khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate của loài địa y parmotrema planatilobatum (hale) hale

 Các bạn sinh viên lớp K35C, khoa Hóa, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh đã ở bên cạnh và giúp đỡ trong quá trình học tâp và thực hiện đề tài.. Với những công dụng đó, địa y

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

CAO ETHYL ACETATE C ỦA LOÀI ĐỊA Y

PARMOTREMA PLANATILOBATUM (HALE) HALE

GVHD: ThS Dương Thúc Huy

MSSV: K35106020

Tp Hồ Chí Minh, tháng 04 năm 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

CAO ETHYL ACETATE C ỦA LOÀI ĐỊA Y

PARMOTREMA PLANATILOBATUM (HALE) HALE

GVHD: ThS Dương Thúc Huy

MSSV: K35106020

Tp Hồ Chí Minh, tháng 04 năm 2013

LỜI CẢM ƠN

V ới tấm lòng trân trọng và biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến:

 Thầy Dương Thúc Huy đã truyền đạt cho em nhiều kiến thức chuyên môn, tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm nghiên cứu quý báu và tạo mọi điều kiện thuận lợi trong suốt quá trình thực hiện và hoàn thành đề tài

 Tất cả quý Thầy Cô khoa Hóa, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh đã tận tình truyền đạt những kiến thức quý báu trong suốt thời gian em theo học và thực hiện đề tài

 Các anh chị nghiên cứu sinh, học viên cao học và các bạn sinh viên bộ môn Hóa Hữu cơ, khoa Hóa, trường Đại học Khoa học Tự nhiên đã động viên, giúp

đỡ trong suốt quá trình thực hiện đề tài

 Các bạn sinh viên lớp K35C, khoa Hóa, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh đã ở bên cạnh và giúp đỡ trong quá trình học tâp và thực hiện đề tài

 Gia đình đã động viên và tạo điều kiện tốt về vật chất lẫn tinh thần để em hoàn thành khóa học của mình

Xin chân thành cảm ơn!

y Cetraria islandica bán rộng rãi trong các tiệm bào chế thuốc ở Thụy Điển và dùng để

điều trị bệnh đái tháo đường, bệnh phổi và bệnh viêm mũi Peltigera canina được sử

dụng ở Ấn Độ như một dược phẩm làm giảm các cơn đau gan[1]

Ngoài công dụng chữa bệnh, địa y còn được sử dụng làm thực phẩm, mỹ phẩm, xà phòng, nước hoa Các loại hợp chất khác nhau và các dẫn suất của depside được chiết từ

các chi Evernia, Parmelia và Ramalina, một số có mùi hương hấp dẫn được dùng trong

xà phòng và nước hoa Đặc biệt, địa y được xem như là các chất chỉ thị sinh học cho ô nhiễm môi trường

Với những công dụng đó, địa y được nhiều nhà hóa dược nghiên cứu, nhiều hợp

chất tự nhiên được cô lập và một số được xác định có hoạt tính kháng khuẩn, kháng ung thư, kháng virut, giảm đau, hạ sốt[3,4] , …

Địa y là thực vật bậc thấp, là kết quả của sự cộng sinh của tảo và nấm Nhờ dạng

sống này, địa y có thể sống được ở nhiều nơi trên đất, đá, thân cây, trong những điều

kiện khác nghiệt và khô hạn của vùng nhiệt đới Ở Việt Nam, người ta dễ dàng tìm thấy

sự có mặt của địa y ở những nơi quen thuộc với sự phân bố phong phú và đa dạng Vậy

mà từ trước đến nay ở Việt Nam chưa có tác giả nào nghiên cứu về hóa học cũng như ứng dụng của địa y Để góp phần vào sự phát triển của khoa học Việt Nam, chúng tôi đã

lựa chọn loài địa y Parmotrema planatilobatum (Hale) Hale họ Parmeliaceae thu hái ở

thành phố Đà Lạt, tỉnh Lâm Đồng, Việt Nam

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

s : Mũi đơn (Singlet)

d : Mũi đôi (Doublet)

t : Mũi ba (Triplet)

m : Mũi đa (Multiplet)

brs : Mũi đơn rộng

m/z : Mass to charge ratio Transfer

NMR : Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance)

HSQC : Heteronuclear Single Quantum Correlation

HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Coherence

1H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance

13

C-NMR : Carbon Nuclear Magnetic Resonance

DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

J : Hằng số tương tác spin-spin

ppm : Part per million

UV : Tia cực tím (ultra violet)

HR-ESI-MS : Hight Resolution- Electro Spray Ionization- Mass Spectrometry

DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU

Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế các loại cao của địa y 16

3 Bảng biểu

Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất H-PP7 và Gyrophoric acid 22 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất M-1 và D-Mannitol 22 Bảng 3.4 Hằng số ghép giữa các proton trong hợp chất M-1 và D-Mannitol 23 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất H-TA1 và D-Arabinitol 25 Bảng 3.6 Hằng số ghép giữa các proton trong hợp chất H-TA1 25

và D-Arabinitol

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN 0

LỜI MỞ ĐẦU 1

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2

DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU 3

MỤC LỤC 4

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 6

1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT 6

1.2 MÔ TẢ THỰC VẬT PARMOTREMA PLANATILOBATUM (HALE) HALE 7 1.2.1 Đặc điểm thực vật 7

1.2.2 Phân loại các hợp chất thường có trong địa y 7

1.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VỀ CHI PARMOTREMA 7

1.3.1 Các hợp chất theo qui trình sinh tổng hợp polyketid 8

1.3.1.1 Các acid béo 8

1.3.1.2 Các acid béo vòng 8

1.3.1.3 Các hợp chất phenol đơn vòng 8

1.3.1.4 Depside 8

1.3.1.5 Depsidone 8

1.3.1.6 Xanthone 9

1.3.2 Các hợp chất theo qui trình sinh tổng hợp mevalonic acid 9

1.3.3 Các hợp chất tạo nên bằng quá trình sinh tổng hợp của tảo 9

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM 14

2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 14

2.1.1 Hóa chất 14

2.1.2 Thiết bị 14

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: DƯƠNG THÚC HUY

2.2 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU 14

2.3 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO 15

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17

3.1 Khảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất H-A7 17

3.2 Khảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất H-PP7 19

3.3 Khảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất M-1 22

3.4 Khảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất H-TA1 24

CHƯƠNG 4 KẾT LUẬN 26

TÀI LIỆU THAM KHẢO 28

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT

Địa y là loại thực vật bậc thấp đặc biệt, là kết quả cộng sinh giữa nấm (mucobyont) và một bộ phận quang hợp (photobiont hoặc phycobyont), thường là tảo

và đôi khi là vi khuẩn cyanobacterium[1]

Thông thường địa y được chia làm 3 dạng:

- Dạng khảm (crustose lichen): Bề mặt của tản địa y khảm cực kì mỏng và bám

chặt vào bề mặt chủ bằng những sợi nấm có lõi

- Dạng phiến (foliose lichen): Tản địa y dạng phiến có hình dạng như tờ giấy

mỏng Bề mặt trên và dưới khác biệt nhau rõ rệt Tản bám lỏng lẻo trên bề mặt

chủ bằng các rễ giả

- Dạng bụi (fruiticose lichen): Địa y dạng bụi có hình thức giống như bụi cây

nhỏ, đứng trên bề mặt chủ và xõa xuống

Hình 1.1 Các dạng địa y (A :dạng khảm, B: dạng phiến, C: dạng bụi)

Ðịa y hiện diện trên thân cây, đất và đá Trên đá chúng là những sinh vật tiên phong, là những tộc đoàn đầu tiên chiếm cứ môi trường mới vì chúng có thể phá hủy

đá dần dần do các acid mà chúng tiết ra, và sẽ tạo ra những hạt đất nhỏ Những chất

hữu cơ từ địa y thối rữa làm tăng thành phần của đất Các acid được tiết ra thay đổi theo loài và thường được dùng để định danh địa y

Ðể hiểu được bản chất của địa y và giải thích nguồn gốc của chúng, các nhà

thực vật học đã thử tổng hợp địa y từ tế bào tảo và nấm Mặc dù cả hai thành phần được nuôi cấy riêng rẽ nhưng việc tổ hợp lại thành địa y thật là khó khăn Trong những năm gần đây, sự cộng sinh được tạo ra, chúng có hình dạng phần nào giống với địa y nhưng chưa phải là cấu trúc thật sự của địa y

1.2 MÔ TẢ THỰC VẬT PARMOTREMA PLANATILOBATUM (HALE)

HALE

1.2.1 Đặc điểm thực vật

Tên khoa học: Parmotrema

planatilobatum (Hale) Hale

Họ: Parmeliacee

Mô tả thực vật: Tản đính lỏng lẻo,

màu xanh xám Thùy rộng từ 0.5-0.8 cm, tròn, mép nối liền hoặc khía tai bèo, có tiêm mao mỏng, dài 1-2 mm Bề mặt trên có đốm Bào tử màu trắng với những mảnh của chất màu tím K+ (skyrin) Mặt dưới màu đen với vùng biên nâu trơn, rễ giả dài, mảnh Ở giữa tản có xẻ dạng chân vịt, có lông, hình dạng như san hô, bề mặt phẳng nhiều hoặc

ít, có lông phổ biến ở gần biên của thùy, cũng ở rìa một phần Có thể quả dạng đĩa còn non, không bào tử

1.2.2 Phân loại các hợp chất thường có trong địa y

Có nhiều hệ thống phân loại các hợp chất hóa học từ địa y, dưới đây là hệ thống phân loại hay dùng nhất Đó là hệ thống phân loại do Shibata và cộng sự đề ra[1] Các

hợp chất hóa học trong địa y được chia làm bốn nhóm chính:

- Ngu ồn gốc acid shikimic: terphenylquinone và dẫn xuất của acid tetronic

- Ngu ồn gốc acid mevalonic: triterpenoid

- Ngu ồn gốc acetate-malonate: các acid dây dài và các acid phenol carboxylic

- Ngu ồn gốc amino acid: các dẫn xuất của diketopiperazine

1.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VỀ CHI PARMOTREMA

Chi Parmotrema (Họ Parmeliaceae) là loài địa y phiến rất phổ biến ở vùng nhiệt đới, trên thế giới có khoảng 220 loài thuộc chi này và một số trong chúng đã được nghiên cứu về mặt hóa dược, tập trung nhiều nhất trong những năm gần đây cho

kết quả rất khả quan

Hình 1.2 Tản địa y Parmotrema

planatilobatum (Hale) Hale

1.3.1 Các h ợp chất theo qui trình sinh tổng hợp polyketid

1.3.1.1 Các acid béo

Năm 2001, Sassaki GL[8] đã cô lập được acid béo trong một số loài địa y thuộc

chi Parmotrema như 9-oxodecanoic acid (1), 9-methyltetradecanoic acid (2), 6- methyltetradecanoic acid (3), 3-hydroxydecanoic acid (4), nonanedioic acid (5) và decanedioic acid (6)

Cũng trong năm này, Irma S Rojas[11] công bố sự có mặt của orcinol (11),

methyl-β-orsellinate (12) và methyl haematommate (13) trong Parmotrema tinctorum

(Nyl.) Hale

Năm 2000, từ địa y Parmotrema stuppeum (Nyl.) Hale, Javaprakasha G K.[18]

đã cô lập orsellinic acid (14) và methyl orsellinate (15)

1.3.1.4 Depside

Năm 1999, Laily B Dinđã công bố trong các loài địa y thuộc chi Parmotrema

có chứa một hàm lượng lớn các hợp chất bậc hai bao gồm các depside là một loại ester

tạo thành bằng sự liên kết của hai hay nhiều phân tử phenolcarboxylic acid như

atranorin (16) và chloroatranorin (17)

Năm 2002, Alcir Teixeira Gomes và cộng sự[15]đã cô lập lecanoric acid (18) từ

Parmotrema tinctorum (Nyl.) Hale

1.3.1.6 Xanthone

Theo N K Honda[15] và cộng sự đã cô lập được 2 xanthone là lichenxanthone

(30) và secalonic acid (31) trong Parmotrema dilatatum, Parmotrema

lichnxanthonium và Parmotrema sphaerospora

1.3.2 Các h ợp chất theo qui trình sinh tổng hợp mevalonic acid

Năm 1993, Bazyli Czeczuga đã nhận danh được 17 carotenoid có mặt trong

Parmotrema tinctorum dựa vào kỹ thuật HPLC và so sánh với phổ IR là α-carotene

(33), β-carotene (34), β-eryptoxanthin (35), lutein (36), 3’-epilutein (38), zeaxanthin (39), luteinepoxide (40), antheraxanthin (41), violaxanthin (42), mutatoxanthin (43), flavoxanthin (44), echinenone (45), canthaxanthin (46), astaxanthin (47), neoxanthin (48), capsochrome (49), β-citraurin (50)

1.3.3 Các h ợp chất tạo nên bằng quá trình sinh tổng hợp của tảo

Năm 2005, Elaine R.Carbonero[14], nhà hóa học Brazil, đã định danh được hai glucan với tên là nigeran [(1 → 3), (1 → 4) - α - glucan] (51)và lichenan [(1 → 3), (1

→ 4) - β - glucan] (52) trong Parmotrema austrosinense, Parmotrema delicatulum,

Parmotrema mantiqueirense, Parmotrema schindleri và Parmotrema tinctorum

Công thức hóa học của các hợp chất:

Methyl-β-orsellinate (12)

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM

2.1 HÓA CH ẤT VÀ THIẾT BỊ

2.1.1 Hóa ch ất

Dung môi dung trong sắc ký cột và sắc ký điều chế, sắc ký lớp mỏng gồm ether

dầu hỏa, ethyl acetate, acetic acid, chloroform, acetone, methanol đều là hóa chất của hãng Chemsol-Việt Nam và được làm khan bằng Na2SO4 nếu sử dụng lại và nước cất

Thuốc thử: để hiện hình các vết hữu cơ bằng sắc ký lớp mỏng, phun xịt bằng dung dịch acid sulfuric 30%, vanillin/H2SO4, đèn UV

Sắc ký cột thường dùng silica gel sắc ký cột 70- 30, cỡ hạt: 0.04-0.06 mm, Ấn

Độ Sắc ký bản mỏng (TCL) loại 25D-Aflufolein 20x20 cm, Kiesel gel 60F254, Merck

2.1.2 Thi ết bị

Các thiết bị dùng để ly trích (lọ thủy tinh, becher, bình lóng)

Máy cô quay chân không Buchi-111 kèm bếp cách thủy Buchi 461 Water Bath

Cột sắc ký: cột cổ điển

Sắc ký lớp mỏng 25DC-Alufolien 20 x 20 cm Kiesel gel F254 Merck

Các thiết bị ghi phổ: Phổ 1H-NMR, 13C-NMR: Ghi trên máy cộng hưởng từ hạt nhân Bruker ở tần số 500 MHz cho phổ 1

H-NMR và 125 MHz cho phổ 13

C-NMR

Tất cả phổ được ghi tại: Phòng Phân Tích Trung Tâm Trường đại học Khoa

Học Tự Nhiên thành phố Hồ Chí Minh, số 227, Nguyễn Văn Cừ, Quận 5, thành phố

Hồ Chí Minh

2.2 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU

Mẫu địa y Parmotrema planatilobatum (Hale) Hale, họ Parmeliaceae, thu hái trên thân cây thông Pinus dalatensis ở thành phố Đà Lạt, tỉnh Lâm Đồng, Việt Nam

Tên khoa học của địa y được xác định bởi thạc sĩ Võ Thị Phi Giao, khoa Sinh học, Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Mẫu cây

được lưu trong quyển lưu giữ tiêu bản thực vật, ký hiệu mẫu số US-B023 tại Bộ môn

Hóa hữu cơ, khoa Hóa học, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia thành phố

Hồ Chí Minh

2.3 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO

Từ 350g mẫu địa y khô và sạch (sơ đồ 2.1) được tiến hành bằng phương pháp

ngâm dầm trong dung môi methanol ở nhiệt độ phòng Lấy dịch chiết cô quay thu hồi

dung môi dưới áp suất thấp Trong khi dịch methanol bay hơi, kết tủa (P, 2g) được lọc

để tách ra khỏi dịch Dịch còn lại được tiếp tục làm khô thu được cao methanol thô (63g) Sử dụng phương pháp trích ly pha rắn silica gel trên cao methanol thô, giải ly lần lượt bằng các đơn dung môi với độ phân cực tăng dần: ether dầu hỏa (60-90oC), ethyl acetate, acetone và methanol thu được các loại cao như: cao E, cao EA, cao Ac

và cao M Dịch của những loại cao này được làm bay hơi dung môi bằng máy cô quay với nhiệt độ xấp xỉ 40oC

Từ tủa của cao ethyl acetate EA3, lọc rửa nhiều lần với methanol thu được hợp chất H-TA1

Từ tủa của cao methanol, lọc rửa nhiều lần với methanol thu được hợp chất

M-1

 Sắc ký cột trên cao EA1 (sơ đồ 2.2)

Cao EA1 (22g) được tiến hành sắc ký cột với hệ dung môi ether dầu hỏa : ethyl acetate với độ phân cực tăng dần từ 9:1 đến ethyl acetate 100% thu được ba phân đoạn

từ EA1.1 đến EA1.3 và phần còn lại

Phân đoạn EA1.2 (8g) được sắc ký cột với hệ dung môi ether dầu hỏa : ethyl

acetate (7:3 – 5:5) thu được bốn phân đoạn (EA1.2.1 – EA1.2.4)

Phân đoạn EA1.2.3 (3.5g) được sắc ký cột liên tục với hệ dung môi chloroform

: ethyl acetate : acetic acid (9:1:0.05) thu được hợp chất H-A7 (10mg)

Phân đoạn EA1.2.4 (2g) được sắc ký cột liên tục với hệ dung môi ether dầu hỏa

: ethyl acetate : acetic acid (6:4:0.05) thu được hợp chất H-PP7 (25mg)

Tất cả cấu trúc của các hợp chất được xác định bằng phổ MS, NMR và so sánh với các dữ liệu đã được công bố

Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế các loại cao của địa y.

Sơ đồ 2.2 Quy trình sắc ký cột trên cao EA1

CHƯƠNG 3 K ẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Kh ảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất H-A7

- Chất bột màu vàng

- Dữ liệu phổ 1

H-NMR (500MHz, DMSO-d6) và 13C-NMR (125 MHz,

DMSO-d6 ) được trình bày trong bảng 3.1 (Phụ lục 1, 1a, 2)

- Phổ HSQC được trình bày ở phụ lục 3a, 3b

- Phổ HMBC được trình bày ở phụ lục 4a, 4b, 4c

- Phổ khối: HR-ESI-MS (chế độ dương): m/z 543.1258 [M+Na]+ tương ứng với công thức phân tử được xác định là (C28H24O10+Na) (543.1267)

với sai số là 0.9o

/oo ( Phụ lục 5)

 Biện luận cấu trúc H-A7

Hình 3.1 Công thức hợp chất H-A7

Phổ 1H-NMR cho thấy một tín hiệu của nhóm hydroxyl kiềm nối [δH 10.94

(1H, s)], bốn proton nhân thơm [δH 8.65 (1H, s), 8.08 (1H, s), 7.47 (1H, s), 6.59 (1H,

s)], hai nhóm methoxy [δH 3.95 (3H, s), 3.85 (3H, s)], bốn nhóm methyl gắn trên nhân thơm [δH2.55 (3H, s), 2.50 (3H, s), 2.43 (3H, s), 2.19 (3H, s)]

Phổ 13

C-NMR cho thấy hợp chất H-A7 có 28 carbon trong đó: một nhóm ceton

δC 186.1 (-C=O), ba nhóm carbonyl [δC 169.0, 168.0, 165.1] (-COO), hai nhóm methoxy [δC 52.1, 51.3] (-OCH3), bốn nhóm methyl gắn trên nhân thơm [δC 21.2, 15.3, 15.0, 8.2] (-CH3) và các carbon của nhân thơm Ngoài ra, phổ 13

C-NMR có tín

hiệu của một nhóm ceton δC 186.1(-C=O) và 4 carbon gắn O ở C-2 (δC 158.0 ), C-4a (δC 158.6 ), C-5a (δC 155.6), C-6 (δC 154.3) chứng tỏ hợp chất H-A7 phải chứa khung xanthone

Phổ HSQC cho thấy tương quan một nối giữa proton nhân thơm δH 8.65, 8.08, 7.47, 6.59 lần lượt với carbon δC 144.8, 121.0, 106.7, 111.7; proton methoxy δH 3.99,

3.85 lần lượt với carbon δC 51.3, 52.1; các proton nhóm methyl δH 2.54, 2.50, 2.43, 2.19 lần lượt tương quan một nối với các carbon δC 15.3, 21.2, 15.0, 8.2

Trên nhân thơm A, nhóm methyl 5-CH3 có δH 2.19, δC 8.1 chứng tỏ nhóm này

phải ở lân cận hai nguyên tử (-O) [7] Phổ HMBC cho thấy 5-CH3 tương quan với C-5a (δC 155.6), C-5 (δC 109.6) Từ đó khẳng định vị trí của nhóm này trong cấu trúc

Nhóm methyl 7-CH3 có δH 2.43, δC 15.0 chứng tỏ nhóm methyl này phải ở lân

cận một nguyên tử (-O) Phổ HMBC cho thấy 7-CH3 có tương quan với C-5 (δC

109.6), C-7 (δC 135.0), C-8 (δC 121.8) Từ đó khẳng định vị trí của nhóm methyl này trên nhân thơm A Phổ HSQC tái khẳng định cấu trúc của nhân thơm A

Phổ 1H-NMR cho thấy tín hiệu của bốn proton nhân thơm, trong đó có hai proton chuyển dịch về vùng từ trường thấp Proton nhân thơm 8-H có độ chuyển dịch hóa học δH 8.08 nên phải ở lân cận một nhóm rút electron (-C=O) Hơn nữa, phổ HMBC cho thấy proton này có tương quan với C-6 (δC 154.3), C-9 (δC 186.1), C-13 (δC 15.0) Từ đó khẳng định vị trí của proton này trên khung xanthone

Hai nhóm methoxy có độ chuyển dịch hóa học δH 3.85 (δC 52.1), δH 3.99 (δC

51.3) chứng tỏ đây là hai nhóm methoxy ester

Trên nhân thơm B, phổ HSQC cho thấy proton δH 8.65 ở vùng từ trường thấp tương quan một nối với carbon vùng từ trường thấp δC 144.8 chứng tỏ proton này phải

chịu ảnh hưởng của 2 nhóm rút electron (-C=O) Phổ HMBC cho thấy proton này có

tương quan với C-9 (δC 186.1), C-9a (δC 135.0), C-4a (δC 158.6), C-2 (δC 158.0).Từ

đó khẳng định vị trí của nó trên nhân thơm B Tính toán độ dịch chuyển hóa học dựa trên tài liệu tham khảo[7]

khẳng định vị trí C-2 phải liên kết O, C-4 phải liên kết nhóm carboxyl, vị trí C-3 chưa xác định

Trên nhân thơm C, nhóm methyl 2’-CH3 có δH 2.55, δC 15.3 chứng tỏ nhóm này phải ở lân cận một nguyên tử (-O) [7]

Phổ HMBC cho thấy 2’-CH3 tương quan với C-1’ (δC 142.0), C-3’ (δC 154.1), C-4’ (δC 106.7), C-6’ (δC 111.7) Đồng thời nhóm methyl 5’-CH3 lại tương quan với C-5’ Từ đó khẳng định vị trí của hai nhóm methyl này trên nhân thơm C Ngoài ra, phổ HMBC còn cho thấy tương quan giữa proton nhân thơm 6’-H (δH 6.59) với các carbon C-2’ (δC 116.8), C-3’ (δC 154.1), C-4’ (δC

106.7), C-9’ (δC 21.2); 4’-H (δH 7.47) với các carbon C-2’ (δC 116.8), C-3’ (δC 154.1)

Phổ HSQC tái khẳng định cấu trúc của nhân thơm C

Từ những dữ liệu phổ và tài liệu tham khảo suy ra được hợp chất H-A7 là:

3-(3-(methoxycarbonyl)-2,5-dimethylphenyl) 4-methyl 9H-xanthene-3,4-dicarboxylate

2,6-dihydroxy-5,7-dimethyl-9-oxo-Hình 3.2 Tương quan HMBC trong hợp chất H-A7

Bảng 3.1 Dữ liệu phổ MNR của hợp chất H-A7

3.2 Kh ảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất H-PP7

chứng tỏ hợp chất H-PP7 là tridepside có ba nhân thơm, mỗi nhân thơm chứa hai

proton ở vị trí meta với nhau và một nhóm methyl So sánh dữ liệu phổ của hợp chất

H-PP7 với dữ liệu phổ của gyrophoric acid (Bảng 2) giúp ta kết luận H-PP7 là

gyrophoric acid

Gyrophoric acid (H-PP7)

B ảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất H-PP7 và Gyrophoric acid

3.3 Kh ảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất M-1

J 1 =11.5, J 2 =6.0, J 3=3.5 ) Mặc khác, proton H-2 còn ghép cặp với proton H-3 O-) (H-3 δH= 3.77 ppm, d, J=8) với hằng số ghép J=8 Vì vậy hai proton này tương

(>CH-erythro đối với nhau Proton H-3 chỉ hiện mũi đôi ghép cặp với proton H-2 mà không

hiện tín hiệu ghép cặp với proton khác Vì vậy hợp chất M-1 có tính đối xứng Mặc

khác, phổ 13C-NMR hiện một tín hiệu carbon nhóm methylene liên kết với O (δC= 64.2) và hai carbon nhóm methine liên kết với O (δC= 71.5, 73.1) Từ đó khẳng định

cấu trúc của hợp chất M-1 So sánh dữ liệu phổ của hợp chất M-1 với tài liệu tham

khảo[9,12]suy ra hợp chất M-1 là D-Mannitol

H HO

OH H

OH H

CH2OH

1 2 3 4 5 6

CH2OH

HO H H OH

HO H HOH2C

H OH