Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn bacillus sp đối kháng với vibrio parahaemolyticus trong nuôi tôm công nghiệp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ LÊ THẾ XUÂN NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG VI KHUẨN Bacillus sp ĐỐI KHÁNG VỚI Vibrio parahaemolyticus TRONG NUÔI TÔM CÔNG NGHIỆP LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN MÃ SỐ: 62620301 NĂM 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ LÊ THẾ XUÂN NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG VI KHUẨN Bacillus sp ĐỐI KHÁNG VỚI Vibrio parahaemolyticus TRONG NUÔI TÔM CÔNG NGHIỆP LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN MÃ SỐ: 62620301 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS VŨ NGỌC ÚT TS PHẠM ANH TUẤN NĂM 2020 i TÓM TẮT Được ghi nhận lần đầu tiên tại Trung Quốc năm 2009, bệnh Hoại tử gan tụy cấp ở tôm (AHPND) đã lan rộng nhiều quốc gia nuôi tôm thế giới, đó có Việt Nam và trở thành mối nguy hại hàng đầu đối với nuôi tôm công nghiệp tại các quốc gia này Tác nhân gây AHPND là một số chủng Vibrio parahaemolyticus mang plasmid mã hóa cho độc tố nhị thê PirA/PirB gây hoại tử gan tụy cấp Mục tiêu của nghiên cứu này là nhằm phân lập, ứng dụng các chủng vi khuẩn Bacillus sp có tính đối kháng mạnh với V parahaemolyticus đê phòng chống AHPND nuôi tôm công nghiệp Đê đạt được mục tiêu nghiên cứu kê trên, từ các ao tôm công nghiệp không mắc bệnh và nghi mắc AHPND tại ba tỉnh Bạc Liêu, Sóc Trăng và Cà Mau, 149 chủng vi khuẩn nghi là Bacillus sp và 51 chủng vi khuẩn Vibrio sp đã được phân lập từ tuyến tiêu hóa tôm, bùn và nước Bằng cách sử dụng kỹ thuật PCR phát hiện các gen toxR, tdh, trh, pirA và pirB và các quan sát mô bệnh học cảm nhiễm tôm, 12 chủng V parahaemolyticus đã được xác định, đó chủng BĐB1.4v, dương tính với cả hai gen pirA và pirB, chính là tác nhân gây AHPND Bên cạnh đó, phương pháp phân loại MLST (Multilocus Sequence Typing) đã được sử dụng đê phân loại một tập hợp gồm 26 chủng Bacillus sp Kết quả phân tích cho thấy có bốn loài Bacillus chính là B subtilis (11 chủng), B velezensis (8 chủng), B siamensis (5 chủng) và B licheniformis (2 chủng) Tiếp đó, phương pháp khuếch tán đĩa thạch đã được sử dụng đê phân lập hai chủng B subtilis BRB2.1 và B siamensis BĐK2.3 có hoạt tính đối kháng cao với V parahaemolyticus bao gồm cả chủng BĐB1.4v gây AHPND Ngoài khả tiết enzyme protease, amylase và cellulase mạnh, hai chủng này còn có thê thích ứng với các điều kiện rộng về nhiệt độ, pH và độ mặn Mật độ ức chế tối thiêu của hai chủng Bacillus này đối với chủng V parahaemolyticus BĐB1.4v gây AHPND là 10 cfu/mL Khi thử nghiệm mô hình nuôi tôm thẻ chân trắng ở quy mô 100 lít, chủng B subtilis BRB2.1 và B siamensis BĐK2.3 giúp phòng chống hiệu quả AHPND với tỷ lệ sống của tôm sau 36 giơ cảm nhiễm V parahaemolyticus BĐB1.4v lần lượt là 85,56% và 76,67% Ơ quy mô 1000 lít khoảng thơi gian theo dõi đến 35 ngày sau cảm nhiễm với tác nhân gây bệnh, chủng B subtilis BRB2.1 không những cho phép bảo vệ tôm khỏi AHPND mà còn cải thiện tỷ lệ sống và hiệu quả sử dụng thức ăn so với mẫu đối chứng không cảm nhiễm Khả đối kháng của chủng B subtilis BRB2.1 có thê liên quan đến sự có mặt của gen mã hóa subtilosin A, vốn là một loại bacteriocin phổ rộng Do tính an toàn của B subtilis đã được công nhận nên chủng B subtilis BRB2.1 có thê được ứng dụng trực tiếp đê sản xuất các chế phẩm sinh học phòng chống AHPND nuôi tôm nước lợ ii ABSTRACT Since its emergence in China in 2009, acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) has been causing massive losses in aquaculture To date, the disease has been recognized as the biggest threat to the shrimp farming industry in many countries (including Vietnam) The causative agent of AHPND has been identified as Vibrio parahaemolyticus strains that harbor a large plasmid encoding binary toxins PirA/PirB The aim of this study was to isolate and apply Bacillus isolates that are strongly antagonistic against V parahaemolyticus to prevent AHPND in cultured shrimps To this end, we have isolated 149 presumptive Bacillus sp isolates and 51 Vibrio sp isolates from shrimp digestive tract, sediment and water samples from commercial shrimp ponds in Bac Lieu, Soc Trang and Ca Mau provinces By detecting toxin genes (toxR, tdh, trh, pirA và pirB) with PCR and performing histological observation, we have identified 12 V parahaemolyticus isolates, among which, BĐB1.4v strain, positive for both pirA and pirB, was shown to be the direct cause of AHPND Furthermore, Multi-locus Sequence Typing (MLST) was used to describe the genetic diversity of a collection of 26 Bacillus isolates The results showed major clusters, corresponding to Bacillus species, namely B subtilis (11 isolates), B velezensis (8 isolates), B siamensis (5 isolates) và B licheniformis (2 isolates) Additionally, agar diffusion method was used to reveal the strong antagonistic activity of B subtilis BRB2.1 and B siamensis BĐK2.3 to V parahaemolyticus (including strain BĐB1.4v causing AHPND) These two Bacillus isolates could not only secrete high level of protease, amylase, and cellulase, but also adapt to a vast range of temperature, pH and salinity Results showed that when inoculated at 10 cfu/mL or higher, these two isolates could inhibit the growth of V parahaemolyticus BĐB1.4v When tested on Litopenaeus vannamei cultured in tanks of 100L, B subtilis BRB2.1 and B siamensis BĐK2.3 strains were proved to be effective against AHPND (shrimps’ survival rates were 85,56% and 76,67% when being cultured with the two isolates) In larger model (1000L), B subtilis BRB2.1 strain not only protected shrimps from AHPND but also improved their food conversion rate The antagonistic activity to V parahaemolyticus of this strain may be explained by the presence of the gene encoding for subtilosin A, which is a wide-spectrum bacteriocin Since B subtilis is considered as GRAS, B subtilis BRB2.1 could be used directly to produce probiotics that prevent AHPND in shrimp farming iii iv MỤC LỤC Trang LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT .ii ABSTRACT iii CAM KẾT KẾT QUẢ Error! Bookmark not defined MỤC LỤC .v DANH SÁCH BẢNG x DANH SÁCH HÌNH xi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xiii Chương 1: GIỚI THIỆU .1 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục tiêu và phạm vi nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thê 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa nghiên cứu 1.5 Tính mới của luận án: 1.6 Thơi gian thực hiện Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát trạng nuôi tôm sú tôm thẻ chân trắng (tôm nước lợ) .4 2.1.1 Tình hình nuôi tôm nước lợ thế giới 2.1.2 Tình hình nuôi tôm nước lợ ở Việt Nam 2.2 Tình hình dịch AHPND tơm ni thế giới Việt Nam .6 2.3 Tác nhân gây AHPND tôm nuôi 2.4 Chẩn đoán AHPND biện pháp phịng, trị bệnh tơm ni 2.4.1 Chẩn đoán AHPND 2.4.2 Phòng chống AHPND ở tôm nuôi 2.5 Vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus 12 2.5.1 Đặc tính chủng V parahaemolyticus 12 2.5.2 Các độc tố của V parahaemolyticus 14 2.5.3 Ảnh hưởng của một số yếu tố môi trương đến sự phát triên của V parahaemolyticus 18 2.5.3.1 Ảnh hưởng của nhiệt độ 18 2.5.3.2 Ảnh hưởng của pH 18 2.5.3.3 Ảnh hưởng của độ mặn 18 2.6 Khái quát chung Bacillus subtilis 19 2.6.1 Sơ lược về B subtilis 19 2.6.2 Ảnh hưởng của các yếu tố môi trương đến sự phát triên của B subtilis 20 2.6.3 Phân loại Bacillus theo phương pháp truyền thống .22 2.6.4 Phân loại Bacillus theo các phương pháp phân tử .22 2.6.5 Ứng dụng của B subtilis công nghiệp và nuôi trồng thủy sản 26 2.7 Bacteriocin 29 2.7.1 Khái niệm 29 2.7.2 Phân loại Bacteriocin 31 2.7.3 Ứng dụng của bacteriocin từ Bacillus thủy sản 31 v 2.7.4 Subtilosin A 33 Chương 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 3.1 Địa điểm nghiên cứu đối tượng nghiên cứu 35 3.2 Phương pháp nghiên cứu 35 3.2.1 Phương pháp lấy mẫu 36 3.2.2 Phương pháp phân lập Vibrio sp và xác định V parahaemolyticus từ ao nuôi tôm 37 3.2.3 Phương pháp phát hiện gen độc tố ở các chủng Vibrio sp phân lập được 37 3.2.3.1 pirA 39 3.2.3.2 pirB 39 3.2.3.3 toxR 39 3.2.3.4 tdh 40 3.2.3.5 trh 40 3.2.4 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố môi trương (nhiệt độ, pH, độ mặn) đến sự phát triên của V parahaemolyticus .40 3.2.5 Phương pháp phân lập các chủng vi khuẩn Bacillus ao nuôi tôm công nghiệp 41 3.2.5.1 Phương pháp lấy mẫu 41 3.2.5.2 Phương pháp phân lập Bacillus từ ao nuôi tôm 41 3.2.6 Phương pháp tuyên chọn các chủng vi khuẩn Bacillus sp 42 3.2.6.1 Phương pháp tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính đối kháng V parahaemolyticus 42 3.2.6.2 Phương pháp tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính protease cao 42 3.2.6.3 Phương pháp tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính amylase cao 42 3.2.6.4 Phương pháp tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính cellulase cao 43 3.2.7 Phương pháp tách chiết và tinh sạch DNA hệ gen của Bacillus 43 3.2.8 Phương pháp phát hiện và tách dòng gen mã hóa bacteriocin từ chủng Bacillus BRB2.1 43 3.2.8.1 Thiết kế mồi khuếch đại gen spaS và sboA từ chủng Bacillus BRB2.1 43 3.2.8.2 PCR khuếch đại gen spaS và sboA từ chủng Bacillus BRB2.1 .44 3.2.8.3 Tách dòng và giải trình tự gen sboA từ chủng Bacillus BRB 2.1 44 3.2.8.4 Xây dựng phả hệ trình tự nucleotide và trình tự axít amin của subtilosin A 44 3.2.9 Phương pháp đánh giá đa đạng di truyền của Bacillus sp phân lập được 45 3.2.9.1 Đánh giá đa dạng di truyền nhóm Bacillus dựa trình tự 16S rDNA 45 3.2.9.2 Đánh giá đa đạng di truyền của nhóm Bacillus dựa phân tích MLST 46 3.2.10 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của yếu tố môi trương đến sự phát triên của Bacillus sp 47 vi 3.2.11 Kiêm tra khả gây AHPND của các chủng V parahaemolyticus BĐB1.3v, BĐB1.4v, BNB 3.1v, BRB1.1v, CĐB6v TTCT 48 3.2.12 Nghiên cứu độc tính của chủng V parahaemolyticus BĐB1.4v tôm 49 3.2.13 Phương pháp thử nghiệm tính đối kháng của Bacillus sp với Vibrio sp ở quy mô phòng thí nghiệm 50 3.2.13.1 Lựa chọn các chủng Bacillus sp có khả ức chế vi khuẩn V parahaemolyticus và hoạt tính enzyme ngoại bào cao 50 3.2.13.2 Khảo sát khả kháng vi khuẩn V parahaemolyticus của các chủng vi khuẩn Bacillus sp hệ thống bê nuôi tôm 100 lít 51 3.2.14 Phương pháp khảo sát khả kháng vi khuẩn Vibrio của các chủng vi khuẩn Bacillus hệ thống bê nuôi tôm 1000 lít 52 3.2.14.1 Bố trí thí nghiêm: 52 3.2.14.2 Phương thức thực hiện: 52 3.2.14.3 Cho ăn và quản lý 52 3.2.14.4 Các tiêu theo dõi 53 3.2.15 Phương pháp xử lý số liệu 53 Chương 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 54 4.1 Phân lập chủng thuộc chi Vibrio ao nuôi tôm công nghiệp 54 4.2 Kết phát gen độc lực chủng Vibrio sp phân lập bằng PCR 55 4.2.1 Phát hiện gen toxR đặc hiệu cho V parahaemolyticus 55 4.2.2 Phát hiện gen độc lực tdh 58 4.2.3 Phát hiện gen độc lực trh 59 4.2.4 Phát hiện gen độc lực pirA 60 4.2.5 Phát hiện gen độc lực pirB 60 4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ, độ mặn, pH đến sự phát triển V parahaemolyticus .62 4.3.1 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự phát triên của chủng vi khuẩn V parahaemolyticus BĐB1.4v 62 4.3.2 Ảnh hưởng của pH đến sự phát triên của chủng vi khuẩn V parahaemolyticus BĐB1.4v 63 4.3.3 Ảnh hưởng của độ mặn đến sự phát triên của chủng vi khuẩn V parahaemolyticus BĐB1.4v 64 4.4 Phân lập chủng thuộc chi Bacillus ao nuôi tôm công nghiệp .65 4.5 Tuyển chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính sinh học ứng dụng nuôi tôm công nghiệp 67 4.5.1 Tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính đối kháng V parahaemolyticus 67 4.5.2 Tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính sinh protease cao 68 4.5.3 Tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính sinh amylase cao 69 4.5.4 Tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính sinh cellulase cao 70 4.6 Xác định sự có mặt gen mã hóa bacteriocin chủng BRB2.1 72 4.6.1 Phát hiện và tách dòng gen mã hóa bacteriocin từ chủng BRB2.1 .72 4.6.2 Xây dựng phả hệ và so sánh trình tự axít amin subtilosin A của chủng BRB2.1 75 vii 163 B subtilis PHỤ LỤC E: KẾT QUẢ THỐNG KÊ E1: Các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sự phát triển vi khuẩn Vibrio Bảng E1.1: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của nhiệt độ đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 24 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E1.2: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của nhiệt độ đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 24 h Nhiet 10 20 26 30 37 45 Bảng E1.3: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của nhiệt độ đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 48 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E1.4: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của nhiệt độ đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 48 h Nhiet 10 20 26 Bảng E1.5: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của pH đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 24 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E1.6: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của pH đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 24 h pH 7.5 Bảng E1.7: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của pH đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 48 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E1.8: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của pH đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 48 h pH 7.5 Bảng E1.9: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của độ mặn đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 24 h 165 Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E1.10: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của độ mặn đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 24 h NaCl 10 20 30 40 Bảng E1.11: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của độ mặn đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 48 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E1.12: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của độ mặn đến mật số vi khuẩn Vibrio sau 48 h NaCl 10 20 30 40 E2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính đối kháng với Vibrio sp Bảng E2.1: Phân tích ANOVA về khả đối kháng của Bacillus sp với Vibrio sp Source Between groups 590.667 Within groups Total (Corr.) Bảng E2.2: Kiêm định LSD về khả đối kháng của Bacillus sp với Vibrio sp Nghiem thuc BNB11.1-BDB1.4v BNB11.1-CNB6v BNB11.1-BDB1.3v BNB11.1-BNB3.1v BNB11.1-BDB1.1v BNK6.1-BDB1.3v BNK6.1-BDB1.4v BNK6.1-CNB6v BNK6.1-BNB3.1v BNK6.1-BDB1.1v BRK4.4-CNB6v BRK4.4-BDB1.3v BRK4.4-BDB1.4v BRK4.4-BDB1.1v BRK4.4-BNB3.1v BNK7.1-CNB6v BNK7.1-BDB1.3v BNK7.1-BNB3.1v BNK7.1-BDB1.4v BNK7.1-BDB1.1v BRB2.1-CNB6v BRB2.1-BDB1.3v BRB2.1-BDB1.1v BRB2.1-BNB3.1v BRB2.1-BDB1.4v 167 Nghiem thuc BĐK2.3-BDB1.3v BĐK2.3-BNB3.1v BĐK2.3-CNB6v BĐK2.3-BDB1.1v BĐK2.3-BDB1.4v E3: Các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sự phát triển vi khuẩn Bacillus Bảng E3.1: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của nhiệt độ đến mật số vi khuẩn Bacillus sau 24 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E3.2: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của nhiệt độ đến mật số vi khuẩn Bacillus sau 24 h Nghiem thuc BĐK 2.3-26oC BĐK 2.3-30oC BĐK 2.3-37oC BĐK 2.3-40oC BRR 2.1-26oC BRR 2.1-30oC BRR 2.1-37oC BRB 2.1-40oC Bảng E3.3: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của pH đến mật số vi khuẩn Bacillus sau 24 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E3.4: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của pH đến mật số vi khuẩn Bacillus sau 24 h NT pH BĐK2.3-4 BĐK2.3-5 BĐK2.3-6 NT pH BĐK2.3-7 BĐK2.3-8 BRB2.1-4 BRB2.1-5 BRB2.1-6 BRB2.1-7 BRB2.1-8 Bảng E3.5: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của độ mặn đến mật số vi khuẩn Bacillus sau 24 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E3.6: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của độ mặn đến mật số vi khuẩn Bacillus sau 24 h Nghiem thuc BRB 2.1-0‰ BRB 2.1-5‰ BRB 2.1-20‰ BRB 2.1-40‰ BĐK 2.3-0‰ BĐK 2.3-5‰ BĐK 2.320‰ BĐK 2.340‰ E4: Khảo sát ảnh hưởng chủng vi khuẩn Vibrio đến tôm thẻ theo thời gian Bảng E4.1: Phân tích ANOVA về ảnh hưởng của các chủng vi khuẩn Vibrio đến tôm thẻ ở thơi gian 36 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E4.2: Kiêm định LSD về ảnh hưởng của các chủng vi khuẩn Vibrio đến tôm thẻ ở thơi gian 36 h Vibrio BĐB 1.3v BĐB 1.4v BNB 3.1v BRB 1.1v CĐB 6v DC E5: Khảo sát khả kháng vi khuẩn Vibrio chủng vi khuẩn Bảng E5.1: Phân tích ANOVA về tỉ lệ sống của tôm ở các nghiệm thức tại thơi điêm 36 h Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E5.2: Kiêm định LSD về tỉ lệ sống của tôm ở các nghiệm thức tại thơi điêm 36h NT BĐB1.4v BRB2.1-BĐK23-BĐB1.4v BĐK23-BĐB1.4v BRB2.1-BĐB1.4v DC E6: Khả át chế Bacillus sp Vibrio Parahaemolyticus ảnh hưởng lên sự phát triển tôm thẻ Bảng E6.1: Phân tích ANOVA về tỉ lệ sống của tôm thẻ tại thơi điêm 35 ngày Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E6.2: Kiêm định LSD về tỉ lệ sống của tôm thẻ tại thơi điêm 35 ngày NT D2 D1 D3 Bảng E6.3: Phân tích ANOVA về hệ số chuyên đổi thức ăn FCR sau 35 ngày nuôi Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng E6.4: Kiêm định LSD về hệ số chuyên đổi thức ăn FCR sau 35 ngày nuôi NT D2 D3 D1 PHỤ LỤC F: MỘT SỐ HÌNH THỰC NGHIỆM 171 Kiêm tra các yếu tố môi trương nước 172 Lấy mẫu gan tụy và ruột tôm kiêm tra mật số vi khuẩn Vibrio ban đầu Cố định mẫu tôm dung dịch cồn và Davidson’s 173 Hệ thống thí nghiệm 100 lít 174 175 Hệ thống thí nghiệm 1000 lít 176 THƠNG TIN TỔNG QUÁT Họ tên Nghiên cứu sinh: Lê Thế Xuân Ngày tháng năm sinh: 19/5/1976 Giới tính: Nam Nơi sinh: Thanh Hóa Điện thoại: 0918039764 Đơn vị công tác: Công ty TNHH SX & TM Trúc Anh Địa hiện nay: Công Điền, Vĩnh Trạch, Bạc Liêu Tốt nghiệp Đại học ngành: Nuôi trồng thủy sản Năm:1999 Tại: Đại học Nha Trang Tốt nghiệp Thạc sĩ ngành: Công nghệ sinh học Năm: 2012 Tại: Đại học Bách khoa Hà Nội 177 ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ LÊ THẾ XUÂN NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG VI KHUẨN Bacillus sp ĐỐI KHÁNG VỚI Vibrio parahaemolyticus TRONG NUÔI TÔM CÔNG NGHIỆP LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN MÃ SỐ: 62620301... thông qua vi? ?̣c kích hoạt hệ thống miễn dịch của tôm (Zokaeifar et al., 2012) Đề tài ? ?Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn Bacillus sp đối kháng với Vibrio parahaemolyticus nuôi tôm công nghiệp? ??... chi Bacillus ao nuôi tôm công nghiệp .65 4.5 Tuyển chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp có hoạt tính sinh học ứng dụng ni tơm công nghiệp 67 4.5.1 Tuyên chọn chủng vi khuẩn Bacillus sp