Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate lá cây núc nác oroxylum indicum l , họ chùm ớt (bignoniaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC Chuyên ngành Hóa Hữu Tên đề tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO ETHYL ACETATE LÁ CÂY NÚC NÁC OROXYLUM INDICUM L Họ chùm ớt (Bignoniaceae) Hướng dẫn khoa học: Th.S Lê Thị Thu Hương Sinh viên thực hiện: Huỳnh Tấn May Niên khóa: 2009 – 2013 Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2013 LỜI CẢM ƠN Hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin chân thành cảm ơn:  Cảm ơn Cô Lê Thị Thu Hương theo sát, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, cung cấp kiến thức, động viên em suốt thời gian thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Được Cơ hướng dẫn may mắn lớn em năm học cuối trường đại học Sư phạm Em xin chân thành cảm ơn Cô!  Cảm ơn Thầy Dương Thúc Huy, Thầy Đặng Vũ Lương, Cô Nguyễn Thị Ánh Tuyết, Thầy Trương Quốc Phú, Thầy Nguyễn Thụy Vũ giúp đỡ, cho em ý kiến quý báu để em hồn thành đề tài  Cảm ơn tất q Thầy Cơ khoa Hóa tận tình dạy dỗ em suốt bốn năm qua để em có kiến thức hồn thành khóa luận tốt nghiệp  Cảm ơn chị Nguyễn Vũ Mai Trang, chị Nguyễn Thị Minh Trang, chị Lê Thị Tú Trinh, anh Nguyễn Trần Bảo Huy, chị Nguyễn Thị Kim Liên nhiệt tình giúp đỡ, truyền thụ kinh nghiệm quý báu cho em từ ngày đầu thực đề tài  Cảm ơn bạn Vũ Nguyễn Thùy Linh, Phạm Thị Hoài, Tạ Thị Hồng Huệ, Lương Thị Thủy, Liêu Diệp Hân, Trần Thanh Vương, Trần Thị Kim Liên giúp đỡ, chia sẻ khó khăn, vui buồn suốt q trình thực đề tài  Cảm ơn tất bạn phòng tổng hợp hữu cơ, phịng phân tích hóa lý, phịng hóa lý giúp đỡ tơi q trình thực đề tài  Cảm ơn cha mẹ gia đình ni nấng, dạy dỗ, chỗ dựa tinh thần vững vàng giúp tơi vượt qua khó khăn tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành đề tài khóa luận tốt nghiệp  Xin gửi lời chúc tốt đẹp đến tất người!  CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT TRONG BÀI KHÓA LUẬN A : acetic acid C : chloroform EA : ethyl acetate PE : petroleum ether M : methanol s (singlet) : mũi đơn d (doublet) : mũi đôi dd (doublet- doublet) : mũi đôi - đôi m (multiplet) : mũi đa br s (broad singlet) : mũi đơn rộng J (coupling constant) : số ghép NMR (Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) : phổ cộng hưởng từ hạt nhân DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization Transfer) HSQC (Heteronuclear Single Quantum Coherence) : tương quan H-C qua nối HMBC (Heteronuclear Multiplet Bond Coherence) : tương quan H-C qua 2, nối MỤC LỤC CHƯƠNG 1:TỔNG QUAN .3 1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT [2] 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CHƯƠNG 2:THỰC NGHIỆM 19 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT THIẾT BỊ 19 2.2 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG PHÂN ĐOẠN EA.3 CỦA CAO ETHYL ACETATE 19 2.3 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG PHÂN ĐOẠN EA.12 CỦA CAO ETHYL ACETATE 20 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢVÀTHẢO LUẬN 25 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 30 4.1 KẾT LUẬN 30 4.2 ĐỀ XUẤT 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 31 LỜI MỞ ĐẦU Từ xưa người biết sử dụng loại thảo mộc việc trị bệnh, mà chúng trở nên gần gũi với người, ngày với phát triển khoa học kĩ thuật, việc tìm hiểu thành phần hóa học, tính chất tác dụng loại thảo mộc lại trở nên đơn giản Một phương pháp nghiên cứu thành phần hóa học loại thảo mộc tách chiết hợp chất thiên nhiên Cây núc nác loại thảo mộc nhiều nhà khoa học quan tâm thành phần hóa học có chứa số dẫn xuất flavonoid chất đắng kết tinh oroxylin Do mà có tác dụng trị số bệnh tai biến mạch máu não, lão hóa, thối hóa gan, xơ vữa động mạch Chính lí trên, mà chúng tơi chọn tên đề tài: “Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate núc nác - Oroxylum indicum L.” nhằm mục đích tách chiết hợp chất tìm hiểu rõ thành phần hóa học núc nác Chương 1:TỔNG QUAN 1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT [2]  Cây núc nác có tên khoa học Oroxylum indicum L., thuộc họ Chùm ớt (Bignoniaceae)  Cây nhỡ, có kích cỡ từ nhỏ đến trung bình từ 5-13m Thân hình trụ nhẵn, phân nhánh, vỏ dày, màu xám tro có nhiều sẹo to rụng để lại, mặt có màu vàng nhạt Lá kép lông chim, mọc đối, thường tập trung thân, phiến xẻ 2-3 lần lông chim Lá chét hình bầu dục, nguyên, dài 6-14cm, rộng 3,5-8 cm, gốc tròn lệch, đầu nhọn Mặt sẫm bóng, mặt nhẵn có lơng, cuống kép hình trụ, có chấm bì khổng Cụm hoa có cuống mập thẳng, mọc ngọn, thành chùm dài 40-80 cm, mang nhiều sẹo phía dưới, bắc nhỏ Hoa to, màu nâu đỏ sẫm, đài hình chng, đài dày ngắn, dài 2,5 cm, ống tràng hình phễu, dài cm, phình họng, cánh hoa chia thành môi, cong gập xuống, mép nhăn nheo Nhị ngắn hơn, nhị có lơng mịn gốc, bầu thuôn dài Hoa nở đêm, thụ phấn nhờ dơi gió Mùa hoa: tháng 6-8 Hình 1.1: Lá núc nác Hình 1.2: Quả núc nác Quả cong, thõng đu đưa từ nhánh liềm, nang, dẹt cong, dài 50-80 cm, dày mm, chín nứt làm hai mảnh Mùa quả: tháng 9-10 Các chín lâu vào mùa khô rụng hết Hạt núc nác hình bầu dục, mỏng, dẹt ba phía Vỏ phát triển thành màng mỏng, màu trắng nâu nhạt với đường gân tỏa từ hạt, trông cánh bướm Chiều dài hạt cánh từ 4-7cm, rộng 2,5-4cm (nếu kể hạt khơng dài 1,5-2,5cm, rộng 1-2cm) Vỏ núc nác không mùi, vị đắng, hắc Vỏ cuộn lại thành hình ống hay hình cung, dày 0,6 - 1,3 cm, dài ngắn khơng định Mặt ngồi màu vàng nâu nhạt, nhăn nheo, có nhiều đường vân dọc, ngang Mặt nhẵn, màu ngồi xám hay vàng lục Mặt bẻ ngang có lớp bần mỏng, mơ mềm, vỏ lổn nhổn có nhiều sạn, có lớp sợi dễ tách theo chiều dọc  Phân bố: Núc nác có nguồn gốc từ tiểu lục địa Ấn Độ, chân núi Hymalaya Trên giới, núc nác phân bố rộng rãi vùng nhiệt đới Châu Á, bao gồm Srilanka, Ấn Độ, Mianma, Trung Quốc (Phúc Kiến, Quảng Tây, Vân Nam, Quý Châu, Tứ Xuyên, Hải Nam, Quảng Đông), Lào, Thái Lan, Campuchia, Philippin, đảo Selip Timor Indonesia Ở nước ta mọc hoang trồng khắp nơi, rải rác khắp tỉnh miền núi trung du Cao Bằng, Lạng Sơn, Quảng Ninh, Bắc Kạn, Thái Nguyên, Tuyên Quang, Yên Bái, Lai Châu, Điện Biên, Sơn La, Hịa Bình, Thanh Hóa, Nghệ An, Quảng Bình, Quảng Trị, Quảng Nam, Quảng Ngãi, Gia Lai, Kon Tum, Đắk Lắk, An Giang  Các tên gọi khác: + Ở Việt Nam: Núc nác, nam hoàng bá, mộc hồ điệp, mạy ca (Tày), co ca liên (Thái), p`sờ lụng (K`ho), kờ lúc (K`dong), póc ta lốp (Ba Na) + Ở Ấn Độ: Syonaka + Ở Trung Quốc: Bạch ngọc nhi, thiên trương chỉ, triểu giản 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH Lá núc nác có tác dụng giảm đau, kháng khuẩn, kháng sinh, dùng để trị phù lách, đau bao tử… Quả chát, có tác dụng làm dễ tiêu hóa, tăng cảm giác thèm ăn, trừ giun sán, bệnh tim, đau cổ họng, bệnh trĩ, viêm phế quản, bạch bì Hạt sử dụng để điều trị trường hợp ho hen không ngừng, đau dày, đau bụng, nhiễm trùng họng, viêm khí quản, tăng huyết áp, mụn nhọt vết thương Thân núc nác dùng để trị dị ứng, rắn cắn, bọ cạp chích Vỏ thân thuốc lợi tiểu, trị bao tử, tiêu chảy lỵ Rễ dùng để trị bệnh tiêu chảy lỵ, chống viêm, long đờm, chống giun, trị đau ngực đầu Vỏ rễ núc nác hăng, chát, cay, đắng, có tác dụng làm se ruột, làm mát, hạ sốt, trị kiết, bạch bì, hen suyễn, tiêu chảy, thấp khớp, viêm phế quản, sưng tấy 1.2.1 Hoạt tính chống viêm [18, 32] Chiết xuất dung dịch nước từ Oroxylum indicum có khả chống viêm Hoạt tính chống viêm nghiên cứu mơ hình thể chuột phù chân Dung dịch nước chiết xuất từ Oroxylum indicum có hoạt tính chống viêm đáng kể liều lượng 150 mg/kg 300 mg/kg trọng lượng thể Với liều lượng 300 mg/kg trọng lượng thể cho thấy hoạt động chống viêm tối đa Thông qua nghiên cứu Oroxylum indicum hữu ích điều trị bệnh viêm mạn tính chứng viêm khớp 1.2.2 Hoạt tính chống độc gan [29] Trong y học Ấn Độ, Oroxylum indicum sử dụng rộng rãi cách phòng rối loạn gan Các dịch trích khác Oroxylum indicum có hoạt tính chống độc gan Các dịch trích petroleum ether, chloroform, ethanol dung dịch nước tiêm vào chuột nhiễm bệnh với liều 300 mg/kg trọng lượng thể Thử nghiệm cho thấy chuột điều trị dịch trích ethanol có hiệu đáng kể 1.2.3 Hoạt tính tẩy giun sán Năm 2000, Downing JE [11] đánh giá hoạt tính tẩy giun sán Oroxylum indicum chống trứng giun lươn ngựa ống nghiệm so sánh với Ivermectin – thuốc tẩy giun hiệu Sử dụng Oroxylum indicum với nồng độ 2×10-5 g/mL lớn ngăn chặn trình nở trứng giun lươn Với nồng độ Oroxylum indicum 2×10-1 g/mL q trình nở đạt 0% Tại nồng độ 2×10-4 g/mL lớn khả sống trứng ấu trùng giun lươn 0% Kết nghiên cứu cho Oroxylum indicum chất tẩy giun thích hợp chống lại giun lươn ngựa 1.2.4 Hoạt tính chống ung thư Năm 1992, Tepsuwan A cộng [30] cơng bố hoạt tính gây độc gen hoạt tính phát triển tế bào niêm mạc dày chuột đực F344 phương pháp ngắn hạn thể sau uống phần nhỏ nitroso hóa Oroxylum indicum Vent Kết cho thấy nitroso hóa Oroxylum indicum có tính gây độc gen phát triển tế bào niêm mạc dày thể chuột Năm 2001, Nakahara K cộng [22] báo cáo chiết xuất methanol Oroxylum indicum ức chế mạnh mẽ đột biến TRP-P-1 thử nghiệm Ames Thành phần kháng đột biến xác định baicalein với giá trị IC 50 2,78 ± 0,15 microM Sự kháng đột biến mạnh chiết xuất với hàm lượng cao baicalein (3,95 ± 0,43%, trọng lượng khơ) Baicalein có tác dụng chất giảm đột biến ức chế N-hydroxyl TRP-P-2 Năm 2006, Narisa K cộng [23] thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào chiết xuất ethanol 95% Oroxylum indicum Các hoạt động gây độc tế bào xác định tác dụng chống tăng sinh dòng tế bào Hep-2 Kết chiết xuất ethanol biểu hoạt tính động gây độc tế bào chống lại dòng tế bào Hep-2 nồng độ 2,5 μg/ml Năm 2007, Roy MK cộng [25] baicalein có tác dụng chống khối u tế bào ung thư người chiết xuất Oroxylum indicum sử dụng điều trị ung thư bổ sung Nghiên cứu 11 thuốc dùng trị bệnh dân gian Bangladesh, kết cho thấy dịch núc nác cho hoạt tính độc tế bào mạnh với tất tế bào khối u Giá trị IC 50 19,6 mg mL-1 với CEM, 14,2 mg mL-1 với HL-60, 17,2 mg mL-1 với B-16 với HCT-8 32,5 mg mL-1 [21] 1.2.5 Hoạt tính bảo vệ dày Năm 2007, Zaveri M cộng [35] báo cáo hoạt tính bảo vệ dày chiết xuất cồn 50% từ vỏ, rễ Oroxylum indicum phân đoạn khác: [10] Dey AK, Mukherjee A, Das PC, Chatterjee A (1978), “Occurrence of Aloe emodin in the leaves of Oroxylum indicum Vent”, Indian J Chem., 16B, 1042 [11] Downing JE (2000), “Anthelmintic activity of Oroxylum indicum against equine strongyles in vitro compared to the anthelmintic activity of Ivermectin”, Journal of Biological Research, [12] Grover G S, Rao J Tirumala (1980), “Analysis of the seeds of Oroxylum indicum Vent.”, J Inst Chem., 52(5), 176-178 [13] Hari Babu T, Manjulatha K, Suresh Kumar G, Hymavathi A, Ashok K Tiwari, Muraleedhar Purohit, Madhusudana Rao J, Suresh Babu K (2010), “Gastroprotective flavonoid constituents from Oroxylum indicum Vent”, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 20(1), 117–120 [14] Hom Nath Luitel, Mina Rajbhandari, Surya K Kalauni, Suresh Awale, Kazuo Masuda, Mohan B Gewali (2010), “Chemical constituens from Oroxylum indicum (L.) Kurz of Nepalese origin”, Scientific World, 8(8), 66-68 [15] Joshi K C, Prakash A, Shah R K (1977), “Chemical exminnation of the roots of Tabebuia rosea and heartwood of Oroxylum indicum”, Planta Med., 31, 257-258 [16] Kawsar U, Sayeed A, Islam A, Abdur RA, Khatun S, Khan AMet (2003), “ Bio-logical activity of Extracts and two Flavonoids from Oroxylum indicum Vent (Bignoniaceae)”, Online journal of Biological science, 3(3), 371-375 [17] Kawsar Uddin, Abu Sayeed, Anwarul Islam, Aziz Abdur Rahman, Abbas Ali, G.R.M Astaq Mohal Khan, Md Golam Sadik (2003), “Purification, characterization and cytotoxic activity of two flavonoids from Oroxylum indicum Vent (Bignoniaceae)”, Asian Journal of Plant Sciences, 2(6), 515518 [18] Laupattarakasem P, Houghton PJ, Hoult JR, Itharat A (2003), “An evaluation of the activity related to inflammation of four plants used in Thai-land to treat arthritis”, Journal of Ethnopharmacology, 85(2-3), 207-215 [19] Maitreyi Zaveri, Amit Khandhar, Sunita Jain (2008), “Quantification of Baicalein, Chrysin, Biochanin-A and Ellagic Acid in Root Bark of Oroxylum indicum by RP-HPLC with UV Detection”, Eurasian Journal of Analytical Chemistry, 3(2), 245-257 [20] Mehta CR, Meta TP (1953), “Tetuin, a glucoside from the seeds of Oroxylum indicum Vent.”, Current Science, 22, 114 [21] Nair A G R and Joshi B S (1979), “Oroxindin – A new flavones glucuronide from Oroxylum indicum Vent.”, Pro Indian Acad Sci, 88A, 323-327 [22] Nakahara K, Onishi KM, Ono H, Yoshida M, Trakoontivakorn G (2001), “An-timutagenic activity against trp-P-1 of the edible Thai Plant: Oroxylum indicum Vent.” Biosci Biotechnol Biochem, 65(10), 2358-60 [23] Narisa K, Jenny MW, Heather MAC (2006), “Cytotoxic Effect of Four Thai Edible Plants on Mammalian Cell Proliferation”, Thai Pharmaceutical and Health Science Journal, 1(3), 189-195 [24] Ren-yi Yan, Yang-yang Cao, Cheng-yu Chen, Hui-qing Dai, Sheng-xian Yu, Jie-lin Wei, Hua Li, Bin Yang (2011), “Antioxidant flavonoids from the seed of Oroxylum indicum”, Fitoterapia, 82, 841-848 [25] Roy MK, Nakahara K, Na TV, Trakoontivakorn G, Takenaka M, Isobe Set (2007), “Baicalein-A flavonoid extracted from a methanolic extract of Oroxylum indicum inhibits proliferation of a cancer cell line in vitro via induction of apoptosis”, Pharmazie, 62(2), 149-53 [26] Saowanee Maungjunburee, Wilawan Mahabusarakam (2010), “Flavonoids from the stem bark of Oroxylum indicum (L.) Benth.ex Kurz”, Proceedings of the 7th IMT-GT UNINET and the 3rd International PSU-UNS Conferences on Bioscience, 136-140 [27] Subramanian SS and Nair AGR (1972), “Flavonoids of the leaves of Oroxylum indicum and Pajanelia longifolia”, Phytochemistry, 11, 439-440 [28] Subramanian SS and Nair AGR (1972), “Flavonoids of the stem bark of Oroxylum indicum”, Current Science, 41(2), 62-63 [29] Tenpe CR, Aman Upaganlawar, Sushil Burle, Yeole YG (2009), “In vitro antioxidant and preliminary hepatoprotective activity of Oroxylum indicum Vent leaf extracts”, Pharmacologyonline, 1, 35-43 [30] Tepsuwan A, Furihata C, Rojanapo W, Matsuhima T (1992), “Genotoxicity and cell proliferative acitivity of a nitrosated Oroxylum indicum Vent fraction in the pyloric mucosa of rat stomach”, Mutat Res., 281(1), 55-61 [31] Thatoi HN, Panda SK, Rath SK, Dutta SK (2008), “Antimicrobial activity and ethnomedicinal uses of some medicinal plants from similipal biosphere reserve Orissa”, Asian Journal of Plant Sciences, 7(3), 260-267 [32] Upaganlawar A, Tenpe CR, Yeole YG (2009), “Anti-inflammatory activity of aqueous extract of Oroxylum indicum Vent Leaves extract preliminary study”, Pharmacologyonline, 1, 22-26 [33] Vasanth S, Natarajan M, Sundaresan R, Rao R B, Kundu AB (1991), “Ellagic acid from Oroxylum indicum Vent.”, Indian Drugs, 28(11), 507 [34] Yuan Yuan, Wenli Hou, Minhai Tang, Houding Luo, Li-Juan Chen, Y.Hugh Guan and Ian A Sutherland (2008), “Separation of Flavonoids from the leaves of Oroxylum indicum by HSCCC”, Chromatographia, 68, 885-892 [35] Zaveri M, Jain S (2007), “Gastroprotective effects of root bark of Oroxylum indicum Vent.”, Journal of Natural Remedies, 7(2), 269-277 NGUỒN INTERNET [36] http://suckhoedoisong.vn Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR hợp chất OI-7 Phụ lục 2: Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất OI-7 55'' 6' HO 77 O 22 A A H3 CO OH B B 10 44 1' 2' 4' OH 3'' OH O Phụ lục 3: Phổ 1H-NMR hợp chất OI-8 55'' 6' HO 77 22 A A H3 CO OH Phụ lục 4: Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất OI-8 B B O 10 44 O 1' 2' 4' OH 3'' OH 55'' 6' HO 77 22 A A H3 CO OH B B O 10 44 1' 2' 4' OH 3'' OH O Phụ lục 5: Phổ 13C-NMR hợp chất OI-8 55'' 6' HO 77 O 22 A A H3CO OH B B 10 44 1' 2' 4' OH 3'' OH O Phụ lục 6: Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất OI-8 Phụ lục 7: Phổ DEPT hợp chất OI-8 Phụ lục 8: Phổ DEPT giãn rộng hợp chất OI-8 55'' 6' HO 77 O 22 A A H3 CO OH B B 10 44 1' 2' O Phụ lục 9: Phổ HSQC hợp chất OI-8 4' OH 3'' OH 55'' 6' HO 77 O 22 A A H3 CO OH B B 10 44 1' 2' O Phụ lục 10: Phổ HSQC giãn rộng hợp chất OI-8 4' OH 3'' OH 55'' 6' HO 77 O 22 A A H3 CO OH B B 10 44 O phụ lục 11: Phổ HMBC hợp chất OI-8 1' 2' 4' OH 3'' OH 55'' 6' HO 77 22 A A H3 CO OH B B O 10 44 1' 2' 4' OH 3'' OH O Phụ lục 12: Phổ HMBC giãn rộng hợp chất OI-8 ... chất cô l? ??p từ núc nác thống kê sơ thành nhóm sau: 1.3.1 Flavonoid: [ 1, 7, 9, 1 5, 1 7, 2 0, 2 1, 2 6, 2 7, 2 8, 34] Tetuin (1 ), chrysin (2 ), oroxylin A (3 ), baicalein (4 ), scutellarein (5 ), baicalein-7-O-glucuronide... tơi chọn tên đề tài: ? ?Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate núc nác - Oroxylum indicum L. ” nhằm mục đích tách chiết hợp chất tìm hiểu rõ thành phần hóa học núc nác Chương 1:TỔNG QUAN... cịn l? ??i để góp phần l? ?m rõ thành phần hóa học núc nác Oroxylum indicum L TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] L? ? Thị Anh Đào, L? ? Thị Thu Hương, Trần Thị Linh Hà (2007 ), “Nghiên cứu số thành