Nghiên cứu tổng hợp protease kiềm tính bằng phương pháp lên men bởi tế bào vi khuẩn bac subtilis cố định

Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐỖ TRẦN NGOAN NGHIÊN CỨU TỔNG HP PROTEASE KIỀM TÍNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN BỞI TẾ BÀO VI KHUẨN Bac.subtilis CỐ ĐỊNH Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số : 604280 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP.HỒ CHÍ MINH ,tháng năm 2007 CÔNG TRÌNH ĐƯC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học : PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯNG Cán chấm nhận xét : Cán chấm nhận xét : Luận văn thạc só bảo vệ tại: HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Ngày Tháng Năm 2007 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH ĐỘC LẬP- TỰ DO -HẠNH PHÚC Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 06 năm 2007 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Học tên học viên : ĐỖ TRẦN NGOAN Phái :Nam Ngày tháng năm sinh : 03 -03 - 1980 Nơi sinh : Quảng Nam Chuyên ngành : Công Nghệ Sinh Học MSHV : 03105628 I - ĐỀ TÀI : NGHIÊN CỨU TỔNG HP PROTEASE KIỀM TÍNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN BỞI TẾ BÀO VI KHUẨN Bac.subtilis CỐ ĐỊNH II - NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG : Nghiên cứu tổng hợp enzyme protease kiềm tính phương pháp lên men tế bào vi khuẩn Bac.subtilis cố định + Bước đầu khảo sát hiệu suất cố định tế bào vi khuẩn Bac.subtilis số chất mang thông dụng + Chọn chất mang - Tối ưu hóa điều kiện cố định tế bào vi khuẩn Bac.subtilis chất mang chọn + Tiến hành lên men thu nhận enzyme protease kiềm tính phương pháp : Lên men tế bào vi khuẩn cố định lên men tế bào vi khuẩn dạng tự + Khảo sát khả tái sử dụng tế bào vi khuẩn dạng cố định III – NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 12/2006 IV – NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 7/2007 V – HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯNG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM NGÀNH BỘ MÔN QUẢN LÍ CHUYÊN NGÀNH Nội dung đề cương luận văn thạc só Hội đồng Chuyên ngành thông qua Ngày PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH tháng năm 2007 CHỦ NHIỆM NGÀNH NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN - NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ CHẤM - NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ CHẤM - LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu Trường Đại Học Bách Khoa Thành Phố Hồ Chí Minh , giai đoạn thực đề tài tốt nghiệp, nhận giúp đỡ tận tình từ phía nhà Trường, Bộ môn, Quý Thầy Cô giáo tất bạn bè lớp CHCNSH – 05 Xin chân thành biết ơn : Bộ môn Công Nghệ Sinh học tạo điều kiện tốt cho học tập thực đề tài nghiên cứu Xin chân thành biết ơn : Thầy Nguyễn Đức Lượng, Cô Đồng Thị Thanh Thu, Cô Nguyễn Thuý Hương, Cô Nguyễn Thị Thuỳ Dương tận tình hướng dẫn giúp đỡ em thực luận văn Cảm ơn giúp đỡ, góp ý chân thành tất bạn bè năm học tập nghiên cứu Chắc chắn tránh khỏi thiếu sót trình thực đề tài,tôi xin chân thành ghi nhận đóng góp quý báo tất quý thầy cô bè bạn Học Viên : Đỗ Trần Ngoan TÓM TẮT Trong đề tài tập trung nghiên cứu hiệu suất cố định tế bào loại chất mang polymer sinh học Alginate 3% xúc tác Ca2+ 2% Chitosan xúc tác glutaraldehyde.Tiến hành cố định tế bào theo phương pháp : Nhốt tế bào vi khuẩn Bac.subtilis gel Alginate 3% hấp phụ tế bào vi khuẩn Bac.subtilis Chitosan Kết quả, chọn phương pháp : Nhốt tế bào vi khuẩn Bac.subtilis gel Alginate 3% với hiệu suất gắn đạt 78,7% Tiến hành nuôi cấy để thu nhận enzyme protease kiềm phương pháp : - Lên men tế bào dạng cố định (1) - Lên men tế bào dạng tự (2) Kết : Ở PP1 : Hoạt độ protease kiềm đạt cực đại 8,55UI/ml.h sau 36h nuôi cấy, pH = 9,56 Ở PP2 :Hoạt độ protease kiềm đạt cực đại : 8,02UI/ml.h sau 48 h nuôi cấy, pH = 9.63 Khả tái sử dụng tế bào vi khuẩn Bac.subtilis cố định gel alginate 3% từ đến chu kỳ, hoạt độ protease kiềm tính thu cuối chu kỳ nuôi thứ đạt 4,08UI/ml.h Giảm 47,7 % so với chu kỳ đầu SUMMARY In this study, I concentrate to research the capacity to fix cells on two kinds of biological polymer such as Alginate (3%) in Ca2+ 2% solution and Chitosan with glutaraldehyt as catalysis components Experiences are followed two methods: entrapment Bac subtilis cells in the Alginat gel (3%) and adsorb Bac subtilis cells on the Chitosan surface As a result, I chose the entrapment method Bac subtilis cells in the Alginate gel (3%) with fix productivity is 78.7% Make the culture to receive alkaline protease by methods: • Fix fermentation (1) • Free fermentation (2) Results: In the fix fermentation, max activity of alkaline protease is 8.55UI/ml.h after 36 hours culture in pH = 9.56 In the free fermentation, max activity of alkaline protease is 8.02 UI/ml.h after 48 hours culture in pH = 9.63 Recycle capacity of Bac subtilis cells is from to cycles, the activity of alkaline protease in 6th cycle is 4.08UI/ml.h –decreasing 47.7% in comparison with the first cycle -v3.1 HOÙA CHẤT VÀ THIẾT BỊ SỬ DỤNG 3.1.1 Hóa chất sử dụng nghiên cứu [30 ,31] STT TÊN HÓA CHẤT MỤC ĐÍCH SỬ DỤNG NGUỒN GỐC Alginate Natri Cố định tế bào vi khuẩn Hiệu Fluka(T.Điển) Chitosan Cố định tế bào vi khuẩn Glutaraldehyde Bổ sung vào chất cố định CaCl2 Bổ sung vào chất cố định Formol Xác định hoạt tính enzyme (E) Việt nam NaOH 0.1 N Pha dd đệm, xác định hoạt tính E Hãng AR – T.Quốc Thymolphtalein Xác định hoạt tính E Hãng AR - T.Quốc Phenolphthalein Xác định hoạt độ E Hãng AR - T.Quốc Gelatin Xác định hoạt tính E Hãng AR - T.Quốc 10 KH2PO4 Pha môi trường, pha dd đệm Hãng AR - T.Quốc 11 Na2CO3 Pha dung dịch đệm Hãng AR - T.Quốc 12 CH3COOH Pha dung dịch đệm Hãng AR - T.Quốc 13 H3BO3 Pha dung dịch đệm Hãng AR - T.Quốc 14 MgSO4.7H2O Pha môi trường Hãng AR - T.Quốc 15 FeSO4.7H2O Pha môi trường Hãng AR - T.Quốc 16 KCl Pha môi trường Hãng AR - T.Quốc 17 NaCl Pha môi trường Hãng AR - T.Quốc 18 Glucose Pha môi trường Hãng AR - T.Quốc 19 Peptone Pha môi trường Hãng AR - T.Quốc 20 Thạch Pha môi trường Hãng AR - T.Quốc 21 HgCl2 Khảo sát hoạt lực vi khuẩn Hãng AR - T.Quốc HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - vi 3.1.2 Dụng cụ thiết bị sử dụng nghiên cứu [ 31] STT LOẠI DỤNG CỤ NGUỒN GỐC THIẾT BỊ MỤC ĐÍCH SỬ DỤNG THÔNG SỐ KT Các dụng cụ thủy tinh Dùng thí nghiệm Nơi SX:Đức,T.Quốc Cân phân tích Cân hóa chất 0.1mg ≤ m ≤ 210 g Máy đo pH Đo pH Nơi SX Nồi hấp tiệt trùng Hấp môi trường , dụng cụ Nơi SX : Nhật Máy lắc ngang Nhân giống, lên men Nơi SX : Đức Bể điều nhiệt Xác định hoạt tính E Nơi SX : Đức Tủ cấy Cấy chuyền, nhân – cấy giống Nơi SX : Đức Tủ ấm Nuôi vi khuẩn Nơi SX : Mỹ Tủ lạnh Bảo quản hóa chất môi trường Nơi SX : Hàn Quốc 10 Tủ sấy Sấy dụng cụ Nơi SX : Đức 11 Máy ly tâm Tách sinh khối , thu dịch E Nơi SX : Đức 12 Máy khuấy từ Đồng hóa dung dịch 13 Máy UV- Vis Đo OD 14 Bom nhu động Cố định tế bào vi khuẩn HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - vii 4.1 CÁC BẢNG SỐ LIỆU 4.1.1 Thí nghiệm xác định hiệu suất cố định tế bào chất mang Bảng : Hiệu suất cố định tế bào vi khuẩn Bac.subtilis gel alginate STT Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0.155 0.049 0.106 68.39 0.157 0,045 0,112 71,34 0,161 0,041 0,120 74,77 T.Cộng 71,51 Bảng : Hiệu suất cố định tế bào vi khuẩn Bac.subtilis gel chitosan STT Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,153 0,051 0,096 66,67 0,155 0,053 0,102 65,81 0,162 0,044 0,118 73,05 T.Coäng 68,51 4.1.2 Thí nghiệm xác định hiệu suất cố định tế bào vi khuẩn Bac.subtilis chịu ảnh hưởng nồng độ canxi Bảng : Hiệu suất cố định tế bào ảnh hưởng nồng độ Ca2+ Thí nghiệm Tỉ lệ giống 10% VCaCl2 = 10ml VAlginate2% =20 ml Nồng độ CaCl2 =1% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,142 0,111 0,031 21,56 0,145 0,110 0,035 24,13 0,143 0,112 0,031 21,81 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - viii Thí nghiệm Tỉ lệ giống 10% VCaCl2 = 10ml VAlginate2% =20 ml Nồng độ CaCl2 =2% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,141 0,044 0,097 69.12 0,143 0,049 0,094 65,87 0,145 0,043 0,102 70,03 Thí nghiệm Tỉ lệ giống 10% VCaCl2 = 10ml VAlginate2% =20 ml Nồng độ CaCl2 =3% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,140 0,058 0,082 58,73 0,145 0,056 0,089 61,53 0,143 0,054 0,089 62,14 Thí nghiệm Tỉ lệ giống 10% VCaCl2 = 10ml VAlginate2% =20 ml Nồng độ CaCl2 =4% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,143 0,062 0,081 56,38 0,142 0,059 0,083 60,07 0,140 0,053 0,087 62,35 Thí nghiệm Tỉ lệ giống 10% VCaCl2 = 10ml VAlginate2% =20 ml Nồng độ CaCl2 =5% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,140 0,056 0,084 60,02 0,142 0,061 0,081 57,04 0,143 0,059 0,084 58,74 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - ix 4.1.3 Thí nghiệm xác định hiệu suất cố định tế bào vi khuẩn Bac.subtilis chịu ảnh hưởng tỉ lệ giống Bảng : Hiệu suất cố định tế bào ảnh hưởng tỉ lệ giống Thí nghiệm Tỉ lệ giống 5% VCaCl2 2,5 % = 10ml VAlginate2% =20 ml Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,067 0,05 0.017 25,32 0,071 0,05 0,021 29,43 0,064 0,045 0,019 29,85 Thí nghiệm Tỉ lệ gioáng 7,5% VCaCl2 2,5% = 10ml VAlginate2% =20 ml Soá lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,072 0,031 0,041 57,36 0,074 0,029 0,045 61,03 0,070 0,031 0,039 56,81 Thí nghiệm Tỉ lệ giống 10% VCaCl2 2,5% = 10ml VAlginate2% =20 ml Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,140 0,045 0,095 67,51 0,143 0,041 0,102 71,10 0,141 0,048 0,093 66,29 Thí nghiệm Tỉ lệ giống 12,5% VCaCl2 2,5 % = 10ml VAlginate2% =20 ml Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,153 0,019 0,114 74,26 0,155 0,038 0,117 75,34 0,156 0,037 0,119 76,02 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só -xThí nghiệm Tỉ lệ giống 15% VCaCl2 2,5% = 10ml VAlginate2% =20 ml Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,162 0,05 0,112 69,23 0,160 0,047 0,113 70,56 0,163 0,046 0,117 72,01 4.1.4 Thí nghiệm xác định yếu tố tối ưu phương pháp nhốt tế bào Bảng : Hiệu suất cố định tế bào theo ma trận qui hoạch thực nghiệm Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 :X1 = 4% , Tỷ lệ giống :X2 = 15% , Nồng độ Alginate :X3 = 4% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,161 0,06 0,101 62,73 0,160 0,057 0,103 64,38 0,163 0,06 0,104 63,39 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 :X1 = 2% , Tỷ lệ giống :X2 = 10% , Nồng độ Alginate :X3 = 4% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,141 0,057 0,084 59,73 0,140 0,054 0,086 61,43 0,143 0,056 0,087 60,64 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 :X1 = 4% , Tỷ lệ giống :X2 = 10% , Nồng độ Alginate :X3 = 4% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,140 0,071 0,069 49,28 0,143 0,068 0,075 52,44 0,141 0,073 0,068 48,29 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xi Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 :X1 = 2% , Tỷ lệ giống :X2 = 15% , Nồng độ Alginate :X3 = 4% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,159 0,049 0,110 69,38 0,161 0,045 0,116 72,34 0,162 0,042 0,120 74,28 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 :X1 = 4% , Tỷ lệ giống :X2 = 15% , Nồng độ Alginate :X3 = 2% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,162 0,05 0,112 69,23 0,160 0,047 0,113 65,56 0,163 0,046 0,117 72,01 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 :X1 = 2% , Tỷ lệ giống :X2 = 10% , Nồng độ Alginate :X3 = 2% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,141 0,065 0,076 53,91 0,139 0,047 0,081 58,27 0,143 0,061 0,082 57,34 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 :X1 = 4% , Tỷ lệ giống :X2 = 10% , Nồng độ Alginate :X3 = 2% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,140 0,064 0,076 54,29 0,143 0,062 0,081 56,64 0,141 0,061 0,08 56,73 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xii Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 :X1 = 2% , Tỷ lệ giống :X2 = 15% , Nồng độ Alginate :X3 = 2% Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,162 0,042 0,120 74,08 0,160 0,037 0,123 76,87 0,161 0,038 0,123 76,15 4.1.5 Thí nghiệm xác định tỷ lệ giống thích hợp Bảng 7: Hiệu suất cố định tế bào phụ thuộc tỷ lệ giống Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 2% , Nồng độ Alginate = 3%,Tỷ lệ giống :X2 = 10% , Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,139 0,071 0,068 48,92 0,140 0,069 0,071 50,72 0,144 0,06 0,072 49,76 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 2% , Nồng độ Alginate = 3%,Tỷ lệ giống :X2 = 11,25% , Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,140 0,065 0,075 53,57 0,139 0,066 0,073 52,53 0,142 0,056 0,086 60,7 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 2% , Nồng độ Alginate = 3%,Tỷ lệ giống :X2 = 12,5% , Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,146 0,059 0,087 59,58 0,147 0,056 0,091 61,90 0,145 0,060 0,085 58,62 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xiii Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 2% , Nồng độ Alginate = 3%,Tỷ lệ giống :X2 = 13,75% , Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,149 0,049 0,103 69,13 0,151 0,047 0,104 68,87 0,153 0,042 0,109 71,24 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 2% , Nồng độ Alginate = 3%,Tỷ lệ giống :X2 = 15% , Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,162 0,043 0,119 73,45 0,160 0,039 0,121 75,62 0,158 0,041 0,117 74,43 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 2% , Nồng độ Alginate = 3%,Tỷ lệ giống :X2 = 16,25% , Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,163 0,038 0,125 76,68 0,165 0,036 0,129 78,19 0,162 0,030 0,132 81,23 Thí nghiệm Nồng độ CaCl2 2% , Nồng độ Alginate = 3%,Tỷ lệ giống :X2 = 17,5% , Số lần tính Po (mg/ml) P(mg/ml) ∆ P(mg/ml) H(%) 0,167 0,042 0,125 74,85 0,169 0,041 0,128 75,74 0,166 0,041 0,125 75,31 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xiv - 4.1.6 Thí nghiệm xác định hoạt độ protease kiềm Bảng : Thí nghiệm khảo sát trình sinh tổng hợp enzyme protease kiềm theo thời gian từ phương pháp nuôi tế bào dạng cố định Maãu 4h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.120 1.130 1.128 1.130 1.150 1.036 1.058 1.112 1.121 a 1.202 1.206 1.230 1.208 1.254 1.125 1.140 1.214 1.198 Hd 1.164 1.079 1.448 1.108 1.477 1.264 1.164 1.448 1.093 Maãu 8h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.160 1.192 1.182 1.152 1.132 1.172 1.142 1.165 1.192 a 1.380 1.424 1.414 1.386 1.374 1.415 1.406 1.402 1.424 Hd 3.124 3.294 3.294 3.323 3.436 3.451 3.749 3.365 3.294 Maãu 12h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.220 1.114 1.128 1.180 1.215 1.126 1.180 1.124 1.146 a 1.496 1.422 1.446 1.504 1.510 1.426 1.502 1.428 1.463 Hd 3.919 4.374 4.516 4.601 4.189 4.260 4.572 4.317 4.501 Maãu 16h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.240 1.196 1.136 1.128 1.205 1.116 1.124 1.134 1.129 a 1.526 1.538 1.502 1.486 1.546 1.476 1.482 1.483 1.468 Hd 4.061 4.856 5.197 5.084 4.842 5.112 5.084 4.956 4.814 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xv Mẫu 20h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.214 1.186 1.126 1.220 1.215 1.126 1.15 a 1.642 1.633 1.568 1.654 1.643 1.572 1.586 1.602 1.578 Hd 6.078 6.347 6.276 6.163 6.078 6.333 6.191 6.390 6.404 1.152 1.127 Maãu 24h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.204 1.178 1.118 1.212 1.217 1.125 1.148 1.142 1.134 a 1.624 1.626 1.548 1.634 1.645 1.546 1.562 1.584 1.569 Hd 5.964 6.362 6.106 5.992 6.078 5.978 5.879 6.276 6.177 Maãu 28h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.215 1.214 1.178 1.202 1.216 1.213 1.196 1.212 1.137 a 1.690 1.680 1.672 1.692 1.678 1.702 1.684 1.706 1.608 Hd 6.745 6.617 7.015 6.958 6.560 6.944 6.930 7.015 6.688 Maãu 32h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.265 1.280 1.214 1.216 1.421 1.412 1.216 1.322 1.325 a 1.825 1.821 1.768 1.782 1.972 1.956 1.765 1.876 1.882 Hd 7.952 7.682 7.867 8.037 7.824 7.725 7.796 7.867 7.909 Maãu 36h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.204 1.216 1.215 1.215 1.303 1.312 1.217 1.236 1.228 a 1.796 1.822 1.814 1.822 1.896 1.924 1.816 1.834 1.841 Hd 8.406 8.605 8.506 8.619 8.421 8.690 8.506 8.492 8.705 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xvi Mẫu 40h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.202 1.215 1.218 1.23 a 1.784 1.802 1.806 1.812 1.874 1.872 1.815 1.835 1.821 Hd 8.264 8.335 8.350 8.264 8.094 7.909 8.350 8.364 8.293 1.304 1.315 1.227 1.246 1.237 Maãu 44h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.212 1.214 1.238 1.224 1.314 1.305 1.256 1.256 1.245 a 1.748 1.762 1.805 1.782 1.854 1.872 1.804 1.815 1.786 Hd 7.611 7.782 8.051 7.924 7.668 8.051 7.782 7.938 7.682 Maãu 48h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.203 1.216 1.226 1.218 1.215 1.304 1.235 1.228 1.238 a 1.706 1.712 1.708 1.706 1.714 1.786 1.745 1.738 1.723 Hd 7.143 7.043 6.844 6.93 7.086 6.844 7.242 7.242 6.887 Maãu 52h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.232 1.185 1.148 1.138 1.216 1.127 1.123 1.136 1.120 a 1.608 1.562 1.526 1.536 1.576 1.522 1.514 1.506 1.528 Hd 5.339 5.353 5.368 5.652 5.112 5.609 5.552 5.254 5.794 Maãu 56h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.238 1.184 1.136 1.138 1.215 1.105 1.134 1.124 1.127 a 1.536 1.502 1.435 1.436 1.526 1.416 1.432 1.433 1.449 Hd 4.232 4.516 4.246 4.232 4.416 4.416 4.232 4.388 4.572 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xvii - Bảng : Thí nghiệm khảo sát trình sinh tổng hợp enzyme protease kiềm theo thời gian từ phương pháp nuôi tế bào dạng tự Mẫu 4h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.080 1.105 1.108 1.123 1.106 1.108 1.132 1.142 1.121 a 1.142 1.176 1.183 1.189 1.174 1.185 1.197 1.214 1.186 Hd 0.880 1.008 1.065 0.937 0.966 1.093 0.923 1.022 0.923 Maãu 8h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.132 1.122 1.173 1.143 1.142 1.153 1.134 1.145 1.128 a 1.278 1.274 1.312 1.302 1.274 1.305 1.276 1.29 Hd 2.073 2.158 1.974 2.258 1.874 2.158 2.016 2.059 2.144 1.279 Maãu 12h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.224 1.115 1.108 1.127 1.216 1.124 1.206 1.129 1.132 a 1.456 1.382 1.356 1.384 1.475 1.376 1.432 1.387 1.389 Hd 3.294 3.791 3.522 3.649 3.678 3.578 3.209 3.664 3.649 Maãu 16h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.243 1.196 1.136 1.128 1.205 1.116 1.124 1.134 1.123 a 1.575 1.538 1.472 1.486 1.546 1.456 1.452 1.473 1.443 Hd 4.714 4.856 4.771 5.084 4.842 4.828 4.658 4.814 4.544 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xviii Mẫu 20h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.215 1.187 1.125 1.22 a 1.643 1.622 1.568 1.654 1.643 1.542 1.586 1.572 1.568 Hd 6.078 6.177 6.291 6.163 6.078 5.907 6.191 5.964 6.319 1.215 1.126 1.15 1.152 1.123 Maãu 24h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.204 1.177 1.128 1.213 1.216 1.121 1.148 1.142 1.132 a 1.562 1.538 1.502 1.574 1.578 1.489 1.532 1.505 1.509 Hd 5.084 5.126 5.311 5.126 5.14 5.226 5.453 5.155 5.348 Maãu 28h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.203 1.213 1.178 1.201 1.208 1.213 1.186 1.202 1.142 a 1.592 1.632 1.572 1.612 1.638 1.608 1.604 1.606 1.576 Hd 5.524 5.950 5.595 5.836 6.106 5.609 5.936 5.737 6.163 Maãu 32h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.245 1.263 1.213 1.156 1.423 1.403 1.215 1.352 1.345 a 1.675 1.681 1.658 1.592 1.862 1.826 1.665 1.786 1.768 Hd 6.106 5.936 6.319 6.191 6.234 6.007 6.390 6.163 6.007 Maãu 36h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.234 1.206 1.245 1.235 1.313 1.304 1.217 1.246 1.238 a 1.696 1.682 1.704 1.702 1.736 1.764 1.716 1.704 1.731 6.518 6.631 6.007 6.532 7.086 6.504 7.001 Hd 6.56 6.759 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só - xix Mẫu 40h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.201 1.215 1.218 1.203 1.305 1.315 1.371 1.246 1.201 a 1.694 1.712 1.726 1.702 1.794 1.822 1.862 1.745 1.686 Hd 6.998 7.057 7.214 7.086 6.944 7.199 6.972 7.086 6.887 Maãu 44h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.212 1.214 1.238 1.224 1.314 1.305 1.256 1.256 1.245 a 1.748 1.762 1.805 1.782 1.854 1.872 1.804 1.815 1.786 Hd 7.611 7.782 8.051 7.924 7.668 8.051 7.782 7.938 7.682 Maãu 48h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.213 1.216 1.226 1.202 1.203 1.204 1.235 1.228 1.218 a 1.786 1.782 1.788 1.756 1.764 1.776 1.795 1.788 1.793 Hd 8.137 8.037 7.980 7.867 7.966 8.122 7.952 7.952 8.165 Maãu 52h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.232 1.183 1.147 1.148 1.236 1.127 1.123 1.136 1.113 a 1.618 1.582 1.556 1.563 1.636 1.522 1.514 1.516 1.518 Hd 5.481 5.666 5.808 5.893 5.68 5.609 5.552 5.396 5.751 Maãu 56h t =1h , v =5ml , k =50 b 1.238 1.194 1.136 1.138 1.213 1.106 1.134 1.124 1.135 a 1.556 1.502 1.445 1.476 1.535 1.416 1.452 1.433 1.429 Hd 4.516 4.374 4.388 4.800 4.572 4.402 4.516 4.388 4.175 HV:Đỗ Trần Ngoan Luận văn thạc só ... NGHIÊN CỨU TỔNG HP PROTEASE KIỀM TÍNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN BỞI TẾ BÀO VI KHUẨN Bac. subtilis CỐ ĐỊNH II - NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG : Nghiên cứu tổng hợp enzyme protease kiềm tính phương pháp lên. .. khai thác tính ưu vi? ??t phương pháp cố định tế bào vi sinh vật phần giải vấn đề nêu nên chọn nghiên cứu tổng hợp protease kiềm tính phương pháp lên men tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis cố định, loại... cố định tế bào vi khuẩn Bac. subtilis chất mang chọn + Tiến hành lên men thu nhận enzyme protease kiềm tính phương pháp : Lên men tế bào vi khuẩn cố định lên men tế bào vi khuẩn dạng tự + Khảo