PHÂN lập THỰC KHUẨN từ đất VÙNG rễ cây ĐINH LĂNG (polyscias fruticosa l harms) ở THÀNH PHỐ cần THƠ có KHẢ NĂNG ức CHẾ VI KHUẨN ralstonia solanacearum

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHƯƠNG TRÌNH TIÊN TIẾN PHÂN LẬP THỰC KHUẨN TỪ ĐẤT VÙNG RỄ CÂY ĐINH LĂNG (Polyscias fruticosa L Harms) Ở THÀNH PHỐ CẦN THƠ CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ VI KHUẨN Ralstonia solanacearum CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS TRƯƠNG THỊ BÍCH VÂN NGUYỄN SONG HÂN MSSV: B1303918 LỚP: CNSH TT K39 Cần Thơ, Tháng 4/2018 Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHƯƠNG TRÌNH TIÊN TIẾN PHÂN LẬP THỰC KHUẨN TỪ ĐẤT VÙNG RỄ CÂY ĐINH LĂNG (Polyscias fruticosa L Harms) THÀNH PHỐ CẦN THƠ CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ VI KHUẨN Ralstonia solanacearum CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS TRƯƠNG THỊ BÍCH VÂN NGUYỄN SONG HÂN MSSV: B1303918 LỚP: CNSH TT K39 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN Trương Thị Bích Vân Nguyễn Song Hân DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………… ………….……………………………………………………………………………… .………………………………………………………………………………………… … ……………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2018 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG Chuyên ngành Công nghệ Sinh học i Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT LỜI CẢM TẠ Con xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến bố mẹ có cơng sinh thành, ni dưỡng, ln quan tâm ủng hộ vật chất tinh thần để đủ tâm sức học hành hồn thành khóa học Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Giáo sư Kaeko Kamei trao cho em hội để học tập nghiên cứu Nhật Bản Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô Viện Công nghệ Sinh học tận tụy việc truyền đạt kiến thức suốt năm Đại học Em xin gửi lời cám ơn chân thành đến TS Trương Thị Bích Vân, cán hướng dẫn, người truyền đạt cho em ý tưởng, kiến thức, kinh nghiệm quý báu để hoàn thành nghiên cứu tạo cho em nhiều hội học hỏi, trau dồi kỹ cho thân Tôi xin gửi lời cám ơn đến thành viên nhóm nghiên cứu thực khuẩn ln giúp đỡ tơi suốt q trình làm thí nghiệm, ln động viên tơi gặp khó khăn Cám ơn tất thành viên lớp Công nghệ Sinh học tiên tiến khóa 39 giúp đỡ tôi, tạo nên kỉ niệm đáng nhớ thời sinh viên NGUYỄN SONG HÂN Chuyên ngành Công nghệ Sinh học ii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT TÓM LƯỢC Ralstonia solanacearum vi khuẩn gây bệnh héo xanh 200 loài thực vật thuộc 50 họ khác xếp thứ hai danh sách tác nhân gây bệnh nguy hiểm trồng (Hayward, 2000; Mansfield et al., 2012) Bệnh gây thiệt hại đáng kể suất trồng Để đối phó với dịch bệnh nơng dân thường sử dụng thuốc bảo vệ thực vật gây ô nhiễm môi trường, thối hóa đất Trong xu hướng đến nông nghiệp xanh, sản phẩm nông nghiệp sạch, người trồng cần phải có biện pháp phịng trừ sinh học vừa hiệu việc kiểm soát dịch bệnh vừa an tồn với mơi trường Thực khuẩn xem biện pháp tiềm việc phòng trừ bệnh vi khuẩn gây thực khuẩn ký sinh tiêu diệt vi khuẩn Hiện nay, chưa có đề tài phân lập thực khuẩn từ đất trồng dược liệu thực Do đó, đề tài “Phân lập thực khuẩn từ đất vùng rễ đinh lăng (Polyscias fruticosa L Harms) thành phố Cần Thơ có khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum” thực nhằm tìm dịng thực khuẩn có khả kiểm sốt vi khuẩn Ralstonia solanacearum Đề tài sử dụng phương pháp nhỏ giọt khảo sát vết tan (double layer agar – drop method, double layer agar – plaque assay) (Kropinski, 2009) phân lập dòng thực khuẩn ɸDL1, ɸDL2, ɸDL3, ɸDL4, ɸDL5, ɸDL6 có khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum từ đất vùng rễ đinh lăng Kết đánh giá phổ ký chủ dòng thực khuẩn phân lập dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum RS2, RS3, RS4, RS5, RS6, RS7, RS8, RS9, RS10 cho thấy2 dịng thực khuẩn ɸDL3 ɸDL6 có phổ ký chủ rộng dòng khác ức chế 3/9 dịng vi khuẩn Thơng qua đặc điểm hình thái vết tan (plaque) dịng thực khuẩn cho vết tan mờ, với tiêu đường kính vết tan, dịng thực khuẩn ɸDL3 cho đường kính phân giải lớn dịng thực khuẩn ɸDL6 Từ khóa: bệnh héo xanh, đinh lăng, Ralstonia solanacearum, thực khuẩn Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT MỤC LỤC PHẦN KÝ DUYỆT i LỜI CẢM TẠ ii TÓM LƯỢC iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH BẢNG vi DANH SÁCH HÌNH vii CÁC TỪ VIẾT TẮT viii CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .2 1.3 Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Thực khuẩn .3 2.1.1 Giới thiệu 2.1.2 Cấu trúc thực khuẩn 2.1.3 Phân loại thực khuẩn 2.1.4 Cơ chế hoạt động thực khuẩn 2.1.5 Các nghiên cứu nước .8 2.2 Bệnh héo xanh vi khuẩn Ralstonia solanacearum 10 2.2.1 Triệu chứng 10 2.2.2 Tác nhân gây bệnh 11 2.2.3 Phương thức lan truyền tồn trữ bệnh 12 2.2.4 Đặc điểm xâm nhiễm .13 2.2.5 Phòng trị bệnh héo xanh vi khuẩn Ralstonia solanacearum 13 2.3 Sơ lược đinh lăng 13 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT 2.3.1 Phân loại đinh lăng 14 2.3.2 Mô tả .15 2.3.3 Công dụng 15 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Thời gian địa điểm 16 3.2 Phương tiện nghiên cứu .16 3.2.1 Vật liệu 16 3.2.2 Dụng cụ thiết bị .17 3.2.3 Hóa chất 17 3.3 Phương pháp 19 3.3.1 Phân lập thực khuẩn .19 3.3.2 Đánh giá phổ ký chủ dòng thực khuẩn phân lập điều kiện phịng thí nghiệm 20 3.3.3 Đánh giá khả ức chế vi khuẩn dòng thực khuẩn vi khuẩn Ralstonia solanacearum điều kiện phịng thí nghiệm 21 3.3.4 Xử lý số liệu 22 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Phân lập thực khuẩn .23 4.2 Đánh giá phổ ký chủ dòng thực khuẩn phân lập điều kiện phịng thí nghiệm 24 4.3 Đánh giá khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum dòng thực khuẩn điều kiện phịng thí nghiệm 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .32 TÀI LIỆU THAM KHẢO .33 PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC Chuyên ngành Công nghệ Sinh học v Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Bảng Vi khuẩn Ralstonia solanacearum từ khoa Nông Nghiệp .16 Bảng Vi khuẩn Ralstonia solanacearum từ Viện Công nghệ Kyoto, Nhật Bản .17 Bảng Môi trường King’s B (Shurleff and Averre III, 1997) .18 Bảng Môi trường King’s B có TZC (Shurleff and Averre III, 1997) 18 Bảng Môi trường CPG (Kelman, 1954) 19 Bảng Mơi trường CPG có TZC (Kelman, 1954) .19 Bảng Kết phân lập thực khuẩn có khả xâm nhiễm vi khuẩn Ralstonia solanacearum Cần Thơ 23 Bảng Phổ kí chủ dịng thực khuẩn dịng vi khuẩn từ khoa Nơng Nghiệp 25 Bảng Phổ kí chủ dòng thực khuẩn dòng vi khuẩn từ Viện Công Nghệ Kyoto, Nhật Bản .26 Bảng 10 Đường kính vết tan (mm) tạo hai dòng thực khuẩn xâm nhiễm vi khuẩn Ralstonia solanacearum RS10 điều kiện phịng thí nghiệm 29 Bảng 11 Đường kính vết tan tạo dòng thực khuẩn thể xâm nhiễm vào vi khuẩn Ralstonia solanacearum RS10 điều kiện phịng thí nghiệm Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Hình Thực khuẩn T2 Hình Các loại thực khuẩn Hình Thực khuẩn có đuôi Hình Hai chu trình vịng đời thực khuẩn .8 Hình Triệu chứng héo xanh ớt .11 Hình Các loài đinh lăng .14 Hình Hình minh họa nghiệm thức thí nghiệm đánh giá phổ ký chủ 21 Hình Sự xuất vết tan thực khuẩn môi trường King’s B có TZC 24 Hình Phổ kí chủ dòng thực khuẩn xâm nhiễm vi khuẩn RS10 mơi trường King’s B có TZC (A) mơi trường King’s B khơng có TZC (B) dịng vi khuẩn Ralstonia solanacearum MAFF 211270, mơi trường CPG khơng có TZC (C) 27 Hình 10 Đường kính phân giải dòng thực khuẩn ɸDL3 ɸDL6 xâm nhiễm vi khuẩn Ralstonia solanacearum thời điểm 24 (Hình A, B) 48 (Hình C, D) 31 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT CÁC TỪ VIẾT TẮT CFU: Colony forming unit Cm: centimeter CPG: Casamino acid – Peptone - Glucose DNA: Deoxyribonucleic acid EPS: Exopolysaccharide L: Liter Mg: milligram Ml: milliliter OD: Optical density PFU: Plaque forming unit R solanacearum: Ralstonia solanacearum Rpm: Revolutions per minute rRNA: Ribosomal ribonucleic acid TZC (hoặc TTC): Tripheny tetrazolium chloride Chuyên ngành Công nghệ Sinh học viii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT Vết tan (B) (A) (D) (C) Hình 10 Đường kính phân giải dịng thực khuẩn ɸDL3 ɸDL6 xâm nhiễm vi khuẩn Ralstonia solanacearum thời điểm 24 (Hình A, B) 48 (Hình C, D) Chun ngành Cơng nghệ Sinh học 31 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN - Phân lập dòng thực khuẩn từ đất trồng đinh lăng có khả kiểm sốt vi khuẩn Ralstonia solanacearum - Trong dòng thực khuẩn phân lập được, dòng ɸDL3 ɸDL6 dịng thực khuẩn có phổ ký chủ rộng so với dòng thực lại có khả xâm nhiễm dịng vi khuẩn Ralstonia solanacearum Dòng vi khuẩn RS10 dòng vi khuẩn chọn để làm thí nghiệm đánh giá khả xâm nhiễm dịng thực khuẩn dòng thực khuẩn bị tất dòng thực khuẩn xâm nhiễm - Thí nghiệm đánh giá khả xâm nhiễm dòng thực khuẩn ɸDL3 ɸDL6 dòng vi khuẩn RS10 cho thấy dòng thực khuẩn ɸDL3 cho đường kính vết tan lớn dịng thực khuẩn ɸDL6 KIẾN NGHỊ - Thực thí nghiệm nhà lưới đối tượng thực vật cụ thể kí chủ vi khuẩn Ralstonia solanacearum để khảo sát khả kiểm sốt vi khuẩn dịng thực khuẩn điều kiện nhà lưới - Nghiên cứu ảnh hưởng dược chất đinh lăng đến vi sinh vật đất vùng rễ cây, đặc biệt tồn thực khuẩn vùng đất - So sánh khác mức độ gene dòng thực khuẩn phân lập chúng gắn vào gene vi khuẩn - Dùng kính hiển vi điện tử truyền qua (Transmission electron microscopy) để xác định hình thái hai dịng thực khuẩn ɸDL3 ɸDL6 - Giải trình tự dòng thực khuẩn ɸDL3 ɸDL6 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 32 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đỗ Tất Lợi 2004 Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB KHKT Hà Viết Cường 2008 Bệnh nông nghiệp Trường Đại Học Hà Nội Hà Nội, trang 117 Hồ Cãnh Thịnh 2015 Phân lập, tuyển chọn dòng thực khuẩn thể phòng trừ bệnh thối hạt lúa vi khuẩn Burkholderia glumae khảo sát môi trường, điều kiện nhân nuôi thực khuẩn thể Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Bảo Vệ Thực Vật Khoa Nông Nghiệp Sinh học ứng dụng Trường Đại Học Cần Thơ Lê Lương Tề Vũ Triệu Mân, 1999 Bệnh vi khuẩn virus hại trồng Nhà xuất Giáo Dục Hà Nội Hà Nội, trang 207 Lê Thị Thanh Thủy, 2014 Nghiên cứu, tuyển chọn vi sinh vật đối kháng vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh trồng Lương Hữu Tâm, 2013 Phân lập bước đầu đánh giá khả hạn chế bệnh cháy bìa lúa vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae số chủng thực khuẩnở Đồng Bằng Sông Cửu Long Luận văn tốt nghiệp cao học Khoa nông nghiệp Sinh học ứng dụng, Đại Học Cần Thơ Cần Thơ Mai Huỳnh Dư An, Nguyễn Trọng Ngữ, Nguyễn Thị Thu Nga, Phan Hữu Bằng, Bùi Khánh Lâm, Lưu Huỳnh Anh Huỳnh Chí Nghĩa, 2016 Thử nghiệm khả phân giải vi khuẩn Escherchia coli thực khuẩn thể Ngô Ứng Long 1977 Tác dụng tăng lực bổ sung Đinh lăng Tóm tắt cơng trình Đinh lăng 1964 – 1974 Nội san Đại học Quân Y, trang 41 – 45 Nguyễn Minh Tâm 2015 Phân lập khảo sát hiệu phòng trị thực khuẩn thể bệnh héo xanh dưa leo vi khuẩn Ralstonia solanacearum điều kiện invitro nhà lưới Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Bảo Vệ Thực Vật Khoa Nông Nghiệp Sinh học ứng dụng Trường Đại Học Cần Thơ Nguyễn Ngọc Hải Uyên 2016 Phân lập thực khuẩn có khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh ớt (Capsicum spp.) Vĩnh Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 33 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT Long, Cần Thơ Sóc Trăng Luận văn Thạc sĩ ngành Công nghệ Sinh học Viện Nghiên cứu phát triển Công nghệ Sinh học Trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Thị Tấm 2013 Đánh giá hiệu phòng trị bệnh vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa 231-1 bệnh đốm vằn nấm Rhizoctonia solani cháy bìa lúa vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae điều kiện in vitro nhà lưới Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Thị Thu Hương, Lương Kim Bích 2001 “Nghiên cứu tác dụng chống trầm cảm stress Đinh lăng”, Tạp chí Dược liệu, (2-3), trang 84-86 Nguyễn Thị Trúc Giang 2014 Nghiên cứu biện pháp phòng trị bệnh cháy bìa (Xanthomonas oryzae pv oryzae) lúa thực khuẩn thể Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Bảo Vệ Thực Vật Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Đại Học Cần Thơ Cần Thơ Nguyễn Thượng Dong, Trần Công Luận, Nguyễn Thị Thu Hương 2007 Sâm Việt Nam số thuốc họ nhân sâm NXB KHKT, trang 287-323 Nguyễn Thúy An, Phạm Văn Kim, Nguyễn Văn Minh Phụng, Nguyễn Thị Thu Nga, 2017 Phân lập tuyển chọn dòng thực khuẩn thể phòng trừ bệnh héo xanh hoa vạn thọ (Tagetes papula L.) vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 49: 44-52 Nguyễn Xuân Hòa, Nguyễn Hữu Tùng, Trần Quang Vui, Bùi Thị Hiền, Lê Văn Phước, Lê Xuân Ánh Nguyễn Thị Thùy, 2016 Phân lập mơ tả đặc tính thực khuẩn thể dùng phân giải vi khuẩn E.coli0141 gây bệnh tiêu chảy lợn Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn, 13: 71-76 Phan Quốc Huy, Nguyễn Minh Trung, Hồ Cảnh Thịnh Nguyễn Thị Thu Nga, 2016 Đánh giá hiệu thực khuẩn thể phòng trừ bệnh thối hạt lúa vi khuẩn Burkholderia glumae Tạp Chi Khoa học Trường Đại Học Cần Thơ, 45: 70-78 Phan Thị Hồng Thúy, Nguyễn Chơn Tình, Bào Thanh Loan Trần Thị Thu Thủy 2010 Khả hạn chế số bệnh lúa xử lý với dịch trích cỏ cứt heo Chun ngành Cơng nghệ Sinh học 34 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT (Ageratum coryzoides) điều kiện nhà lưới Hội thảo quốc gia bệnh hại thực vật Việt Nam trang 195-201 Trần Hưng Minh, Ngơ Văn Chí, Phạm Minh Phú Nguyễn Thị Thu Nga, 2016 Phân lập bước đầu đánh giá hiệu thực khuẩn thể phòng trừ bệnh thối gốc lúa vi khuẩn Erwinia chrysanthemi Tạp Chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 3: 185-192 Tiếng Anh Abayaneh, M.R., Mahendra R 2013 Antifungal Metabolites from Plants Heidelberg, Berlin: Springer-Verlag Abedon, S T 2009 Phage evolution and ecology Adv Appl Microbiol 67, 1–45 Ackermann, H.W 2004 Bacteriophage classification In Bacteriophages, Biology and Applications, Eds Kutter E., Sulakvelidze A., CRC Press ISBN 978-0-84931336-3, Boca Raton, USA, pp 67–89 Ackermann, H.W 2006 Classification of bacteriophages In The Bacteriophages, Ed Calendar R, Oxford University Press, ISBN 0-19-514850-9, New York, USA, pp 8–16 Ackermann, H.W 2007 5500 Phages examined in the electron microscope Archives of Virology Vol.152, No.2, pp 227-243 PMID 17051420 Agata, J.K., G Tomasz, N.K Bożena, B Sylwia, D Aleksandra, T Gracja, N Agnieszka, J.D Magdalena, N Magdalena, R Malwin, M Agata, M Borys, W Grzegorz and W Alicja 2016 Biodiversity of bacteriophages: morphological and biological properties of a large group of phages isolated from urban sewage 6:34338 DOI 10.1038/srep34338 Agrios, G.N 2005 Plant pathology, Academic Press, pp 922 Van, T.T.B, P.K.N Huan, R Namikawa, K Miki, A Kondo, D.T.P Thao, K Kamei 2015 Archives of Virology 161(2):483-486 Balogh, B., J.B Jones, M.T Momol, S.M Olson, A Obradovic 2003 Improved efficacy of newly formulated bacteriophages for management of bacterial Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 35 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT spot on tomato Plant Dis.87:949–954 Barrow, P.A., M.A Lovell and A Berchieri 1998 Use of lytic bacteriophage for control of experimental Escherichia coli septicaemia and meningitis in chickens and calves Clin Diagn Lab Immunol 5, pp.294–298 Bensita, M.B., P Nilani and C.D Madhu 1998 Studies on the antipyretic, antiinflammatory, analgesic and molluscicidalproperties of Polyscias fruticosa (L) Harms Ancient Sci Life 17:313–19 Bensita, M., N.P Bernard, R.Venkataswamy, and C.M Divakar, 1998 Deparment of pharmacognosy, college of pharmacy, Ramakrishna institute of paramedical sdience Coimbatore Vol No18 (2), pages 165-172 Buddenhagen, I.W., L Sequeira, and A Kelman 1962 Designation of races in Pseudomonas solanacearum Phytopathology 52:726 Chaboud, A., A Rougny, A Proliac, J Raynaud, P Cabalion, 1995 A new triterpenoid saponin from Polyscias fruticosa, Fr Pharmazie, 50 (5), page 371379 Christensen, J.R 1965 The kinetics of reversible and irreversible attachment of bacteriophage T 1, Virology Vol.26, No.4, pp 727-737 Elphinstone, J.G 2005 The current bacterial wilt situation: a global overview In: Allen C, Prior P, Hayward AC, editors Bacterial wilt disease and the Ralstonia solanacearum species complex St Paul, MN: American Phytopathological Society Press, pp.9–28 Fegan, M and P Prior 2005 “How complex is the “Ralstonia solanacearum species complex?” in Bacterial wilt Disease and the Ralstonia solanacearum Species Complex, eds C Allen, P Prior, and A C Hayward (Madison,WI: APS), pp.449–462 Fokine A., M.G Rossmann 2014 Molecular architecture of tailed double-stranded DNA phages Bacteriophage, 4: e28281 Fox, J.L 2000 Phage treatments yield healthier tomato, pepper plants ASM News 66, Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 36 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT pp 455–456 Fujiwara, A., M Fujisawa, R Hamasaki, T Kawasaki, M Fujie and T Yamada 2011 Biocontrol of Ralstonia solanacearum by treatment with lytic bacteriophages Appl Environ Microbil., 77, pp.4155-4162 Fujiwara, A., M Fujisawa, R Hamasaki, T Kawasaki, M Fujie, and T Yamada 2011 Biocontrol of Ralstonia solanacearum by Treatment with Lytic Bacteriophages Applied and Environmental Microbiology, 12: 4155 – 4162 Fujiwara, A., T Kawasaki, S Usami, M Fujie and T Yamada 2008 Genomic characterization of Ralstonia solanacearum phage RSA1 and its related prophage (RSX) in strain GMI1000 J Bacteriol., 190, pp 143-156 Garcia, P.B., B Martınez, J.M Obeso and A Rodriguez 2008 Bacteriophages and their application in food safety Lett Appl Microbiol 47, pp.479–485 Genin, S., and C Boucher 2002 Ralstonia solanacearum: secrets of a major pathogen unveiled by analysis of its genome Mol Plant Pathol 3, pp.111–118 Genin, S., and T.P Denny 2012 Pathogenomics of the Ralstonia solanacearum species complex Ann Rev Phytopathol 50, pp.67–89 Harper D.R and E Kutter 2008 Bacteriophage: Therapeutic Uses In The Encyclopedia of Life Sciences Hayward, A C 1994 “The hosts of Pseudomonas solanacearum,” in Bacterial Wilt The Disease and Its Causative Agent, Pseudomonas solanacearum, eds A C Hayward and G L Hartman (Wallingford: CAB International), pp.9–24 Hayward, A.C 1991 Biology and epidemiology of bacterial wilt caused by Pseudomonas solanacearum Ann Rev Phytopathol 29, pp.65–87 Hayward, A.C 1991 Biology and epidemiology of bacterial wilt caused by Pseudomonas solanacearum Ann Rev Phytopathol 29, pp.65–87 Hayward, A.C 2000 Ralstonia solanacearum In: Encyclopidia of Microbiology, J Lederberg, ed Academic Press, San Diego, CA Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 37 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT Hikichi, Y 2016 Interactions between plant pathogenic bacteria and host plants during the establishment of susceptibility J Gen Plant Pathol 82, pp 326–331 Hong, J.C 2005 Detection of Ralstonia solanacearum In Irrigation Ponds and Semiaquatic Weeds, And Its Chemical Treament In Water Master thesis University of Florida Florida, America Howard, L.R., S.T Talcott, C.H Brenes and B Villalon 2000 Changes in phytochemical and antioxidant activity of selected pepper cultivars (Capsicum species) as influenced by maturity J Agric Food Chem, pp.1713–1720 Huiskonen, J.T., H.M Kivelä, D.H Bamford, and S.J Butcher 2004 The PM2 virion has a novel organization with an internal membrane and pentameric receptor binding spikes Nature Structural & Molecular Biology, Vol 11, No.9, pp 850856 Janse, J 1996 Potato brown rot in western Europe-history, present occurrence and some remarks on possible origin, epidemiology and control strategies Bull OEPP/EPPO, 26, pp 679-695 Koffuor G.A., A Boye, J Ofori-Amoah 2014 Antiinflammatory and safety assessment of Polyscias fruticose (L.) Harms (Araliaceae) leaf extract in ovalbumin-induce asthma J Phytopharmacol 3:337–42 Koffuor, A.G., A Boye, J Ofori-Amoah, S Kyei, S Abokyi, R.A Nyarko, R.N Bangfu 2014 Anti-inflammatory and safety assessment of Polyscias fruticosa (L.) Harms (Araliaceae) leaf extract in ovalbumin-induced asthma The Journal of Phytopharmacology 3(5): 337-342 Kropinski, A.M., A Mazzocco, T.E Waddell, E Lingohr, R.P Johnson 2009 Enumeration of bacteriophages by double agar overlay plaque assay Methods Mol Biol, 501:69-76 Kutter, E and A Sulakvelidze 2005 Bacteriophage: biology and application CRC Press The United State, pp.450 Leiman, P.G., F Arisaka, M.R van Raaij, V.A Kostyuchenko, A.A Aksyuk, S Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 38 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT Kanamaru and M.G Rossmann 2010 Morphogenesis of the T4 tail and tail fibers Virology Journal, Vol 7, pp 355 Lim, T.K 2013 Edible Medicinal and Non – Medicinal Plants Springer Science & Business Media Germany, pp 606 Lurz, R., E.V Orlova, D Günther, P Dube, A Dröge, F Weise, M van Heel and P Tavares 2001 Structural organisation of the head-to-tail interface of a bacterial virus Journal of Molecular Biology, 310: 1027-37 Lutomski, J., T.C Luan, T.T Hoa 1992 Polyacetylenes in the Araliaceae family, Part IV The antibacterial and antifungial activities of two main polyacetylenes from Panax vietnamensis Ha et Grushv and Polyscias fruticosa (L.) Harms Herba Pol.38, page 137-140 Mansfield, J., S Genin, S Magori, V Citovsky, M Sriariyanum, P Ronald 2012 Top 10 plant pathogenic bacteria in molecular plant pathology Mol Plant Pathol 13:614–629 Obradovic, A., J.B Jones, M.T Momol, B Balogh, and S.M Olson 2004 Management of tomato bacterial spot in the field by foliar applications of bacteriophages and SAR inducers Plant Dis 88, pp.736–740 Orlova, E.V 2012 Bacteriophages and their structural organisation Rijeka, Croatia: InTech, pp: 3-30 Orlova, E.V., B Gowen, A Dröge, A Stiege, F Weise, R Lurz, M van Heel and P Tavares 2003 Structure of a viral DNA gatekeeper at 10 A resolution by cryoelectron microscopy The EMBO Journal, 6:1255 – 62 Plisson, C., H.E White, I Auzat, A Zafarani, C São-José, S Lhuillier, P Tavares and E.V Orlova 2007 Structure of bacteriophage SPP1 tail reveals trigger for DNA ejection The EMBO Journal, Vol 26, No.15, pp 3720-3728 Raupach, G.S and J.W Kloepper 1998 Mixtures of plant growth-promoting rhizobacteria enhance biological control of multiple cucumber pathogens Phytopathology 88, pp.1158-1164 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 39 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT São-José, C., S Lhuillier, R Lurz, R Melki, J Lepault, M.A Santos, and P Tavares 2006 The ectodomain of the viral receptor YueB forms a fiber that triggers ejection of bacteriophage SPP1 DNA.The Journal of Biological Chemistry, Vol 281, No.17, pp 11464-11470 Schnabel, E.L and A.L Jone 2000 Isolation and characterization of five Erwinia amylovora bacteriophages and assessment of phage resistance in strains of Erwinia amylovora Appl Environ Microbiol 67, pp.59–64 Schnabel, E.L and A.L Jones 2001 Isolation and characterization of five Erwinia amylovora bacteriophages and assessment of phage resistance in strains of Erwinia amylovora Appl Environ Microbiol 67, pp 59–64 Smith, H.W and M.B Huggins 1982 Successful treatment of experimental Escherichia coli infections in mice using phage: its general superiority over antibiotics J Gen Microbiol 128, pp 307–318 Smith, H.W and M.B Huggins 1983 Effectiveness of phages in treating experimental Escherichia coli diarrhoea in calves, piglets and lambs J Gen Microbiol 129, pp.2659–2675 Stéphan G 2010 Molecular traits controlling host range and adaptation to plants in Ralstonia solanacearum New Phytologist, 187: 920 – 928 Tanaka, H., H Negishi and H Maeda 1990 Control of tobacco bacteria wilt by an avirulent strain of Pseudomons solanacearum M4S and its bacteriophage Ann.Phytopathol.Soc.Jpn, 56:243 – 46 Varadharajan R, Rajalingam D 2011 Diuretic activity of Polyscias fruticosa (L.) Harms Int J Innovative Drug Discov 1:15–18 Vo, D.H., S Yamamura, Ohtani, K Kasai, R Yamasaki, K Nham, N.T Chau, H.M 1998 Oleane saponins from Polyscias fruticosa L Harms Phytochemistry 47, page 451-457 Wall, M.M., C.A Waddell and P.W Bosland Variation in beta-carotene and total carotenoid content in fruits of Capsicum HortScience 2001, 36, pp.746–749 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 40 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT Williamson, K.E., M Radosevich, and K.E Wommack Abundance and diversity of virusesin six Delaware soils 2005 Appl Environ Microbiol 71(6): 3119–25 Wommack, K.E and R.R Colwell 2000 Virioplankton, viruses in aquatic ecosystems Microbiology and Molecular Biology Review, 64: 69 – 114 Trang web https://hakufarm.vn/cay-dinh-lang-co-may-loai-va-cach-phan-biet/ (ngày 1/3/2018) https://sinhhocvietnam.vn/dac-tri-heo-ru-than-thu-thoi-qua-heo-vang-tren-cay-ot/ (ngày 21/7/2017) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 41 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT PHỤ LỤC PHỤ LỤC Bảng 11 Đường kính vết tan tạo dịng thực khuẩn thể xâm nhiễm vào vi khuẩn Ralstonia solanacearum RS10 điều kiện phịng thí nghiệm Thực khuẩn 24h 48h 72h Rep 3 2.5 3 3.5 2.5 4 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 4 3.8 3.8 3.5 3.7 3.5 4.2 3.5 4.2 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học ɸDL3 Rep 4 4.5 2.5 3 2.5 3 4.5 4.5 4.5 3.5 3.5 2.5 3.5 4.5 4.7 4.7 3.5 3.5 3.5 3 Rep 3 4 2 4.5 3.5 3.5 4.5 2.5 2.5 2.5 4.5 3.7 3.5 4.5 4.5 3.5 Rep 3 3 2.5 3.5 3.5 2.5 3.5 3.5 3.5 2.5 3.5 3.5 3.5 3.7 4 3.7 3.5 3.7 3.5 3.5 ɸDL6 Rep 3 3 2.5 2.5 3 2.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3 3.5 3.5 3 3.7 3.5 3.7 3.5 3.5 3.5 3.7 3.5 3.5 Rep 3 3 2.5 2.5 3.5 3 4.5 3.5 3.5 3.5 3 3.5 3.5 4.5 3.7 3.5 3.5 3.5 3.2 3.2 3.5 3.5 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT PHỤ LỤC Kết thống kê đường kính vết tan tạo dòng thực khuẩn thời điểm 24 Analysis of Variance Source DF Adj SS Adj MS F-Value P-Value Thực khuẩn 0.06000 0.060000 Error 0.02333 0.005833 10.29 0.033 Total 0.08333 Model Summary S R-sq R-sq(adj) R-sq(pred) 0.0763763 72.00% Means Thực khuẩn N DL3 Mean 65.00% StDev 37.00% 95% CI 3.1333 0.0289 (3.0109, 3.2558) DL6 2.9333 0.1041 (2.8109, 3.0558) Pooled StDev = 0.0763763 Fisher Pairwise Comparisons Grouping Information Using the Fisher LSD Method and 95% Confidence Thực khuẩn N DL3 Mean Grouping 3.1333 A DL6 2.9333 B Means that not share a letter are significantly different Kết thống kê đường kính vết tan tạo dòng thực khuẩn thời điểm 48 Analysis of Variance Source DF Adj SS Adj MS F-Value P-Value Thực khuẩn 0.04167 0.041667 Error 0.01167 0.002917 Total 0.05333 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 14.29 0.019 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT Model Summary S R-sq R-sq(adj) R-sq(pred) 0.0540062 78.13% 72.66% 50.78% Means Thực khuẩn N DL3 Mean StDev 95% CI 3.5167 0.0577 (3.4301, 3.6032) DL6 3.3500 0.0500 (3.2634, 3.4366) Pooled StDev = 0.0540062 Fisher Pairwise Comparisons Grouping Information Using the Fisher LSD Method and 95% Confidence Thực khuẩn N DL3 Mean Grouping 3.5167 A DL6 3.3500 B Means that not share a letter are significantly different Kết thống kê đường kính vết tan tạo dòng thực khuẩn thời điểm 72 Analysis of Variance Source DF Adj SS Adj MS F-Value P-Value Thực khuẩn 0.060000 0.060000 Error 0.001933 0.000483 124.14 0.000 Total 0.061933 Model Summary S R-sq R-sq(adj) R-sq(pred) 0.0219848 96.88% Means Thực khuẩn N DL3 Mean 96.10% StDev 92.98% 95% CI 3.82667 0.01155 (3.79143, 3.86191) DL6 3.6267 0.0289 Pooled StDev = 0.0219848 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học (3.5914, 3.6619) Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 39-2018 Trường ĐHCT Fisher Pairwise Comparisons Grouping Information Using the Fisher LSD Method and 95% Confidence Thực khuẩn N Mean Grouping DL3 3.82667 A DL6 3.6267 B Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học ... l? ??p thực khuẩn từ đất vùng rễ đinh l? ?ng (Polyscias fruticosa L Harms) thành phố Cần Thơ có khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum? ?? thực nhằm tìm dịng thực khuẩn có khả kiểm sốt vi khuẩn Ralstonia. .. TIÊN TIẾN PHÂN L? ??P THỰC KHUẨN TỪ ĐẤT VÙNG RỄ CÂY ĐINH L? ?NG (Polyscias fruticosa L Harms) THÀNH PHỐ CẦN THƠ CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ VI KHUẨN Ralstonia solanacearum CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VI? ?N THỰC HIỆN... khuẩn từ đất vùng rễ đinh l? ?ng (Polyscias fruticosa L Harms) thành phố Cần Thơ có khả ức chế vi khuẩn Ralstonia solanacearum. ” thực với mục đích tìm dịng thực khuẩn triển vọng có khả ức chế vi