu từ rong B gelatinus Nghiên cứu điều kiện bảo quản chế phẩm lectin sau tinh Nghiên cứu, phát triển ứng dụng chế phẩm lectin từ rong B gelatinus lĩnh vực y học, nông nghiệp số lĩnh vực khác 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO ❖ Tài liệu Tiếng Việt Trương Văn Châu (2004), “Một số tính chất hóa sinh Lectin mít na”, tạp chí [1] khoa học-ĐHSP Hà Nội, 4, pp.83-87 Đỗ Ngọc Liên, Trần Tuấn Quỳnh (1991), “Tách tinh chế số tính chất [2] Lectin từ hạt chay A tonkinensis”, Tạp chí khoa học, 13(2), pp 20-27 Nguyễn Đức Lượng cộng (2004), “Công nghệ enzyme”, Nhà xuất [3] Đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh, 534 trang Trần Thị Luyến, Đỗ Minh Phụng, Nguyễn Anh Tuấn, Ngô Đăng Nghĩa, “Chế biến [4] rong biển”, Giáo trình Đại học Nha Trang Lê Thanh Mai cộng (2006), “Các phương pháp phân tích ngành cơng [5] nghệ lên men”, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 332 trang [6] Nguyễn Thị Thịnh, Lê Doãn Diên, Nguyễn Quốc Khang Phan Huy Bảo (1983), “Kết điều tra Lectin số giống đậu Việt Nam”, Tạp chí sinh học, 5(4), pp.11-18 Đặng Thị Thu cộng (2003), “Công nghệ enzyme”, Nhà xuất Khoa [7] học kỹ thuật, Hà Nội, 304 trang Đặng Thị Thu, Tơ Kim Anh, Lê Quang Hịa, Đỗ Ngọc Liên, Nguyễn Thị Xuân [8] Sâm, Lê Ngọc Tú, Đỗ Hoa Viên (2009), “Cơ sở công nghệ sinh học_Tập 2: Công nghệ hóa sinh”, NXB Giáo dục Việt Nam, Đà Nẵng ❖ [9] Tài liệu Tiếng Anh Allen, N K and Brillantine L (1969), “A survey of hemagglutinins in various seeds”, J Immunol, 102, pp 1295-1299 [10] Austin B and Zhang H (2006), “Vibrio harveyi: a significant path gen of marine vertebrates and invertebrates”, Letters in applied Microbiology, 43(2), pp 119-214 [11] Balcht, Aldona & Smith, Raymond (1994), “Pseudomonas aeruginosa: Infections and Treatment”, Informa Health Care, pp 83–84 [12] Balzarini et al (1991), “Alpha-(1-3)- and alpha-(1-6)-D-mannose- specific plant lectins are markedly inhibitory to human immunodeficiency virus and 51 cytomegalovirus infections in vitro”, Antimicrob Agents Chemother, 35(3), pp 410-6 [13] Barnes B.J., Wiederhold N.P., Micek S.T., Polish L.B., Ritchie D.J (2003),"Enterobacter cloacae ventriculitis successfully treated with cefepime and gentamicin: case report and review of the literature", Pharmacotherapy, 23(4), pp.537–42 [14] Barondes S.H., Cooper D.N., Gitt M.A., Leffler H (1994), “Galectin: Structure and function of a large family of animal lectin”, J Biol Chem., 269, 20807-10 [15] Bartolomeu Warlene S de Souza et al (2007), “A survey of Antarctic algae for agglutinins”, Oecol Bras., 11(1), pp 122-130 [16] Basilio J Anía, M.D (2007), "Serratia", eMedicine [17] Benevides N M B., Holanda M L., Melo F R., Freitas A L P and Sampaio A H (1998), “Purification and Partial Characterisation of the Lectin from the Marine red alga Enantiocladia duperreyi (C Agardh) Falkenberg”, Botanica Marina, vol 41, pp 521-525 [18] Boyd W.C., Almodavar L.R., Boyld L.G (1966), “Agglutinins in marine algae for human erythrocytes”, Transfusion (Philadelphia), 6, pp.82-83 [19] Calvete J J., Costa F H F., Saker S S., Murciano M P M., Nagano C S., Cavada B S., Grangeiro T B., Ramos M V., Bloch C., Freitas B T and Sampaio A H (2000), “The amino acid sequence of the agglutinin isolated from the red marine alga Bryothamnion triquetrum defines a novel lectin structure”, CMLS Cell Mol Life Sci., 57, pp 343-350 [20] Doty, M.S (1988), “Prodromus ad systematica Eucheumatoideorum: Atribe of commercial seaweeds related to Eucheuma (Solieriaceae, Gigartinales)”, In:I.A Abbott (Ed.), Volume II, California, pp 159-207 52 PHỤ LỤC Bảng PL 1: Giá trị mật độ quang OD tương ứng với nồng độ BSA (µg/ml) Nồng độ BSA (µg/ml) OD750nm 20 0,053 40 0,112 80 0,209 120 0,309 160 0,401 200 0,478 Bảng PL 2: Ảnh hưởng dung môi chiết đến HĐTS HĐR lectin Dung mơi Thể tích HA (ml) (HU/ml) Protein tổng (mg) MAC (mg/HU) HĐTS (HU) HĐR (HU/mg) Nước cất 32 5.065 0.040 128 25.3 EtOH 10% 32 4.994 0.039 128 25.6 EtOH 20% 64 4.641 0.018 256 55.2 EtOH 30% 64 5.206 0.020 256 49.2 PBS 64 5.524 0.022 256 46.3 53 Bảng PL 3: Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu : dung môi chiết (w/v) đến HĐTS HĐR lectin Tỉ lệ Thể tích (ml) HA (HU/ml) Protein tổng (mg) MAC (mg/HU) HĐTS (HU) HĐR (HU/mg) 1:04 32 3.051 0.024 128 42.0 1:06 64 6.644 0.017 384 57.8 1:08 32 15.428 0.060 256 16.6 1:10 10 16 21.868 0.137 160 7.3 Bảng PL 4: Ảnh hưởng thời gian chiết (giờ) đến HĐTS HĐR lectin Thời gian (giờ) Thể tích (ml) HA (HU/ml) Protein tổng (mg) MAC (mg/HU) HĐTS (HU) HĐR (HU/mg) 32 6.564 0.034 192 29.3 64 7.3605 0.019 384 52.2 6 64 11.3325 0.030 384 33.9 64 14.9085 0.039 384 25.8 54 Bảng PL 5: Kết đo A 280nm hoạt độ NKHC phân đoạn sau sắc kí trao đổi ion DEAE-Sepharose Số ống OD HA Số ống OD HA 0 19 0 0 20 0 0.199 21 0 0.302 22 0.005 0.204 23 0.083 0.148 24 0.986 32 0.09 25 0.243 8 0.06 26 0.053 0.037 27 0.023 10 0.024 28 0.011 11 0.017 29 0.003 12 0.012 30 0.001 13 0.013 31 0.001 14 0.012 32 0 15 0 33 0 16 0 34 0 17 0 35 0 18 0 36 0 55 Bảng PL 6: Kết đo A 280nm hoạt độ NKHC phân đoạn sau sắc kí lọc gel Sephacryl S-200 Số ống OD HA Số ống OD HA 0 21 0.118 32 0 22 0.056 16 0 23 0.032 4 0 24 0.02 0 25 0.005 0 26 0.003 0 27 0.002 0 28 0.003 0 29 0.01 10 0 30 0.021 11 0 31 0.042 12 0 32 0.02 13 0.003 33 0.016 14 0.021 34 0.011 15 0.035 35 0.009 16 0.037 36 0.004 17 0.058 37 0.003 18 0.088 16 38 0.001 19 0.348 64 39 0 20 0.269 32 40 0 56 Bảng PL 7: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus Hoạt độ NKHC % 100 100 100 100 100 50 25 12.5 3.125 Nhiệt độ (C) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 HA 64 64 64 64 64 32 16 Bảng PL 8: Ảnh hưởng pH đến hoạt độ NKHC lectin từ rong đỏ B gelatinus Hoạt độ NKHC pH % HA 100 64 100 64 100 64 100 64 100 64 100 64 100 64 10 100 64 57 ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH HĨA HỌC CỦA LECTIN TỪ RONG ĐỎ BETAPHYCUS GELATINUS. .. khác Lectin từ rong biển lần Boyd phát vào năm 1966 có nhiều cơng trình nghiên cứu phân bố, đặc tính hóa sinh ứng dụng lectin từ rong biển nhiều lĩnh vực khác [23,24] Các nghiên cứu lectin từ rong. .. nghiên cứu lectin từ rong biển Từ năm 1985 đến năm 1992, ông cộng khảo sát có mặt lectin 90 lồi rong biển thu? ??c dòng rong: rong đỏ, rong nâu rong xanh Trong đó, hoạt tính ngưng kết hồng cầu từ