Đang tải... (xem toàn văn)
Các hẹ SMEDDS phải bền vững về nhiệt độnq học, các thí nghiệm đánh giá độ bền cua SMEDDS rat cần thiết để đảm bảo SMEDDS ổn định trong quá trình bảo quản và hlnh thành v[r]
(1)NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG CÔNG THỨC HỆ Tự NHŨ TẠO VI NHŨ TƯỢNG PHYLLANTHIN
Sử DỤNG DÂU GẤC LÀM PHA DẦU
Võ Thị Diệu (Khoa Dược, Đ ại học Y Dược TP Hồ Chí Minh)
I i t r u r n y uCTff IS N y u /e ii iJ IF C rĩạ iin (ó ổ ìĩ N U r\n - i V, r\iĩO ã UÍPỢC, t/ậ l h ọ c í t ' Ho o n / ĩv íĩn n )
ĐẶT VÁN ĐÈ
Phyilanthin (Hình 1) hoạt chết Diệp hạ châu đang, Phyllanthus amarus, với nhiều tác dụng dược lý quan trọng hoạt tỉnh chống oxy hóa, bảo vệ tế bào gan, làm giảm acid uric huyết, ức chế P- glycoprotein có tác dụng hiệp ỉực với số thuốc kháng ung thư (1_3} Tuv nhiên, phyllanthin rầt tan nước (9,5 Ịjg/mỊ)'4), dẫn tới sinh khả dụng đường uống thấp (0,62°/o)í2) Với khả cản thiện độ tan nâng cao sinh kha dụng đường uong, hệ tự nhũ tạo vỉ nhũ tương (SMEDDS) ngày nghiên cứu ứng dụng nhiều ngành dượ<r5,6) Nghiên cứu nhằm mục tiêu xây dựng công thức khảo sát tỉnh
chất hệ tự nhu tạo VI nhũ tương chứa phyllanthin
(P-SMEDDS) hướng tới mục íiêu cải thiện độ hịa tan phyilanthỉn
Ĩ C K ,
Hỉnh Cơng íhức hóa học phylianthín
ĐĨI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u
Đối tượng nghiên cứu
Phyiỉaníhin (độ tinh khiết 98,73 %) ban NCKH - TV, Khoa Dược, Đ ại học Y Dược TP Hồ Chí Minh cung cấp Các tá dược, dung môi đạt ỉiêu chuẩn Dược điển tiêu chuẩn sờ v ỏ nang cứng số (Thái Lan) máng thẩm tách MWCO (molecular weight cut off) 3500 - 4000 (Cellu Sep, Mỹ)
Phương pháp nghiên cứu
X ây dựng thấm định phương pháp HPLC định lượng phyllanthin
Chuẩn bị m ẫu thử định lưựng phyllanthin tá dược P-SM EDDS: Hòa tan hồn íồn mẫu
cần định lượng ethanol Lọc dung dịch qua màng lọc kích thước lỗ íọc 0,22 |jm trước phân tích phương pháp HPLC
Chuẩn b ị m ẫu th định luự ng phyllartthir) phơng thích từ th nghiệm độ hòa tan: Lọc mẫu thu đứợc từ
thử nghiệm khảo sát độ hịa tan qua màng lọc kích thước lỗ lọc 0,22 ụm trước phân ỉích phương pháp HPLC
Điều kiện H PLC định lượng phyllartthin
Máy sắc ký lỏng hiệu cao Azura (Knauer, Đức), đầu dò UVD 2.1L Cột sắc ký: Syncronis C18 (250x4,6 mm; ụm) tiền cột C18HQ 105 (4x10 mm; ụm) Hệ pha động: acetonitril - nước (75:25)
Nhiệt độ cột: 25 °c Thể tích tiêm mẫu: 20 |JÍ Thời gian phân tích: 12 phút Bước sóng phát hiện: 230 nm
Thẩm định phương pháp HPLC định lượng phyllanthin
Phương pháp HPLC định lượng phyllanthin được
íhẩm định ve tính tương thích hệ thong, tính đặc hiệu, íính tuyến íính, độ lặp lại độ
X ây dựng công thức P-SM EDDS
Khảo sá t độ tan phyllanthin tá dược
Độ tan phyilanthin írong loại dầu tự nhiên (dầu Gấc, dầu Mè, dầu Dừa, đầu Đậu nành, dầu Đậu
phụng), chấí diện hoạt (Cremophor RH40,
Cremophor EL, Labrasol) chất đồng diện hoạt (Lutrol, Transcutoi) xác định phương pháp bão hòa Lựa chọn dầu có khả hịa tan phyllanthin cao
Khào sát lựa chọn chất diện hoạt
Phối hợp dầu lựa chọn với chất diện hoạị tỷ lệ khác Pha loãng 100 lần với nước, lắc vắ so sánh độ Lựa chọn chất diện hoạt tạo nhũ tương suốt, bền
Khảo s ỉ lựa chọn chất đồng diện hoạt
Thiếí lập giản đồ pha gồm nươc, dầu chọn, hỗn hợp chất diện hoạt chọn/chẩt đồng diện hoạt khẩo sát (3:1, kl/kỉ) theo phương pháp chuẩn độ nước (water titration) Lựa chọn chai đồng diện hoạt tạo đừợc vùng vi nhò tương rộng
Khảo sát lựa chọn công th úc tá dược SMEDDS (bl- SMEDDS)
Từ thành phần chọn, thiết lập giản đồ pha Lựa chọn bi-SMEDDS có vùng nhũ tương
rộng Ly íâm bl-SM EDDS tốc độc 4000
vòng/phút 20 phút, đánh giá độ bền bl- SMEDDS lựa chọn công thức tối ưu
Tải hoạt chất vào bl-SMEDDS
Tải phyilanthin vào bl-SMEDDS với hàm lượng phylỉanthin khác (10, 14, 20, 35 mg/g), tạo thành P-SMEDDS Pha loãng P-SMEDDS 10 lần 100 lần với dịch dày giả định ezym (SGFwe) Đánh giá độ bền vi nhũ tương thơi điềm ngáy sau pha ioãng sau pha lỗng Lựa chọn cơng thức P-SMEDDS tối ưu
Đánh già tính chất P-SM EDDS
Khảo sá t thời gian tự nhũ P-SMEDDS: Khả
năng tự nhũ P-SMEDDS đánh giá 900
ml SGFwe 37°c, sử dụng cá từ với íổc độ quay 50
vịng/phủt ml P-SMEDDS phân ỉán vào môi trường nhờ đầu syring nhúng chìm mặt
thống mơi trường cm tốc độ bơm ml/phút
Kích thước tiểu phân zeta: P-SMEDDS
được pha loãng 100 lần với nước cất tạo thành vỉ nhũ tương Xác định kích thước tiểu phân trung bình, dãy phân bố kích thước (Pdl) zeta vi nhũ íương
(2)-hình thành.
Độ bền vi nhũ tương phylìanthirt: Pha iỗng P- SMEĐDS 100 iần với SGFwe, ly tâm 15000 vòng/phút 15 phút Quan sát tách pha, kết tủa hoạỉ chất (nếucó)
Định lượng phyllanthin P-SM EDDS: Áp dụng
phương pháp HPLC định lượng phyllanthin nêu ìrên Độ hịa tan viên nang P-SM EDDS: Khả phóng thích phyllanthin từ viên nang P-SMEDDS viên nang tinh thể phylianthin khảo sát sử dụng phương pháp phóng thích trự c tiếp phương pháp phóng thích qua màng thầm tách (MW CO 3500-4000 Da) 900 ml SGFwe, sử dụng thiết bị kiểu cánh khuấy vơi tốc ổộ quay 50 vòng /ph ú t Thời gian lấy mẫu 3, 6, 9, 12, 15, 20, 30 phút viên nang P- SMEDDS 15, 30, 60, 90, 120, 180 phút viên nang ìinh thể phylianthin Mau lọc qua màng lọc có kích ỉhước lỗ lọc 0,22 ụm trước định lượng phương phap HPLC So sánh kết độ hòa ỉan viên nang P-SMEDDS với độ hịa tàn viên nang tỉnh thề phianthin
KẾT QUÀ VÀ BÀN LUẬN
Thẩm định phương pháp HPLC định lượng phyilanthín
Phương pháp HPLC định lượng phyilanthin íá dược, P-SMEDDS, nìẫu mơi trường thư nghiệm độ hịa tan đạỉ u cầu tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu (xem phần Phụ Lục), tình tuyến
tính khoảng nồng đọ 0,25 - 296,19 với
trinh tương quan tuyến tính _y = 58,llx
phương i2
(R"=0,9998); ổạí độ lặp iại với RSD = 0,90 %; đạt độ với đọ phục hồi iư ,1 -1 ,6 %
Xây dựng công thức P-SMEDDS
Độ tan phyllanthin tá dược
Độ tan cùa phyllanthin dầu (dầu Gác, dầu Dừa, dầu Mè, dầu Đậu nành~ đầu Đậu phụng), chất diện hoạt (Labrasoi, Crem ophor RH40, Cremophor EL), chất đong diện hoạt (Transcuíol p, Lutrol 400) thề Hỉnh
7000
i
'6009 50.00 40.00 ’ 30.00 20.00 ■ 10.00 000
ÍỆỊ 11
III ■
&
m
/ rể * ế /
Hình Độ tan phyllanỉhin ỉá dược
Hệ SMEDDS pha iỗng mơi trường dịch dày xảy kết íua hoạt chất (6) Vi vậy,
cần khảo sát độ tan hoạt chất tá dược, đặc biệt pha dầu, lựa chọn tá dược có khả hịa tan hoại chất tối ưu Phyilanthin tan tốt tá dược khảo sát, cao rẩt nhiều lần nừởc (9,5 |jg/ml) Trong năm loại dầu khảo sốt, phyllàiíthin tan tot dầu Gấc (16,29 mg/ml) Do đó, dầu Gấc chọn làm pha dầu cho P-SMEDDS
Khảo sá t lựa chọn chất diện hoạt
Chất diện hoạt chọn lựa dựa khả nhũ hóa pha dầu Trong ba chầt diẹn hoạt khảo sát, Labrasoi hòa tan phyilanthin nhiều (36,98 mg/mlj nhũ hóa dầu G ấc yếu, tạo nhũ tương thơ, khơng bền Crem ophor RH40 nhũ hóa dầu Gấc tốt, hình thành vi nhũ tương suốt bền, la
Cremophor EL Crem ophor RH40 íuy hịa tan
phyilanthin nhũ hóa dầu Gấc tốt, tạo vi nhũ tương suốt, bền Do đó, Crem ophor RH40 chọn iàm chất diện hoạt cho P-SMEDDS
Khảo sát lựa chọn chất đồng diện hoạt
Sự tạo gei làm kéo dài thời giãn hình thành vi nhũ tương{7) Vì vậy, giản đồ pha có vùng tạo ge! q rộng khơng lựa chọn Giản đồ pha sư dụng hỗn hợp Crem ophor RH40/Transcutoi p ty lệ 3:1 (ki/kì) vùng íạo vi nhũ tương hẹp (Hình 3b) khơng có tạo ge! trước hình thành vi nhũ tương Do đó, Transcutoi p chọn làm chất đồng diện hoạt cho P-SMEDDS
Hình Giản đồ pha cùa nước; dầu Gấc; Cremophor RH40 chất đồng diện hoạt: (a) Lutroi (b) Transcutol p Tỳ iệ Cremophor RH40/chất đồng diện hoạt 3:1 (ki/kí) Vùng chấm bi vùng tạo vi nhũ tương, vùng tô màu xám vùng tạo gel
Vùng vi nhũ tương hai giản đồ pha hẹp Điều iý giải dầu Gấc dầu thiên nhiên, gồm hàm lượng iớn acid béo có mạch carbon đài, phân cực, khó phân íán thường cần m ột lượng lớn chất diện hoạt để hlnh thành vi nhũ tương Với mục đích mở rộng vùng vi nhũ tương, dầu Gấc phổi hợp với mọt số dầu có mạch carbon trung bình Kết cho thấy sổ dầu có m ạch carbon trung bình, Caprl 90 giúp m rộng vùng vi nhũ tương nhiều Đề tài tiếp tục khảo sat tỷ lẹ phối hợp dau Gấc/Capryol 90 iàm pha dầu cho P-SMEDDS
(3)Hỉnh Giản đồ pha nước; dầu Gác/Capryol 90 tỷ íệ (a) 1:0, (b) 2:1, (c) 1:1 (kl/kl); Cremophor RH40rrranscuíol p tỷ iệ 3:1 (ki/ki) Vùng chấm bi vung tạo vi nhũ tữờng.
Sau phối hợp dầu G ấc với Capryol 90, vùng vi nhũ tương mở rộng đáng kể-(Hình 4) Giản đồ pha sử dụng dầu Gầc/Capryol 90 tỷ iệ 1:1 có vùng vi nhũ tương rộng Do đó, hợp dầu Gấc/Capryol 90 ty !ệ 1:1 (kl/kl) chọn làm pha dầu cho P-SM EDDS Đây công bố nước giới sử dụng dầu Gấc hay hỗn hợp dầu Gấc/Capryol 90 làm tá dứợc pha dầu cho SMEDDS.
Giản đồ pha lựa chọn công thức bl-SMEDDS
(c) (d) (e)
Hình Gián đồ pha nước; dầu Gấc/Capryoi 90 íỷ lệ 1:1 (kl/kl); Cremophor RH40/Transcutol p tỷ lệ (a) 1:0, (b) 4:1, (c) 3:1, (d) 2:1, (e) 1:1 (k!/kl) Vùng chấm bi ià vùng tạo vi nhũ tương Vùng tô màu xám vùng tạo gel.
Giản đồ pha sử dụng Cremophor RH40/Transcutol p tỷ lệ 4:1 tỷ lệ 3:1 (Hình 5b, 5c) có vùng vi nhũ tương rộng vùng tạo gel hẹp Từ hai giản đồ pha này, số cơng thức bl-SMEDDS (Bảng 1) chọn để ííếp tục khảo sát.
Bảng Các công thức bl-SM EDDS chọn từ giản đồ pha
Cơng thức Giản
pha
Tỳ íệ pha dầu/ chất nhũ hỏa
Thành phần (ki/kl)
bỉ-SMEDDS (5b) 4:6 Dầu Gấc/Capryo! 90/Cremophor RH40/Transcutol p 20:20:48:12
bỉ-SMEDDS 3:7 Dầu Gảc/Caprvoi 90/Cremophor RH40/Transcuto1 p 15:15:56:14
bỉ-SMEDDS (5c) 3:7 Dằu Gâc/Capryol 90/Cremophor RH40/Transcutoi p 15:15:52,5:17,5
(4)Đánh giá độ bền bl-SM EDDS
Các hẹ SMEDDS phải bền vững nhiệt độnq học, thí nghiệm đánh giá độ bền cua SMEDDS rat cần thiết để đảm bảo SMEDDS ổn định trình bảo quản hlnh thành vi nhũ tương ben vững đường tiêu hóa Các bl-SMEDDS 1, bi-SMEDDS 2, bl- SMEDDS bị tách thành hai lớp sau ly tâm 4000 vòng/phút 20 phút, đó, bl-SMEDDS suốt, đồng nhất, khơng có tượng ỉách lớp Vì vậy, cơng thức bí-SMEDDS iựa chọn để tiếp tục khảo sát
Khả tải hoạt chất phyilanthin vào bl-SMEDDS
Sau tải phylianthin vơi hàm lượng 10, 14,
20, 35 mg/g vào bi-SMEDDS 4, tạo thành
các P-SMEDDS 10, P-SMEDDS 14, P-SMEDDS 20, P-SMEDDS 35 chất suốt đồng nhất, tỷ lệ pha loãng 10 lần SGFwe, tất bốn công thức P-SMEDDS 10, P-SMEDDS 14, P-SMEDDS 20, P-SMEDDS 35 bền vững, tỷ iệ pha íỗng 100 lần SGFwe, P-SMEDDS 10, P-SMẸDDS 14 khơng có tượng tách pha, kết tủa hoật chất thời điềm h h sau pha ỉoãng t u y nhiên, công thức P-SMEDDS 20, P-SMEDDS 35 (sau pha iỗng 100 íần SGFwe) xuất tinh thề phyỉlanthin sau pha iỗng Vì vậy, P-SMEDDS 14 chọn để tiep tục khảo sát
N hư vậy, công thức P-SM EDDS tối ưu lựa chọn là: Phyilanthin/Dầu Gấc/Capryol 90/Cremophor
RH40/Transcutol p vởi tỷ iệ
1,38:9,86:9,86:59,17:19,73 (kl/kl) Đánh g iá tín h c h ấ t P-SMEDDS
Thời gian tự nhũ P-SM EDDS
P-SMEDDS có khả tự nhũ, hình thành vi nhũ tương suốt bền vững với íhời gian tự nhũ trung binh ia 1,20 ± 0,17 phút (n=3)
Kích thước tiểu phân thề zeta
Dãy phân bố kích thước tiểu phân ví nhũ tương hình thành từ P-SMEDDS trình bày Hình Vi nhũ tương phyllanthin hình íhành từ Í^-SMEDDS có kích thước tiểu phân trung bình 19,17 ± 0,10 nm dãy phân bố kích thước hẹp, Pdl trung binh íà 0,076 ± 0,007 (n=3)
? 15 : \.Ề
Ũ
; : ị
: Ị \
pha lỗng P-SMEDDS 100 íần vởi SGFwe ly tâm 15000 vòng/phút 15 phút (n=6)
Định lượng phyllanthin P-SMEDDS
Định lượng phyllanthin P-SMEDDS phương phap HPLC cho thấy ham lượng phyllanthin P-SMEDDS trung binh 13,47 ± 0,11 mg/g (0=3)
Độ hòa tan viên nang P-SMEDDS '
Kích thước trung bình tiểu phân tinh thề phyllanthỉn viên nang tinh thề phyílanthin xác định khoảng 100 pm (Dữ liẹu khơng trình bày báo nay) Ket phóng thích phýllanthm từ viên nang P-SMEDDS vien nang tinh phyiianíhin mơi trường SGFwe trình bày Hỉnh
100 ! J S | H J p
V iê n n a n a P - S M E D D S m g p h ó n a th íc h tr ự c tiế p — ®— v i è i i n a iio P - S M E D Đ S m g p h ò n g th ic h q u a r iià iis t h ẩ n tá c h
" V iên naĩiB tinli th ể phyllaníhin 'm a plìịne t h í c htr\tc tiế p a
_ - ~ Ĩ
T
1
Hình
0.1 100
Size(d.nm)
100 CO
Hình Dãy phân bố kích thư ớc tiểu phân vi nhũ tương hinh thành từ P-SMEDDS
Khảo sát độ bền vi nhũ tương phyllanthin
Kết khảo sát cho thấy, khơng có thay đổi (tách pha, kết tủa hoạt chất) cua vi nhũ tương sau
8 0 120 Thời eian (phút)
7 Kết thích phyllanthin từ viên
nang P-SMEDDS viên nang tinh thể phylianthin SGFwe (n=6)
Viên nang P-SMEĐĐS có khả phóng thích phyllanthin hồn tồn nhanh so với viên nang tinh thể phyllanthin Trong phương pháp phóng thích trực tiếp, 97% phyllanthin phong thích từ viên nang P-SMEDDS 15 phúí đầu tiên, có 31% phyllanthin phóng thích từ viên nang tinh thể phyllanthin sau 120 phút Sự tăng vượt trội tỷ lệ phóng thích phyiíanthin từ viên nang P- SMEDDS so với viên nang tinh thể pftylianthin vi P- SMEDDS có khả tự nhũ hỉnh thành vi nhũ tương chứa phyilanthin trạng thái hòa tan dầu Vi nhũ tương co kích thước tiếu phân nhỏ, tạo tong diện tích bề mặt ỉớn, giúp tăng tốc độ hịa tan phyllanthin írong mơi trường
(5)độ hịa tan phyllanthin từ đó, có thề làm tăng sinh khả dụng đường uống cùa phyllanthin
K Ế T LÙẬN
Đề tài đẩ xác định độ tan phyllanthin dầu, chất diện hoạt, chát đồng diện hoạt khảo sát thiết lập giản đồ pha với tỷ íệ tá dược khác Các kết kế thừa trònq nghiên cứu sau Đ ây nghiên cứu ìrong nước thể giới công bố việc sử dụng dầu Gẩc làm tá dược pha dầu cho hệ SMEDDS Công thức P-SMEDDS đữực xây dựng thành công với kha tự nhũ, tạo vi nhũ tương nhanh, bền vững, kích thước tiểu phân hình thành vùng nano dãy phân bố kích thước hẹp Công thứ c P-SMEDDS chứng minh có khả cải thiện độ hịa tan phyllanìhin
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Krithika, R., Mohankumar, R., et (2009), "isolation, characterization and antioxidaíive effect of phyilanthin against CCI4-induced toxicity in HepG2 cell line", Chem Biol Interact, 181(3), 351-358.
2 Murugaiyah, V., Chan, K L (2007), "Analysis of lignans from Phyilanthus niruri L in plasma using a simple
HPLC method with fluorescence detection and its application in a pharmacokinetic study", J Chromatogr B
Analyt Technol Biomed Life Sci, 852(1-2), 138-144.
3 Sukhaphirom, N., Vardhanabhuti, N., et (2013), "Phyilanthin and hypophyllanihin inhibit function of P-gp but not MRP2 in Caco-2 celis", J Pharm Pharmacol, 65(2), 292-299
4 Hanh, N D-, Sinchaipanid, N., et al (2014), "Physicochemicai characterization o f phyllanthin from Phyllanthus amarus Schum et Thonn , Drug Dev ind Pharm 40(6), pp 793-802
5 Cerpnjak, K., Zvonar, A., et (2013), "Lipid-based systems as a promising approach for enhancing the
bioavailability of poorly water-soluble drugs", Acta Phatm,
63(4), 427-445
6 Pouion, c w (2000), "Lipid formulations for oral administration of drugs: non-emulsifying, seif-emulsifying and ‘seif-microemuisifying’ drug delivery systems", Eur J
PharmSci, 11(2), 93-98 _
7 Li, P., Ghosh, A., et (2005), "Effect of combined use of nonionic surfactant on formation of oil-in-water microemulsions", Int J Pharm 288(1), pp 27-34
PHỤ LỤC
(6)T r a n s c u to l p
N
- m >ỉ in -0
-V" 'i'
2
Tire
8 10 12
[min
Lutrol
vvrt>
0
- — I .
2
Tali
8 10 12
[nin.]
Hình 2, Sắc ký đồ HPLC thể íính đặc hiệu cùa phương pháp định lượng phylianthin P-SMEDDS; (a) mau phyilanthin chuẩn, (b) mẫu trắng, (c) mẫu thử
« 1S°-
ị
100-ầ <
50-0
I l50~ i 100-§
50-ữ
2ữ
150-6 Time
6 T i m e
1 c h u a n
10 12
[min.]
p l a c c b o
10
[ m i n ]
m a u p la c c b
a)
b)
(7)RP (C ,15 cm X mm, pm), detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng À = 215 nm, tốc độ dỏng- ml/ phút, thể tích tiêm: 20 ụi, dung dịch hịa tan
methanol: H3PO4 5% (5:1), dung dịch đệm: g
triethylamin hydrodorid mi dung dịch H3PO4 5%
thêm nước vừa đủ 550 mi
Pha động: acetoniírii - dung dịch đệm (45-55) Dung dịch chuần: Cân xác khoảng 20 mg
loperamid.HCI chuần vào bình định mức 100 mí thêm
8^ml dung dịch hòa tan, siêu âm phút, thêm nước
i v? ? l HÚÍ xác 10 ml vào bình định mức 100
mi, thêm nước đến vạch lọc qua màng iọc 0,22 pm
Dung dịch thừ Cân 20 viên, tính khối lượng trung
bình nghiền mịn, cân bột thuốc tương đương 10 mg
loperamid hỵdroclorid vào binh định mức 100 mi, thêm
8 mi dung dịch hòa tan, siêu âm phút, thêm nước đen
vại ? ‘ Hú! chỉnh xác 10 ml cho và0 bình định mức 50 ml,
thêm nước đến vạch, lọc qua màng lọc 0,’22 um
KẾT QUẢ ■■■« a V H
1 Thẩm đ ịn h q u ỵ trìn h HPLC tro n g đ ịn h lư ợ ng
Tinh đặc hiệu: Pic chất khầo sái tách 'hoàn
toàn pic khác sắc ký đồ mẫu íhử thơi gian lưu cùa gic mẫu thử tương đương thời gian lưu cùa^ pic mẫu chuẩn, sắc ký đồ cua mẫu trắng, mau không xuất pic khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu chấỉ chuần
Tính tương thích hệ thống: hệ so đối xứng 96
RSD thời gian lưu 0,1 %
Độ lặp lại: c v % = 0,18%.
Độ đúrtơ: tv iê Dhuc hồi tm nn hình n 1R0/
*o •s
'J=t
e
Q
17 0 1SOO 13 0
1100
900 /00 500
' S ,4 S x
“ 20 23
N ồng đ ộ (ng/m l)
30
Hình ĐiPỜng ch u ầ n phư n g pháp HFLC tro n g đ ịn h lư ợ ng
2 Thẩm đ ịn h q u y trìn h HPLC tro n g th đ ộ hòa tan
, Tínl] đf c h‘ệu- Pĩc chẩí khảo sát tách hoàn toàn pic khác tro n g s ắ c ký đồ mâu thử, thời gian lưu pic mẫu thử tương đương ỉhời gian lưu cua pic mâu chuẩn, sắc ký đồ mẫu trắng mẫu
nên khơng xuất pic ỉróng khoảng thơi gian lưu
tương ứng với thời gian iưu chất chuẩn
Tính tu un g thích hệ thống: hệ số đối xứng ỉà
RSD thời gian lưu 0,12% ’
Đ ộ lặ p lạ i: c v % = 1,79%
Độ đúng: tỷ lệ phục hồi írung bình 06%
Tính tuyến tính: ỳ = 55 87X-10.96, trắc nghiệm F
cho thầy phương trình hồi quy có tính tương thích
(p<0,05) trắc nghiệm T cho thấy hệ số b bo có V
nghĩa (p<0,05) (hỉnh 2)
ỹ = 5 ,8 - 10 ,9
-
N ồng đ ộ (fỉg/m l)
Hình Đường chuẩn phương pháp HPLC thừ nghiệm độ hòa tan
3 Thăm d ò th n h phần c ô n g th ứ c vả m hình th ự c n ghiệm D -optim al
n h ả m ? C.ứUS ãm.dÒ_ ch? J hếy Mann°9ẹ_m 208Ỏ và nain starch glycolat có ảnh hường đến tính chất sản
SsSSSESSF Eh"“" “° s s s w assBảng ■ Mơ hình liệu thực nghiệm
10 11 12 13 14 80 60 40 80 60 80 80 40 60 40 40 60 60 40 40 10 40 40 40 30 50 50 50 10 20 40 10 10 20 40 20 20 50 50 50 30 30 50 30 30 50 50 -Yl 3,51 5,5 4,5 3,87 4,57 5,97 5;32 4,33 5,57 6,32 4,79 3,82 5,61 46,5 89,83 50,33 49,83 53,83 115,83 98,66 46.83 83Í33 84,16 54J6 44,5 79,33 78.83 86,97 74,02 79,74 85,97 80,46 77 82,2 83,57 79,29 69’96 79,46 83,8 80 78,93
_ Ghi chú:
x ị: Mannogem 2080
x2: Natri starch glycolat
X3: Avicel 102 y ỹ Đ ộ cứng
V2: Độ rã
(8)4 Phân tíc h m ố i liên q uan nhân
Xu hướng, mức độ liên quan x2, x3 vá y-1, y2, y3được trinh bày bảng
X1 *2 x3 luyên R^thử Ghi chú:
Y1 + + + 990,054 993,077 Xi! Mannogem 2080 Vi: Độ cứnq
y2 + + + 885,333 973,319 x2: Natri starch qỉycolat Vs: Độ rã
+ + + 789,078
,, A * - - 863,419 X3i Avicel 102 Y3: Độ hòa tan 10 phút ảnh hưởng đến độ cứng, độ rã độ hòa tan viên
íí> > J
\ p *
\ 'ý\ 'Sỉm r\Y / ' * W v\y ^ v X W A *
H ình Quy luật liên quan nhân x 1( x2, x3 y1t y2, y3 T ối u hóa c n g th ứ c
Luyện mạng: nhóm thừ: & thuật toán:
BackPropagationLearning
Điều kiện luyện mạng:
Ràng buộc: không co Trọng số:
Hàm mục tiêu:
- yi (Đọ cứng): > 4,5 kP UP (MiD = 4.5)
- ý2 (Độ rã): < 48 giây DOWN (MID = 48) - ýã (Độ hoa t a n /10 phút): > 75% UP (MID = 75) Két tối ưu hóa
Nồng độ tối ưu cùa nguyên liệu: - Xi (Mannogem 2080): X g
- x2 (Natri starch glycolat): y g - x3 (Avicel 102): z g
Tính ch ất d ự đoân sản phẩm (100%):
- y-i (Độ cứng): 4,50 kP - y2 (Độ rã): 48,00 giây
- y3 (Độ hòa ta n /10 phút): 82,81%
Kỉềm c h ứ n g c ô n g th ứ c tố i u s o sánh sản phẩm
Công thức tối ưu sản xuất lô liên tiếp so sánh tính chất sản phẩm với giá tri dự đốn phần mềm thông minh
Bảng Kết kiểm chứng cơng thức tối ưu
Tính chất Thưc nghiêm Dư đốn
Lăn Lần Trung bình
ỵi 4,35 4,4 4,37 4,5
y2 46,83 47,25 47,04 48
ys 83,46 83,24 83,35 82,81
Kết phân tích phương sai haị yếu tố khơng lặp cho thấy:
- Tính chất sản phẩm có tính lăp lai với lơ liên tiếp (p > 0,05)
- Kết dự đoán phần mềm thơng minh
thực nghiệm khác khơng có ỷ nghĩa thống kê (p > 0,05)7
So sánh công thức tối ưu với công thửc D giai đoạn thăm dị cho thấy cơng thức tối ưu có độ hòa tan (83,35% /10 phút, 95,83% / 20 phút) tốt công thức D (94,46% /30 phút)
Bảng Kết qua kiểm nghiệm công thức tối ưu cơng thưc D
STT Tính chốt Cơng thức tối
ưu
Công thức D
Độ cứng (kP) 4,37 4,39
2 Thời gian rã (qiâv) 47,04 38,17
3 Độ hòa tan 83,35* 94,46 **
*: Độ hòa ta n /10 phút **: Độ hòa tan/ 30 phút
6 Nâng cấ p c ỡ lô 20.000 v iê n s o sá nh độ
hòa ta n in v itro v i v iê n th a m khảo
Nắng cấp cỡ lô ỉên 20.000 viên xác định thời gian trộn ban đầu thích hợp 12 phút, cằc thông số độ phân bổ cỡ hạỉ, độ phân bố khối lượng viên, độ trơn chảy khối nguyên liệu sau trộn đạt yêu cầu Sản xuất ĩô 20.000 viên với thời gian irộn vừa tìm Kiểm nghiệm sản phẩm theo tiêu chuẩn sở xây dựng!
Bảng Kết kiểm nghiệm vỉên nén loperamid hydroclorid mg
Chỉ tiêu kiểm nghiệm Kết kiêm nghiêm
Hình thức Đạị
Khối lượng (mg) 100,15
Đô cứng (kP) 4,45
Hàm lươnq (%) 99,84
Độ rã (giây) 46
Độ hòa tan/ 20 phút (%) 95,83
Đồnq khối iượnq Đaí
Đồnqđều hàm lươnq Đat
(9)So sánh tính chất viên nén lô 20.000 viên lô 2.000 viên, kết phân tích phương sai hai yếu tố khơng lặp cho thấy khác tính chất viên iô 2.000 viên lô 20.000 viên khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05)
- So sánh độ hòa tan in vitro sản phầm
viên Imodium insỉanst, kết viên nén loperamid hydrociorid mg tương đương hòa tan với viên Imodium instanst pH 1.2 pH 4.5 không tương đương pH 6.8
KỂT LUẬN
Nghiên cứu xây dựng công thức cho viên nén rã nhanh miệng chứa ioperamid hydroclorid ma trợ giúp phần mềm thơng minh ti kiệm nhiều thời gian chi phí Sản phẩm đạt
tiểu chuẩn sở tương đương độ hòa tan in vitro
với viên Imodium instanst moi trường pH 1.2 4.6 không tương đương môi trường pH 6.8 Sản phẩm không tương với viên Imodium instanst pH 6.8 ià viên Imodium insíanst bào chế phương pháp đơng khơ nên hịa tan tốt
KIẾN NGHỊ
- Nghiên cứu tăng cường độ hòa tan cho chế phẩm môi trưởng pH 6.8
- Nghiên cứu đọ ổn định sản phẩm
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Bộ Ỹ tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học Hà Nộị, 362-365, phụ Iục5, 5.3, 119: 129
2 Bộ Y tế (2009), Dược thư quốc gia, NXB Y học Hà
Nội, 747-748
3 Đặng Văn Giáp (2002), Thiết kế tối LUI hóa cơng
thức quy trình, NXB Y học Tp Hồ Chí Minh.
4 Huỳnh Thị Ánh Hằng, Đặng Văn Giáp, Phạm Thị Bích Thủy (2013), Xây dựng cơng thức viên nén
glimepirid mg với Martogem 2080 cai thiện độ hịa tan,
Tạp chí Dược học, 442,14-18
5 Tạ Mạnh Hùng, Đoàn Cso Sơn (2012), Hướng dẫn
chung thẩm định quy trình phàn tích phương pháp HPLC, Tạp chí kiểm nghiệm thuốc, số 4/2012, tập 10,1-8.
6 Bharathi A, Mohan Guptha K, Uma Jagannadha Rao Y (2012), Formulation development and evaluation of
loperamide hydrochloride orally disintegrating tablets,
Indian Journal of Research in Pharmacy and
Biotechnology, 1(2), 116-118
7 Erande Ritesh, Regupathi T, Shaikh Surfraj, Baokar Shikrishna (2011), Formulation development and
valuation o f fast dissolving tablet loperamide HCI, Indo
American Journal of Pharmaceutical Research, 1(1), 84- 91
8 Priyanka Nagar, Kusum Singh, iti Chauhan, Madhu Verma, Mohd Yasir, Azad Khan, Rajat Sharma and
Nandini Cupta (2011), Orally distegrating tablets:
formulation, preparation techniques and evaluation,
Journal of Applied Pharmaceutical Science, 1(4), 35-45 Surya Prakash Gautam, Janki Prasad Rai, Uma Biỉlshaiya, Niiesh Jain, Pradeep Vikram, Deepak Kumar Jain (2013), Formulation and evaluation o f mouth
dissolving tablet o f loperamide, International journal
pharmaceutical sciences and research, 4(5), 1782-1788
NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG TAN HUYÉT KHỐI I N V I T R O CỦA SAPONIN
TÁCH CHIẾT TỪ CÂY TAM THÁT ( P A N A X N O T O G I N S E N G )
Nhóm nghiên cứu: Vũ P hư ng T o (Sinh viên D3, Khoa YDược, ĐHQGHN),
N guyễn T h ị T h ú y Mậu (Bác sỹ, B ộ môn Y Dược học CO'sờ , Khoa Y Dược, ĐHQGHN),
N guyễn T nh Hằng (Bác sỹ, Bọ môn Y Dược học sờ, Khoa Y Dược, ĐHQGHN),
Nhóm giáo viên hướng dẫn:
PG S T S Nguyễn Thanh Hải (Bộ môn Bào Chế Công nghiệp dược, Khoa Y Dược, ĐHQGHN),
TS Vũ Thi Thơm (Bộ môn Y Dược học sơ, Khoa Y Dược, ĐHQGHN)
ĐẶT VẤN ĐÈ VÀ MỤC TIÊU NGHIÊN c ứ u
HŨyết khối nguyên nhân cùa nhiều bệnh lý tim mạch, có mối liên hệ chặt chẽ tới trình máu tổn thương tế bao nọi mơ thành mạch máu Ước tính hàng năm có từ 2-4/1000 bệnh nhân cần liệu pháp chống đông máu tan huyết khối điều trị tắc nghẽn mạch máu [1] Hiện nay, ỉhị trường có nhiều loại thuốc có tac dụng chong huyết khối dùng để ngăn ngừa điều trị chưng tắc nghẽn mạch máu Tuy nhiên, bệnh nhân vẩn phải chịu rủi ro nguy chảy máu tác dụng phụ không mong muốn [9]
Theo y học cổ truyền, tam th ất (panax notoginseng) biết đến vị thuốc có nhiều tác dụng q nhứ giúp bỉnh ổn huyết áp, chống kết tụ tiểu cầu, làm ían huyết khối ngăn nịịiừa xơ vữa mạch [1] Tam thẩt chưa nhiều nhom chat có hoạt tính sinh học, đặc biệt
các chất íhuộc nhóm saponin như: notoginsenoside R1f Ft1, Fe, Fc ; ginsenoside Rgì, Re, Rbi, Rd [3] Một số nghiên cứu Saponin tách chiết từ thuốc y học cổ truyền Naodesheng cùa Trung Quốc [1], từ cây Campomanesia xanthocarpa cùa Brazil [6] hay từ rau chân vịt Hàn Quốc [5] chứng minh tác dụng ức chế kết tập tiểu cau chống huyết khối Saponin Để góp phần phát triền thuốc ỉừ dược liệu tam thấí Việt Nam, chúng tơi nghiên cứu íác dụng cua saponin, chiết xuat từ panax notoginseng, việc ngăn ngừa hình thành cục máu đông như khả làm tan huyết khối in vitro.
ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN u ĐỐI tượng