Bài viết đề xuất quy trình mới, xử lí mẫu sữa và thực phẩm bổ sung bằng phương pháp chiết siêu âm, sử dụng acid nitric loãng, sau đó điều chỉnh pH dịch chiết với amoni hydroxyt về môi trường kiềm trước khi tiến hành phân tích trên thiết bị ICP-MS để xác định hàm lượng iod trong sữa và thực phẩm.
NGHIÊN CỨU KHOA HỌC XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG IOD TRONG SỮA VÀ THỰC PHẨM BỔ SUNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHỐI PHỔ PLASMA CẢM ỨNG CAO TẦN (ICP-MS) Đinh Viết Chiến1* , Phạm Công Hiếu1,2 , Nguyễn Bảo Thoa1 , Nguyễn Minh Châu1, Lê Văn Hà1, Vũ Thị Bích Phương2, Nguyễn Văn Ri2, Nguyễn Thị Ánh Hường2, Lê Thị Hồng Hảo1,2 Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia Khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội (Ngày đến tòa soạn: 10/1/2019; Ngày sửa sau phản biện: 20/2/2019; Ngày chấp nhận đăng: 28/2/2019) Tóm tắt hương pháp xác định iod sữa thực phẩm bổ sung nghiên cứu Các thông số thiết bị tối ưu hóa tự động cơng suất cao tần, khí nebulizer, thấu kính ion Iod chiết từ mẫu dung dịch HNO3 2% sử dụng bể rung siêu âm nhiệt độ 80ºC Mẫu sau điều chỉnh đến pH ÷ 10 sử dụng dung dịch NH3, sau lọc qua màng lọc 0,45 µm trước phân tích thiết bị ICP-MS Phương pháp cho thấy có độ lặp lại hiệu suất thu hồi cao, phù hợp để xác định iod mẫu sữa thực phẩm bổ sung Từ khóa: Iod, ICP-MS, thực phẩm ĐẶT VẤN ĐỀ Iod vi chất dinh dưỡng cần thiết cho thể động vật người Sự thiếu hụt iod gây tình trạng phát triển tinh thần thể chất trẻ em, bệnh bướu cổ người lớn Trẻ em phụ nữ mang thai đối tượng dễ bị thiếu iod nhu cầu tăng cao Hiện nay, việc hấp thu iod qua loại thực phẩm sữa, thực phẩm bổ sung dễ thực hiệu nhiều so với loại gia vị mặn khác muối, mắm, nước tương Tuy nhiên, việc phân tích hàm lượng iod mẫu phức tạp nói tương đối khó khăn mà phương pháp thông thường không thực Các phương pháp phân tích iod chủ yếu dựa kỹ thuật ICP-MS Iod chiết phương pháp thủy phân mẫu môi trường kiềm mạnh (tetrametylammoni hydroxit) sử dụng tủ sấy [1], hay thủy phân mẫu môi trường acid nitric đặc sử dụng lị vi sóng [2] Nghiên cứu đề xuất quy trình mới, xử lí mẫu sữa thực phẩm bổ sung phương pháp chiết siêu âm, sử dụng acid nitric lỗng, sau điều chỉnh pH dịch chiết với amoni hydroxyt môi trường kiềm trước tiến hành phân tích thiết bị ICP-MS ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu mẫu sữa, thực phẩm bổ sung Đây mẫu có thành phần phức tạp, hàm lượng iod số mẫu thấp (đặc biệt sữa nước) nên việc định lượng xác tiêu địi hỏi phải sử dụng phương pháp có độ nhạy độ chọn lọc cao Bên cạnh đó, iod tồn đồng thời dạng khác mẫu (chủ yếu dạng muối I , IO3- kim loại kiềm kiềm thổ) gây khó khăn cho việc xác định Vì vậy, phương pháp ICP-MS phương pháp ưu việt để phân tích tổng hàm lượng iod sữa thực phẩm bổ sung P * Điện thoại: 0987980874 Email: chemvietchien@gmail.com Tạp chí KIỂM NGHIỆM VÀ AN TOÀN THỰC PHẨM (Số 1-2019) NGHIÊN CỨU KHOA HỌC 2.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất Thiết bị khối phổ plasma cao tần cảm ứng sử dụng hệ NEXION 350X – Perkin Elmer (Mỹ) Bể rung siêu âm có phận điều nhiệt từ hãng Elma (Đức) Các hóa chất tinh khiết đáp ứng cho phân tích khối phổ như: HNO3 65% (Merck), NH3 25% (Merck) Dung dịch chuẩn Iod có nồng độ 1000ppm (Merck) Nước sử dụng nước siêu có điện trở 18,2 Khí Argon có độ tinh khiết đáp ứng 99,999% Ngồi ra, dụng cụ khác phịng thí nghiệm như: ống ly tâm 50mL, bình thủy tinh dụng cụ thông thường khác sử dụng nghiên cứu KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 3.1 Khảo sát lựa chọn dung mơi phân tích Lựa chọn dung mơi phân tích mẫu bước quan trọng, có ý nghĩa định đến độ nhạy độ xác phương pháp phân tích Trên sở tham khảo tài liệu [2,3,4,5], dung môi lựa chọn để khảo sát gồm: dung dịch HNO3 dung dịch NH3 Tiến hành chuẩn bị dung dịch chuẩn iod 10ppb dung môi lựa chọn để khảo sát có nồng độ 0,25%, sau phân tích thiết bị ICP-MS Kết cho thấy, môi trường NH3 tín hiệu iod ổn định cao gấp lần mơi trường HNO3 Vì vậy, việc chuẩn bị mẫu mơi trường có tính kiềm trước phân tích thiết bị ICP-MS thích hợp hơn, phù hợp với phương pháp tham khảo Tuy nhiên, khả chiết iod khỏi mẫu phức tạp sữa, thực phẩm bổ sung mơi trường NH3 khơng tốt HNO3 Do đó, tiếp tục tiến hành khảo sát chuẩn bị mẫu chuẩn làm việc iod hỗn hợp đệm NH3 - NH4NO3 cách thay đổi tỉ lệ khác thể tích HNO3 NH3 có nồng độ Kết thể hình Hình Kết khảo sát tỉ lệ HNO3 : NH3 Kết cho thấy, phân tích iod môi trường đệm NH3 - NH4NO3 với dung dịch HNO3 NH3 tỉ lệ 1:2 theo thể tích, pH tương ứng khoảng 9÷10, tín hiệu iod thu cao nhất, có xu hướng ổn định Điều có ý nghĩa quan trọng HNO3 sử dụng bước xử lí mẫu nhằm tăng hiệu chiết iod với mẫu phức tạp sữa bột, hay số loại thực phẩm bổ sung chứa nhiều béo 3.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích tối ưu nhằm xác định iod ICP-MS Các thông số hệ thống khối phổ plasma cảm ứng (ICP-MS) có ảnh hưởng lớn đến độ nhạy, độ xác, độ lặp lại phép đo Các điều kiện nghiên cứu tối ưu tự động, sử dụng dung dịch chuẩn hóa thiết bị, bao gồm: công suất nguồn phát cao tần RF, lưu lượng khí nebulizer (LLKM), độ sâu mẫu, số lần quét khối Ngoài ra, thời gian bơm, rửa mẫu sử dụng dung mơi hữu isopropanol để tăng cường tín hiệu độ ổn định cho phép phân tích iod nghiên cứu tối ưu Các kết điều kiện tối ưu thu thể Bảng 10 Tạp chí KIỂM NGHIỆM VÀ AN TỒN THỰC PHẨM (Số 1-2019) NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Bảng Các thông số chọn để định lượng iod Thông s͙ Giá tr͓ Thông s͙ Giá tr͓ Công suҩt RF 1100W Quét khӕi 20 lҫn LLKM 0,85mL/phút Ĉo lһp lҫn Khí Ar tҥo Plasma 18,0L/phút Ĉӝ sâu mүu 1,1 mm Thӡi gian bѫm rӱa Tӵ 60s Thӡi gian bѫm mүu 45s Isopropanol 2% Thông sӕ khác Tӵ ÿӝng 3.3 Khảo sát điều kiện xử lí mẫu Khảo sát điều kiện xử lí mẫu cách thay đổi nhiệt độ thời gian rung siêu âm Kết cho thấy, điều kiện chiết siêu âm nhiệt độ 70ºC, hàm lượng iod mẫu thu cao (Hình 2) Ở nhiệt độ 90ºC, hàm lượng iod thu thấp, hầu hết iod mẫu bị tượng thăng hoa Hình Kết khảo sát nhiệt độ chiết Tương tự, thời gian chiết tối ưu khảo sát Kết thể hình Hình Kết khảo sát thời gian chiết Kết cho thấy, thời gian chiết mẫu 30 phút cho hàm lượng iod lớn Do đó, thời gian chiết 30 phút lựa chọn cho khảo sát 3.4 Quy trình xử lý mẫu Trên sở kết khảo sát điều kiện xử lý mẫu, quy trình phân tích iod mẫu sữa thực phẩm bổ sung phương pháp ICP-MS thể Sơ đồ Tạp chí KIỂM NGHIỆM VÀ AN TOÀN THỰC PHẨM (Số 1-2019) 11 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Cân mүu (0,5-2g) +20 ml HNO3 2% Siêu âm 700C 30 phút - ÿӏnh mӭc 100mL bҵng Lӑc lҩy 10mL (mүu sӳa) Lӑc lҩy 1mL (mүu TPBS) Bình ÿӏnh mӭc 25mL - ÿiӅu chӍnh pH 9-10 - ÿӏnh mӭc vӟi H2O L c qua màng 0,45 μm Phân tích ICP-MS Sơ đồ Quy trình phân tích Iod phương pháp ICP-MS 3.5 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) Giới hạn phát (LOD) phương pháp tính giá trị độ lệch chuẩn phân tích mẫu trắng 10 lần Giới hạn định lượng (LOQ) tính theo công thức: LOQ = 3,33 x LOD Kết thể Bảng Bảng Giới hạn phát giới hạn định lượng iod mẫu sữa thực phẩm bổ sung ICP-MS Thc pẖm N͉n m̳u Sͷa b͡t Sͷa n˱ͣc LOD (μg/100g) 2,5 0,6 8,0 LOQ (μg/100g) 12 2,0 40 b͝ sung Kết Bảng cho thấy, giá trị LOQ phương pháp hoàn toàn phù hợp để định lượng iod mẫu, kể bổ sung mức nhỏ sữa nước (thường gặp mức 10-30 µg/100g) Vì vậy, phương pháp ICP-MS ưu việt sử dụng để xác định iod mẫu có hàm lượng biến thiên khoảng rộng 3.6 Độ xác phương pháp Đánh giá độ xác phương pháp thông qua độ chụm, độ thực 03 mẫu: sữa bột, sữa nước, thực phẩm bổ sung Độ chụm đánh giá qua phân tích lặp lại 06 lần, phân tích tái lặp điều kiện có thay đổi thời gian phân tích, tính hệ số biến thiên tương đối lặp lại, tái lặp tương ứng Đánh giá độ qua độ thu hồi cách thêm lượng 12 12 Tạp chí KIỂM NGHIỆM VÀ AN TỒN THỰC PHẨM (Số 1-2019) NGHIÊN CỨU KHOA HỌC chuẩn biết trước iod vào mẫu thực mức bằng, ½ gấp đơi lượng iod có mẫu Kết tổng hợp bảng Bảng Kết thẩm định phương pháp N͉n m̳u Thông s͙ Sͷa b͡t Sͷa n˱ͣc TPBS RSDr (%) 3,7 4,1 2,2 RSDR (%) 3,6 3,9 4,1 R (%) 91,5-103 87-101 102-107 Ĉӝ không ÿҧm bҧo ÿo U(%) 15 12 11 Các kết thẩm định cho thấy phương pháp đáp ứng tốt yêu cầu kỹ thuật theo AOAC (độ lặp lại RSDr ≤ 5,3 %; độ tái lặp RSDR ≤ 8%; hiệu suất thu hồi R khoảng 80-110% 3.6 Phân tích mẫu thực tế Ứng dụng phương pháp xây dựng phân tích số mẫu thực tế thu thập thị trường Kết hàm lượng Iod số mẫu thu thập thể bảng Bảng Kết phân tích mẫu thực tế S͙ m̳u sai khác N͉n m̳u T͝ng s͙ vͣi công b͙ ± 10% ± 20% > 20% Sӳa bӝt 45 21 74 Sӳa nѭӟc 11 20 Thӵc phҭm bә sung 17 10 11 38 Từ đó, biểu đồ biểu thị mức sai khác kết phân tích so với cơng bố nhãn sản phẩm nhà sản xuất thể hình Sai khác Hình Biểu đồ % mức sai khác kết phân tích iod so với cơng bố Kết cho thấy, có đến 17% số mẫu thu thập thị trường có sai khác kết kiểm nghiệm (nhỏ so với công bố nhãn sản phẩm) lớn 20% Trong đó, có 14/22 mẫu (62%) công bố bổ sung iod dạng muối KI, tập trung chủ yếu vào nhóm sản phẩm thực phẩm bổ sung Đây nguyên nhân dẫn đến tượng hao hụt iod tượng thăng hoa, hay hấp phụ thành bao bì sản phẩm Tạp chí KIỂM NGHIỆM VÀ AN TỒN THỰC PHẨM (Số 1-2019) 13 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KẾT LUẬN Phương pháp ICP-MS ưu việt sử dụng để phân tích tổng hàm lượng iod Nghiên cứu đưa quy trình xử lí mẫu sở kỹ thuật chiết siêu âm nhằm xác định iod mẫu phức tạp sữa thực phẩm bổ sung Các kết nghiên cứu cho thấy phương pháp có độ xác đáp ứng u cầu AOAC, giới hạn định lượng khoảng 2ữ40 àg/100g l tng ng vi cỏc phng phỏp chun hin (5ữ100 àg/100g) [2] Phng phỏp phõn tớch cn mở rộng đối tượng mẫu phân tích (gia vị mặn loại thực phẩm khác), đồng thời hướng đến việc sử dụng nội chuẩn để kiểm soát tốt q trình phân tích TÀI LIỆU THAM KHẢO TCVN 9517:2012, Xác định Iod thực phẩm phương pháp phổ khối lượng plasma cao tần cảm ứng (ICP-MS) AOAC 2012.14 (2012), Total Iodine in Infant formula and nutritional products by Inductively coupled plasma mass spectrophotometry Luisa Maria, Fernández-Sánchez, Pilar Bermejo-Barrera, Jose´ Maria Fraga-Bermudez, Joanna Szpunar, Ryszard Lobinski (2007), Determination of iodine in human milk and infant formulas, Journal of Trace Elements in Medicine and Biology 21 S1, pages 10 – 13 A.A Labib1,2, B.M Challan (2014), Assessment of Dietary Supplement from Iodine by Milk Intake, Arab Journal of Nuclear Science and Applications, 48(2), pages (1-10) Kaare Julshamn, Lisbeth Dahl and Karen Eckhoff (2001), Determination of Iodine in Seafood by Inductively Coupled Plasma/Mass Spectrometry, JOURNAL OF AOAC INTERNATIONAL VOL 84, NO 6 C Phillip Shelor, Purnendu K Dasgupta (2011), Review of analytical methods for the quantification of iodine in complex matrices, Analytica Chimica Acta 702, pages 16–36 Summary DETERMINATION OF IODINE CONTENT IN MILK AND FOOD SUPPLEMENTS BY INDUCTIVELY COUPLED PLASMA MASS SPECTROMETRY (ICP-MS) Dinh Viet Chien1*, Pham Cong Hieu1,2, Nguyen Bao Thoa1, Nguyen Minh Chau1, Le Van Ha1, Vu Thi Bich Phuong2, Nguyen Van Ri2, Nguyen Thi Anh Huong2, Le Thi Hong Hao1,2 National Institute for Food Control Faculty of Chemistry, University of Science, Vietnam National University - Hanoi The determination of iodine in milk and food supplements by inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) was investigated Several parameters of the equipment were optimized automatically such as power of radio frequency, nebulizer gas, and voltage of ion lens Iodine was extracted from samples by using 2% HNO3 with ultrasonic at 80ºC Sample solutions were adjusted to the pH of 9÷10 by using ammonium hydroxide, and then filtered by using a 0.45 µm membrane before being analyzed by means of ICP-MS The method has good repeatability and high recovery efficiency that are suitable for the determination of iodine in milk and food supplements Keywords: Iodine, ICP-MS, food 14 Tạp chí KIỂM NGHIỆM VÀ AN TOÀN THỰC PHẨM (Số 1-2019) ... 9517:2012, Xác định Iod thực phẩm phương pháp phổ khối lượng plasma cao tần cảm ứng (ICP-MS) AOAC 2012.14 (2012), Total Iodine in Infant formula and nutritional products by Inductively coupled plasma. .. để định lượng iod mẫu, kể bổ sung mức nhỏ sữa nước (thường gặp mức 10-30 µg/100g) Vì vậy, phương pháp ICP-MS ưu việt sử dụng để xác định iod mẫu có hàm lượng biến thiên khoảng rộng 3.6 Độ xác phương. .. bố nhãn sản phẩm) lớn 20% Trong đó, có 14/22 mẫu (62%) cơng bố bổ sung iod dạng muối KI, tập trung chủ yếu vào nhóm sản phẩm thực phẩm bổ sung Đây nguyên nhân dẫn đến tượng hao hụt iod tượng thăng