Viêm xơ hóa đường mật thể hiện ở ít nhất hai thể, thể đầu tiên là xơ hóa đường mật nguyên phát (PSC) chủ yếu ảnh hưởng đến nam giới trưởng thành trong đó chỉ có phản ứng duy nhất (khôn[r]
(1)QUY TRÌNH
N.527 QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG KHÁNG THỂ KHÁNG TIỂU VI THỂ GAN THẬN TYPE (LKM1)
I NGUYÊN LÝ
Xét nghiệm dựa phản ứng miễn dịch gắn enzyme gián bước sau:
Các kháng thể có mặt mẫu dương tính gắn với kháng nguyên phủ bề mặt hai giếng phản ứng, hình thành phức hợp kháng nguyên-kháng thể Sau ủ, bước rửa loại bỏ phân tử khơng gắn gắn khơng đặc hiệu Tiếp đó, chất cộng hợp enzyme bổ sung gắn với phức hợp kháng nguyên - kháng thể cố định Sau ủ, bước rửa thứ hai loại bỏ chất cộng hợp không gắn Cơ chất enzyme tiếp tục thêm vào giếng, trình thủy phân tạo màu diễn thời gian ủ Cường độ màu xanh dương tạo tỉ lệ thuận với nồng độ phức hợp kháng nguyên-kháng thể đo phương pháp quang học bước sóng 650 nm hệ thống xét nghiệm miễn dịch ELISA (Enzymelinked immunosorbant assay)
II CHUẨN BỊ
1 Cán thực hiện: 01 bác sĩ 01 cán đại học 01 kỹ thuật viên chuyên ngành Hóa sinh
2 Phương tiện, hóa chất:
- Phương tiện: máy xét nghiệm miễn dịch Alegria- hãng ORGENTEC/ Germany - Thuốc thử sẵn sàng sử dụng: Bộ xét nghiệm định lượng LKM1 sau:
Dải Alegria Test Strips cấu thành từ giếng với thành phần:
Giếng + Giếng trống khơng phủ (để pha lỗng mẫu)
Giếng + Được phủ kháng nguyên (giếng phản ứng) Giếng Mẫu chứng, màu vàng, chứa kháng thể đặc
hiệu, PBS, BSA, chất tẩy, chất bảo quản natri azide 0,09% ProClin 300 0,05%
(2)Giếng Dung dịch pha loãng mẫu, màu vàng, chứa PBS, BSA, chất tẩy, chất bảo quản natri azide 0,09% ProClin 300 0,05%
Giếng Cơ chất TMB, suốt, chứa 3,3’, 5,5’- Tetramethylbenzidin
Các vi giếng phủ sẵn C1q người có độ tinh khiết cao
Mã sản xuất mã vạch : LKM-1
- Ngoài dung dịch hệ thống như:
+ Wash (1x20mL): Dung dịch rửa, chứa TRIS, detergent, chất bảo quản natri azide 0,09% (50x)
+ System fluid (1x2,5mL): Dung dịch hệ thống chứa acid (1000x)
- Bộ xét nghiệm cần bảo quản bóng tối điều kiện 2-8°C Khơng để hóa chất tiếp xúc với nhiệt, mặt trời ánh sáng mạnh suốt trình bảo quản sử dụng Bảo quản thử Alegria (đậy kín khơ ráo) túi có khóa cung cấp Dung dịch Wash Buffer System Fluid sau pha loãng ổn định tối thiểu 30 ngày bảo quản 2-8°C
Dụng cụ khác: + Máy vortex; Pipet 10 μL; + Ống đong thể tích 1000 mL 2500 mL + Nước cất nước khử ion
3 Người bệnh: Người bệnh giải thích tư vấn trước thực XN, tốt nhịn ăn sáng lấy máu vào buổi sáng
4 Phiếu xét nghiệm: có đầy đủ thông tin bệnh nhân bao gồm họ tên, tuổi, khoa phịng, chẩn đốn, tình trạng mẫu, tên BS định, ngày định, ngày lấy mẫu, loại thuốc sử dụng (nếu có)…
III CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
1 Lấy mẫu bệnh phẩm xử lý mẫu:
- Bệnh phẩm phải lấy kỹ thuật vào ống xét nghiệm tiêu chuẩn Sử dụng ống không chống đông (ống serum) sử dụng ống có chất chống đơng Li-Heparine, EDTA
(3)- Bệnh phẩm lưu 2-8°C vịng ngày -20°C vòng tháng - Bảo quản chất chuẩn, QC sau hoàn nguyên nhiệt độ -20°C, tiến hành chạy phải để nhiệt độ phịng (20- 25°C) rã đơng hồn tồn lắc trước tiến hành xét nghiệm
2 Tiến hành kỹ thuật
- Máy xét nghiệm, hóa chất chuẩn trước thực phân tích Việc chuẩn xét nghiệm định lượng LKM1hiệu chuẩn thay đổi lơ hóa chất Kiểm tra chất lượng nằm giới hạn cho phép Thông thường chạy nội kiểm (QC) mức ngày: mức bình thường khơng bình thường Đối chiếu với luật kiểm tra chất lượng đạt tiến hành phân tích mẫu
- Thanh thử Alegria Test Strips với công nghệ SMC sử dụng với thiết bị chẩn đốn Alegria Để có thơng tin chi tiết quy trình vận hành thiết bị, tham khảo tài liệu hướng dẫn sử dụng thiết bị
(1) Bóc miếng dán phủ giếng trống từ đến thử Alegria Test Strips Khơng bóc phần dán phủ có in mã vạch, phủ giếng từ đến
(2) Hút 10 μL mẫu khơng pha lỗng vào đáy giếng (3) Đặt thử vào khay SysTray
(4) Đặt khay SysTray vào vị trí thiết bị Alegria bắt đầu chạy Tất bước sau thực tự động Xét nghiệm chạy hoàn tất thiết bị bắt đầu in kết - Định kỳ: Chuẩn lại chạy mức QC sau thay lô thuốc thử sau bảo dưỡng, sửa chữa máy cố, thay trang thiết bị phân tích quan trọng Ghi lại kết vào bảng theo dõi kết chuẩn máy xét nghiệm
- Đưa bệnh phẩm vào phân tích theo protocol máy Khi có kết phân tích đối chiếu với phiếu xét nghiệm, trả, lưu kết vào hệ thống mạng, in phiếu kết xét nghiệm trả kết cho người bệnh thời gian quy định
IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
1 Giá trị tham chiếu: Bình thường: LKM1: <10 U/mL 2 Ý nghĩa lâm sàng
(4)nên xác định tất bệnh nhân nghi ngờ bệnh gan tự miễn.Sự theo dõi tự kháng thể hữu ích trường hợp AIH mà có biến giảm mạnh ANA, ASMA kháng thể kháng LKM1 số cho thấy đáp ứng với điều trị ức chế miễn dịch Viêm gan tự miễn (AIH) bệnh viêm gan chủ yếu ảnh hưởng tới giới nữ, đặc trưng viêm gan gian thùy, tăng nồng độ enzyme transaminase, có mặt tự kháng thể huyết gia tăng nồng độ IgG AIH đáp ứng với điều trị ức chế miễn dịch, cần đưa phác đồ điều trị sớm chẩn đoán
Bệnh viêm gan tự miễn (AIH) type ảnh hưởng chủ yếu người trưởng thành, AIH type có 80% trường hợp gặp trẻ em Phản ứng huyết dương tính với ANA và/ ASMA xác định AIH type 1, dương tính với kháng thể kháng microsome gan thận type (LKM-1) và/ kháng thể kháng tế bào chất gan type (anti-LC1) xác định AIH type Bệnh nhân bị AIH type có kháng thể kháng LC1 có đặc điểm mơ bệnh học nặng so với trường hợp khơng có kháng thể kháng LC1 Các kháng thể kháng LKM-1 gắn với cytochrome P450 IID6 (CYP2D6); enzyme formiminotransferase cyclodeaminase (FTCD) phân tử đích kháng thể kháng LC1
Tự kháng thể kháng kháng nguyên gan hòa tan (SLA) kháng nguyên gan-tụy (LP), gắn với phân tử ức chế UGA tRNA liên kết với Protein kháng nguyên (tRNP(Ser)Sec) Chúng gọi tự kháng thể kháng SLA/LP dùng marker đặc hiệu cho type trường hợp AIH trầm trọng kết huyết học âm tính tự kháng thể AIH thơng thường Những điểm tương đồng mặt lâm sàng bệnh nhân AIH type (dương tính với ANA ASMA) bệnh nhân AIH dương tính với anti-SLA với khoảng 30% huyết dương tính trùng lặp anti-SLA ASMA và/ ANA, cho thấy kháng thể kháng SLA marker quan trọng bổ sung cho chẩn đoán AIH type 1, marker AIH type đơn Sự xuất kháng thể kháng SLA bệnh nhân mắc AIH nặng điểm xu hướng tái phát sau ngưng sử dụng corticosteroid so với trường hợp tương tự âm tính với kháng thể kháng SLA
Xơ gan mật nguyên phát (PBC) xác định kháng thể kháng ty thể (AMA-M2) phản ứng với enzyme phức hợp pyruvate dehydrogenase tiểu đơn vị E2 ANA đặc hiệu bệnh chủ yếu phản ứng với kháng nguyên lõi nhân gp210 kháng nguyên khối nhân sp100 Chúng đặc biệt quan trọng PBC có AMA-M2 âm tính
Viêm xơ hóa đường mật thể hai thể, thể xơ hóa đường mật nguyên phát (PSC) chủ yếu ảnh hưởng đến nam giới trưởng thành có phản ứng (không đặc hiệu) kháng thể kháng bào tương quanh nhân bạch cầu trung tính khơng điển hình (p-ANCA) thể thứ hai bệnh phát triển từ thời thơ ấu gọi bệnh xơ hóa đường mật tự miễn (ASC) với đặc điểm huyết học gần giống với AIH type
(5)gan-thận type (LKM-1) thường bị nhiễm HCV (9) Kháng thể LC1 miêu tả kết hợp với kháng thể kháng LKM-1 miêu tả riêng biệt bệnh nhân AIH type (17) Kháng thể kháng LC1 tìm thấy 14% bệnh nhân bị viêm gan C có kháng thể kháng LKM-1 dương tính
Viêm gan tự miễn khơng rõ nguồn gốc đặc trưng hình ảnh lâm sàng mà phân biệt với bệnh viêm gan tự miễn ANA, ASMA kháng thể kháng LKM-1 cho kết âm tính bệnh bắt đầu khởi phát xuất muộn q trình tiến triển bệnh Kháng thể kháng SLA dương tính 12-30% trường hợp bệnh nhân viêm gan chưa rõ nguyên nhân Bệnh thường đáp ứng với liệu pháp dùng steroid Protein loại mang tính kháng nguyên tái tổ hợp với độ tinh cao microsomes gan-thận (LKM-1) gắn vào giếng
V NHỮNG SAI SĨT VÀ XỬ TRÍ
Sử dụng bệnh phẩm máu toàn phần thu thập kỹ thuật phê duyệt, tránh gây vỡ hồng cầu
Mẫu huyết dùng cho xét nghiệm phải không bị vỡ hồng cầu Tránh sử dụng mẫu vỡ hồng cầu mẫu nhiễm mỡ, nhiên, mẫu không gây nhiễu xét nghiệm Tránh lặp lại bước làm đông rã đông mẫu huyết huyết tương làm giảm hoạt tính kháng thể