Nghiên cứu thu nhận phân đoạn dịch chiết giàu polyphenol từ rong mơ sargassum mcclurei và ứng dụng để hạn chế sự oxy hóa lipid trên cơ thịt cá bớp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN LÊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU THU NHẬN PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT GIÀU POLYPHENOL TỪ RONG MƠ SARGASSUM MCCLUREI VÀ ỨNG DỤNG ĐỂ HẠN CHẾ SỰ OXY HÓA LIPID TRÊN CƠ THỊT CÁ BỚP LUẬN VĂN THẠC SĨ KHÁNH HÒA - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN LÊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU THU NHẬN PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT GIÀU POLYPHENOL TỪ RONG MƠ SARGASSUM MCCLUREI VÀ ỨNG DỤNG ĐỂ HẠN CHẾ SỰ OXY HÓA LIPID TRÊN CƠ THỊT CÁ BỚP LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Công nghệ thực phẩm Mã số: 8540101 Mã học viên: 57CH054 Quyết định giao đề tài: 295/QĐ-ĐHNT, ngày 15/03/2017 Quyết định thành lập hội đồng: 366/QĐ-ĐHNT, ngày 04/04/2019 Ngày bảo vệ: 11/5/2019 Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THẾ HÂN TS KHỔNG TRUNG THẮNG Chủ tịch Hội Đồng: PGS.TS HUỲNH NGUYỄN DUY BẢO Phòng Đào tạo Sau Đại học: KHÁNH HÒA - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Khánh Hòa, tháng năm 2019 Học viên Nguyễn Lê Thùy Linh iii LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành sau thời gian thực Phịng Thí nghiệm thuộc Khoa Công nghệ Thực phẩm Viện Công nghệ Sinh học Mơi trường, Trường Đại học Nha Trang Để hồn thành luận văn nhận nhiều động viên, giúp đỡ cá nhân tập thể Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thế Hân TS Khổng Trung Thắng tận tâm hướng dẫn, truyền đạt cho nhiều kiến thức quý báu khoa học, kinh nghiệm thực tế kỹ làm việc, ứng dụng tiến khoa học kỹ thuật vào công tác chuyên môn thực tế Bên cạnh đó, tơi xin ghi nhớ tình cảm q báu q thầy Khoa Công nghệ Thực phẩm, Viện Công nghệ Sinh học Mơi trường, Phịng Đào tạo Sau Đại học; cán quản lý Phịng Thí nghiệm thuộc Trung tâm Thí nghiệm Thực hành giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực luận văn Tác giả xin cảm ơn đề tài “ Ngiên cứu, đánh giá tiềm nguồn lợi khả khai thác, ni trồng lồi rong biển kinh tế đảo tiền tiêu phục vụ phát triển kinh tế - xã hội”, mã số: KC.09.05/16-20, thuộc Chương trình KH & CN trọng điểm cấp Quốc gia giai đoạn 2016- 2020: “Nghiên cứu khoa học công nghệ phục vụ quản lý biển, hải đảo phát triển kinh tế biển”, mã số:KC.09/16-20, hỗ trợ phần mẫu vật, số liệu để hoàn thành luận văn Và cuối gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình, người thân, bạn bè ln động viên, cỗ vũ tinh thần để tơi vượt qua khó khăn suốt q trình thực luận văn Khánh Hòa, tháng năm 2019 Học viên Nguyễn Lê Thùy Linh iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM ƠN .iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH .ix LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan rong biển .4 1.2 Sơ lược rong mơ Sargassum mcclurei 1.2.1 Phân loại đặc điểm hình thái 1.2.2 Giá trị dinh dưỡng ứng dụng rong mơ Sargassum mcclurei .6 1.2.3 Tình hình nghiên cứu nước liên quan đến đề tài 1.3 Q trình oxy hố lipid 11 1.3.1 Phân loại chế trình oxy hoá lipid 11 1.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình oxy hoá lipid .14 1.3.3 Ảnh hưởng q trình oxy hố lipid đến chất lượng thực phẩm .16 1.4 Cá bớp vấn đề oxy hoá lipid đối tượng nghiên cứu 17 1.5 Tổng quan chất chống oxy hoá 20 1.5.1 Một số chất chống oxy hoá tổng hợp 20 1.5.2 Một số chất chống oxy hóa tự nhiên 21 1.6 Một số phương pháp đánh giá khả chống oxy hoá 26 1.6.1 Phương pháp TEAC (Trolox equivalent antioxydant capacity) 26 1.6.2 Phương pháp khử gốc tự DPPH (Scavenging ability towards DPPH) 27 1.6.3 Phương pháp ORAC (Oxygen radical absorbance capacity) .27 1.6.4 Phương pháp TRAP (Total radical-trapping antioxydant potential) 27 1.6.5 Phương pháp FRAP (Ferric reducing-antioxydant power) 28 1.6.6 Xác định số PV (peroxyde value) 28 1.6.7 Xác định số TBARS (Thiobarbituric Acid-Reactive Substances) 28 1.6.8 Xác định hàm lượng acid béo tự (Free Fatty Acid - FFA) 28 1.7 Quá trình chiết hợp chất có hoạt tính sinh học từ ngun liệu tự nhiên 29 1.7.1 Cơ sở khoa học trình chiết 29 v 1.7.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết 29 1.7.3 Một số phương pháp tách chiết 31 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .34 2.1 Đối tượng nghiên cứu 34 2.2 Hoá chất thuốc thử 34 2.3 Bố trí thí nghiệm 34 2.3.1 Bố trí thí nghiệm tổng quát 34 2.3.2 Thí nghiệm tách phân đoạn dung mơi chiết 36 2.3.3 Thí nghiệm đánh giá khả hạn chế trình oxy hố lipid cá bớp .37 2.3.4 Thí nghiệm đánh giá tính ổn định phân đoạn dịch chiết theo thời gian bảo quản 39 2.4 Phương pháp phân tích 39 2.4.1 Xác định hiệu suất chiết .39 2.4.2 Xác định hàm lượng polyphenol tổng số 40 2.4.3 Đánh giá hoạt tính chống oxy hố 40 2.4.4 Đánh giá khả hạn chế oxy hoá lipid thịt cá bớp 42 2.5 Phương pháp xử lý số liệu .43 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .44 3.1 Hàm lượng polyphenol hoạt tính chống oxy hóa phân đoạn dung môi chiết 44 3.2 Ảnh hưởng phân đoạn dịch chiết ethyl acetate đến oxy hóa lipid chất lượng cảm quan thịt cá bớp 48 3.2.1 Ảnh hưởng đến oxy hóa lipid 48 3.2.2 Sự thay đổi cảm quan mẫu cá thời gian bảo quản 54 3.3 Nghiên cứu ổn định hàm lượng polyphenol theo thời gian bảo quản .56 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO .61 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BHA : Butylated hydroxyanisole BHT : Butylated hydroxytoluene DHA : Docosahexaaenoic DPPH : 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ĐC : Mẫu đối chứng EGCG : Epigallocatechin-3-gallate EtOAc : Ethyl acetate FFA : Free Fatty Acid GAE : Gallic Acid Equivalent NL/D : Nguyên liệu/dung môi PV : Peroxyde value TCA : Acid Trichloracetic TBA : Acid Thiobarbituric TBARS : Thiobarbituric acid-reactive substances vii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Hiệu suất chiết hàm lượng polyphenol tổng số phân đoạn dịch chiết từ rong Sargassum Mcclurei .45 Bảng 3.2 Đánh giá cảm quan mẫu cá thời gian bảo quản .55 viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Rong mơ Sargassum mcclurei Hình 1.2 Sơ đồ ảnh hưởng oxy hóa chất béo đến chất lượng thực phẩm 16 Hình 1.3 Cá bớp Rachycentron canadum 17 Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo BHT BHA .21 Hình 1.5 Vô hoạt gốc tự flavonoid 23 Hình 1.6 Cơ chế tạo phức flavonoid ion kim loại 24 Hình 1.7 Các vùng cấu trúc đảm bảo khả chống oxy hóa phenol 24 Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 35 Hình 2.2 Thí nghiệm tách phân đoạn dung mơi chiết từ rong Sargassum mcclurei .36 Hình 2.3 Thí nghiệm đánh giá khả hạn chế oxy hóa lipid thịt cá bớp phân đoạn dịch chiết ethyl acetate từ rong Sargassum mcclurei 38 Hình 2.4 Thí nghiệm đánh giá tính ổn định phân đoạn dịch chiết từ rong Sargassum mcclurei theo thời gian bảo quản 39 Hình 3.1 Khả khử gốc tự DPPH phân đoạn dịch chiết từ rong Sargassum mcclurei .46 Hình 3.2 Tổng lực khử các phân đoạn dịch chiết từ rong Sargassum mcclurei 47 Hình 3.3 Sự thay đổi hàm lượng acid béo tự thịt cá bớp theo thời gian bảo quản ĐC: Mẫu đối chứng, Mẫu: Mẫu phân đoạn dịch chiết ethyl acetate, VTM C: Vitamin C (acid ascorbic), EGCC: Epigallocatechin-3-gallate 50 Hình 3.4 Sự thay đổi số PV thịt cá bớp theo thời gian bảo quản ĐC: Mẫu đối chứng, Mẫu: Mẫu phân đoạn dịch chiết ethyl acetate, VTM C: Vitamin C (acid ascorbic), EGCC: Epigallocatechin-3-gallate 52 Hình 3.5 Sự thay đổi số TBARS thịt cá bớp theo thời gian bảo quản ĐC: Mẫu đối chứng, Mẫu: Mẫu phân đoạn dịch chiết ethyl acetate, VTM C: Vitamin C (acid ascorbic), EGCC: Epigallocatechin-3-gallate 54 ix Hình 3.6 Sự thay đổi hàm lượng polyphenol tổng số phân đoạn dịch chiết ethyl acetate theo thời gian bảo quản 58 Hình 3.7 Sự thay đổi hoạt tính khử gốc tự DPPH phân đoạn dịch chiết ethyl acetate theo thời gian bảo quản 59 x 36 Demirel, Z., Ferda, F., Ulku, N., Guven, O.G., Atakan, K.S (2009) Antimicrobial and antioxydant activity of brown algae from the Aegean Sea National center for biotechnology information, 74(6), 619-628 37 Devi, G K., Manivannan, K., Thirumaran, G., Rajathi, F A A., & Anantharaman, P (2011) In vitro antioxidant activities of selected seaweeds from Southeast coast of India Asian Pacific journal of tropical medicine, 4(3), 205-211 38 Duan, X J., Zhang, W W., Li, X M., & Wang, B G (2006) Evaluation of antioxidant property of extract and fractions obtained from a red alga, Polysiphonia urceolata Food chemistry, 95(1), 37-43 39 Ebrahimzadeh, M A., Khalili, M., & Dehpour, A A (2018) Antioxidant activity of ethyl acetate and methanolic extracts of two marine algae, Nannochloropsis oculata and Gracilaria gracilis-an in vitro assay Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences, 54(1), 70-79 40 Erol, N T., Sari, F., Polat, G., & Velioglu, Y S (2009) Antioxidant and antibacterial activities of various extracts and fractions of fresh tea leaves and green tea Tarim BilimLeri Dergisi, 15(4), 371-378 41 Farasat, M., Khavari-Nejad, R A., Nabavi, S M B., & Namjooyan, F (2014) Antioxidant activity, total phenolics and flavonoid contents of some edible green seaweeds from northern coasts of the Persian Gulf Iranian journal of pharmaceutical research: IJPR, 13(1), 163 42 Faulkner D.J (2002) Marine natural products Nature Product Report, 19(1),49 43 Fernandes de Oliveira, A M., Sousa Pinheiro, L., Souto Pereira, C K., Neves Matias, W., Albuquerque Gomes, R., Souza Chaves, O., Vanderlei de Souza, M., Nóbrega de Almeida, R., … Simões de Assis, T (2012) Total Phenolic Content and Antioxidant Activity of Some Malvaceae Family Species Antioxidants (Basel, Switzerland), 1(1), 33-43 44 Field, C J., Clandinin, M.T., Van E.J E (2001) Polyunsaturated fatty acids and T-call function: Implications for the neonate Lipids, 36(9), 1025-1032 45 Foon, T S., Ai, L A., Kuppusamy, P., Yusoff, M M., & Govindan, N (2013) Studies on in-vitro antioxidant activity of marine edible seaweeds from the east coastal region of Peninsular Malaysia using different extraction methods Journal of Coastal Life Medicine, 1(3), 193-198 46 Frankel, E N (1985) Chemistry of autoxidation: mechanism, products and flavor significance Flavor chemistry of fats and oils, 1-37 64 47 Fu, H.Y., Shieh, D.E (2002) Antioxyd,ant and free radical scavenging activities of edible mushrooms Journal of Food Lipid, 9, 35-46 48 Gandhi, K., Arora, S., & Kumar, A (2017) Industrial applications of supercritical fluid extraction: a review International journal chemical studies, 5, 336-340 49 Ganesan, K., & Xu, B (2017) A critical review on polyphenol and health benefits of black soybeans Nutrients, 9(5), 455 50 Gertenbach, D D (2002) Solid-liquid extraction technologies for manufacturing nutraceuticals Functional foods: biochemical and processing aspects, 2, 331-336 51 Goodman, D L., McDonnel, J T., Nelson, H S., Vaughan, T R., & Weber, R W (1990) Chronic urticaria exacerbated by the antioxidant food preservatives, butylated hydroxyanisole (BHA) and butylated hydroxytoluene (BHT) Journal of allergy and clinical immunology, 86(4), 570-575 52 Gordon, M.H (2001) The development of oxidative rancidity.in: Antioxidants in Food – Practical Applications CRC Press, Washington, 7–22 53 Heen, E (1982) Developments in chilling and freezing of fish Int J Refrig 5, 45–49 54 Hickey, S., Roberts, H (2004) Ascorbate: the science of vitamin c Nature 45 55 Hornsey IS, Hide D (1985) The production of antimicrobial compounds by British Marine algae & Variation of antimicrobial activity with algal generation Britsh Phycologycal Journal, 20, 21-25 56 Huss, H.H (1995) Quality and Quality Changes in Fresh Fish FAO Fisheries Technical Paper No 348, p 195 57 Innis, S M (1991) Essential fatty acids in growth and development Progress in Lipid Research, 30, 39-103 58 Jerez-Martel, I., García-Poza, S., Rodríguez-Martel, G., Rico, M., AfonsoOlivares, C., & Gómez-Pinchetti, J L (2017) Phenolic profile and antioxidant activity of crude extracts from microalgae and cyanobacteria strains Journal of Food Quality, 2017 59 Jo, C., Lee, J.I & Ahn, D.U (1999) Lipid oxidation, color changes and volatiles production in irradiated pork sausage with different fat content and packaging during storage Meat Sci 51, 355–361 60 John, T (2009) Carotenoids: Physical, Chemistry and Biological function and properties Nature, 77 65 61 Kelman, D., Posner, E K., McDermid, K J., Tabandera, N K., Wright, P R., & Wright, A D (2012) Antioxidant activity of Hawaiian marine algae Marine Drugs, 10(2), 403-416 62 Kenneth, N., Boll, M., Geiger, O (2018) Handbook of Hydrocarbon and Lipid Microbiology Springer Nature, 262-266 63 Kim, K Y., Nam, K A., Kurihara, H., & Kim, S M (2008) Potent αglucosidase inhibitors purified from the red alga Grateloupia elliptica Phytochemistry, 69(16), 2820-2825 64 Kislik, V (2011) Solvent Extraction Spinger 167-203 65 Kondo, K., Kurihara, M., Miyata, N., Suzuki, T., & Toyoda, M (1999) Mechanistic studies of catechins as antioxidants against radical oxidation Archives of Biochemistry and Biophysics, 362, 79-86 66 Labuza, T.P (1971) Kinetics of lipid oxidation in foods CRC Critical Review in Food Technology, 2, 355-405 67 Lauritzsen, K., Martinsen, G., & Olsen, R.L (1999) Copper induced lipid oxydation during salting of cod (Gadus morhua L.) Journal of Food Lipids, 6, 299-315 68 Lemon, D.W (1975) An improved TBA test for rancidity New Series Circular, 51, 52-55 69 Leygonie, C., Britz, T.J & Hoofman, L.C 2012 Impact of freezing and thawing on the quality of meat: Review Meat Sci 91, 93–98 70 Li, Y., Fu, X., Duan, D., Liu, X., Xu, J., & Gao, X (2017) Extraction and identification of phlorotannins from the brown alga, Sargassum fusiforme (Harvey) Setchell Marine drugs, 15(2), 49 71 Lim, S N., Cheung, P K., & Ooi, D V (2002) Evaluation of tioxidative activity of extracts from brown seaweed Sargassum siliquastrum Journal of agricultural and food chermistry, 50, 3862-3866 72 López, A., Rico, M., Rivero, A., & de Tangil, M S (2011) The effects of solvents on the phenolic contents and antioxidant activity of Stypocaulon scoparium algae extracts Food Chemistry, 125(3), 1104-1109 73 Lowry, R R., & Tinsley, I J (1976) Rapid colorimetric determination of free fatty acids Journal of the American Oil Chemists' Society, 53(7), 470-472 74 Marfak, A (2003) Radiolyse gamma des flavonoïdes, Etude de leur réactivité avec les radicaux issus des alcools: formation de depsides Doctoral dissertation, Thèse de Doctorat Faculté de Pharmacie, Université de Limoges, 220 66 75 Mariem, C., Sameh, M., Nadhem, S., Soumaya, Z., Najiba, Z., & Raoudha, E G (2014) Antioxidant and antimicrobial properties of the extracts from Nitraria retusa fruits and their applications to meat product preservation Industrial Crops and Products, 55, 295-303 76 Masniyom, P., Benjakul, S., & Visessanguan, W (2005) Combination effect of phosphate and modified atmosphere on quality and shelf-life of refrigerated seabass slices LWT-Food Science and Technology, 38, 745-756 77 Melo, T A D., Serra, I M R D S., Sousa, A A., Sousa, T Y O., & Pascholati, S F (2018) Effect of Ascophyllum nodosum seaweed extract on postharvest'Tommy Atkins’ mangoes Revista Brasileira de Fruticultura, 40(3), 42-51 78 Min, D B., & Boff, J M (2002) Chemistry and reaction of singlet oxygen in food Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 1, 58-72 79 Miranda, J M., Ortiz, J., Barros-Velázquez, J., & Aubourg, S P (2016) Quality enhancement of chilled fish by including alga Bifurcaria bifurcata extract in the icing medium Food and bioprocess technology, 9(3), 387-395 80 Nakai, M (2006) Phlorotannins as radical scavengers from the extract of Sargassum ringgoldianum Marine Biotechnology, 8(4) 409-414 81 Nawar, W.W (1996) Lipids Food Chemistry, 225-320 82 Nguyen, M.V., Thorarinsdottir, K.A., Thorkelsson, G., Gudmundsdottir, A., & Arason, S (2012) Influences of potassium ferrocyanide on lipid oxydation of salted cod (Gadus morhua) during processing, storage and rehydration Food Chemistry, 131, 1322-1331 83 Omar, A., & Erick D (2014) Use of seaweed extract as a promising post-harvest treatment on Washington Navel orange (Citrus sinensis Osbeck) Biological agriculture & horticulture, 30(3), 198-210 84 Oyaizu, M (1986) Antioxydantative activity of browing products of glucosamine fractionated by organic solvent and thin-layer chroma-tography Nippon Shokukhin Kogyo Gakkaishi, 3(5), 771-775 85 Ozen, B.O., Eren, M., Pala, A., Ozmen, I., & Soyer, A (2011) Effect of plant extracts on lipid oxydation during frozen storage of minced fish muscle International Journal of Food Science & Technology, 46, 724-731 86 Ozogol, F., Polat, A., & Ozogul, Y (2004) The effect of modified atmosphere packaging and vacuum packaging on chemical, sensory and microbiological change of sardines (Sardina pilchardus) Food Chemistry, 85, 49-57 67 87 Pauleti, N N., Mello, J., Siebert, D A., Micke, G A., de Albuquerque, C A C., Alberton, M D., & Barauna, S C (2018) Characterisation of phenolic compounds of the ethyl acetate fraction from Tabernaemontana catharinensis and its potential antidepressant-like effect Natural product research, 32(16), 1987-1990 88 Peschel, W., Sánchez-Rabaneda, F., Diekmann, W., Plescher, A., Gartzía, I., Jiménez, D., & Codina, C (2006) An industrial approach in the search of natural antioxidants from vegetable and fruit wastes Food Chemistry, 97(1), 137-150 89 Pu, H., Sun, Q., Tang, P., Zhao, L., Li, Q., Liu, Y., & Li, H (2018) Characterization and antioxidant activity of the complexes of tertiary butylhydroquinone with β-cyclodextrin and its derivatives Food Chemistry, 260, 183-192 90 Rajauria, G., Foley, B., & Abu-Ghannam, N (2016) Identification and characterization of phenolic antioxidant compounds from brown Irish seaweed Himanthalia elongata using LC-DAD–ESI-MS/MS Innovative food science & emerging technologies, 37, 261-268 91 Ramah, S., Etwarysing, L., Auckloo, N., Gopeechund, A., Bhagooli, R., & Bahorun, T (2014) Prophylactic antioxidants and phenolics of seagrass and seaweed species: a seasonal variation study in a Southern Indian Ocean Island, Mauritius Internet Journal of Medical Update-EJOURNAL, 9(1), 27-37 92 Rastogy, N.K., Raghavarao, K., Balasubramaniam, V.M., Niranjan, K and Knorr, D 2007 Opportunities and challenges in high pressure processing of foods Crit Rev Food Sci Nutr 47, 69–112 93 Richards, M.P., & Hultin, H.O (2002) Contributions of blood and blood components to lipid oxidation in fish muscle Journal of Agricultural and Food Chemistry, 50 (3), 555-564 94 Rioux, L E., Turgeon, S L., & Beaulieu, M (2009) Effect of season on the composition of bioactive polysaccharides from the brown seaweed Saccharina longicruris Phytochemistry, 70(8), 1069-1075 95 Rosaline, X D., Sakthivelkumar, S., Rajendran, K., & Janarthanan, S (2012) Screening of selected marine algae from the coastal Tamil Nadu, South India for antibacterial activity Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 2(1), 140-146 96 Rychen, G., Aquilina, G., Azimonti, G., Bampidis, V., Bastos, M D L., & Kolar, B (2018) Butylated hydroxyanisole (BHA) as a feed additive for all animal species EFSA Journal, 16(3), 215-222 68 97 Sadeghi, A., Hakimzadeh, V., & Karimifar, B (2017) Microwave assisted extraction of bioactive compounds from food: a review Journal Food Science Nutrition, 7, 19-27 98 Sampath-Wiley, P., Neefus, C D., & Jahnke, L S (2008) Seasonal effects of sun exposure and emersion on intertidal seaweed physiology: fluctuations in antioxidant contents, photosynthetic pigments and photosynthetic efficiency in the red alga Porphyra umbilicalis Kützing (Rhodophyta, Bangiales) Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 361(2), 83-91 99 Sathya, R., Kanaga, N., Sankar, P., & Jeeva, S (2017) Antioxidant properties of phlorotannins from brown seaweed Cystoseira trinodis (Forsskål) C Agardh Arabian Journal of Chemistry, 10, 2608-2614 100 Shitole, S S., Balange, A K., & Gangan, S S (2014) Use of Seaweed (Sargassum tenerrimum) extract as gel enhancer for lesser sardine (Sardinella brachiosoma) surimi International Aquatic Research, 6(1), 55 101 Singleton, V.L., Orthofer, R., & Lamuela-Raventos, R.M (1999) Analysis of total phenol andother oxydation substrates and antioxydants by means of Folin– Ciocalteu reagent Method Enzymol, 299, 152–78 102 Sivertsvik, M., Jeksrud, W.K & Rosnes, J.T 2002 A review of modified atmosphere packaging of fish and fishery products – significance of microbial growth, activities and safety International Jounarl Food Science Technology 37, 107–127 103 Sellimi, S., Benslima, A., Ksouda, G., Montero, V B., Hajji, M., & Nasri, M (2017) Safer and healthier reduced nitrites turkey meat sausages using lyophilized Cystoseira barbata seaweed extract Journal of Complementary and Integrative Medicine, 15(1) 104 Stojkovic D, Petrovic J, Sokovic M, Glamoclija J, Kukic-Markovic J and Petrovic S, In situ antioxidant and antimicrobial activities of naturally occurring caffeic acid, pcoumaric acid and rutin, using food systems J Sci Food Agric 93:3205-3208 (2013) 105 Strain, J.J., & Benzie, I.F (1996) The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of antioxydant power, the FRAP assay Analytical Biochemistry, 23(9), 7076 106 Su, M S., Chien, Y H., & Liao, I C (2000) Potential of marine cage aquaculture in Taiwan: cobia culture Aquaculture in Asia, 12 69 International Symposium on Cage 107 Tanvir, E M., Hossen, M., Hossain, M., Afroz, R., Gan, S H., Khalil, M., & Karim, N (2017) Antioxidant properties of popular turmeric (Curcuma longa) varieties from Bangladesh Journal of Food Quality, 2017 108 Thoudam., B., Kirithika, T., Shiny, K., & Usha, K (2011) Phytochemical screening and antioxidant activity of various extracts of Sargassum muticum International Journal Pharmaceutical Research and Development, 3(10), 25-30 109 Van Maanen, J M S., Verkerk, U H., Broersen, J., Lafleur, M V M., De Vries, J., Retel, J., & Pinedo, H M (1988) Semi-quinone formation from the catechol and ortho-quinone metabolites of the antitumor agent VP-16–213 Free Radical Research Communications, 4(6), 371-384 110 Van Nguyen, M (2018) Influences of Bleeding Conditions on the Quality and Lipid Degradation of Cobia (Rachycentron canadum) Fillets During Frozen Storage Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, 18(2), 289-300 111 Vanschoonbeek, K., de Maat, M.P., & Heemskerk, J.W (2003) Fish oil consumption and reduction of arterial disease Journal of Nutrition, 133, 657-660 112 Vermerris, W., & Nicholson, R (2007) Phenolic compound biochemistry Springer Science & Business Media.Volker, B (2018) Vitamin E Food Chemistry, 7(3), 44-54 113 Vilma, Č., Saulius, G., & Egidijus, B (2009), "Selection of fat-degrading microorganisms for the treatment of lipid- contaminated environment", Biologija, 55 (3–4), 84–92 114 Volker, B (2018) Vitamin E Food Chemistry, 7(3), 44-54 115 Wang T., Rosa J., & Guorun O (2009) Total phenolic compounds, radical scavenging and metal cheatation of extracts form Icelandic seaweeds Food Chemistry, 116 , 240-248 116 Wayner, D.D.M, Burton, G.W & Ingold, K.U (1985) Quantitative measurement of the total peroxyl radial trapping antioxydant capability of human blood plasma by controlled peroxydation Health and the Environment Journal, 18(7), 33-41 117 Wrona, J., Zaidul, I S M., Rahman, M M., Sharif, K M., Mohamed, A., Sahena, F., & Omar, A K M (2013) Techniques for extraction of bioactive compounds from plant materials: a review Journal of Food Engineering, 117(4), 426-436 70 118 Yamamoto, S (1992) Mammalian lipoxygenases: molecular structures and functions Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Lipids and Lipid Metabolism, 1128(2-3), 117-131 119 Zarkovic, N (2018) Antioxidants and second messengers of free radicals Flavor Chemistry of Fats and Oils, (11), 199-204 120 Zhao, Y., Zhu, A., Tang, J., Tang, C., & Chen, J (2017) Comparative Effects of Food Preservatives on the Production of Staphylococcal Enterotoxin I from Staphylococcus aureus Isolate Journal of Food Quality, 2017 121 Zubia M., Robledo D., & Freile-Pelegrin Y (2007) Antioxidant activities in tropical marine macroalgae from the Yucatan Peninsula, Mexico Journal of applied Phycology, 19, 449–458 122 http://www.fao.org 71 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Xây dựng đường chuẩn polyphenol tổng số Chuẩn bị dung dịch gallic acid nồng độ 2mg/mL: cân 20 mg gallic acid pha với 10 mL nước cất Tiến hành pha loãng dung dịch Gallic acid vừa chuẩn bị với nồng độ sau: Kết đo sau: Nồng độ 0,05 0,1 0,25 0,5 0,75 1,0 1,5 acid: Lần 0,0000 0,0954 0,1954 0,2902 0,5693 0,7469 0,9916 1,3583 Abs = 760 nm Kết trung bình ± độ lệch chuẩn Lần 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,101 0,0982 ± 0,0040 0,1874 0,1914 ± 0,0057 0,3002 0,2952 ± 0,0071 0,5736 0,5715 ±0,0030 0,761 0,7540 ± 0,0010 0,9735 0,9826 ± 0,0128 1,3699 1,3641 ± 0,0082 Đường chuẩn gallic Phụ lục 2: Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số phân đoạn dịch chiết rong mơ Phân đoạn Hàm lượng polyphenol tổng số Độ hấp thụ bước sóng 760 nm (mg GAE/g dịch chiết) Lần Lần Lần Lần Trung bình Hexan 0,3774 0,3362 145,0662 149,9439 147,5050  3,45c Butanol 0,6364 0,6368 43,5145 44,8260 44,1703 0,93b Ethyl acetate 0,6848 0,7121 186,7929 180,4433 183,6181  4,49c Nước 0,3896 0,4068 29,9850 32,8133 31,3992  2,00b Phụ lục 3: Kết xác định tổng lực khử phân đoạn dịch chiết rong mơ Thể tích mẫu dịch chiết 50 µL 100 µL 150 µL 200 µL Năng lực khử Phân đoạn Lần Lần Trung bình Hexan 0,2597 0,2955 0,27760,025c Butanol 0,1851 0,1673 0,17620,012b Ethyl acetate 0,3165 0,3055 0,31100,0077a Nước 0,1027 0,1248 0,11380,0156a Hexan 0,3446 0,3533 0,34900,006c Butanol 0,2509 0,2532 0,25210,0016b Ethyl acetate 0,3761 0,3988 0,38750,016a Nước 0,1512 0,1396 0,14540,0082a Hexan 0,4936 0,4454 0,46950,0340c Butanol 0,3064 0,3145 0,31050,0057b Ethyl acetate 0,5655 0,5276 0,54660,0267a Nước 0,2377 0,2233 0,23050,0102a Hexan 0,5047 0,534 0,51940,0207c Butanol 0,3566 0,3791 0,36790,0159b Ethyl acetate 0,5731 0,6346 0,60390,0434a Nước 0,293 0,2923 0,29270,0004a Phụ lục 4: Kết xác định khả khử gốc tự DPPH phân đoạn dịch chiết rong mơ Thể tích Phân mẫu dịch đoạn chiết Độ hấp thụ bước sóng 517 nm Lần µL 10 µL 15 µL 20 µL Control Control Lần 1 Lần Trung bình 0,1308 0,1956 0,2014 41,8640 34,1058 37,98495,4859d 0,1425 0,1477 0,1956 0,2014 28,2116 25,5919 26,90181,8524bc Hexan 0,1154 Butanol Lần Khả khử gốc tự DPPH (%) Ethyl 0,1086 acetate 0,1099 0,1956 0,2014 45,2897 44,6348 44,96220,4631a Nước 0,159 0,1956 0,2014 15,2141 19,8992 17,55673,3129b Hexan 0,1081 0,1173 0,2066 0,2169 48,9492 44,6045 46,77693,0722d Butanol 0,1432 0,1394 0,2066 0,2169 32,3731 34,1677 33,27041,2690c Ethyl 0,1008 acetate 0,1062 0,2066 0,2169 52,3967 49,8465 51,12161,8032a Nước 0,1526 0,1628 0,2066 0,2169 27,9339 23,1169 25,525434061b Hexan 0,0984 0,1132 0,1913 0,1777 53,2653 46,2360 49,75074,9704d Butanol 0,1277 0,1293 0,1913 0,1777 39,3493 38,5894 38,96940,5373c Ethyl 0,0907 acetate 0,0915 0,1913 0,1777 56,9223 56,5424 56,73240,2687a Nước 0,1382 0,1913 0,1777 31,9877 34,3624 33,17501,6792b 0,1749 54,8584 52,3598 53,60911,7668cd 0,1683 0,1432 Hexan 0,0813 0,0858 0,1738 Butanol 0,0967 0,0989 0,1738 0,1749 46,3076 45,0861 45,69680,8638c Ethyl acetate 0,0696 0,0701 0,1738 0,1749 61,3548 61,0772 61,21601,7668a Nước 0,1119 0,1057 0,1738 0,1749 37,8679 41,3104 39,58912,4342b Phụ lục 5: Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số phân đoạn Ethyl acetate từ dịch chiết rong mơ điều kiện bảo quản Điều kiện bảo quản Bảo quản lạnh Bảo quản đông Thời Độ hấp thu gian bảo bước sóng 760 quản Hàm lượng polyphenol tổng số (mg GAE/g dịch chiết) nm (ngày) Lần Lần Lần Lần Trung bình 0,6848 0,7121 186,7929 180,4433 183,61814,4898d 0,5813 0,5901 155,3978 158,0671 156,73251,3346bc 0,4101 0,4241 103,4671 107,7137 105,59042,133a 0,3222 0,3019 76,8041 70,6464 73,72523,0788b 0,2658 0,2701 59,6960 61,0004 60,34820,6522b 0,6848 0,7121 186,7929 180,4433 183,61814,4898d 0,6648 0,6522 180,7621 176,9042 178,81521,9110c 0,6223 0,6116 167,8345 164,5888 166,21161,6228a 0,514 0,5101 134,9834 133,8005 134,39190,8365b 0,3471 0,3566 85,79791,4408b 84,3571 87,2387 Phụ lục 6: Bảng giá trị EC50 phân đoạn từ dịch chiết rong mơ Khả bắt gốc tự DPPH Tổng lực khử Fe (EC50, µg/mL) (EC50, mg/mL) Phân đoạn Lần Lần Trung bình Lần Lần Trung bình Hexan 1,0246 1,4024 1,2135±0,2672d 14,2356 18,1415 16,1885±2,7619c Butanol 13,7056 13,8640 13,7848± 0,1120 182,792 183,2787 183,0353±0,3441 Ethyl acetate 0,6449 0,7252 0,6850±0,0568a 10,98316 10,7456 10,7456±0,3359a Nước 6,4033 6,02407 6,2137±0,2682d 83,5556 87,2900 85,4229±2,6406a Phụ lục 7: Kết đo hàm lượng acid béo tự (FFA) thịt cá bớp bảo quản lạnh nhiệt độ 4C Thời gian bảo quản (ngày) Chỉ số FFA (mg/100g chất béo) Mẫu ĐC 1,8319 1,4083 1,6395 1,6266±0,2120a Mẫu 1,8319 1,4083 1,6395 1,6266±0,2120a VTM C 1,8319 1,4083 1,6395 1,6266±0,2120a EGCG 1,8319 1,4083 1,6395 1,6266±0,2120a ĐC 2,3118 1,8544 2,2581 2,1415±0,2500a MẪU 1,4216 1,7713 1,7555 1,6495±0,1975a VTM C 1,7588 1,8424 1,5109 1,7041±0,1724a EGCG 1,6856 1,7932 1,8113 1,7634±0,0679a ĐC 1,9336 2,1461 2,4670 2,1823±0,14a MẪU 1,8389 1,6003 1,8268 1,7554±0,1343a VTM C 2,1793 1,3521 1,9726 1,8347±0,4305a EGCG 1,7394 1,8884 1,9003 1,8427±0,0896a ĐC 2,5051 2,6637 2,3247 2,4878±0,1552a MẪU 1,7995 1,7349 1,9524 1,829±0,1116a VTM C 2,0042 1,9140 1,8823 1,9395±0,0632a EGCG 1,8363 1,7549 2,0531 1,8815±0,1541a ĐC 2,7814 2,8228 2,7711 2,7954±0,0337a MẪU 1,6309 2,1543 2,0876 1,9577±0,2848a VTM C 2,0542 2,3541 2,1543 2,1876±0,1527a EGCG 2,1967 2,0876 1,8920 2,0588±0,1544a ngày ngày 12 ngày Trung bình Phụ lục 8: Kết đo số peroxide (PV) thịt cá bớp bảo quản lạnh nhiệt độ 4C Thời gian bảo quản (ngày) Chỉ số PV (M hydroperoxide/g chất béo) Mẫu Trung bình ĐC 32,8998 30,1371 31,5184±1,3814a Mẫu 32,8998 30,1371 31,5184±1,3814a VTM C 32,8998 30,1371 31,5184±1,3814a EGCG 32,8998 30,1371 31,5184±1,3814a ĐC 51,5871 50,5618 51,0745±0,51264a MẪU 36,5867 39,6121 38,0994±1,5127a VTM C 45,0314 48,6729 46,8521±1,8207a EGCG 42,9808 42,3142 42,6475±0,3333a ĐC 63,4056 57,7034 60,5545±2,8511a MẪU 44,0819 41,6475 42,8647±1,2172a VTM C 56,9357 53,0972 55,0165±1,9192a EGCG 47,0567 49,2739 48,1653±1,1086a ĐC 68,5976 66,9562 67,7769±0,8207a MẪU 51,0921 48,3042 49,6982±1,3939a VTM C 55,0518 60,6782 57,8650±2,8132a EGCG 53,6882 57,7994 55,7438±2,0556a ĐC 67,2895 72,7593 70,0244±2,7391a MẪU 52,9811 51,8093 52,3952±0,5859a VTM C 62,8248 65,0773 63,9510±1,1263a EGCG 61,3348 58,7135 60,0242±1,31064a ngày ngày 12 ngày Phụ lục 9: Kết đo số TBARS thịt cá bớp bảo quản lạnh nhiệt độ 4C Thời gian bảo quản (ngày) Chỉ số TBARS (µmol MAD/kg thịt cá) Mẫu Trung bình ĐC 9,2898 9,7707 9,5303±0,2405a Mẫu 9,2898 9,7707 9,5303±0,2405a VTM C 9,2898 9,7707 9,5303±0,2405a EGCG 9,2898 9,7707 9,5303±0,2405a ĐC 23,8905 19,4321 21,6613±2,2292a MẪU 11,3470 12,7066 12,0268±0,6798a VTM C 19,1269 17,2533 18,1901±1,3248a EGCG 18,0030 17,0238 17,5134±0,4896a ĐC 30,8882 33,1078 31,9980±1,1098a MẪU 16,8213 18,9939 17,9076±1,0863a VTM C 24,9612 27,3045 26,1328±1,1717a EGCG 22,5782 23,9693 23,2738±0,6955a ĐC 41,0907 40,7515 40,9211±0,1696a MẪU 24,7774 25,0887 24,9330±0,1556a VTM C 29,3288 30,4095 29,8691±0,5404a EGCG 28,2800 29,4785 28,8792±0,5993a ĐC 46,2853 47,4821 46,8837±0,5984a MẪU 30,7706 28,5036 29,6371±1,1335a VTM C 37,4351 38,7964 38,1157±0,6806a EGCG 32,8779 34,3579 33,6179±0,74a ngày ngày 12 ngày ... chống oxy hóa để bảo quản thực phẩm hạn chế xi Do vậy, đề tài: ? ?Nghiên cứu thu nhận phân đoạn dịch chiết giàu polyphenol từ rong mơ Sargassum mcclurei ứng dụng để hạn chế oxy hóa lipid thịt cá bớp? ??... chống oxy hóa phân đoạn dịch chiết giàu polyphenol từ rong S mcclurei  Đánh giá khả hạn chế oxy hóa lipid phân đoạn dịch chiết rong mơ S mcclurei thịt cá bớp  Nghiên cứu thay đổi hàm lượng polyphenol. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN LÊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU THU NHẬN PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT GIÀU POLYPHENOL TỪ RONG MƠ SARGASSUM MCCLUREI VÀ ỨNG DỤNG ĐỂ HẠN CHẾ SỰ OXY HÓA LIPID TRÊN CƠ