Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat của lá cây Xăng sê (Sanchezia nobilis Hook.f)

 Đã xác định cấu trúc 2 hợp chất phân lập được: Thông qua kết quả đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối, phổ cộng hưởng hạt nhân và so sánh với các dữ liệu công bố của các hợp chất liên qua[r]

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC

––––––––––––––––––––––

LÊ HỒNG DƯƠNG

TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT

CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC

––––––––––––––––––––––

LÊ HỒNG DƯƠNG

TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT

CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC

KHÓA: QH.2015.Y

NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS VŨ ĐỨC LỢI

ThS BÙI THỊ XUÂN

LỜI CẢM ƠN

Em Lê Hồng Dương – sinh viên lớp K4 Dược học, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Đây đề tài em chọn để nghiên cứu làm khóa luận tốt nghiệp sau năm theo học chuyên ngành Dược học Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

Lời đầu tiên, em xin cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu – Dược cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Thầy đã trực tiếp bảo, hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt quá trình nghiên cứu để hồn thiện khóa luận Khơng vậy, thầy truyền cho em kiến thức, kĩ mềm hữu ích, giúp em tự tin khi bước sang ngưỡng cửa sống

Em xin cảm ơn Ths Bùi Thị Xuân – Giảng viên Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trực tiếp hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm, kĩ năng, giúp đỡ em nhiều trình thực tập

Em xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, cán bộ, giảng viên Khoa Y Dược thầy cô giáo các sở Khoa Y Dược liên kết giảng dạy dạy dỗ, tạo điều kiện cho em trong suốt năm học tập nghiên cứu chuyên ngành Dược học

Vì cịn thiếu kinh nghiệm, nên báo cáo em khơng thể tránh những sai sót Kính mong đóng góp ý kiến, bảo thầy để khóa luận em hồn thiện

Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 18 tháng 05 năm 2020 Sinh viên

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT

STT Ký hiệu Ý nghĩa

1 d Doublet

2 dd Doublet of doublet

3 DEPT Phổ DEPT (Detortionless enhancement by polarization transfer)

4 ESI-MS Phổ khối ion hóa phun điện tử (Electrospray ionization - mass spectrometry)

5 FT-IR Quang phổ chuyển đổi hồng ngoại Fourier (Fourier-transform infrared spectroscopy)

6 HMBC Phổ HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Correlation) HMQC Phổ HMQC (Heteronuclear Multiple Quantum

Coherence)

8 HSQC Phổ HSQC (Heteronuclear Single Quantum Coherence) IC50 Nồng độ ức chế 50% (50% inhibitory concentration)

10 IR Tia hồng ngoại (Infrared)

11 LC50 Nồng độ gây chết 50% (50% lethal concentration)

12 LC/MSD Sắc kí lỏng đầu dò khối phổ (Liquid chromatograph/mass selective detector)

13 m/z Khối lượng/điện tích (Mass to charge ratio)

14 NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear magnetic resonance)

15 ppm 10-6 (Parts per million)

16 s Singlet

DANH MỤC HÌNH ẢNH, HÌNH VẼ

Hình ảnh, hình vẽ Tên hình vẽ Trang

Hình Hình thái vĩ mô thân, lá, hoa (A); Lát

cắt dọc hoa (B)

Hình Vi học bột thân

Hình Vi học bột cuống

Hình Hình ảnh Xăng sê – Sanchezia nobilis

Hook.f 14

Hình Sơ đồ chiết xuất từ phân đoạn ethyl acetat

của Xăng sê 17

Hình Sơ đồ phân lập chất từ phân đoạn ethyl

acetat Xăng sê 18

DANH MỤC BẢNG BIỂU

Bảng biểu Tên bảng biểu Trang

Bảng Dữ liệu phổ DEPT,

1

H- 13C-NMR XS3

và chất tham khảo 19

Bảng Dữ liệu phổ DEPT,

1

H- 13C-NMR XS5

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 3

1.1. Tổng quan chi Sanchezia 3

1.1.1. Vị trí phân loại chi Sanchezia 3

1.1.2. Đặc điểm thực vật phân bố loài chi Sanchezia 3

1.2. Tổng quan Xăng sê (Sanchezia nobilis) 4

1.2.1. Phân bố Xăng sê 4

1.2.2. Đặc điểm thực vật Xăng sê 4

1.2.3. Đặc điểm vi học bột dược liệu Xăng sê 5

1.2.4. Thành phần hóa học Xăng sê 7

1.2.5. Tác dụng dược lí Xăng sê 9

1.2.6. Công dụng theo Y học cổ truyền Xăng sê 12

CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.1. Đối tượng nghiên cứu 13

2.1.1. Nguyên liệu 13

2.1.2. Hóa chất, thiết bị 13

2.2. Phương pháp nghiên cứu 14

2.2.1. Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 14

2.2.2. Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 15

CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 16

3.1. Kết chiết xuất phân lập hợp chất 16

3.2. Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập 18

3.2.2. Hợp chất XS5: Kaempferol 20

3.3. Bàn luận 22

3.3.1. Apigenin 22

3.3.2. Kaempferol 23

MỞ ĐẦU

Từ xa xưa, tài ngun thuốc đóng vai trị quan trọng việc chăm sóc sức khỏe, đặc biệt nước có truyền thống sử dụng dược liệu Chính vậy, việc nghiên cứu, phát triển chất mang hoạt tính sinh học lồi có giá trị thiết thực đời sống

Việt Nam nước có nguồn thực vật phong phú với khoảng 12.000 lồi, điều tra 3.850 loài sử dụng làm thuốc thuộc 309 họ [6] Đa phần mọc tự nhiên chưa nghiên cứu cách đầy đủ, có hệ thống mặt khoa học hoạt tính sinh học

Viêm loét dày bệnh phổ biến hàng đầu bệnh đường tiêu hóa, xuất nhiều quốc gia lứa tuổi Theo Hội Khoa học Tiêu hóa Việt Nam, 70% người Việt có nguy bị đau dày có chiều hướng ngày gia tăng Vì vậy, dân gian ta truyền sử dụng Xăng sê vị thuốc quý Lá có tác dụng kháng viêm, làm liền vết loét để chữa bệnh viêm loét dày – tá tràng [5] Trên giới, số công trình nghiên cứu dược lí đại khẳng định phần tác dụng Xăng sê như: chống oxi hóa, chống ung thư, kháng khuẩn, kháng nấm, diệt côn trùng,… [37, 40, 41] Tuy nhiên nay, việc nghiên cứu thành phần hóa học, đánh giá tác dụng sinh học Xăng sê hạn chế

Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat của Xăng sê

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia

1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia

Dựa theo hệ thống phân loại APG IV (Hệ thống phân loại thực vật hạt kín - Angiosperm Phylogeny Group) [22] hệ thống phân loại thực vật có hoa Armen Takhtajan [47], chi Sanchezia thuộc:

Giới (Kingdom): Thực vật (Plantae)

Ngành (Division): Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp (Class): Ngọc lan (Magnoliopsida)

Phân lớp (Subclass): Hoa môi (Lamiidae) Bộ (Order): Hoa mơi (Lamiales)

Họ (Family): Ơ rơ (Acanthaceae) Chi (Genus): Sanchezia 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố loài chi Sanchezia

Trên giới, chi Sanchezia (họ Acanthaceae) bao gồm 20 loài, phân bố khu vực nhiệt đới cận nhiệt đới Cây thuộc chi chủ yếu vùng Địa Trung Hải, châu Phi, số nước Mỹ, Úc, Sri Lanka, Ấn Độ, Malaysia,… Hầu hết chúng lâu năm từ rừng mưa nhiệt đới Trung Nam Mỹ (Ecuador) [19]

Cuối kỉ XVIII, Ruiz Pavón mơ tả chi Sanchezia có hai lồi Sau đó, năm 1964, chi bổ sung Leonard Smith, xác nhận có 58 lồi, nửa mô tả Tuy nhiên, vào năm 2015, Tripp Koenemann thống kê lại lịch sử phát triển lập danh mục 55 loài thuộc chi [49]

sặc sỡ (vàng, cam, đỏ, tím) Quả nang, chứa nhiều hạt Hạt hình cầu ovan [10, 30, 49]

Ở Việt Nam, chi Sanchezia có lồi có tên khoa học Sanchezia

nobilis hay Sanchezia speciosa Nguyễn Tiên Bân mô tả liệt kê

trong Danh lục loài thực vật Việt Nam [1]

1.2 Tổng quan Xăng sê (Sanchezia nobilis) Tên khoa học: Sanchezia nobilis Hook.f

synonyms: Sanchezia speciosa Leonard [23]

Tên thường gọi: Xăng sê, Khôi đốm, Ngũ sắc [1] 1.2.1 Phân bố Xăng sê

S nobilis giới thiệu lần đầu vào năm 1866 (Lavergne, 1982),

có xu hướng mọc tự phát vào năm 1940 Cây thường trồng làm cảnh, làm hàng rào, xung quanh vườn tìm thấy khu vực râm mát, ẩm ướt nhiều đảo Thái Bình Dương Hawaii, Fiji, New Caledonia, Rarotonga,… [35]

1.2.2 Đặc điểm thực vật Xăng sê

Xăng sê bụi nhỏ, mọc thẳng đứng, phân nhánh thấp, cao khoảng 0,5-1,5 mét

Thân thảo, màu trắng, khơng có lơng Thân đứng, trịn phần hình tứ giác phần dưới, đạt chiều dài khoảng 0,5-1 mét, đường kính 0,5-2 cm

Hình 1: Hình thái vĩ mô thân, lá, hoa (A) Lát cắt dọc hoa (B) [10] Chú thích: Thân; Lá; Cuống lá; Cụm hoa hoàn chỉnh; Bẹ hoa;

6 Đài hoa; Tràng hoa; Nhị hoa; Nhuỵ hoa

Hoa lưỡng tính, mọc cuối nhánh, nở từ cụm hoa có gai, cao 4-5 cm Hoa có mùi đặc trưng, vị đắng nhẹ, dài khoảng 2,5-3,5 cm Bẹ hoa đài hoa thn dài, có màu xanh lục Tràng hoa màu đỏ cam, hình ống trịn, có lơng bên ngồi Hoa gồm bốn nhị, nhị thn dài, bao phấn có lơng, tai đều, tiểu nhụy thị dài, thụ 2, lép Nang hột

[4, 10, 19, 35]

1.2.3 Đặc điểm vi học bột dược liệu Xăng sê

1.2.4.1 Bột thân

bào; (8) xơ trụ bì; (9) xơ bần; (10) xơ rây; (11) tinh thể canxi cacbonat hình khối; (12) ống quản bào; (13) lông che chở [10]

Hình 2: Vi học bột thân [10] 1.2.4.2 Bột

Hình 3: Vi học bột cuống [10]

1.2.4 Thành phần hóa học Xăng sê

Kết nghiên cứu Md Abu Shuaib Rafshanjani cộng (2015) cho thấy chiết xuất S speciosa có chưa hợp chất thuộc nhóm glycosid, alcaloid, saponin, carbohydrat, flavonoid, tanin, steroid, triterpenoid phenolic [41] Cũng vào năm 2015, phân tích định tính Seline Omondi J C Omondi lại đưa kết S speciosa chứa nhóm anthraquinon saponin, khơng chứa nhóm terpenoid, steroid, alcaloid flavonoid [43] Nghiên cứu phận khác Xăng sê, tính đến có 30 hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học

Năm 2013, Ahmed E Abd Ellah cộng [17] phân lập rượu matsutake từ phận mặt đất S nobilis, bao gồm:

(2) 3-O-β-glucopyranosyl-1-octen-3-ol

(3) 3-O-β-glucopyranosyl-(1→6)-β-glucopyranosyl-1-octen-3-ol (4) 3-O-β-arabinopyranosyl-(1→6)-β-glucopyranosyl-1-octen-3-ol (5)

3-O-β-arabinopyranosyl-(1→6)-β-glucopyranosyl-(1→6)-β-glucopyranosyl-1-octen-3-ol

Năm 2014, Ahmed E Abd Ellah cộng [18] tiếp tục nghiên cứu sâu hoạt chất có S nobilis, thu hợp chất (3 rượu cinnamyl glycosid, neolignan glycosid, rượu benzyl glycosid flavonoid glycosid), là:

(6) 9-O-β-glucopyranosyl trans-cinnamyl alcohol

(7) 9-O-β-xylopyranosyl-(1→6)-O-β-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-glucopyranosyl trans-cinnamyl alcohol

(8) Syringin

(9) 4-O-β-glucopyranosyl dehydrodiconiferyl alcohol (10) 7-O-β-glucopyranosyl benzyl alcohol

(11) 7-O-β-apiofuranosyl-(1→6)-O-β-glucopyranosyl benzyl alcohol (12) Apigenin-7-O-β-glucopyranosid

(13) Apigenin-7-O-gentiobiosid

(14) Apigenin-7-O-β-glucuronopyranosid

Năm 2016, từ dịch chiết ethanol S speciosa, TS Vũ Đức Lợi cộng [15, 50] phân lập hợp chất:

(15) Quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid (Quercitrin) (16) Quercetin 3-O-β-D-galactopyranosid (Hyperosid) (17) Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (Daucosterol) (18) 3-methyl-1H-benz[f]indole-4,9-dion

(19) 9-methoxycanthin-6-on (20) 9-hydroxyheterogorgiolid (21) O-methyl furodysinin lacton

Năm 2019, TS Vũ Đức Lợi cộng [16] phân lập thêm hợp chất từ dịch chiết S nobilis:

(22) Quercetin (23) Scopoletin

(24) Kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosid

(25) Quercetin-3-O-α -L-rhamnosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosid

(26) Axit 3’-O-methyl-3,4-methylenedioxy ellagic

Trong năm đó, nhóm nghiên cứu Phạm Thị Hà, Nguyễn Thị Hiền [2, 3] phân lập hợp chất từ S nobilis phương pháp sắc kí:

(27) Stigmasterol

(28) 4',5,7-trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavon (29) Kaempferol-3-O--L-arabinofuranosid (30) Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid 1.2.5 Tác dụng dược lí Xăng sê

1.2.6.1 Tác dụng gây độc tế bào

Trong nghiên cứu Nusrat Shaheen cộng (2017), họ đánh giá khả gây độc tế bào ống nghiệm từ chiết xuất dichloromethan chiết xuất methanol S speciosa Đánh giá sơ bộ, dịch chiết dichloromethan thể tác dụng gây độc tế bào đáng kể xét nghiệm tôm ngâm nước muối (IC50 2,528 ± 0,31 µg/mL) xét nghiệm

ức chế tăng sinh tế bào MTT dòng tế bào HeLa (IC50 26,7 ± 0,72 µg/mL)

[44]

1.2.6.2 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, diệt côn trùng

Năm 2014, nhóm nghiên cứu Md Abu Shuaib Rafshanjani cộng đánh giá tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm (phương pháp khuếch tán đĩa) tác dụng diệt trùng (phương pháp thử hoạt tính bề mặt) cây S speciosa Kết cho thấy chloroform phân đoạn cho tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm tốt so với hai phân đoạn ethyl acetat ether dầu hỏa Phạm vi vùng ức chế ± 0,01 đến 23 ± 0,02 mm sử dụng 500 µg/đĩa Thí nghiệm diệt trùng tỷ lệ tử vong Tribolium

castaneum 60%, 40% 20% liều 50 mg/mL 48 đối

với phân đoạn chloroform, ethyl acetat ether dầu hỏa [40]

1.2.6.3 Tác dụng chống ung thư

Md Abu Shuaib Rafshanjani cộng (2015) tiếp tục nghiên cứu về S speciosa đưa kết luận sơ dịch chiết có tiềm việc kiểm soát chất gây ung thư lĩnh vực dược lý Dịch chiết n-hexan ethyl acetat cho tác dụng gây độc tế bào đáng kể với nồng độ gây chết trung bình (LC50) 19,95 µg/mL 12,88 µg/mL,

vincristin sulphat LC50 10,96 µg/mL [41]

1.2.6.4 Tác dụng chống viêm

chất Hợp chất cho thấy tác dụng ức chế mạnh nhất, với giá trị IC50

193,70 ± 5,24 μg/mL [50]

Từ hợp chất phân lập trên, TS Vũ Đức Lợi cộng tập trung nghiên cứu tác dụng chống viêm S speciosa Họ sử dụng 0,05 mL muối natri arrageenan 1% để gây phù chân chuột chứng minh được chiết xuất S speciosa với liều 1,5 g/kg cân nặng có tác dụng mạnh việc ức chế phù chân carrageenan gây chuột [15]

1.2.6.5 Tác dụng chống oxy hóa

Cũng nghiên cứu Mohammadjavad Paydar cộng (2013) nêu mục 1.2.6.1, dịch chiết S speciosa thể tác dụng chống oxy hóa gần tương tự quercetin, tương lai nguồn chống oxy hóa tự nhiên tiềm [37]

Trong nghiên cứu PGS.TS Bùi Thanh Tùng cộng (2016) nêu mục 1.2.6.4, bốn hợp chất phân lập cho tác dụng chống oxi hóa mạnh, cụ thể sau: hợp chất > hợp chất > hợp chất > hợp chất Giá trị IC50 gốc DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) thu

hợp chất 20,83 ± 1,29 μg/mL [50]

1.2.6.6 Tác dụng giảm đau trung ương

Năm 2018, nhóm nghiên cứu ThS Bùi Thị Xuân cộng đánh giá tác dụng giảm đau trung ương chuột nhắt trắng phân đoạn n-hexan ethyl acetat S nobilis Nhóm sử dụng phương pháp mâm nóng phương pháp rê kim, cho chuột uống cao ngày liên tục, với liều 64 mg/kg/ngày 192 mg/kg/ngày (n-hexan), liều 16 mg/kg/ngày 48 mg/kg/ngày (ethyl acetat) Kết cho thấy phân đoạn ethyl acetat cho tác dụng giảm đau trung ương rõ rệt so với phân đoạn n-hexan [8]

1.2.6.7 Tác dụng chống loét dày – tá tràng

(1,85 ± 0,80) giảm số loét (5,61 ± 2,69); nhiên khơng làm thay đổi diện tích vết lt [16]

1.2.6 Công dụng theo Y học cổ truyền Xăng sê

CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu

2.1.1 Nguyên liệu

Lá Xăng sê lựa chọn thu hái Thị trấn Cổ Lễ, huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định ngày 15/01/2018 Sau thu hái tiến hành xử lý mẫu, phơi sấy, bảo quản túi nilon kín đem giám định tên khoa học Khoa Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu Kết luận: S nobilis Hook.f họ Acanthaceae (họ Ơ rơ) với tên Việt Nam Xăng sê Khôi đốm (số hiệu: DL-150118) Một mẫu lưu lại Phòng Tiêu Khoa Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu

Hình 4: Hình ảnh Xăng sê – Sanchezia nobilis Hook.f

2.1.2 Hóa chất, thiết bị

2.1.2.1 Hóa chất

 Các dung môi dùng để chiết xuất phân lập: Ethanol (EtOH) 80%, n-hexan, ethyl acetat (EtOAc), axit tartaric 2%, dichlomethan (CH2Cl2),

chloroform (CHCl3), NaHCO3, methanol (MeOH), aceton (Ac),

 Các hóa chất để định tính: NaOH, H2SO4, HCl, FeCl3, phenolphtalein,

Fehling,…

 Các vết hình dung cách sử dụng tia UV (254 nm, 365 nm) cách phun 10% H2SO4, sau hơ nóng súng nhiệt

2.1.2.2 Thiết bị

 Bản mỏng: tráng sẵn Kieselgel 60 F254 (Merck, silicagel, 0,25 mm)

bản mỏng pha đảo RP-18 F254 (Merck, 0,25 mm)

 Sắc ký cột: thực silica gel (70–230 230–400 mesh, Merck)

 Nhiệt độ nóng chảy: đo máy Mikroskopheiztisch PHMK-50 (VEB

Waegetechnik Rapido, Đức)

 Phổ NMR [1

H (500 MHz), 13C (125 MHz) DEPT-90 135 MHz)]:

được ghi máy AVANCE AV 500 (Brucker, Đức) Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam (VAST)

 Phổ khối ESI-MS: đo máy Varian Agilent 1100 LC/MSD

 Dụng cụ thí nghiệm: Pipet, ống nghiệm, bình nón, bình chiết, cốc có

mỏ, bình gạn, bình cầu…

 Các thiết bị khác: tủ sấy, tủ hút, cân phân tích,…

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất

Mẫu Xăng sê (3,0 kg) sau rửa sạch, phơi khô, thái nhỏ ngâm chiết dung môi ethanol 80% nhiệt độ phòng ngày (3 lần, sử dụng 12L, 10L, 10L) Lọc dịch chiết ethanol thu qua giấy lọc, gộp dịch lọc cất loại dung môi áp suất giảm, thu cao chiết tổng ethanol

Tiến hành xử lý phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat chủ yếu sử dụng phương pháp sắc ký cột Các phân đoạn trình phân lập theo dõi sắc ký lớp mỏng

Sắc ký cột: thực với chất hấp phụ silicagel pha thường pha đảo, lựa chọn hệ dung mơi có độ phân cực tăng dần Silicagel pha thường cỡ hạt 0,063 - 0,200 mm (Merck) cỡ hạt 0,040 - 0,063 mm (Merck) với loại cột sắc ký có kích cỡ khác

Sắc ký lớp mỏng: thực mỏng nhôm tráng sẵn silicagel 60G F254 (Merck), độ dày 0,2 mm RP-18 F254, độ dày 0,25 mm (Merck)

Sau triển khai sắc ký, mỏng kiểm tra đèn tử ngoại bước sóng 254 nm 365 nm, sau phun thuốc thử dung dịch H2SO4

10% ethanol đốt nóng bếp điện từ 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất

Xác định cấu trúc hợp chất phân lập qua bước chính:

- Bước 1: Thực đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối (ESI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1

H-NMR, 13C-NMR, DEPT), thiết lập liệu chất phân lập

CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất

Lá S nobilis rửa sạch, phơi khô, cắt nhỏ Cân 3,0 kg cắt nhỏ ngâm chiết 12 L dung môi ethanol 80 % nhiệt độ phòng ngày, rút lấy dịch chiết lần Bổ sung thêm dung môi cho ngập dược liệu 2-3 cm (10 L/lần) tiếp tục chiết thêm hai lần, thu dịch chiết lần hai lần ba

Gộp dịch chiết lần, lọc dịch chiết ethanol thu qua giấy lọc đem cất thu hồi ethanol áp suất giảm thu khoảng 251,2 g cao chiết tổng ethanol

Lấy 150 g cao chiết phân tán nước cất chiết phân bố n-hexan ethyl acetat (mỗi dung môi lần, lần 900 ml 30 phút) Các phân đoạn n-hexan, ethyl acetat cất loại dung môi áp suất giảm để thu phân đoạn tương ứng n-hexan ký hiệu H (28,6 g) ethyl acetat ký hiệu E (56,8 g) Phần dịch chiết nước cịn lại cạn thu phân đoạn ký hiệu N (45,6 g)

Cắn ethyl acetat (20 g) phân tán dung dịch axit tartaric 2% (300 ml) lọc tách bỏ cặn rắn, thu dịch lọc Dịch lọc kiềm hóa đến pH NaHCO3, sau chiết dung mơi dichlomethan (CH2Cl2) (4

lần x 600 ml/lần) Gộp dịch chiết cất thu hồi dung môi áp suất giảm thu cắn ký hiệu E1 (5 g) Phân đoạn E1 tiến hành triển khai phân tách cột sắc ký silicagel với hệ dung mơi rửa giải có độ phân cực tăng dần (CH2Cl2:MeOH, 30:1 → 10:1) thu phân đoạn nhỏ ký hiệu E1.1,

Hình 5: Sơ đồ chiết xuất từ phân đoạn ethyl acetat Xăng sê

Tiến hành phân tích cắn ethyl acetat (20,0 g) cột sắc ký silicagel với hệ dung mơi có độ phân cực tăng dần bao gồm n-hexan:ethyl acetat (5:1→1:1, v/v, phân đoạn 600 mL) tiếp sau ethyl acetat:methanol (5:1→ 1:1, v/v, phân đoạn 500 mL) thu phân đoạn ký hiệu E2~E5

Phân đoạn E2.1 (0,5 g) phân tách cột sắc ký silica gel, hệ dung môi rửa giải acetone:methanol (1:3; v/v) thu chất rắn màu vàng, ký hiệu XS3 (18 mg)

Từ phân đoạn E3 (5,4 g), chạy sắc ký cột silicagel (Φ45 mm × 350 mm) với hệ pha động chloroform:methanol (2:1, v/v) thu phân đoạn nhỏ E3.1~ E3.3 Tinh chế phân đoạn nhỏ E3.1 (1,1 g) sắc ký cột

Lá S nobilis

(3,0 kg)

lá

Dịch chiết tổng EtOH (251,2 g)

Cao chiết tổng EtOH (150 g)

Cao pha loãng

Dịch chiết nước Dịch chiết

n-hexan

Cắn n−hexan (H) (28,6 g)

32 L EtOH 80% EtOH thu hồi

n-hexan thu hồi

Nước cất

0.9 L × lần n−hexan

Lọc

Dịch chiết ethyl acetat

Cắn nước (N) (45,6 g) Ethyl acetat

thu hồi Cắn ethyl acetat (E)

(56,8 g)

pha đảo YMC C-18 sử dụng hệ dung môi rửa giải methanol:nước (2:1, v/v) thu hợp chất ký hiệu hợp chất XS5 (19 mg)

Hình 6: Sơ đồ phân lập chất từ phân đoạn ethyl acetat Xăng sê

3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập 3.2.1 Hợp chất XS3: Apigenin

Chất bột màu vàng nhạt, tnc = 347,5 o

C

Phổ ESI-MS: m/z 270,9 [M+H]+ Công thức phân tử: C15H10O5

(M=270)

Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT chất XS3 chất tham khảo [9] trình bày bảng

Cắn ethyl acetat (20 g)

lá

E2 (4,1 g) n-hexan:ethyl acetat

(5:1→1:1, v/v); ethyl acetat:methanol

(5:1→ 1:1, v/v)

E3 (5,4 g) E4 E5 cloroform:methanol

(2:1, v/v)

E2.1 (0,5 g) E2.2 E2.3 E2.4 E3.1 (1,1 g) E3.2 E3.3 aceton:methanol

(1:3, v/v) cloroform:methanol

(30:1; 20:1; 10:1; 5:1, v/v)

methanol:nước (2:1, v/v)

Hình 7: Cấu trúc hợp chất XS3 (Apigenin)

Bảng 1: Dữ liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR XS3 chất tham khảo Vị trí

C DEPT

δC XS3

ppm

δC Ja,b

ppm

δH XS3(ppm)

(Mult, J=Hz)

δH Ja,c

(ppm) (Mult, J=Hz) C 163,7 165,3

3 CH 102,8 102,7 6,77 (s) 6,68 (s)

4 C 181,7 181,9 C 157,3 156,5

6 CH 98,8 98,8 6,19 (d; J=2,0) 6,16 (d; J=2,0) C 164,1 163,2

8 CH 93,9 93,9 6,48 (d; J=2,0) 6,45 (d; J=2,0) C 161,1 161,4

10 C 103,7 104,6 1’ C 121,1 120,6

2’ CH 128,4 128,1 7,92 (d; J=7,5) 7,88 (d; J=8,6) 3’ CH 115,9 115,9 6,93 (d; J=8,5) 6,93 (d; J=8,6) 4’ C 161,4 120,0

5’ CH 115,9 115,9 6,93 (d; J=8,5) 6,93 (d; J=8,6) 6’ CH 128,4 129,4 7,92 (d; J=7,5) 7,88 (d; J=8,6)

a )đo DMSO, b )

Ở phổ

H-NMR XS3, tín hiệu proton vịng thơm doublet ghép đôi δH 6,92 6,48 (J=2,0 Hz) cho thấy tương quan HSQC với cộng hưởng

carbon tương ứng δC 102,8 (d) 98,8 (d), gán cho H-6 H-8

vòng A Hai doublet ghép trực tiếp δH 7,92 6,92 (2H, J=8,5 Hz) cho thấy

các liên kết xa với tín hiệu 13C-NMR δC 161,4 (C-4’) Do đó, gán

tương ứng H-2’/6’ H-3’/5’ vịng B Ngồi ra, singlet δH 6,77

gán cho H-3 Việc gán H-3 xác nhận mối tương quan xa với C-2 (δC 161,1) C-1’ (δC 121,1)

13

C-NMR δC 164,1 cho thấy mối tương quan

của HMBC với H-6 H-8, gán cho C-7 Trên phổ 13C-NMR DEPT cho thấy có tín hiệu carbon bậc nhóm CH Dựa liệu phân tích so sánh với phổ 1H-NMR, 13C-NMR tài liệu tham khảo [9] cấu trúc hợp chất XS3 xác định Apigenin

3.2.2 Hợp chất XS5: Kaempferol

Chất bột vơ định hình màu vàng, tnc = 170-172oC

Phổ ESI-MS: m/z 286,8 [M+H]+, m/z 284,8 [M-H]- Công thức phân tử: C15H10O6 (M=286)

Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT chất XS5 chất tham khảo [42] trình bày bảng

Bảng 2: Dữ liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR XS5 chất tham khảo Vị trí

C DEPT

δCXS5

ppm

δCLa,b

ppm

δH XS5(ppm)

(Mult, J=Hz)

δH La,c

(ppm) (Mult, J=Hz) C 146,8 146,8

3 C 135,6 136,6 C 175,9 176,6 C 160,8 162,3

6 CH 98,2 99,2 6,19 (d; J=2,0) 6,28 (d; J=2,0) C 163,8 164,9

8 CH 93,4 94,4 6,43 (d; J=2,0) 6,52 (d; J=2,0) C 156,1 157,7

10 C 103,0 104,1 1’ C 121,6 123,3

2’ CH 129,4 125,9 8,04 (dd; J=8,5; 2,0) 8,04 (dd; J=11,5; 2,8) 3’ CH 115,4 116,3 6,92 (dd; J=9,0; 2,0) 6,95 (dd; J=9,8; 2,7) 4’ C 159,1 160,1

5’ CH 115,4 116,3 6,92 (dd; J=9,0; 2,0) 6,95 (dd; J=9,8; 2,7) 6’ CH 129,4 125,9 8,04 (dd; J=8,5; 2,0) 8,04 (dd; J=11,5; 2,8)

a )đo DMSO, b )

125 MHz, c )500 MHz, L) chất tham khảo Kaempferol

Hợp chất XS5 thu dạng bột vơ định hình màu vàng Phổ ESI-MS hợp chất XS5 cho pic ion phân tử m/z 284,8 [M-H]- m/z 286,8 [M+H]+ tương ứng với khối lượng phân tử M=286 Công thức phân tử phù hợp với cơng thức phân tử C15H10O6

Phổ 1H-NMR, ta thấy có mặt cặp proton nằm vị trí meta vịng thơm δH 6,19 (1H, d, J=2,0 Hz) 6,43 (1H, d, J=2,0 Hz) tương

ứng với H-6 H-8 Phổ

H-NMR cho thấy có mặt tín hiệu doublet δH 8,04 (2H, d, J=2,8, 11,5 Hz, H-2’ H-6’) 6,92 (2H, d, J=2,8,

flavon 1’, 4’ Có tất 15 tín hiệu C quan sát phổ 13C-NMR Chúng phổ DEPT HMQC 14 nguyên tử carbon sp2 tín hiệu carbonyl δC 175,9 Độ bất bão hòa chiếm 8/11 liên kết đôi

độ bất bão hòa lại phù hợp với cấu trúc flavonol So sánh liệu NMR của XS5 với Kaempferol [42] cho thấy cấu trúc hai hợp chất giống nhau, đó, hợp chất XS5 xác định Kaempferol

3.3 Bàn luận

Đề tài phân lập hai hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat phương pháp ngâm chiết với dung mơi EtOH, Apigenin Kaempferol Sau đó, em đem xác định cấu trúc thông qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối phổ cộng hưởng từ hạt nhân, so với liệu phổ công bố chất liên quan Đây hai chất lần phần lập từ Xăng sê (Sanchezia nobilis Hook.f)

3.3.1 Apigenin

Apigenin flavonoid có độc tính thấp nhiều tác dụng sinh học có lợi Trong tự nhiên, apigenin thường tìm thấy dạng glycosyl hóa, với cấu trúc ba vịng liên kết với loại đường thơng qua nhóm hydroxyl (O-glycosid) trực tiếp với carbon (C-glycosid) [33] Các glycosid apigenin phổ biến apiin, apigenin-7-O-glucosid, apigenin-8-C-glucosid (vitexin), apigenin-6-C-glucosid (isovitexin), apigenin-7-O-neohesperidosid (rhoifolin), apigenin-6-C-glucosid 8-C-arabinosid (schafosid) [29, 45, 48]

Apigenin phân bố rộng giới thực vật, tìm thấy nhiều loại rau, thảo mộc trái [12] Ví dụ như: rau mùi tây, rau bina, hạt cần tây, trái cần tây xanh, oregano khơ,… thực phẩm có hàm lượng apigenin cao [12, 34] Trà hoa cúc, giàu apigenin, sử dụng loại thuốc dân gian để làm giảm chứng khó tiêu viêm dày Chúng sử dụng nước súc miệng, sản phẩm chăm sóc da thuốc hít để giảm nhiễm trùng [36]

Scutellaria barbata D Don (Lamiaceae), Castanea sativa Mill (Fagaceae), Portulaca oleracea L., Marrubium continosum ssp (Libanoticum), Combretum erythrophyllum (Combretaceae), Aquilegia oxysepala keo ong,

trong phần lớn thảo dược truyền thống thuốc thay [33]

Apigenin chứng minh có hoạt động kháng khuẩn, kháng vi-rút, chống nấm chống kí sinh trùng [33] Gần đây, apigenin cịn phát có độc tính nội thấp [48, 52], có tác dụng khác phát triển tế bào ung thư, sống sót, chết số loại tế bào khác [29, 36] Các chức sinh học báo cáo apigenin bao gồm chống oxy hóa, chống đột biến, chống ung thư, chống viêm, chống tăng sinh chống tiến triển [36]

Các đặc tính chống đái tháo đường apigenin khả ức chế hoạt động α-glucosidase, tăng tiết insulin [21], tương tác trung hòa loại oxy phản ứng (ROS) tế bào [26], góp phần vào phịng ngừa biến chứng tiểu đường [38] Apigenin cho thấy khả cung cấp oxit nitric (NO) vừa phải cho tế bào nội mơ, hạn chế nguy tổn thương tế bào nội mô rối loạn chức tăng đường huyết [38]

Apigenin chứa số hoạt tính sinh học tự nhiên để cải thiện khả ghi nhớ, liệu pháp miễn dịch chủ động thụ động chống amyloid-β tau, sử dụng peptid tổng hợp kháng thể đơn dòng (mAb),… Tất liệu pháp báo cáo ứng cử viên đầy triển vọng để điều trị thêm cho bệnh nhân mắc Alzheimer [13, 20]

Mất ngủ trầm cảm bệnh liên quan đến hệ thần kinh trung ương (CNS) Hiệu hoạt tính sinh học phụ thuộc vào xâm nhập chúng qua hàng rào máu não (BBB) Một số nghiên cứu chứng minh flavonoid dễ dàng xâm nhập qua BBB [27], đó, apigenin có tác dụng trực tiếp, tích cực bệnh trầm cảm ngủ [11]

3.3.2 Kaempferol

hạt chia, hẹ, là, moringa, tỏi Nghiên cứu tác dụng dược lí, kaempferol chứng minh có tính kháng khuẩn, chống viêm, chống oxy hóa, chống ung thư, chống đái tháo đường, bảo vệ tim mạch, bảo vệ thần kinh [31]

Kaempferol mở cho phát triển loại thuốc chống màng sinh học mới, làm giảm nguy kháng thuốc vi khuẩn Khả hình thành màng sinh học bề mặt làm cho Staphylococcus aureus trở thành yếu tố gây bệnh bệnh viện, nhiễm trùng thiết bị y tế cấy ghép Vì vậy, Di Ming cộng nghiên cứu chất ức chế màng sinh học khác với loại kháng sinh sử dụng để ngăn ngừa nhiễm trùng S aureus biofilms Sử dụng kính hiển vi nhuộm màu (CV) pha lê huỳnh quang cho thấy 64 μg/ml kaempferol ức chế hình thành màng sinh học S aureus 80% Trong đó, nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) kết đường cong tăng trưởng (AUC) kaempferol khơng có hoạt tính kháng khuẩn chống lại chủng vi khuẩn thử nghiệm Kaempferol ức chế giai đoạn gắn kết hình thành màng, xác định xét nghiệm gắn với fibrinogen Hơn nữa, xét nghiệm truyền lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET) phản ứng chép chuỗi polymerase ngược thời gian thực định lượng (qRT-PCR) cho thấy kaempferol làm giảm hoạt động S aureus sortaseA (SrtA) biểu gen liên quan đến độ bám dính [14]

Nghiên cứu tác dụng chống viêm Kaempferol Helicobacter

pylori gây ra, thấy kaempferol làm giảm biểu cytokin

tiền viêm (TNF-α, IL-1β IL-8) sản xuất IL-8 tế bào tuyến khơng điển hình (AGS) Ngồi ra, kaempferol ngăn chặn chuyển vị gen liên quan đến cytotoxin A (CagA) cytotoxin không bào A (VacA)

H pylori sang tế bào AGS Vì vậy, kaempferol cho thấy tác dụng chống

viêm cách ngăn chặn dịch chuyển protein CagA VacA dẫn đến điều hòa cytokin tiền viêm [24]

độ da, kaempferol không chất tẩy mạnh superoxid anion, gốc hydroxyl peroxynitrit [28], cịn ức chế enzym pro-oxy hóa xanthin oxyase [32] Thậm chí, kaempferol kích hoạt enzym chống oxy hóa superoxid effutase, catalase heme oxyase-1 [46] ngăn chặn tạo gốc hydroxyl cách chelat hóa đồng sắt [25] Ngồi ra, chứa nhóm hydroxyl C3, C4, C5; nhóm ceton C4 liên kết đơi C2-C3 [32], ta thấy tiềm chống oxy hóa kaempferol

Ngồi ra, thực phẩm giàu kaempferol có liên quan đến việc giảm nguy phát triển số loại ung thư: da, gan ruột kết Các chế hoạt động bao gồm apoptosis, ngăn chặn chu kỳ tế bào pha G2/M, điều hịa giảm biểu biểu mơ-trung mơ (EMT) đường dẫn tín hiệu phosphoinositid 3-kinase / protein kinase B [31] Ở nghiên cứu khác, kaempferol thúc đẩy trình tự thực chết tế bào, tăng chuyển đổi LC3-I thành LC3-LC3-ILC3-I điều chỉnh p62 ung thư dày (GC) Hơn nữa, phát chúng tơi kaempferol kích hoạt tín hiệu IRE1-JNK-CHOP từ cytosol đến nhân ức chế G9a kích hoạt chết tế bào tự phát tế bào GC [51]

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận

Sau q trình nghiên cứu thực nghiệm, đề tài khóa luận thu số kết sau:

 Đã chiết xuất, phân lập: Sử dụng phương pháp ngâm chiết với dung môi EtOH 80% phương pháp sắc ký cột để chiết xuất phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Xăng sê

 Đã xác định cấu trúc hợp chất phân lập được: Thông qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối, phổ cộng hưởng hạt nhân so sánh với liệu công bố hợp chất liên quan, hợp chất xác định Apigenin (XS3) Kaempferol (XS5) Đây lần hợp chất phân lập từ Xăng sê

 Kiến nghị

 Định lượng hợp chất phân lập từ phân đoạn ethyl acetat Xăng sê để xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu

 Tiếp tục triển khai nghiên cứu, phân lập hợp chất khác để xác định thêm thành phần loài Sanchezia nobilis Hook.f

TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt

1 Nguyễn Tiên Bân V P Serov (2005), Danh lục loài thực vật

Việt Nam, Vol III, Nhà xuất Nông nghiệp, 272-273

2 Phạm Thị Hà (2019), "Nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n-hexan Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f)", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Đại học, Khoa Y Dược,

ĐHQGHN

3 Nguyễn Thị Hiền (2019), "Nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết nước Khơi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f)", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Đại học, Khoa Y Dược,

ĐHQGHN

4 Phạm Hoàng Hộ (2003), Cây cỏ Việt Nam, Vol III, Nhà xuất Trẻ, 39

5 Nguyễn Trung Hịa (2012), Đơng y tồn tập, Nhà xuất Thuận Hóa, 1234-1235

6 Vũ Đức Lợi, Nguyễn Tiến Vững Lê Thị Thu Hường (2016), Tài

nguyên thuốc, Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội, 71-74

7 Bùi Thị Xuân, Vũ Đức Lợi, Vũ Thị Mây cộng (2018), "Một số hợp chất phân lập từ Khơi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f.)",

Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, 34(1), tr 42-47

8 Bùi Thị Xuân, Vũ Đức Lợi, Trần Minh Ngọc cộng (2018), "Nghiên cứu tác dụng giảm đau phân đoạn dịch chiết từ Khơi Đốm (Sanchezia nobilis Hook f.)", Tạp chí Khoa học

ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, 34(2), tr 26-30

Tiếng Anh

10 Ahmed E Abd-Ellah, Khaled M Mohamed, Enaam Y Backheet cộng (2006), "Macro-and micromorphology of Sanchezia nobilis Hook cultivated in Egypt: Leaf, stem and flower", Bulletin of

Pharmaceutical Sciences Assiut, 29(2), tr 300-327

11 Salehi B., Venditti A., Sharifi-Rad M cộng (2019), "The therapeutic potential of apigenin", International journal of molecular

sciences, 20(6), tr 1305

12 S Bhagwat, D B Haytowitz J M Holden (2011), "USDA Database for the Flavonoid Content of Selected Foods", U.S Department of

Argiculture, tr 1–156

13 Millington C., Sonego S., Karunaweera N cộng (2014), "Chronic neuroinflammation in Alzheimer’s disease: new perspectives on animal models and promising candidate drugs", BioMed research

international

14 Ming D, Wang D, Cao F cộng (2017), "Kaempferol inhibits the primary attachment phase of biofilm formation in Staphylococcus aureus", Frontiers in microbiology, 8(1), tr 2263

15 Loi Vu Duc, Tung Bui Thanh, Ha Vu Hoang cộng (2016), "Phytochemical and anti-inflammatory effect from the leaf of

Sanchezia speciosa Leonard growing in Vietnam", Journal of Chemical Pharmaceutical Research, 8(7), tr 309-315

16 Loi Vu Duc, Xuan Bui Thi Ngoc Tran Minh (2019), "Chemical Constituents and Anti-Ulcer Activity of Ethylacetate Extract of the Leaves of Sanchezia nobilis Hook F", Pharmacognosy Journal, 11(6), tr 1172-1180

17 Ahmed E Abd Ellah, Khaled M Mohamed, Enaam Y Backheet cộng (2013), "Matsutake alcohol glycosides from Sanchezia

nobilis", Chemistry of natural compounds, 48(6), tr 930-933

glycosides from Sanchezia nobilis", Chemistry of natural compounds, 50(5), tr 823-826

19 G E Trease and W C Evans (2009), Pharmacognosy 16th Edition, Baillere and Tindall Press, 35

20 Nabavi S F., Khan H., D'onofrio G cộng (2018), "Apigenin as neuroprotective agent: Of mice and men", Pharmacological

research, 128, tr 359-365

21 Pamunuwa G., Karunaratne D.N V Y Waisundara (2016), "Antidiabetic Properties, bioactive constituents, and other therapeutic effects of scoparia dulcis", Evidence-Based Complementary and

Alternative Medicine

22 The Angiosperm Phylogeny Group (2016), "An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG IV", Botanical Journal of the Linnean

Society

23 William F Hunt, Bill Lord, Benjamin Loh cộng (2014),

Plant Selection for Bioretention Systems and Stormwater Treatment Practices, SpringerBriefs in Water Science and Technology, 19

24 Yeon M J, Lee M H, Kim D H cộng (2019), "Anti-inflammatory effects of Kaempferol on Helicobacter pylori-induced inflammation", Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 83(1), tr 166-173

25 Ren J., Meng S., Lekka C E cộng (2008), "Complexation of flavonoids with iron: structure and optical signatures", The Journal of

Physical Chemistry B, 112(6), tr 1845-1850

26 Shay J., Elbaz H A., Lee I cộng (2015), "Molecular mechanisms and therapeutic effects of (−)-epicatechin and other polyphenols in cancer, inflammation, diabetes, and neurodegeneration",

27 Végh K., Riethmüller E., Hosszú L cộng (2018), "Three newly identified lipophilic flavonoids in Tanacetum parthenium supercritical fluid extract penetrating the Blood-Brain Barrier", Journal

of pharmaceutical and biomedical analysis, 149, tr 488-493

28 Wang L., Tu Y C., Lian T W cộng (2006), "Distinctive antioxidant and antiinflammatory effects of flavonols", Journal of

Agricultural and Food Chemistry, 54(26), tr 9798-9804

29 E C Lefort J Blay (2013), "Apigenin and its impact on gastrointestinal cancers", Molecular Nutrition & Food Research, 57(1), tr 126-144

30 Emery C Leonard Lyman B Smith (1964), "Sanchezia and related American Acanthaceae", Rhodora, 66(768), tr 313-343

31 Imran M., Salehi B., Sharifi-Rad J cộng (2019), "Kaempferol: A key emphasis to its anticancer potential", Molecules, 24(12), tr 2277

32 Özyürek M., Bektaşoğlu B., Gỹỗlỹ K v cỏc cng s (2009), "Measurement of xanthine oxidase inhibition activity of phenolics and flavonoids with a modified cupric reducing antioxidant capacity (CUPRAC) method", Analytica chimica acta, 636(1), tr 42-50

33 Wang M., Firrman J., Liu L cộng (2019), "A review on flavonoid apigenin: Dietary intake, ADME, antimicrobial effects, and interactions with human gut microbiota", BioMed research

international

34 D L McKay J B Blumberg (2006), "A review of the bioactivity and potential health benefits of chamomile tea (Matricaria recutita L.)",

Phytotherapy Research, 20(7), tr 519-530

36 D Patel, S Shukla S Gupta (2007), "Apigenin and cancer chemoprevention: Progress, potential and promise (Review)",

International Journal of Oncology, 30(1), tr 233-245

37 Mohammadjavad Paydar, Yi Li Wong, Bushra Abdulkarim Moharam cộng (2013), "In vitro anti-oxidant and anti-cancer activity of methanolic extract from Sanchezia speciosa leaves", Pak J Biol Sci, 16(20), tr 1212-5

38 Wang Q Q., Cheng N., Yi W B cộng (2014), "Synthesis, nitric oxide release, and α-glucosidase inhibition of nitric oxide donating apigenin and chrysin derivatives", Bioorganic & medicinal

chemistry, 22(5), tr 1515-1521

39 Verma A R., Vijayakumar M., Mathela C S cộng (2009), "In vitro and in vivo antioxidant properties of different fractions of Moringa oleifera leaves", Food and Chemical Toxicology, 47(9), tr 2196-2201

40 MA Rafshanjani, Shumaia Parvin, Md Abdul Kader cộng (2014), "In vitro antibacterial, antifungal and insecticidal activities of ethanolic extract and its fractionates of Sanchezia speciosa Hook f",

Int Res J Pharm, 5(9), tr 717-720

41 Md Abu Shuaib Rafshanjani, Shumaia Parvin, Md Abdul Kader cộng (2015), "Preliminary phytochemical screening and cytotoxic potentials from leaves of Sanchezia speciosa Hook F", International

Journal of Advances in Scientific Research, 1(3), tr 145-150

42 Aisyah L S., Yun Y F., Herlina T cộng (2017), "Flavonoid compounds from the leaves of Kalanchoe prolifera and their cytotoxic activity against P-388 murine leukimia cells", Natural Product

Sciences, 23(2), tr 139-145

43 Omondi Seline Omondi J C (2015), "Phytochemical analysis of fifty (50) selected plants found in the University Botanic Garden, Maseno, Kenya for their chemotaxonomic values", Journal of

44 Nusrat Shaheen, Muhammad Uzair, Bashir CH Ahmad cộng (2017), "In vitro cytotoxicity of Sanchezia speciosa extracts on human epithelial cervical cancer (HeLa) cell line", Acta Poloniae

Pharmaceutica - Drug Research, 74(5), tr 1389-1394

45 M J Simirgiotis, G Schmeda-Hirschmann, J Borquez cộng (2013), "The Passifora tripartita (banana passion) fruit: a source of bioactive flavonoid C-glycosides isolated by HSCCC and characterized by HPLC-DAD-ESI/MS/MS", Molecules, 18(2), tr 1672–1692

46 Hong J T., Yen J H., Wang L cộng (2009), "Regulation of heme oxygenase-1 expression and MAPK pathways in response to kaempferol and rhamnocitrin in PC12 cells", Toxicology and applied

pharmacology, 237(1), tr 59-68

47 Armen Takhtajan (1997), Diversity and classification of flowering

plants, Columbia University Press

48 D Tang, K Chen, L Huang cộng (2017), "Pharmacokinetic properties and drug interactions of apigenin, a natural flavone", Expert

Opinion on Drug Metabolism & Toxicology, 13(3), tr 323–330

49 Erin A Tripp Daniel M Koenemann (2015), "Nomenclatural Synopsis of Sanchezia (Acanthaceae), Fifty Years Since Last Treated",

Novon: A Journal for Botanical Nomenclature, 24(2), tr 213-221

50 Bui Thanh Tung, Vu Duc Loi, Nguyen Thanh Hai cộng (2016), "In vitro antioxidant and anti-inflammatory activities of isolated compounds of ethanol extract from Sanchezia speciosa Leonard’s leaves", Journal of basic clinical physiology pharmacology, 28(1), tr 79-84

PHỤ LỤC

1 PHIẾU KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC

2 PHỔ MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSBC CỦA HỢP CHẤT XS3 (APIGENIN)

6

.5

7

.0

7

.5

8

.0

8

.5

9

.0

9

.5

1

0

.0

1

0

.5

1

1

.0

1

1

.5

1

2

.0

1

2

.5

1

3

.0

6.477 6.481 6.768 6.916 6.920 6.929 6.933 7.911 7.915 7.925 7.928 10.326 10.804 12.949

1.04 1.02 2.07 2.09 1.03 1.03 1.00

X

S

3

-D

M

S

O

-1

6

.2

6

.3

6

.4

6

.5

6

.6

6

.7

6

.8

6

.9

7

.0

7

.1

7

.2

7

.3

7

.4

7

.5

7

.6

7

.7

7

.8

7

.9

8

.0

6.189 6.193 6.477 6.481 6.768 6.916 6.920 6.929 6.933 7.911 7.915 7.925 7.928

1.03 1.04 1.02 2.07 2.09

X

S

3

-D

M

S

O

-1

9

5

1

0

0

1

0

5

1

1

0

1

1

5

1

2

0

1

2

5

1

3

0

1

3

5

1

4

0

1

4

5

1

5

0

1

5

5

1

6

0

1

6

5

1

7

0

1

7

5

1

8

0

1

8

5

93.91 98.79 102.80 103.66 115.91 121.14 128.42 157.27 161.11 161.41 163.71 164.08 181.69

X

S

3

-D

M

S

O

-C

1

3

C

P

& D E P T X S 3 -D M S O -C 1 3 C P D D E P T 9 0 D E P T 1 3 5 C 1 3 C P D C H & C H 3 C H

2 21

ppm

35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135

ppm

95

100

105

110

115

120

125

130

6

.2

6

.3

6

.4

6

.5

6

.6

6

.7

6

.8

6

.9

7

.0

7

.1

7

.2

7

.3

7

.4

7

.5

7

.6

7

.7

7

.8

7

.9

8

.0

8

.1

8

.2

6.186 6.190 6.432 6.436 6.915 6.919 6.929 6.933 8.030 8.034 8.043 8.047

1.00 1.01 2.11 2.06

X

S

5

-D

M

S

O

-1

9

5

1

0

0

1

0

5

1

1

0

1

1

5

1

2

0

1

2

5

1

3

0

1

3

5

1

4

0

1

4

5

1

5

0

1

5

5

1

6

0

1

6

5

1

7

0

1

7

5

98.16 103.00 115.39 121.62 129.44 135.60 146.79 156.14 159.14 160.67 163.84 175.86

X

S

5

-D

M

S

O

-C

1

3

C

P

& D E P T X S 5 -D M S O -C 1 3 C P D D E P T 9 0 D E P T 1 3 5 C 1 3 C P D C H & C H 3 C H

2 21