Phân tích dư lượng imidacloprid và azoxystrobin bằng phương pháp sắc ký lỏng: trường hợp nghiên cứu trên cây đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms)

Bài viết nghiên cứu quy trình định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) đầu dò UV được thực hiện trên lá Đinh Lăng. Kết quả đạt các yêu cầu về tính phù hợp hệ thống, tính tuyến tính, độ đặc hiệu, độ đúng, giới hạn định lượng và giới hạn phát hiện. Kết quả phân tích cũng cho thấy không còn tồn dư thuốc thử nghiệm trên lá Đinh lăng sau bảy ngày phun thuốc.

Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 03 - 2018 PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG IMIDACLOPRID VÀ AZOXYSTROBIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG: TRƯỜNG HỢP NGHIÊN CỨU TRÊN CÂY ĐINH LĂNG (Polyscias fruticosa (L.) Harms) Nguyễn Phước Định, Lê Hữu Bảo Trân, Võ Thị Tuyết Trâm, Đỗ Văn Mãi Khoa Dược – Điều Dưỡng, Trường Đại học Tây Đô (Email: dinhanan2007@yahoo.com) Ngày nhận: 28/3/2018 Ngày phản biện: 29/4/2018 Ngày duyệt đăng: 10/5/2018 TĨM TẮT Đồng Bằng Sơng Cửu Long có nhiều tiềm sản xuất trồng dược liệu Nhiều lọai thuốc bảo vệ thực vật sử dụng Hai lọai thuốc Imidacloprid Azoxystrobin thuốc bảo vệ thực vật hệ mới, thời gian bán hủy ngắn, có phổ tác dụng rộng, kiểm sốt nhiều đối tượng bệnh hại trồng, kể thảo dược Tuy nhiên chưa có nghiên cứu lưu tồn hai nhóm thuốc dược liệu, nơng dân có sử dụng thuốc Vì thế, có quy trình định lượng nhanh góp phần kiểm soát dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nguyên liệu, xác định thời điểm thu hoạch để nguồn dược liệu sạch, đáp ứng nhu cầu sản phẩm sản xuất thực phẩm chức hay dược phẩm Nghiên cứu quy trình định lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) đầu dò UV thực Đinh Lăng Kết đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, tính tuyến tính, độ đặc hiệu, độ đúng, giới hạn định lượng giới hạn phát Kết phân tích cho thấy khơng tồn dư thuốc thử nghiêm Đinh lăng sau bảy ngày phun thuốc Từ khóa: Dư lượng thuốc, imidacloprid, azoxystrobin, quy trình phân tích, Đinh Lăng Trích dẫn: Nguyễn Phước Định, Lê Hữu Bảo Trân, Võ Thị Tuyết Trâm Đỗ Văn Mãi, 2018 Phân tích dư lượng imidacloprid azoxystrobin phương pháp sắc ký lỏng: Trường hợp nghiên cứu Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế, Trường Đại học Tây Đô 03: 123-137 *Thạc sĩ Nguyễn Phước Định, Khoa Dược - Điều dưỡng, Trường Đại học Tây Đô 123 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 03 - 2018 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU GIỚI THIỆU Nhu cầu sản phẩm ngày cao, đặc biệt sản phẩm đơng dược ngày trọng Ngồi việc trồng lượng nhỏ dược liệu nhà kính để hạn chế sâu bệnh việc trồng chuyên canh dược liệu khu vực rộng lớn tiềm ẩn nhiều nguy phá hoại côn trùng nấm bệnh Lựa chọn thuốc bảo vệ thực vật có hoạt tính cao nhiều đối tượng trùng, nấm bệnh tồn dư độc với người sử dụng ưu tiên hàng đầu vùng chuyên canh Hơn nữa, có quy trình định lượng thuốc giúp xác định thời điểm thu hoạch dược liệu, đảm bảo dược liệu khơng có tồn dư thuốc đồng nghĩa không tồn dư thuốc bảo vệ thực vật Imidacloprid thuốc trừ sâu hệ thuộc nhóm neonicotinoids (Ahmad et al., 2012; Ashorkr et al., 2006), độc với người (Sacramento, 2002), có phổ tác dụng rộng, phòng rầy nâu, rệp sáp, bọ trĩ (Mostafa et al., 2014) Azoxystrobin thuốc trừ nấm nguồn gốc sinh học, thuộc nhóm strobins (Nageswara Rao et al., 2012), độc với người, phổ tác dụng rộng, phòng nhiều bệnh cháy lá, thối rễ (Vojislava Bursic et al., 2007.) Có quy trình định lượng đồng thời imidacloprid azoxystrobin góp phần giúp chứng minh sản phẩm đạt yêu cầu chất lượng, sử dụng chất kiểm soát dịch bệnh Đối tượng chọn thử nghiệm dư lượng Đinh lăng nhỏ với mục tiêu xây dựng quy trình định lượng đánh giá dư lượng hai thuốc sau bảy ngày phun thuốc 2.1 Hóa chất nghiên cứu Imidacloprid Azoxystrobin chuẩn Sigma Aldrich, dung môi sắc ký đạt tiêu chuẩn HPLC, hóa chất lại đạt tiêu chuẩn phân tích 2.2 Đối tượng nghiên cứu Imidacloprid Azoxystrobin lưu tồn thực vật Đinh lăng chọn thử nghiệm dư lượng qua phun thuốc Imidacloprid (100mg/L) Azoxytrobin (250mg/L) theo hướng dẫn sử dụng thuốc bao bì Mẫu thu lúc sáng sớm ngày thứ thứ sau phun thuốc, chứa túi nilon để mát, phân tích ngày 2.3 Phương pháp nghiên cứu Thử nghiệm quy trình định lượng đồng thời Imidacloprid Azoxystrobin HPLC/UV với cột C18 (250 mm x 4,6 mm x μm) Chiết Imidacloprid, Azoxystrobin định lượng chất mẫu Đinh lăng quy trình xây dựng 3.1 Quy trình định lượng (Nguyễn Thị Kim Phụng, 2007) Pha dung dịch mẫu chuẩn imidacloprid ppm azoxystrobin ppm Cân xác lượng chất chuẩn imidacloprid tương ứng với 10 mg, cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung acetonitril vừa đủ Hút xác ml dung dịch chuẩn gốc cho vào bình định mức dung tích 124 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô 100 ml, thêm acetonitril tới vạch lắc kỹ dung dịch chuẩn ppm Làm tương tự với azoxystrobin Dung dịch mẫu chuẩn hỗn hợp ppm Hút ml dung dịch chuẩn imidacloprid ppm hút ml dung dịch chuẩn azoxystrobin ppm vào bình định mức dung tích 10 ml Lọc qua màng lọc 0,45 µm trước đem chạy sắc ký Dung dịch thu hỗn hợp imidacloprid azoxystrobin có nồng độ chất ppm Khảo sát điều kiện phân tích sắc ký Khảo sát phổ UV imidacloprid azoxystrobin để tìm bước sóng chung Tiến hành qt phổ từ 200-400 nm Số 03 - 2018 Tính phù hơp hệ thống Tính phù hợp hệ thống xác định dựa thông số đặc trưng sắc ký như: diện tích pic (S), thời gian lưu (tR), độ phân giải (RS), hệ số đối xứng (AS), số đĩa lý thuyết (N) thông số thường dùng để đánh giá độ ổn định hệ thống tiêm lặp lại lần Yêu cầu: - Số đĩa lý thuyết ≥ 2000 - Giá trị RSD thời gian lưu ≤ 1,0% diện tích pic phải ≤ 2,0% - Hệ số đối xứng pic phải khoảng 0,8 - 1,5 - Độ phân giải pic pic phụ phải lớn 1,5 Khảo sát thành phần pha động Tính đặc hiệu Tiến hành phân tích mẫu chuẩn với thay đổi thành phần pha động Dung dịch chất chuẩn hỗn hợp imidacloprid azoxystrobin pha loãng từ dung dịch chuẩn gốc Thành phần dung môi pha động chọn để khảo sát acetonitril (ACN) nước với tỉ lệ thể tích khác Khảo sát tốc độ dòng Ảnh hưởng tốc độ dòng đến q trình sắc ký khảo sát cách tiến hành chạy sắc ký hỗn hợp imidacloprid azoxystrobin với tốc độ: 0,5 ml/phút; 0,8 ml/phút; ml /phút; 1,2 ml/phút; 1,5 ml/phút 2.3.2 Thẩm định quy trình (Theo phương pháp cơng bố Bộ Y tế, (2009) ICH (1996)) Tiến hành sắc ký mẫu dung môi, mẫu chuẩn imidacloprid, azoxystrobin mẫu giả định Mẫu trắng: dung mơi pha động/dung mơi hòa tan mẫu hay pha loãng mẫu Mẫu chuẩn: dung dịch chứa chất chuẩn imidacloprid, dung dịch chứa chất chuẩn azoxystrobin, dung dịch chứa hỗn hợp hai chất chuẩn Mẫu giả định: dịch chiết dược liệu (khơng có chất cần phân tích) cho thêm chất chuẩn hỗn hợp imidacloprid azoxystrobin Trong pic mẫu trắng, chuẩn imidacloprid, azoxystrobin tách hoàn toàn mẫu giả định phải có pic có thời gian lưu giống với pic chất chuẩn pic tách hoàn toàn với pic lại có 125 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) Giới hạn phát (LOD) giá trị nồng độ thấp chất phân tích mà hệ thống phân tích cho tín hiệu phân tích có nghĩa so với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu đường Giới hạn định lượng (LOQ) xem nồng độ thấp chất phân tích mà hệ thống phân tích định lượng với tín hiệu phân tích có nghĩa định lượng so với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu Để xác định LOD LOQ thiết bị, ta tiến hành sau: pha loãng từ 5-7 lần mẫu chuẩn chứa hỗn hợp imdacloprid azoxystrobin nồng độ ppm chuẩn bị mẫu trắng (chứa dung môi pha động) sau tiêm vào thiết bị HPLC Đến chiều cao pic = lần chiều cao đường lấy LOD Tính tuyến tính Khoảng tuyến tính imidacloprid azoxystrobin khảo sát cách pha dãy dung dịch chuẩn khoảng từ 0,4-1,6 ppm có nồng độ tăng dần sau: 0,4 ppm; 0,8 ppm; ppm; 1,2 ppm; 1,6 ppm ứng với 40%, 80%, 100%, 120%, 160% Sau đó, tiến hành phân tích với điều kiện tối ưu khảo sát Các giá trị diện tích pic thu được, xây dựng phương trình hồi quy diện tích pic nồng độ dãy chuẩn Độ xác Độ lặp lại phép đo: Độ lặp lại Số 03 - 2018 hệ thống sắc ký khảo sát cách tiêm lặp lần mẫu chuẩn hỗn hợp imidacloprid azoxystrobin vào hệ thống HPLC Kết đánh giá thông qua độ lệch chuẩn (SD), độ lệch chuẩn tương đối (RSD) diện tích pic thời gian lưu Độ xác trung gian: Tiến hành độ lặp lại làm ngày khác với điều kiện người thực Độ Thực ba mức nồng độ 80%, 100% 120% nồng độ đo Mỗi mức pha ba dung dịch, dung dịch tiến hành sắc ký lần Tính diện tích pic dựa vào phương trình hồi quy suy nồng độ tìm thấy So với nồng độ pha tính tỷ lệ phục hồi Tỷ lệ phục hồi mức nồng độ: 98,0% – 102% cho quy trình phân tích định lượng RSD tỷ lệ phục hồi mức nồng độ phải ≤ 2,0 % mức nồng độ 2.3.2 Chiết định lượng Khảo sát dung môi chiết mẫu Cho vào bình nón g Đinh lăng thêm hai chuẩn, cho tiếp khoảng 20 ml dung môi chiết Lắc siêu âm khoảng 10 phút Lọc lấy dịch chiết lần Lặp lại qui trình lần Gộp dịch chiết lần lại Tiến hành loại tạp sơ cách lắc với 10 ml H2O Loại bỏ lớp nước, lớp lại đem thu hồi dung môi bếp đun cách thủy nhiệt độ 50 oC Hòa cắn với 10 ml ACN, lắc với khoảng 10 ml PE Lấy lớp ACN đem 126 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô khoảng ml Chấm dịch chiết lên mỏng tiến hành sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi cloroform – ethylacetat (1:1) Sau quan sát đèn UV bước sóng 254 nm Khảo sát phương pháp loại tạp - Chiết lỏng – lỏng Cho vào bình nón g Đinh lăng thêm hai chuẩn, cho tiếp khoảng 20 ml dung môi tối ưu chọn Lắc siêu âm khoảng 10 phút Lọc lấy dịch chiết lần Lặp lại qui trình lần Gộp dịch chiết lần lại Tiến hành loại tạp sơ cách lắc với 10 ml H2O Loại bỏ lớp nước, lớp lại đem cô thu hồi dung môi bếp đun cách thủy nhiệt độ 50 oC Hòa cắn với 10 ml ACN, lắc với khoảng 10 ml ether dầu hỏa Lấy lớp ACN đem khoảng ml Tiến hành phân tích HPLC Số 03 - 2018 ACN Gộp phân đoạn, đem ml, lọc qua màng lọc 0,45 µm Tiến hành phân tích hệ thống HPLC/UVVis - Chiết lỏng – lỏng silicagel Khả loại màu phụ thuộc vào chất chất hấp phụ dung môi rửa giải Trong phân tích sắc ký, silicagel chất hay sử dụng để loại tạp, khử màu có diện tích bề mặt lớn có khả hấp phụ lưu giữ chất màu Định lượng mẫu đinh lăng Mẫu thu lúc sáng sớm vào ngày thứ ba thứ bảy sau phun thuốc Sau phân tích theo quy trình xây dựng KẾT QUẢ 3.1 Xây dựng quy trình định lượng - Chiết lỏng – lỏng than hoạt Khảo sát điều kiện phân tích sắc ký Chuẩn bị mẫu tương tự Sử dụng thêm phương pháp loại tạp than hoạt Cho khoảng 0,1 g than hoạt vào dịch chiết, sau rửa giải phân đoạn Mỗi phân đoạn sử dụng 10 ml Phổ UV imidacloprid azoxystrobin để tìm bước sóng chung Tiến hành quét phổ từ 200-400 nm 1.500 Abs 1.000 azoxystropin xystrobin imidacloprid 0.500 0.000 -0.500 200.00 250.00 300.00 nm 350.00 400.00 Hình 3.1 Phổ hấp thụ azoxystrobin imidacloprid acetonitril 127 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đơ Hình 3.1 cho thấy azoxystrobin có độ hấp thu cực đại bước sóng 207 nm, imidacloprid 270 nm Hai phổ có độ hấp thu giao bước sóng 250 nm Chọn bước sóng 250 nm để định Số 03 - 2018 lượng đồng thời hai chất Khảo sát thành phần pha động Hệ dung môi ACN - nước (55:45) cho pic đẹp tách tốt Hình 3.2 Sắc ký đồ ACN/ Nước (55%:45%) Khảo sát tốc độ dòng Tốc độ dòng ml/phút cho thấy thời gian lưu giảm dần, pic rõ đẹp, hai pic tách hồn tồn 3.2 Thẩm định quy trình Tính phù hơp hệ thống Hình 3.3 Kết sắc kí đồ khảo sát tính phù hợp hệ thống 128 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 03 - 2018 Bảng 3.1 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống Imidacloprid Số lần tiêm mẫu Trung bình %RSD SD tR (phút) 3,954 3,949 3,969 3,947 3,974 3,960 3,957 0,309 0,012 Spic (µAU x giây) 626144 634100 638942 642210 643648 660550 640932 1,797 11517 As Rs imi N 1,140 1,126 1,138 1,156 1,162 1,128 1,142 1,282 0,015 0,941 0,955 0,967 0,942 0,951 0,960 0,953 0,011 0,0101 39194,789 39100,101 39103,700 38679,280 39004,980 38243,829 38887,780 0,933 362,722 Bảng 3.2 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống Azoxystrobin Số lần tiêm mẫu Trung bình %RSD SD tR (phút) 12,058 12,081 12,165 12,072 12,215 12,144 12,122 0,513 0,012 S (µAU x giây) 1805578 1814130 1824734 1832351 1835474 1828874 1823524 0,631 11498 Bảng 3.1 3.2 cho thấy giá trị độ lệch chuẩn tương đối thời gian lưu (tR), diện tích pic (S), số đĩa lý thuyết không 2%, hệ số đối xứng (AS) nằm khoảng 0,8-1,5, độ phân giải As 1,013 1,009 1,007 1,021 1,014 0,999 1,010 0,731 0,007 Rs azo 2,012 2,212 2,411 2,254 2,211 2,231 1,889 21,12 0,399 N 76407,704 75540,833 75960,530 76049,748 76593,872 73276,171 75638,143 1,605 1213,992 (RS) lớn 1,5 hệ thống có tính phù hợp, tiếp tục tiến hành bước đánh giá với điều kiện sắc kí tương tự 129 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đơ Số 03 - 2018 Tính đặc hiệu Hình 3.4 Sắc ký đồ đánh giá độ đặc hiệu Imidacloprid Azoxystrobin Hình 3.4 cho thấy dung dịch chuẩn, sắc ký đồ xuất hai pic Imidacloprid Azoxystrobin có thời gian lưu 3,959 phút 12,210 phút Đối với sắc ký đồ mẫu trắng, sắc ký đồ khơng có pic xuất tương ứng thời gian lưu Imidacloprid Azoxystrobin Đối với mẫu giả định, sắc ký đồ cho hai pic tương ứng với pic Imidacloprid Azoxystrobin sắc ký đồ dung dịch chuẩn thời gian lưu Vì quy trình phân tích có tính đặc hiệu Xác định LOD LOQ thiết bị Hình 3.5 Hỗn hợp imidacloprid azoxystrobin nồng độ 0,048 ppm 130 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 03 - 2018 Hình 3.6 Hỗn hợp imidacloprid azoxystrobin nồng độ 0,0048 ppm Hình 3.5 3.6 cho thấy nồng độ Azoxystrobin 0,048 ppm imidacloprid 0,0048 ppm chiều cao = lần đường Do đó: - LOQ Azoxystrobin = = - LOD Azoxystrobin 0,048 ppm - LOD Imidacloprid 0,0048 ppm 10 x 0,048 = 0,16 ppm - LOQ Imidacloprid = = 10 LOD 10 LOD 10 x 0,0048 = 0,016 ppm Tính tuyến tính Từ suy ra: Bảng 3.3 Phương trình hồi quy Imidacloprid Azoxystrobin Chất phân tích Phương trình hồi quy imidacloprid azoxystrobin y = 71350x + 10098 y = 168301x + 13071 Bảng 3.3 cho thấy tỷ lệ diện tích pic sắc ký nồng độ phụ thuộc tuyến tính với cách chặt chẽ với hệ số tương quan cao đạt yêu cầu Khoảng nồng độ tuyến tính rộng hai chất Imidacloprid Azoxystrobin từ 0,4-1,6 ppm Do đó, ta sử dụng Hệ số tương quan R2 R2=0,998 R2=0,997 Khoảng nồng độ tuyến tính (ppm) 0,4-1,6 0,4-1,6 phương pháp đường Imidacloprid azoxystrobin mẫu thử khoảng tuyến tính khảo sát 131 Độ xác - Độ lặp lại phép đo Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 03 - 2018 Bảng 3.4 Độ lặp lại hệ thống HPLC với mẫu Azoxystrobin Thời gian lưu Azoxystrobin TT Thời gian lưu 12,081 12,077 12,132 12,167 12,205 12,311 Diện tích pic Azoxystrobin Các thơng số thống kê Diện tích Các thơng số thống kê Gía trị trung bình Xtb=12,162 Độ lệch chuẩn SD=0,088 Độ lệch chuẩn tương đối RSD(%)=0,72% 6472807 6535964 6475974 6419486 6475006 6592855 Giá trị trung bình Xtb=6495348.67 Độ lệch chuẩn SD=60348.26 Độ lệch chuẩn tương đối RSD(%)=0,92% Bảng 3.5 Độ lặp lại hệ thống HPLC mẫu Imidaclopid TT Thời gian lưu Imidacloprid Thời gian lưu Các thông số thống kê 3,959 Gía trị trung bình Xtb=3,959 3,964 Độ lệch chuẩn 3,971 SD=0,0188 3,966 Độ lệch chuẩn tương đối 3,973 RSD(%)=0,47% 3,922 Bảng 3.4 3.5 cho thấy hệ thống sắc ký lỏng có độ lặp lại tốt Đối với phép định lượng, độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic 0,92 % 1,45 % ứng Diện tích pic Imidacloprid Diện tích Các thơng số thống kê 2375675 Gía trị trung bình 2360311 Xtb=2383429,5 2339617 Độ lệch chuẩn 2375992 SD=34611,11 2419586 Độ lệch chuẩn tương đối 2429396 RSD(%)=1,45% với Azoxystrobin Imidacloprid Quy trình phân tích ổn định áp dụng để phân tích mẫu thử - Độ xác trung gian Bảng 3.6 Độ xác trung gian mẫu Imidacloprid Số lần đo Trung bình RSD Ngày 2367836 2301897 2401211 2315012 2342202 2296789 2337491 1,75% Diện tích pic (μAU*giây) Ngày Ngày 2341037 2352453 2401004 2390451 2390312 2385421 2352789 2410207 2321107 2331652 2321775 2314473 2354671 2364109 1,44% 1,57% 132 Kết 2352090 1,59% Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 03 - 2018 Bảng 3.7 Độ xác trung gian mẫu Azoxystropin Số lần đo Trung bình RSD Ngày 6399178 6400153 6403347 6421182 6501122 6467781 6432127 0,66% Diện tích pic (μAU*giây) Ngày Ngày 6417754 6475441 6438765 6390435 6443221 6485421 6432119 6410379 6421277 6478553 6456423 6455763 6432927 6449332 0,23% 0,61% Bảng 3.7 bảng 3.8 cho thấy quy trình phân tích có độ xác cao (RSD diện tích pic ≤ 2%) Quy trình định lượng đồng thời hai chất Imidacloprid Azoxystrobin Kết 6438128 0,5% phương pháp HPLC có tính đặc hiệu, miền giá trị rộng độ xác cao, quy trình phân tích ổn định áp dụng để phân tích mẫu thử Độ Bảng 3.8 Kết khảo sát độ phương pháp với mẫu Imidacloprid Imidacloprid Mức nồng độ đo (%) 80% 100% 120% Diện tích pic (µAU x giây) Nồng độ (µg/ml) Nồng độ đo Tỷ lệ hồi phục tính từ phương trình mức (µg/ml) % hồi quy 205027 208279 205482 245580 250561 250227 292776 286531 288721 2 2,5 2,5 2,5 3 1,99 2,03 2,00 2,48 2,54 2,54 3,06 2,98 3,01 133 101,00 98,29 99,97 101,00 98,12 98,25 98,00 100,30 99,60 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 03 - 2018 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ phương pháp với Azoxystrobin Azoxystrobin Mức nồng độ đo (%) 80% 100% 120% Diện tích pic (µAU x giây) 486013 478894 488829 580466 589840 587042 677931 669835 670075 Nồng độ (µg/ml) Nồng độ đo tính từ phương trình mức (µg/ml) hồi quy 2,02 2,01 2,03 2.5 2,50 2.5 2,59 2.5 2,53 3,00 2,96 296 Bảng 3.8 3.9 cho thấy tỷ lệ phục hồi mức nồng độ Imidacloprid Azoxystrobin nằm khoảng 98102% nên phương pháp đạt yêu cầu độ Như quy trình định lượng imidacloprid Azoxystrobin phương pháp HPLC có tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính rộng, độ xác độ đạt yêu cầu 3.2 Chiết định lượng Đánh giá hiệu dung môi chiết Dung môi diclorometan chiết hiệu dịch chiết Chọn diclorometan làm dung môi chiết mẫu Tỷ lệ hồi phục % 98,98 99,25 98,28 99,79 98,41 98,46 99,82 101,22 101,48 Phương pháp loại tạp, độ thu hồi Chiết lỏng – lỏng Sau phân tích dịch chiết HPLC với chuẩn, kết độ thu hồi chiết lỏng – lỏng đạt 90% Chiết lỏng – lỏng than hoạt Chiết lỏng – lỏng kết hợp than hoạt có ưu điểm than hoạt có khả hấp phụ tốt chất màu cho kết sắc ký đồ tách tốt độ thu hồi thấp hơn, khoảng 80% Chiết lỏng – lỏng silicagel Silicagel giữ lại chất nhựa loại bỏ số chất màu dịch chiết Tuy nhiên độ thu hồi phương pháp khoảng 80% 134 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đơ Số 03 - 2018 Hình 3.7 Kết khảo sát loại tạp than hoạt Bảng 3.10 Kết độ thu hồi phương pháp chiết làm Imidacloprid Azoxytrobin Đinh lăng Phương pháp LLE Azoxystrobin LLE + than hoạt LLE + silicagel LLE Imidacloprid LLE + than hoạt LLE + silicagel Hàm chuẩn (ppm) 4 4 4 Phương pháp chiết diclorometan làm lắc phân bố cho sắc ký lượng Hàm lượng thu Độ thu hồi (%) thêm (ppm) 3,6 3,2 3,0 3,7 2,9 3,0 90 80 75 92,5 72,5 75 đồ độ thu hồi khoảng 90% Định lượng mẫu đinh lăng Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu thử ngày thứ ba thứ bảy mẫu chuẩn 135 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 03 - 2018 Bảng 3.14 Kết định lượng Imidacloprid Azoxytrobin đinh lăng Imidacloprid Azoxystrobin Hàm lượng (mg/kg) ngày sau phun 0,1 0,2 Sau ba ngày phun thuốc theo liều lượng hướng dẫn nhà sản xuất, hàm lượng Imidacloprid (0.1 ppm) Azoxystrobin (0,2 ppm) ngưỡng quy định chung chất rau Sau bảy ngày phun thuốc, Đinh lăng khơng dư lượng imidacloprid azoxytrobin KẾT LUẬN Nghiên cứu thử nghiệm quy trình định lượng đồng thời Imidacloprid azoxystrobin HPLC/UV-VIS với tỷ lệ pha động nước - acetonitril (45:55), tốc độ dòng ml/phút, thể tích mẫu 20 µl, bước sóng 250 nm Phương pháp có độ lặp lại với RSD diện tích pic Imidacloprid 1,45% RSD diện tích pic Azoxystrobin 0,92% có độ xác trung gian cao với RSD ≤ 2% Phương pháp có phụ thuộc tuyến tính nồng độ chất phân tích với hệ số tương quan hồi quy ≥ 0,997 (hay R2 ≥ 0,995) đạt yêu cầu định lượng Độ nằm khoảng 98-102% nên quy trình đạt yêu cầu phân tích định lượng Qua kết phân tích Imidacloprid Azoxystrobin khơng tồn dư Đinh lăng sau bảy ngày phun thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO Ahmad Baig Sajad Et al, 2012 Imidacloprid residues in vegetables, soil Hàm lượng (mg/kg) ngày sau phun - and water in the southern Punjab, Pakistan Journal of Agricultural Technology 8(3), pp.903-916 Ashorkr et al, 2006 Persistence and fate of Carbosulfan and Imidacloprid residue in potato plants Central Agricultural Pesticides Laboratory Agricultural Research Centre, Egypt Bộ Y tế, 2009 Hướng dẫn ASEAN thẩm định quy trình phân tích, Phụ lục –Thơng tư 22/2009/TTBYT Quy định đăng ký thuốc ICH Topic Q2B, 1996 Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology Mostafa A Abbassy, Mamdouh A Marzouk, Hoda M.Nasr, Awatef S Mansy, 2014 Analytical Determination of imidacloprid and tetraconazole residues in Cucumber plant after Whitely and Powdery mildew control, Vol 1, (2), pp 1-15 Nageswara Rao Et al, 2012 Development and Validation of HPLCUV method for Simultanous determination of Strobilurin fungicide residues in tomato fruits followed by matrix solid phase Disperision (MSPD) Department of Analytical Chemistry International Insitiuate of Biotechnology and Toxicology 3(11) pp, 113-118 136 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Nguyễn Thị Kim Phụng, 2007 Phương pháp cô lập hợp chất hữu Nhà xuất Đại học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh, tr 247 Sacramento C.A, 2002 HPLC Determination of Total Imidacloprid Số 03 - 2018 Vegetation, Center for Analytical Chemistry, California, (916) 262-2080 Vojislava Bursic, Sanja Lazic, Vera Stozsin, Ferenc Bagi, Ferenc Balaz, 2007 Determination of azoxystrobin residues in cucumberrs pp 257-260 A HPLC METHOD FOR DETERMINATION OF IMIDACLOPRID AND AZOXYSTROBIN RESIDUES: CASE STUDY IN POLYSCIAS FRUTICOSA (L.) HARMS Nguyen Phuoc Dinh, Le Huu Bao Tran, Vo Thi Tuyet Tram and Do Van Mai Faculty of Pharmacy and Nursing, Tay Do University (Email: dinhanan2007@yahoo.com) ABSTRACT The Mekong Delta has great potential for crop and medicinal plants production Plant protection chemicals are widely used The new pesticides, Imidacloprid and Azoxystrobin, have broad spectrum, effective control of pests, and pathogens on plants with short half life Currently, there is no simultaneous quantitative procedures for finding the resisue of these substances Therefore, it is necessary to study a fast quantitative method to determine the residue of pesticides on raw materials for better deciding harvesting time This activity leads to obtain the good materials which can meet the requirement of clean products for functional foods or medicine The quantitative liquid chromatography (HPLC) of UV probes was carried out on the leaves of Polyscias fruticosa (l.) Harms The results reach the requirements for system suitability, linearity, specificity, correctness, quantitative limits and detection limits Analytical results also showed that there was not detected of these pesticides residue on the leaves after seven days spraying Keywords: Pesticide residue, Imidacloprid, Azoxystrobin, HPLC method, Polyscias fruticosa (L.) Harms 137 ... HPLC, hóa chất lại đạt tiêu chuẩn phân tích 2.2 Đối tượng nghiên cứu Imidacloprid Azoxystrobin lưu tồn thực vật Đinh lăng chọn thử nghiệm dư lượng qua phun thuốc Imidacloprid (100mg/L) Azoxytrobin... nilon để mát, phân tích ngày 2.3 Phương pháp nghiên cứu Thử nghiệm quy trình định lượng đồng thời Imidacloprid Azoxystrobin HPLC/UV với cột C18 (250 mm x 4,6 mm x μm) Chiết Imidacloprid, Azoxystrobin. .. lọc 0,45 µm trước đem chạy sắc ký Dung dịch thu hỗn hợp imidacloprid azoxystrobin có nồng độ chất ppm Khảo sát điều kiện phân tích sắc ký Khảo sát phổ UV imidacloprid azoxystrobin để tìm bước sóng