- So sánh cường độ màu sắc của các băng với cường độ màu của cut-off control: + Nếu cường độ màu sắc mạnh hơn: kết quả xét nghiệm là dương tính;.. + Nếu cường độ màu sắc là yếu hơn: xé[r]
(1)QUY TRÌNH
22.369 QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM ANA 17 PROFILE TEST (SÀNG LỌC VÀ ĐỊNH DANH ĐỒNG THỜI 17 TYP KHÁNG THỂ KHÁNG NHÂN BẰNG THANH SẮC KỸ
MIỄN DỊCH) I NGUYÊN LÝ
ANA 17 profile test (sàng lọc định danh đồng thời 17 typ kháng thể kháng nhân sắc ký miễn dịch) định trường hợp nghi ngờ đến bệnh tự miễn
Kháng nguyên (KN) gắn sẵn màng strip Các KN kết hợp với kháng thể (KT) đặc hiệu (nếu có) huyết người bệnh tạo nên phức hợp KN - KT ủ Sau rửa sạch, phức hợp gắn tiếp với KT kháng globulin miễn dịch người (anti IgG) kết hợp sẵn enzym peroxidase Sau rửa, lượng enzym gắn với phức hợp giữ lại giếng Khi cho chất enzym xúc tác tạo phản ứng tạo màu xanh Sau ngừng phản ứng tạo màu nước cất, đọc kết
II CHUẨN BỊ
1 Cán thực hiện: 01 Bác sỹ 01cán đại học 01 kỹ thuật viên chuyên ngành Hóa sinh
2 Phương tiện, hóa chất
2.1 Phương tiện: Máy ly tâm ống máu; - Pipet đầu dùng cho 10µl, 300 µl, 700µl, 1000µl; - Pipet nh a; - Găng tay
2.2 Hóa chất:
- Dung dịch Wash Buffer 20X (pha thành dung dịch 1X nước cất); - Dung dịch đệm mẫu (10ml Wash Buffer 1X + lọ Blocking Reagent); - Dung dịch cộng hợp (Conjugates);
- Cơ chất tạo mầu (TMB substrate); - 24 strips; - 24 rãnh ủ; - Bảng tham chiếu; - Nước cất, hoá chất khử trùng Natri hypoclorite
3 Người bệnh: Người bệnh giải thích tư vấn trước thực XN, tốt nhịn ăn sáng lấy máu vào buổi sáng
4 Phiếu xét nghiệm: có đầy đủ thơng tin bệnh nhân bao gồm họ tên, tuổi, khoa phòng, chẩn đốn, tình trạng mẫu, tên BS định, ngày định, ngày lấy mẫu, loại thuốc sử dụng (nếu có)…
V CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
(2)- Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống Máu không vỡ hồng cầu
- Bệnh phẩm nhận từ khoa lâm sàng phận lấy mẫu phịng khám Nhân viên nhận mẫu lấy thơng tin bệnh nhân từ phần mềm quản lý Bệnh viện, in dán barcode vào ống bệnh phẩm, sau cho ly tâm 4000 vòng 10 phút tách lấy huyết
- Cần tách huyết sớm tốt để tránh tượng tan máu làm ảnh hưởng đến kết phản ứng Nếu có lẫn hồng cầu thành phần hữu hình mẫu huyết cần ly tâm mẫu thêm lần để loại thành phần trước xét nghiệm
- Mẫu huyết bảo quản nhiệt độ 2°C đến 8°C dùng làm xét nghiệm vòng ngày Nếu muốn để lâu xét nghiệm cần phải bảo quản tủ lạnh sâu (≤ -20°C) Tuy nhiên với mẫu bảo quản lạnh sau cần tránh rã đông-tan nhiều lần
2.Tiến hành kỹ thuật:
- Bước Đặt strip (Strip cho người bệnh, Strip chứng âm, Strip chứng dương) vào rãnh ủ - Bước Cho 700µL Wash buffer 1X 300µL Sample buffer vào rãnh ủ Làm ẩm strip với dung dịch ủ vòng phút, lắc
- Bước Hút 10µL mẫu huyết vào rãnh ủ, trộn Ủ 30 phút 20-32°C, lắc (5 phút lắc lần) Hút bỏ hoàn toàn dung dịch rãnh
- Bước Rửa lần (1x 1,5mLWash buffer 1X) vịng phút, lắc Hút bỏ hồn tồn dung dịch rửa Lặp lại bước rửa lần
- Bước Hút 700 µL Wash buffer 1X 300 µL Conjugate vào rãnh ủ, lắc Ủ 30 phút 20-32°C, lắc (5 phút lắc lần) Hút bỏ hoàn toàn dung dịch rãnh
- Bước Rửa lần (1x 1,5ml Wash buffer 1X) vịng phút, lắc Hút bỏ hồn toàn dung dịch rửa Lặp lại bước rửa lần
- Bước Hút 700 µL nước cất 300 µL chất màu vào rãnh ủ, lắc Ủ 15 phút 20-32°C, lắc (5 phút lắc lần), tránh ánh sáng Hút bỏ hoàn toàn dung dịch rãnh
- Bước Hút mL dung dịch nước cất vào rãnh ủ Ủ phút, lắc Hút bỏ hoàn toàn dung dịch rãnh Lặp lại bước lần
- Bước Bỏ strip khỏi rãnh ủ Làm khô strip giấy lọc - Bước 10 Phân tích kết vịng 24h
VI NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
(3)+ Cường độ màu sắc cut-off control yếu so với Functional control; + Chứng âm tính, chứng dương tính
- Đặt strip lên bảng tham chiếu cho băng vị trí Functional control, Cut-off control strip khớp với băng bảng tham chiếu
- So sánh cường độ màu sắc băng với cường độ màu cut-off control: + Nếu cường độ màu sắc mạnh hơn: kết xét nghiệm dương tính;
+ Nếu cường độ màu sắc yếu hơn: xét nghiệm âm tính VII NHỮNG SAI SĨT VÀ XỬ TRÍ
- Sai sót mẫu bệnh phẩm: tên người bệnh giấy định xét nghiệm ống máu không thống nhất, máu bị đơng Xử trí: u cầu nơi đưa mẫu xác minh lại thông tin giấy định ống nghiệm, cần phải lấy lại mẫu bệnh phẩm