Bước đầu khảo sát thành phần hóa học của cây bổ béo bốn nhị gomphandra tetrandra (wall ) sleumer , họ thụ đào (icacinaceae)​

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN MẠNH KHOA BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY BỔ BÉO BỐN NHỊ Gomphandra tetrandra (Wall.) Sleumer., HỌ THỤ ĐÀO (Icacinaceae) KHĨA LUẬN TỚT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN MẠNH KHOA BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY BỔ BÉO BỐN NHỊ Gomphandra tetrandra (Wall.) Sleumer., HỌ THỤ ĐÀO (Icacinaceae) KHĨA LUẬN TỚT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHĨA: QH.2015.Y NGƯỜI HƯỚNG DẪN: PGS.TS ĐỠ THỊ HÀ TS VŨ ĐỨC LỢI HÀ NỘI - 2020 LỜI CÁM ƠN Khóa luận kết q trình học tập, rèn luyện em Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trình nghiên cứu, thực hành Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu Trong q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận này, em nhận nhiều giúp đỡ quý báu từ Thầy Cô Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội nhà khoa học Viện Dược liệu gia đình bạn bè Trước hết, em xin bày tỏ lòng biết sâu sắc tới PGS.TS Đỗ Thị Hà TS Vũ Đức Lợi - người Thầy hết lòng tận tình, bảo em q trình làm khóa luận Em xin gửi lời cám ơn chân thành đến ThS Nguyễn Thị Thu, ThS Vũ Thị Diệp cán nghiên cứu Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu giúp đỡ hướng dẫn em q trình thực hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Ban Chủ nhiệm Khoa Y Dược, Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền Thầy Cô Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện cho em thực khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cám ơn tới ơng Đinh Gia Thuyết, phịng Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn huyện Minh Hóa, tỉnh Quảng Bình cấp dược liệu tài trợ phần kinh phí từ đề tài Nghị định thư Việt - Hàn "Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư điều hòa miễn dịch số thuốc Việt Nam" để em thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Cuối cùng, em xin gửi lời cám ơn tới gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ em trình học tập làm đề tài tốt nghiệp Trong trình làm khóa luận khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận góp ý Thầy Cơ để khóa luận em hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 07 tháng 06 năm 2020 Sinh viên Nguyễn Mạnh Khoa MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT, CÁC KÍ HIỆU DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.1 Đặc điểm phân bố thực vật chi Gomphandra 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố số loài thuộc chi Gomphandra ở Việt Nam 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng sinh học 1.1.5 Công dụng số loài thuộc chi Gomphandra 1.2.1 Vị trí phân loại Bở béo bốn nhị 1.2.2 Đặc điểm thực vật vị trí phân bố 1.2.3 Thành phần hóa học 11 1.2.4 Tác dụng sinh học 12 1.2.5 Công dụng 12 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.2.1 Hóa chất 13 2.2.2 Thiết bị 14 2.3.1 Phương pháp định tính nhóm chất thường gặp phản ứng hóa học 14 2.3.2 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 19 2.3.3 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 20 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.3.1 Hợp chất GT-1A2 24 3.3.2 Hợp chất GT-8C1 26 3.4.1 Về định tính 27 3.4.2 Về chiết xuất 27 3.4.3 Về phân lập xác định cấu trúc hợp chất 28 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT, CÁC KÍ HIỆU Tên viết tắt Tên viết đầy đủ Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy H-NMR 5-HMF 13 C-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) 5-Hydroxymethyl-2-furfural Cacbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13) AARS Aminoacyl-tRNA synthetase ABTS 2,20-Azino-bis-(3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulfonic acid) AMP Adenosine monophosphate ATP Adenosine triphosphat BmAsnRS Brugia malayi asparaginyl-tRNA synthetase BuOH Butanol CD3OD Deuterated methanol COSY Correlation Spectroscopy DCM Dicloromethane DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DLA Daltons lymphoma ascites DPPH 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl EAC Ehrlich’s Ascites Carcinoma Electronspray Ionization Mass Spectrum ESI-MS (Phổ khối ion hóa phun mù điện tử) EtOH Ethanol EtOAc Ethyl acetate Heteronuclear Multiple Bond Correlation HMBC HPLC (Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết) High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) Heteronuclear Single Quantum Correlation HSQC (Phổ tương tác dị hạt nhân lượng tử đơn) IC50 50% Inhibitory Concentration (Nồng độ ức chế 50%) IL Interleukin m/z Khối lượng/ điện tích MCP-1 Monocyte Chemoattractant Protein-1 MDA Malondialdehyde MeOH Methanol mRNA Messenger RNA (ARN thông tin) TLC Thin Layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng) TNF-α Tumor Necrosis Factor-α (Yếu tố hoại tử khối u alpha) tRNA Transfer RNA (ARN vận chuyển) UTI Urinary Tract Infection (Nhiễm trùng đường tiết niệu) v/v Thể tích/ thể tích v/v/v Thể tích/ thể tích/ thể tích DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Đặc điểm thực vật chi Gomphandra Hình 1.2 Cấu trúc hóa học campothecin (1) Hình 1.3 Cấu trúc hóa học quercetin (2) luteolin (3) Hình 1.4 Đặc điểm thực vật mẫu nghiên cứu 10 Hình 1.5 Cấu trúc hóa học apigenin-7-O-β-ᴅ-apiofuranosyl-(1->6)-β-ᴅglucopyranosid (4) apigenin-7-O-β-ᴅ-glucopyranosid (5) 11 Hình 1.6 Cấu trúc hóa học gonocaryosid A 11 Hình 2.1 Rễ Bổ béo bốn nhị 13 Hình 3.1 Quy trình chiết xuất cao tổng cao phân đoạn từ rễ Bổ béo bốn nhị 23 Hình 3.2 Sắc ký đồ cao tổng cao phân đoạn từ rễ Bổ béo bốn nhị 23 Hình 3.3 Sơ đồ quy trình phân lập hợp chất từ rễ Bổ béo bốn nhị 24 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất GT-1A2 25 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất GT-8C1 26 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết định tính sơ nhóm chất có rễ dược liệu 21 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất GT-1A2 25 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất GT-8C1 27 MỞ ĐẦU Việt Nam có hệ sinh thái phong phú đa dạng, có tiềm to lớn tài nguyên thuốc với 4000 loài thuốc, 50 lồi tảo biển, 75 lồi khống vật gần 410 động vật làm thuốc [2] Vì vậy, từ xa xưa, ông cha ta sử dụng thuốc cổ truyền từ loại để chữa trị số bệnh thường gặp nâng cao sức khỏe Những thuốc sử dụng rộng rãi cho thấy tính hiệu tốt, nhiên đa số dựa kinh nghiệm dân gian mà chưa có sở khoa học vững Trong thập kỷ gần đây, người dần có xu hướng sử dụng sản phẩm có nguồn gốc thảo dược để phịng trị bệnh Nền y học cở truyền ngày quan tâm phát triển Với tiến khoa học kỹ thuật, ngày nhiều loài dược liệu nghiên cứu sâu thành phần hóa học, tác dụng sinh học, … Những kết nghiên cứu đó sẽ nguồn cung cấp hợp chất tiềm để thử hoạt tính sinh học, phục vụ cho nhiều lĩnh vực khoa học, đặc biệt y học Bổ béo bốn nhị (Gomphandra tetrandra (Wall.) Sleumer.) số loài sử dụng phổ biến dân gian với công dụng chống mệt mỏi, giải khát, tăng cường sức khỏe chữa viêm tủy xương, viêm dày cấp tính [5, 6] Các tác dụng sinh học bao gồm chống oxy hóa, dọn dẹp gốc tự ức chế enzym lipoxygenase chứng minh thử nghiệm in vitro [39] Tuy nhiên, giới ở Việt Nam, nghiên cứu lồi cịn khiêm tốn Do vậy, để góp phần cung cấp sở khoa học thành phần hóa học cho nghiên cứu loài tương lai, khóa luận triển khai với đề tài: “Bước đầu khảo sát thành phần hóa học Bổ béo bốn nhị Gomphandra tetrandra (Wall.) Sleumer., họ Thụ đào (Icacinaceae)” với mục tiêu: Định tính nhóm chất thường gặp phản ứng hóa học rễ Bổ béo bốn nhị Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ rễ Bổ béo bốn nhị CHƯƠNG 1: TỞNG QUAN Tởng quan về chi Gomphandra 1.1.1 Đặc điểm phân bố và thực vật của chi Gomphandra Chi Gomphandra có khoảng 33 loài ở vùng nhiệt đới cận nhiệt đới châu Á, từ vùng Malesia đến New Guinea, quần đảo Solomon Santa Cruz, đông bắc Úc vùng Melanesia Hai loài xuất ở Ceylon [18] Một tài liệu khác cho chi Gomphandra có 60 loài phân bố ở Ấn Độ, Trung Quốc Solomon [46] Ở Việt Nam, chi Gomphandra có loài, đó có hoặc loài có rễ củ dùng để làm thuốc [1] Chi Gomphandra dạng bụi đến thân gỗ cỡ trung bình Cụm hoa mọc ở nách lá, mọc đối hoặc mọc cuối Hoa đơn tính Đài hoa hình chén, liền toàn đến nhọn hoặc chia thùy Hoa có đến cánh, riêng rẽ hoặc liên kết với Hoa đực có -5 nhị hoa, nhị dẹt mở rộng ở phía trên, nhẵn hoặc thường có lông tơ mọc ở trung tâm, mặt lưng / hoặc vị trí liên kết; bầu nhụy nhỏ chưa phát triển, hình trụ, hình nón hoặc hình trứng Hoa cái: nhị lép có đặc điểm giống nhị hoa đực, có lông tơ; bầu nhụy hình trụ, đơi có phần nhơ lên ở gốc không có phần phụ bên, nhụy hoa không có cuống, giống hình đầu ghim, thường chia thùy hoặc đỉnh, phát triển Quả không phẳng, chứa hạt, hình dạng khác nhau, lớp thịt mỏng, bên lớp vỏ thường có 8-13 đường dọc, rãnh nổi bật ở bên [46] PHỤ LỤC PHỤ LỤC KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA CÁC HỢP CHẤT Phụ lục 2.1 Dữ liệu phổ hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.2 Dữ liệu phổ hợp chất GT-8C1 PHỤ LỤC KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC 2.1 DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT GT-1A2 Cấu trúc hóa học hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.1.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.1.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.1.3 Phổ DEPT hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.1.4 Phổ ESI-MS hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.1.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.1.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.1.3 Phổ DEPT hợp chất GT-1A2 Phụ lục 2.1.4 Phổ ESI-MS hợp chất GT-1A2 PHỤ LỤC 2.2 DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT GT-8C1 Cấu trúc hóa học hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.3 Phổ HMBC hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.4 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.5 Phổ COSY (500/500 MHz, CD3OD) hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.3 Phổ HMBC hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.4 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất GT-8C1 Phụ lục 2.2.5 Phổ COSY (500/500 MHz, CD3OD) hợp chất GT-8C1 ... 11 6,6 11 9,2 - 15 3,9 15 4,2 1ʹ 4,7 5 (1H, d, 7, 5) 10 3,6 10 4,3 7 5,0 7 5,9 7 8,0 7 9,0 7 1,4 7 2,4 7 8,0 7 8,5 6 2,6 6 3,5 2ʹ 3ʹ 6ʹ δC 3,4 4 (2H, m) 4ʹ 5ʹ * 3,4 0 (2H, m) 3,9 0 (1H, dd, 1,0 ; 1 2, 0) 3,7 1 (1H, m)... KHOA BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY BỔ BÉO BỐN NHỊ Gomphandra tetrandra (Wall. ) Sleumer. , HỌ THỤ ĐÀO (Icacinaceae) KHĨA LUẬN TỚT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC. .. 3. 5) Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất GT-8C1 26 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất GT-8C1 C/H δHa,c (độ bội, J = Hz) δCa,b - 15 2,4 15 3,4 2, 6,9 8 (2H, d, 8, 5) 11 9,4 12 1,4 3, 6,7 1 (2H, d, 8,5 )