Bài viết tập trung phân tích hàm lượng Icariin trong các sản phẩm thực phẩm bảo vệ sức khỏe dạng viên nén, viên nang, dạng lỏng và dạng nguyên liệu cao Dâm dương hoắc.
Nghiên cứu khoa học Xác định hàm lượng Icariin thực phẩm bảo vệ sức khỏe kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao Vũ Thị Thanh An2*, Lương Thế Dũng1, Mạc Thị Thanh Hoa2, Cao Công Khánh2 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia (Ngày đến tòa soạn: 03/6/2020; Ngày chấp nhận đăng: 30/6/2020) Tóm tắt Kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao kết hợp với detector PDA ứng dụng phân tích hàm lượng Icariin thực phẩm bảo vệ sức khỏe (TPBVSK) có chứa thành phần Dâm dương hoắc (Epimedium) Giai đoạn xử lý mẫu sử dụng dung môi chiết methanol kỹ thuật siêu âm cách thủy Quy trình phân tích thực hệ thống HPLC Alliance-Waters e2695 với cột sắc ký pha đảo C18 Reliant (250 mm × 4,6 mm, µm) pha động theo gradient acetonitril với dung dịch acid phosphoric 1% 20 phút Kết thẩm định cho thấy phương pháp có độ đặc hiệu tốt, đường chuẩn tuyến tính khoảng từ 0,42 - 42 µg/mL, độ lặp lại độ thu hồi phương pháp đáp ứng yêu cầu phân tích theo AOAC Phương pháp triển khai phân tích số sản phẩm TPBVSK nguyên liệu cao khô Dâm dương hoắc có mặt thị trường với kết hàm lượng Icariin từ 6,15 - 54,3 mg/g (đối với sản phẩm TPBVSK) từ 6,47 - 24,5 g/100g (đối với mẫu ngun liệu cao khơ) Từ khóa: Icariin, dâm dương hoắc, HPLC, thực phẩm bảo vệ sức khỏe, TPBVSK ĐẶT VẤN ĐỀ Tại Việt Nam, sản phẩm thực phẩm bảo vệ sức khỏe (TPBVSK) có nguồn gốc từ thuốc cổ truyền với thành phần dược liệu phát triển đa dạng Trong số dược liệu đó, Dâm dương hoắc (Epimedium) - loại dược liệu thường sử dụng thuốc cổ truyền với tác dụng chữa bệnh thận, liệt dương, đau nhức xương khớp [1] Nhu cầu sử dụng sản phẩm TPBVSK hỗ trợ điều trị phòng ngừa bệnh tật, nâng cao sức khỏe người dân nâng cao Chính thị trường xuất nhiều sản phẩm thực phẩm bảo vệ sức khỏe có cơng bố thành phần Dâm dương hoắc Với phát triển khoa học kỹ thuật, nhà khoa học phát thành phần có tác dụng Dâm dương hoắc dược liệu chi Dâm dương hoắc (Epimedium) Icariin Icariin có chất flavonol có khung cấu trúc tương tự kaempferol thay vị trí 08 nhóm 3-methylbut-2-en-1-yl nhóm hydroxy vị trí 03, 04 07 chuyển đổi tương ứng với 6-deoxy-alpha-L-mannopyranoside, methyl ether betaD-glucopyranoside [3] Sau hấp thu vào thể, Icariin phân bố tới nhiều vị trí thể, bao gồm não Do đó, Icariin thể số hoạt động sinh học tác dụng chống *Điện thoại: 0987653162 Email: vuthithanhan010195@gmail.com Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 145 Xác định hàm lượng Icariin thực phẩm bảo vệ sức khỏe kỹ thuật oxy hóa chống viêm, bảo vệ thần kinh, hoạt động chống khối u, tác động khác lên tim, xương, ức chế PDE5 nhiều quan khác [5] Hiện nay, mặt hàng thực phẩm bảo vệ sức khỏe, nước ta có phương pháp tiêu chuẩn để phân tích hàm lượng thành phần, đặc biệt hoạt chất có nguồn gốc từ dược liệu Chính thực tế đặt u cầu cần phải có nhiều phương pháp kiểm nghiệm thành phần thực phẩm bảo vệ sức khỏe nói chung phân tích Icariin nói riêng nhằm góp phần bảo vệ quyền lợi người tiêu dùng hỗ trợ quan chức việc kiểm soát tốt vấn đề chất lượng sản phẩm Trên giới phát triển số phương pháp xác định hàm lượng Icariin nhiều mẫu khác điện di (CE), sắc ký lớp mỏng hiệu cao (HPTLC), sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) [3-5], HPLC phương pháp có độ nhạy tốt, phổ biến dễ áp dụng phạm vi rộng VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu tập trung phân tích hàm lượng Icariin sản phẩm TPBSVK dạng viên nén, viên nang, dạng lỏng dạng nguyên liệu cao Dâm dương hoắc 2.2 Hóa chất, chất chuẩn 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ Các loại thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu gồm có: - Thiết bị sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Allience với detector PDA; - Cột sắc ký C18 (250 mm × 4,6 mm; 5µm) tiền cột tương ứng; - Các dụng cụ thiết bị phụ trợ khác phòng thí nghiệm 2.2.2 Hóa chất, chất chuẩn Các loại dung mơi, hóa chất sử dụng loại tinh khiết phân tích, dùng cho sắc ký lỏng hiệu cao có chất lượng tương đương - Chất chuẩn Icariin, độ tinh khiết 98%, Lot PRF9031903 (Biopurify); - Acetonitril, acid phosphoric, methanol, ethanol (Merck), nước đề ion 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu Các mẫu TPBVSK lấy ngẫu nhiên thị trường Hà Nội Được bảo quản theo yêu cầu nhà sản xuất q trình phân tích 2.3.2 Phương pháp phân tích - Thử nghiệm lựa chọn thông số hệ thống HPLC phân tích Icariin cho pic sắc ký có tín hiệu ổn định, cân xứng tách hoàn toàn với pic tạp khác: cột sắc ký, pha động (thành phần gradient), bước sóng định lượng, - Thử nghiệm lựa chọn trình xử lý mẫu: dung môi chiết, số lần chiết, kỹ thuật chiết để đảm bảo chiết chất phân tích đạt hiệu cao, đơn giản, dễ thực 146 Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 Vũ Thị Thanh An, Lương Thế Dũng, Mạc Thị Thanh Hoa, Cao Công Khánh - Thẩm định phương pháp theo hướng dẫn tài liệu tham khảo [2] 2.3.3 Xử lý số liệu - Phần mềm Empower hệ thống HPLC; - Phần mềm Microsoft Excel; - Một số công thức thống kê thường dùng phân tích KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích 3.1.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký Qua tham khảo tài liệu tham khảo [3-5], kết hợp với việc tiến hành khảo sát thực tế thiết bị HPLC Alliance -Waters e2965, điều kiện phân tích Icariin mẫu thực phẩm bảo vệ sức khỏe sau: - Cột Reliant C18 (250 mm ì 4,6 mm, àm) v tiền cột tương ứng; - Pha động: theo chương trình Gradient Bảng 1; - Tốc độ dòng: 1,0 mL/min; Thể tích mẫu: 20 µL; - Bước sóng phát định lượng: 260 nm, khoảng ghi phổ: 200 - 600 nm Hình sắc ký đồ phân tích dung dịch chuẩn Icariin với thông số Bảng Chương trình gradient pha động phân tích Icariin Thời gian (min) H3PO4 1%/nước (%) Acetonitril (%) 90 10 1,0 90 10 3,0 50 50 5,0 30 70 13 30 70 15 90 10 20 90 10 0,0 15.644 - 1404186 0.14 0.12 AU 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0.00 5.00 15.00 10.00 20.00 25.00 Minutes Hình Sắc ký đồ phân tích Icariin HPLC Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 147 Xác định hàm lượng Icariin thực phẩm bảo vệ sức khỏe kỹ thuật Với thời gian lưu Icariin khoảng 15,6 phút đảm bảo khả tách chất phân tích với tạp chất khác mẫu giúp ổn định thời gian lưu, tín hiệu đáp ứng lần thử 3.1.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện xử lý mẫu Icariin chất có độ tan tốt nước alcol Trong nghiên cứu chiết xuất Icariin từ dược liệu Dâm dương hoắc, phương pháp chiết thường sử dụng chiết hồi lưu với ethanol methanol Khi bổ sung vào mẫu thực phẩm chức năng, dù dạng hoạt chất hay dược liệu, cao dược liệu, việc chiết tách Icariin bị ảnh hưởng tá dược thành phần hoạt chất khác có mẫu Chính thế, nghiên cứu tiến hành khảo sát 02 dung mơi alcol ethanol methanol với nồng độ khác thời gian chiết khác để lựa chọn điều kiện tối ưu chiết tách Icariin khỏi mẫu với hiệu suất cao 3.1.2.1 Khảo sát dung môi chiết mẫu Hàm lượng Icariin Thử nghiệm 05 loại dung môi: ethanol 50%, ethanol 100%, methanol 50%, methanol 70%, methanol 100% khảo sát cách cân khoảng 1,0 g mẫu TPBVSK dạng viên nang cứng đồng nhất, chiết với 20 mL dung môi 15 phút với hỗ trợ bể siêu âm cách thủy, sau so sánh hàm lượng Icariin chiết để đánh giá hiệu suất chiết Kết hiệu chiết loại dung mơi thể Hình Hàm lượng dung mơi chiết Ethanol Hình Biểu đồ thể hiệu chiết loại dung môi Kết cho thấy, dung môi methanol 100% cho hàm lượng Icariin chiết lớn 05 hệ dung môi khảo sát Do methanol lựa chọn làm dung môi chiết mẫu 3.1.2.2 Khảo sát số lần chiết mẫu Để khảo sát số lần chiết mẫu, 01 mẫu TPBVSK dạng viên nang cứng chứa Icariin cân khoảng 1,0 g, chiết methanol 05 lần (mỗi lần 20 mL) sử dụng kỹ thuật siêu âm cách thủy 15 phút, sau phân tích theo điều kiện lựa chọn (3.1.1) Kết xác định số lần chiết tối ưu dựa phần trăm mẫu chiết lần cho thấy sau lần chiết thứ 02, lượng Icariin có mẫu gần chiết hết, lần chiết khơng cịn lượng Icariin đáng kể Do đó, quy trình chiết Icariin mẫu TPBVSK sử dụng 02 lần chiết Kết phân tích hàm lượng Icariin mẫu TPBVSK dạng viên nang cứng thể Hình 148 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 Vũ Thị Thanh An, Lương Thế Dũng, Mạc Thị Thanh Hoa, Cao Công Khánh 15.760 - 296668 AU 0.030 0.020 0.010 0.000 0.00 5.00 10.00 Minutes 15.00 20.00 Hình Sắc ký đồ phân tích Icariin mẫu TPBVSK dạng viên nang cứng 3.1.2.3 Khảo sát kỹ thuật chiết mẫu Để khảo sát kỹ thuật chiết mẫu sử dụng mẫu TPBVSK dạng viên nang cứng, thử nghiệm sử dụng kỹ thuật siêu âm cách thủy 15 phút, 30 phút, kỹ thuật lắc ngang 15 phút, 30 phút kỹ thuật ngâm 15 phút, 30 phút (thỉnh thoảng lắc đều) sử dụng dung mơi chiết methanol (chiết 02 lần × 20 mL/lần, định mức 50 mL methanol phân tích hệ thống HPLC) Kết phân tích hàm lượng Icariin mẫu TPBVSK dạng viên nén thể Bảng Bảng Kết thử nghiệm kỹ thuật chiết Kỹ thuật chiết Siêu âm 15 phút Siêu âm 30 phút Lắc ngang 15 phút Lắc ngang 30 phút Ngâm 15 phút Ngâm 30 phút Hàm lượng Icariin (mg/g) 25,7 25,9 20,4 21,1 17,5 19,2 Kết từ Bảng cho thấy, kỹ thuật chiết siêu âm cho hiệu cao khác biệt thời gian chiết 15 phút 30 phút không đáng kể Như vậy, sau trình khảo sát, quy trình chiết Icariin mẫu TPBVSK sau: Cân xác g mẫu đồng nhất, chiết lặp lại 02 lần với 20 mL methanol/lần, siêu âm cách thủy 15 phút/lần Dịch chiết gộp lại định mức 50 mL methanol, sau lọc, pha lỗng (nếu cần) phân tích hệ thống HPLC 3.2 Xác định giá trị sử dụng phương pháp phân tích Phương pháp lựa chọn dựa việc khảo sát điều kiện phân tích xử lý mẫu, tiếp tục xác nhận giá trị sử dụng theo yêu cầu thẩm định phương pháp hóa học [2] Kết thể sau: 3.2.1 Độ đặc hiệu Sắc ký đồ mẫu trắng, thời gian lưu Icariin khơng có peak, thời gian lưu mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn giống (Hình 4a) Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 149 Xác định hàm lượng Icariin thực phẩm bảo vệ sức khỏe kỹ thuật Phổ hấp thụ UV peak Icariin sắc ký đồ mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn trùng khớp (Hình 4b) a Chuẩn icariin Mẫu thêm chẩn b Hình Kết chồng píc sắc ký chuẩn icariin mẫu thêm chuẩn (a) phổ UV-VIS Icariin sắc ký đồ mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn (b) 3.2.2 Khoảng tuyến tính Phân tích dãy dung dịch chuẩn Icariin với nồng độ khác hệ thống HPLC với điều kiện lựa chọn Kết Bảng cho thấy khoảng tuyến tính từ 0,42 - 42,0 µg/mL Bảng Đường chuẩn khoảng tuyến tính Icariin Nồng độ (µg/mL) Diện tích pic 2,0 21,0 8,40 4,20 2,10 0,84 0,42 1517101 752350 292974 142201 69803 23717 8136 C tt (µg/mL) Bias (%) 42,02 20,95 8,30 4,15 2,15 0,88 0,45 0,0 0,0 -1,2 -1,3 2,7 5,2 7,9 Hình Đường chuẩn Icariin Với khoảng tuyến tính rộng trên, phương pháp thực phân tích hàm lượng Icariin loại mẫu TPBVSK với mức khác 3.2.3 Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) điểm nồng độ thêm chuẩn cho tín hiệu S/N = S/N = 10, kết thu được: 150 Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 Vũ Thị Thanh An, Lương Thế Dũng, Mạc Thị Thanh Hoa, Cao Công Khánh - Nền TPBVSK dạng lỏng: LOD = 13,5 µg/g; LOQ = 45,0 µg/g - Nền TPBVSK dạng rắn: LOD = 9,62 µg/g; LOQ = 32,0 µg/g Với giá trị LOD LOQ trên, phương pháp đáp ứng u cầu phân tích mẫu TPBVSK có bổ sung thành phần Dâm dương hoắc 3.2.4 Độ lặp lại Thực xác định độ lặp lại phương pháp mẫu TPBVSK dạng lỏng dạng rắn chứa thành phần Dâm dương hoắc Mỗi mẫu phân tích 06 lần, kết thu Bảng Bảng Kết phân tích độ lặp lại Nền mẫu Hàm lượng Mức yêu cầu AOAC Kết Dạng lỏng 1,65 g/100g Hàm lượng 1% RSDr ≤ 2,7% 2,09 Dạng rắn 9,81 g/100g Hàm lượng 10% RSDr ≤ 1,8% 1,59 Các kết Bảng cho thấy phương pháp đạt yêu cầu AOAC [2] độ lặp lại hai mẫu có hàm lượng khác 3.2.5 Độ tái lập trung gian Thực độ lặp lại với người thời gian phân tích khác Kết thu Bảng Bảng Kết phân tích độ tái lập trung gian Nền mẫu Hàm lượng Mức yêu cầu AOAC Kết Dạng lỏng 1,58 g/100g Hàm lượng 1% RSDR ≤ 4,0% 3,21 Dạng rắn 9,74 g/100g Hàm lượng 10% RSDR ≤ 3,0% 2,17 Các kết Bảng cho thấy phương pháp đạt yêu cầu AOAC [2] độ tái lập trung gian hai mẫu có hàm lượng khác 3.2.6 Độ thu hồi Thực thêm lượng chuẩn Icariin xác định vào mẫu trắng, mẫu thực 06 lần phân tích theo quy trình xác định Dựa mức hàm lượng thực tế phân tích được, tính độ thu hồi Kết thu Bảng Bảng Kết phân tích độ thu hồi Nền mẫu Thêm chuẩn Độ thu hồi (%) Mức yêu cầu Dạng lỏng 0,01% 95,6 - 103,9% 90 - 107% Dạng rắn 0,1% 96,8 - 102,3% 95 - 105% Từ kết thu cho thấy phương pháp đạt yêu cầu AOAC [2] độ thu hồi hai mẫu có mức thêm chuẩn hàm lượng khác Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 151 Xác định hàm lượng Icariin thực phẩm bảo vệ sức khỏe kỹ thuật 3.3 Kết xác định hàm lượng Icariin mẫu thực Ứng dụng phương pháp xây dựng để kiểm nghiệm mẫu TPBVSK số nguyên liệu cao khô Dâm dương hoắc lấy ngẫu nhiên thị trường, tập trung chủ yếu vào sản phẩm có tác dụng cải thiện tăng cường sinh lý, hỗ trợ điều trị rối loạn nội tiết Kết thu Bảng Hình Bảng Kết phân tích số mẫu thực tế Mẫu Nền mẫu Hàm lượng (mg/g) (*) Mẫu Nền mẫu Hàm lượng (mg/g) (*) M1 M2 M3 M4 Viên nén Viên nén Viên nén Viên nang cứng 26,0 ± 1,2 14,1 ± 0,7 54,3 ± 2,1 35,7 ± 1,8 M7 M8 M9 M10 Viên nang mềm Viên nang mềm Dạng dung dịch Cao khô 6,15 ± 0,4 24,1 ± 1,1 16,0 ± 0,7 245 ± 15 M5 Viên nang cứng 2,04 ± 0,2 M11 Cao khô 98,5 ± 4,6 M6 Viên nang cứng 18,6 ± 0,8 M12 Cao khô 64,7 ± 3,2 Ghi chú: (*) Hàm lượng Icariin mẫu thực tính theo dạng nguyên trạng 15.255 - 191452 0.020 0.08 0.06 AU a 0.030 AU 15.263 - 155494 0.040 0.010 0.04 0.02 b 0.00 0.000 10.00 12.00 14.00 16.00 Minutes 18.00 20.00 10.00 12.00 14.00 16.00 Minutes 18.00 20.00 Hình Sắc ký đồ phân tích mẫu TPBVSK dạng viên nang mềm (a) dạng lỏng (b) Từ kết cho thấy, hàm lượng Icariin có thực phẩm bảo vệ sức khỏe dạng viên nén từ 14,1 - 54,3 mg/g, dạng viên nang cứng từ 2,04 - 35,7 mg/g, dạng viên nang mềm từ 6,15 - 24,1 mg/g Hơn nữa, qua phân tích sơ cho thấy hàm lượng Icariin số mẫu nguyên liệu cao khô Dâm dương hoắc lấy ngẫu nhiên thị trường khác (6,47 - 24,5%) Tuy nhiên, kết sơ ban đầu, để có đánh giá đầy đủ mức hàm lượng Icariin mẫu TPBVSK mẫu nguyên liệu cao Dâm dương hoắc thị trường, cần tiến hành phân tích tiếp tục với số lượng mẫu lớn Các kết phân tích mẫu thực cho thấy phương pháp có độ xác, độ tin cậy có tính khả thi cao, triển khai áp dụng phịng thí nghiệm an tồn thực phẩm để kiểm nghiệm, đánh giá chất lượng sản phẩm TPBVSK chứa thành phần Dâm dương hoắc KẾT LUẬN Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích Icariin mẫu TPBVSK phương pháp HPLC-DAD Quy trình xử lý mẫu đơn giản cách chiết 02 lần methanol với hỗ trợ siêu âm cách thủy 15 phút Thời gian phân tích HPLC 20 phút với cột sắc ký C18 pha động gradient acetonitrile với dung dịch acid phosphoric 1% Kết thẩm định cho thấy, phương pháp có độ đặc hiệu cao, giá trị giới hạn định lượng nhỏ (0,45 µg/g 152 Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 Vũ Thị Thanh An, Lương Thế Dũng, Mạc Thị Thanh Hoa, Cao Cơng Khánh dạng lỏng, 0,32 µg/g dạng rắn); khoảng tuyến tính rộng (từ 0,42 - 42 µg/mL); độ thu hồi, độ lặp lại, độ tái lập trung gian đáp ứng yêu cầu phương pháp phân tích theo AOAC Phương pháp ứng dụng phân tích mẫu TPBVSK chứa Dâm dương hoắc cho thấy hàm lượng Icariin có khơng đồng dạng bào chế dạng bào chế khác TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Hà Nội: Nhà xuất Y học, 2006 [2] Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia, Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Hà Nội: Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 2010 [3] Z Yang, J Zhao, “Qualitative and quantitative analysis of icariin analogues in Epimedium koreanum by UPLC-Q-TOF-MS”, Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, vol.38, no.1, pp 19-29, 2017 [4] O N Pozharitskaya, V M Kosman, A N Shikov D Demchenko, “Comparison between HPLC and HPTLC densitometry for the determination of icariin from Epimedium koreanum extracts”, Journal of Separation Science, vol 30, no 5, pp 708-712, 2007 [5] Y Chai, S Ji, Zhang Guoqing, Y Wu, X Yin, “Determination of icariin in Chinese traditional medicine by capillary zone electrophoresis”, Biomedical Chromatography, vol 13, no 5, pp 373-375, 1999 Determination of Icariin content in dietary supplements by high performance liquid chromatography Vu Thi Thanh An2, Luong The Dung1, Mac Thi Thanh Hoa2, Cao Cong Khanh2 University of Science, Vietnam National University, Hanoi National Institute for Food Control, Hanoi Abstract High performance liquid chromatography with PDA detector technique has been applied to analyze the Icariin content in dietary supplements that contains the ingredient of Epimedium Sample preparation used methanol solvent and ultrasonic technique Analytical procedure performed on HPLC Alliance-Waters e2695 system with chromatographic column C18 Reliant (250 mm ì 4.6 mm, àm) and gradient between acetonitril and phosphoric acid 1% solution in 20 minutes The validation results showed that the method had good specificity, linear calibration curve in the range of 0.42 - 42 µg/mL, the repeatability and recovery of the method meet the analytical requirements according to AOAC The method has been deployed to analyze some dietary supplement products on the market and give Icariin content 6.15 - 54.3 mg/g (in dietary supplement) and 6.47 - 24.5 g/100g (in powder extracts) Keywords: Icariin, Epimedium, HPLC, dietary supplements Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 153 ... Tạp chí Kiểm nghiệm An tồn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 151 Xác định hàm lượng Icariin thực phẩm bảo vệ sức khỏe kỹ thuật 3.3 Kết xác định hàm lượng Icariin mẫu thực Ứng dụng phương pháp xây... Minutes Hình Sắc ký đồ phân tích Icariin HPLC Tạp chí Kiểm nghiệm An toàn thực phẩm - Tập 3, Số 3, 2020 147 Xác định hàm lượng Icariin thực phẩm bảo vệ sức khỏe kỹ thuật Với thời gian lưu Icariin. .. Trên giới phát triển số phương pháp xác định hàm lượng Icariin nhiều mẫu khác điện di (CE), sắc ký lớp mỏng hiệu cao (HPTLC), sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) [3-5], HPLC