Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn cao ethyl acetate EA1 cây chìa vôi (cissus modeccoides planch )​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Nguyễn Ngọc Tín NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN CAO ETHYL ACETATE EA1 CÂY CHÌA VƠI (Cissus modeccoides Planch.) ḶN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT Thành phố Hồ Chí Minh – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Nguyễn Ngọc Tín NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN CAO ETHYL ACETATE EA1 CÂY CHÌA VƠI (Cissus modeccoides Planch.) Chun ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC KHOA HỌC VẬT CHẤT NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT Thành phố Hồ Chí Minh – 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi tên Nguyễn Ngọc Tín, học viên cao học chun ngành hóa hữu Tơi xin cam đoan luận văn Thạc sĩ: “Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn cao ethyl acetate EA1 chìa vôi Cissus modeccoides Planch.” thực hướng dẫn TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết Các số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực, có nguồn gốc rõ ràng Theo hiểu biết tài liệu tham khảo, kết nghiên cứu luận văn chưa công bố bất cứ nghiên cứu khác Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Ngọc Tín LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu thực phòng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên, khoa Hóa học, trường Đại học Sư phạm thành phố Hồ Chí Minh Em xin chân thành cảm ơn cô Nguyễn Thị Ánh Tuyết tận tình hướng dẫn giúp đỡ em q trình thực khóa luận tốt nghiệp Cô không hỗ trợ cho em mặt kiến thức khoa học kỹ mà truyền cho em niềm đam mê nghiên cứu khoa học Đó hành trang quý báu cho em bước đường tương lai sau Em xin hết lịng cảm ơn q Thầy Cơ phịng hợp chất thiên nhiên nói riêng Thầy Cơ khoa Hóa học – trường Đại học Sư phạm thành phố Hồ Chí Minh nói chung Các Thầy Cơ tận tình hướng dẫn, giảng dạy, truyền thụ cho em nhiều kiến thức khoa học quý báu suốt thời gian em học trường Em xin gửi lời cảm ơn đến bạn phòng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên Trường đại học Sư phạm thành phố Hồ Chí Minh tận tình trao đổi kinh nghiệm quý báu tạo mọi điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực đề tài MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỜ MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu 4 Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN Các nghiên cứu đặc điểm thực vật Các nghiên cứu dược tính 2.1 2.2 Dược tính theo y học cổ truyền Dược tính theo y học đại 2.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 19 2.1 Hóa chất, thiết bị, phương pháp 19 2.1.1 Hóa chất 19 2.1.2 Thiết bị 19 2.1.3 Phương pháp tiến hành 19 2.2 2.3 Nguyên liệu 20 Điều chế loại cao 20 2.4 Phân lập số hợp chất hữu phân đoạn cao ethyl acetate EA1 21 2.4.1 Sắc kí cột silica gel phân đoạn cao ethyl acetate EA1 21 2.4.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn HEA2 21 2.4.3 Sắc kí cột silica gel phân đoạn HEA6 22 2.4.4 Sắc kí cột silica gel phân đoạn HEA8 23 2.4.5 Sắc kí cột silica gel phân đoạn HEA11 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM1 27 3.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM2 28 3.3 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM3 30 3.4 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM4 33 3.5 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM6 35 3.6 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM8 37 3.7 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM9 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt H-NMR Tiếng Anh Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance  Ac C d dd EA g Glu H Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance Chemical shift Acetone Chloroform Doublet Double of doublet Ethyl acetate Gram Glucopyranosyl n-Hexane HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence 13 C-NMR HSQC Hz J m Me mg MHz ppm Rf RP-18 s SKC SKLM t UV Heteronuclear Single Quantum Correlation Hertz Coupling constant Multiplet Methanol Miligram Mega Hertz Part per million Retention factor Reversed Phase-18 Singlet Triplet Ultra Violet Tiếng Việt Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon (13) Độ chuyển dịch hoá học Mũi đôi Mũi đôi đôi Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết Hằng số ghép spin Mũi đa Một phần triệu Pha đảo C-18 Mũi đơn Sắc ký cột Sắc ký lớp mỏng Mũi ba Tia cực tím DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Dược tính theo y học đại số lồi thuộc chi Cissus Bảng 1.2 Một số hợp chất lập từ số lồi thuộc chi Cissus Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel phân đoạn cao ethyl acetate EA1 18 Bảng 2.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn HEA2 19 Bảng 2.3 Sắc kí cột silica gel phân đoạn HEA6 19 Bảng 2.4 Sắc kí cột silica gel phân đoạn HEA8 20 Bảng 2.5 Sắc kí cột silica gel phân đoạn HEA11 21 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM1 hợp chất so sánh 24 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM2 hợp chất so sánh 26 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM3 hợp chất so sánh 28 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM4 hợp chất so sánh 31 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM6 hợp chất so sánh 33 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM8 hợp chất so sánh 35 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM9 hợp chất so sánh 37 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hoa Chìa vơi Hình 3.1 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM1 24 Hình 3.2 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM3 28 Hình 3.3 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM4 cấu trúc hợp chất vitexin 30 Hình 3.4 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM6 33 Hình 3.5 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM8 34 Hình 3.6 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM9 36 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế phân đoạn cao ethyl acetate EA1 từ Chìa vôi 17 Sơ đồ 2.2 Quy trình cô lập hợp chất CM4, CM6, CM8 22 Sơ đồ 2.3 Quy trình cô lập hợp chất CM1, CM2, CM3, CM9 22 Mặt khác, phổ COSY cho thấy tương quan proton H3-17/ H-3/H2-4 tương quan H2-10 H2-9 giúp dự đoán có gắn kết nhóm methylene với Từ số liệu phổ trên, kết hợp với so sánh tài liệu tham khảo (bảng 3.3) [27], cấu trúc CM3 đề nghị lasiodiplodin Hóa học lập thể C-3 chưa xác định Hình 3.2 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM3 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM3 hợp chất so sánh CM3 (CDCl3) Vị trí carbon 10 11 12 13 14 15 16 17 18 δH (ppm) (J-Hz) 5.28 (m) 1.93 (m) 1.63 (m) 2.67 (dt, 13.5, 9.0) 2.49 (dt, 13.5, 6.5) 6.23 (d, 2.0) 6.24 (d, 2.0) 1.32 (d, 6.0) 3.75 (s) δC (ppm) 168.8 72.3 32.4 21.3 26.5 24.2 25.5 30.1 30.4 143.1 108.3 157.4 97.0 158.0 117.8 19.5 55.9 Lasiodiplodin (CD3OD) [27] δC δH (ppm) (J-Hz) (ppm) 5.28 (m) 2.77 (m) 2.43 (m) 6.20 (d, 2.2) 6.22 (d, 2.2) 1.33 (d, 6.5) 3.77 (s) 169.5 72.6 32.3 21.3 26.4 24.2 25.5 30.1 30.4 143.0 108.4 157.8 97.0 157.9 117.1 19.5 55.8 3.4 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM4 Hợp chất CM4 (7.3 mg) thu từ phân đoạn HEA11.11 với đặc điểm sau: - Chất bột vô định hình, màu vàng, tan tốt dung môi DMSO - Sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi C:Me 85:15 cho vết hình H2SO4 20%, hơ nóng bảng mỏng cho vết tròn màu vàng (Rf = 0.33)  Phổ 1H-NMR (DMSO-d6): phụ lục  Phổ 13C-NMR (DMSO-d6): phụ lục 4a  Phổ HSQC (DMSO-d6): phụ lục 4b  Phổ HMBC (DMSO-d6): phụ lục 4c, 4d, 4e  Phổ COSY (DMSO-d6): phụ lục 4f BIỆN LUẬN CẤU TRÚC Phổ 1H-NMR hợp chất CM4 cho thấy diện tín hiệu cộng hưởng proton –OH kiềm nối H 13.12 (s), bốn tín hiệu cộng hưởng proton vòng thơm H 8.14 (2H, d, 8.0Hz), 7.08 (2H, d, 8.0Hz), 6.85 (1H, s), 6.28 (1H, s) tín hiệu proton anomer H 4.71 (1H, d, 10.0Hz) Bên cạnh đó, phổ đồ xuất tín hiệu cộng hưởng proton gắn carbon mang dị tố oxygen vùng H 3.41 – 4.95 Phổ 13C-NMR hợp chất CM4 cho thấy tín hiệu cộng hưởng carbon >C=O C 182.1, năm carbon thơm gắn với dị tố oxygen C 163.5, 162.8, 162.3, 160.4, 156.0, tín hiệu carbon vòng thơm vùng C 98.2 – 128.8 tín hiệu carbon liên kết với dị tố oxygen vùng C 55.6 – 81.8 Từ liệu phổ NMR trên, hợp chất CM4 dự đoán flavonoid liên kết với phân tử đường Phổ HMBC cho thấy tín hiệu tương quan proton H–3 (6.85, s) với carbon C 182.1 (C–4), 163.5 (C–2), 104.0 (C–10) proton H–6 (6.28, s) với carbon C 162.8 (C–7), 160.4 (C–5), 104.6 (C–8) Bên cạnh đó, hai tín hiệu proton vòng thơm H 8.14 (2H), 7.09 (2H) có số ghép lớn J = 9.0 Hz dự đốn vịng thơm B có nhóm thế vị trí para Ngoài ra, proton nhóm methoxy –OCH3 H 3.87 cho tương quan HMBC với carbon vòng thơm C 162.3 (C–4') giúp xác định nhóm –OCH3 gắn vào carbon (C–4') Một số tương quan HMBC khác trình bày hình 3.3 Proton anomer H–1'' cho tương quan HMBC với carbon C 104.6 (C–8), 156.0 (C–9), 162.8 (C–7) giúp xác định phân tử đường glucose liên kết với C–8 qua cầu nối C–glycoside Kết hợp với phổ COSY, HSQC, HMBC phân tử đường xác định có carbon cộng hưởng C 81.8 (C–5''), 78.6 (C–3''), 73.4 (C–1''), 70.9 (C–2''), 70.5 (C– 4''), 61.2 (C–6''), số ghép proton anomer H-1'' lớn J = 9.5 Hz giúp dự đoán phân tử đường β-D-glucose Từ số liệu phổ trên, kết hợp với so sánh số liệu NMR vitexin (bảng 3.4) [28] cho thấy có nhiều điểm tương đồng Ngoại trừ, cấu trúc hợp chất CM4 có nhóm methoxy vị trí C-4', cấu trúc CM4 đề nghị vitexin 4'-methyl ether Hình 3.3 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM4 cấu trúc hợp chất vitexin Bảng 3.4 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM4 hợp chất so sánh CM4 (DMSO-d6) Vị trí carbon 10 1' 2' 3' 4' 5' 6' 1" 2" 3" 4" 5" 6" -OCH3 5–OH 3.5 δH (ppm) (J-Hz) 6.85 (s) 6.28 (s) 8.14 (d, 8.0) 7.08 (d, 8.0) 7.08 (d, 8.0) 8.14 (d, 8.0) 4.70 (d, 9.5) 3.83 (m) 3.26 (m) 3.41 (m) 3.25 (m) 3.57 (dd, 5.5, 11.0) 3.76 (dd, 4.5, 11.0) 3.87 13.12 (s) δC (ppm) 163.5 103.1 182.1 160.4 98.2 162.8 104.6 156.0 104.0 123.2 128.8 114.4 162.3 114.4 128.8 73.4 70.9 78.6 70.5 81.8 61.2 Vitexin (DMSO-d6) [28] δC δH (ppm) (ppm) (J-Hz) 6.77 (s) 6.27 (s) 8.02 (d, 8.0) 6.89 (d, 8.0) 6.89 (d, 8.0) 8.02 (d, 8.0) 4.69 (d, 10.0) 3.82 (dd, 9.0, 10.0) 3.29 3.34 3.26 3.52 (dd, 5.5, 11.0) 3.76 (br d, 11.0) 163.9 102.4 182.0 160.4 98.1 162.7 104.6 156.0 104.0 121.6 128.9 115.8 161.1 115.8 128.9 73.4 70.8 78.7 70.5 81.8 61.3 55.6 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM6 Hợp chất CM6 (11.2 mg) thu từ phân đoạn HEA2.6 với đặc điểm sau: - Tinh thể màu trắng, hình kim, tan tốt dung môi chroloform - Sắc ký lớp mỏng với hệ dung mơi H:Ac 4:2 cho vết hình H2SO4 20%, hơ nóng bảng mỏng cho vết tròn màu vàng nhạt (Rf =0.30)  Phổ 1H-NMR (CDCl3): phụ lục  Phổ 13C-NMR (CDCl3): phục lục 5a  Phổ HSQC (CDCl3): phụ lục 5b  Phổ HMBC (CDCl3): phụ lục 5c, 5d BIỆN LUẬN CẤU TRÚC Phổ 1H-NMR hợp chất CM6 thể tín hiệu cộng hưởng ba proton gắn vòng thơm δH 7.54 (1H, dd, J = 8.0/8.0 Hz), 7.03 (1H, d, J = 7.5 Hz) 6.99 (1H, d, J = 8.5 Hz) Hằng số ghép J proton lớn giúp dự đốn ba proton gắn vịng thơm mang nhóm thế 1,2,3 Phổ 1H-NMR xuất tín hiệu cộng hưởng hai proton oxymethine >CH-O- δH 4.61 (2H, m) tín hiệu cộng hưởng proton methyl –CH3 δH 1.52 (3H, d, J = 6.0 Hz) Tín hiệu cộng hưởng –OH kiềm nối δH 10.96 Phổ 13C kết hợp với HSQC cho thấy hợp chất CM6 có 10 carbon Trong đó, carbon >C=O cộng hưởng δC 168.5, carbon vòng thơm mang oxygene δC 162.0, ba carbon vòng thơm =CH- cộng hưởng ở δC 136.9, 117.8 116.3, hai carbon vòng thơm lại cộng hưởng δC 141.2 106.7, hai carbon oxymethine δC 80.0 69.2, carbon methyl δC 17.9 Pronton methyl cộng hưởng dạng mũi đôi (J = 6.0 Hz) cho tương quan HMBC tới carbon methine mang oxygene δC 80.0 69.2 giúp dự đoán nhóm methyl gắn carbon oxymethine (-O-CH-CH3) Hai proton methine 4.61 (2H, m) gắn hai carbon δC 80.0 69.2 cho tương quan HMBC tới carbon δC 168.5, 141.2, 116.3 giúp xác định hệ thống Ar-CH(OH)-CH(CH3)-O-CO- cấu trúc hợp chất CM6 Ngồi ra, tín hiệu –OH kiềm nối δH 10.96 với tương quan HMBC proton ghép cặp ortho 7.54 (1H, dd, J = 8.0/8.0 Hz, H-6) tới carbon δC 162.0, 141.2 giúp dự đoán nhóm –OH kiềm nối vị trí C-8 Một số tương quan HMBC khác trình bày hình 3.4 Từ tất liệu cho phép dự đoán hợp chất CM6 dẫn xuất isocoumarin có gắn nhóm methyl C-3 nhóm –OH C-8 Kết hợp so sánh với số liệu phổ NMR hai hợp chất cis trans-4hydroxymellein [30] cho thấy số liệu NMR hợp chất CM6 tương đồng với số liệu NMR hợp chất trans-4-Hydroxymellein nên đề nghị cấu trúc hợp chất CM6 trans-4-Hydroxymellein Hình 3.4 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM6 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM6 hợp chất so sánh Vị trí carbon 4a 8a 3-CH3 8-OH 3.6 Hợp chất CM6 (CDCl3) δC δH (J, Hz) 168.5 80.0 69.2 141.2 116.3 136.9 117.8 162.0 106.7 17.9 4.61 (m) 4.61 (m) 7.03 (d,7.5) 7.54 (dd, 8.0, 8.0) 6.99 (d, 8.5) 1.52 (d, 6.5) 10.96 (s) trans-4-Hydroxymellein (CDCl3) [29] δC δH (J, Hz) 169.5 80.0 69.2 141.2 116.3 136.9 116.8 162.0 106.7 17.9 4.59-4.63 (m) 4.59-4.63 (m) 7.04 (d ,8.5) 7.54-7.57 (m) 7.00 (d, 8.5) 1.52, d (5.5) 11.0 (s) cis-4-Hydroxymellein (CDCl3) [29] δC δH (J, Hz) 169.4 78.4 67.5 140.7 118.5 137.0 118.8 162.3 107.1 16.3 4.71 (qd, 6.0, 1.0) 4.59 (d, 2.0) 7.04 (dd, 8.5, 1.0) 7.54 (dd, 8.5, 7.0) 6.93 (d, 7.5) 1.60 (d, 6.5) 11.0 (s) Khảo sát cấu trúc hợp chất CM8 Hợp chất CM8 (13.5 mg) thu từ phân đoạn HEA2.2 với đặc điểm sau: - Dạng tinh thể, không màu, tan tốt dung môi chloroform - Sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi H:EA 98:2 cho vết hình     H2SO4 20%, hơ nóng bảng mỏng cho vết có màu tím (Rf = 0.26) Phổ 1H-NMR (CDCl3): phụ lục 6, 6a Phổ 13C-NMR (CDCl3): phụ lục 6b, 6c Phổ HSQC (CDCl3): phụ lục 6d, 6e Phổ HMBC (CDCl3): phụ lục 6f, 6g, 6h BIỆN LUẬN CẤU TRÚC Phổ 1H-NMR hợp chất CM8 thể tín hiệu cộng hưởng proton olefin δH 4.70 (1H, d, J = 2.5 Hz) 4.57 (1H, dd, J=1.5, 2.5 Hz) Ngồi ra, phổ 1H-NMR cịn thể tín hiệu cộng hưởng nhóm methyl vùng δH (0.80 – 1.68) Phổ 13C-NMR HSQC hợp chất CM8 cho thấy hợp chất có 30 carbon Trong đó, có tín hiệu cộng hưởng carbon >C=O δC 218.1 (C–3) tín hiệu cộng hưởng carbon olefin δC 150.9 (>C=, C–20) 109.4 (=CH2, C–29) Từ kiện phổ NMR tài liệu tham khảo, hợp chất CM8 dự đoán triterpene có khung sườn lupane với liên kết đôi nhóm carbonyl >C=O Bên cạnh đó, tương quan HMBC proton olefin δH 4.70 4.57 đến carbon cộng hưởng δC 19.3 ( –CH3, C–30) δC 48.3 (=CC=O giúp dự đoán >C=O vị trí số Qua kiện phổ NMR kết hợp liệu phổ hợp chất lup-20(29)en-3-one [31] cho thấy có tương đồng nên đề nghị cấu trúc hợp chất CM8 lup20(29)-en-3-one Hình 3.5 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM8 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM8 hợp chất so sánh CM8 (CDCl3) Vị trí carbon 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 3.7 δH (ppm) (J-Hz) 2.47 (m), 2.40 (m) 2.37 (m) 1.07 (s) 1.03 (s) 1.07 (s) 0.93 (s) 0.96 (s) 0.80 (s) 4.70 (d, 2.5) 4.57 (dd, 2.5, 1.5) 1.68 (s) δC (ppm) 39.6 34.1 218.1 47.3 55.0 19.7 33.6 40.8 49.8 36.9 21.5 25.2 38.2 43.0 27.5 35.5 42.9 48.3 48.0 150.9 29.9 40.0 26.7 21.0 15.8 16.0 14.5 18.0 109.4 19.3 Lupenone (CDCl3) [30] δC δH (ppm) (ppm) (J-Hz) 2.20 (m), 2.40 (m) 2.40 (m) 0.97 (s) 0.75 (s) 0.82 (s) 1.02 (s) 0.94 (s) 0.78 (s) 4.63 (br s) 4.50 (br s) 1.76 (s) 39.6 34.1 218.2 47.2 54.9 19.6 33.5 40.7 49.8 36.8 21.4 25.1 38.1 42.8 27.4 35.5 42.9 47.9 48.2 150.8 29.8 39.9 26.6 20,9 15.7 15.9 14.4 17.9 109.5 19.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất CM9 Hợp chất CM9 (4.5 mg) thu từ phân đoạn HEA6.4 với đặc điểm sau: - Dạng bột, màu trắng, tan tốt dung môi chloroform - Sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi H:C 4:2 cho vết hình H2SO4 20%, hơ nóng bảng mỏng cho vết có màu tím (Rf = 0.29)  Phổ 1H-NMR (CDCl3): phụ lục 7, 7a  Phổ 13C-NMR (CDCl3): phục lục 7b, 7c  Phổ HSQC (CDCl3): phụ lục 7d, 7e  Phổ HMBC (CDCl3): phụ lục 7f, 7g, 7h, 7i BIỆN LUẬN CẤU TRÚC Phổ 1H-NMR hợp chất CM9 thể tín hiệu cộng hưởng proton olefin 5.63 (1H, d, J = 6.0 Hz), proton nhóm oxymethine >CH-O- δH 3.47 tín hiệu nhóm methyl vùng từ trường cao (δH 0.95 – 1.16) Phổ 13C-NMR cho tín hiệu cộng hưởng 30 carbon Trong đó có carbon oxymethine –CH–O– δC 76.4 (C–3), hai carbon olefin δC 141.7 (C–5) 122.1 (C–6) Từ liệu NMR giúp dự đoán hợp chất CM9 triterpenoid với liên kết đôi nhóm –OH Proton olefin δH 5.63 cho tương quan HMBC đến carbon tứ cấp 40.9 (C–4) Proton nhóm methyl H3–23 (δH 1.04), H3–24 (δH 1.14) cho tương quan HMBC tới carbon olefin >C= δC 141.7 (C–5), carbon oxymethine >CH–O– δC 76.4 (C–3) giúp dự đốn C–3 mang nhóm –OH nối đơi vị trí C–5 C–6 Proton olefin cho tương quan HMBC đến carbon methine >CH– δC 49.7 47.5, proton nhóm methyl δH 0.85 cho tương quan HMBC đến carbon δC 49.7 47.5, C–8 C– 10 có δC 47.5 49.7 Một số tương quan HMBC khác biểu diễn hình 3.6 Qua kiện phổ NMR kết hợp so sánh với liệu phổ hợp chất 3-Hydroxy-D:B-friedo-olean-5-ene [32] cho thấy có tương đồng nên cấu trúc hợp chất CM9 đề nghị 3-Hydroxy-D:B-friedo-olean-5-ene Hình 3.6 Cấu trúc số tương quan HMBC hợp chất CM9 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CM9 hợp chất so sánh Vị trí carbon 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 CM9 (CDCl3) δH (ppm) (J-Hz) 47 (t, ) 63 (d, 6.0) 04 (s) 14 (s) 85 (s) 10 (s) 01 (s) 16 (s) 99 (s) 0.95 (s) δC (ppm) 18.2 27.9 76.4 40.9 141.7 122.1 23.7 47.5 34.9 49.7 34.6 30.4 37.9 39.3 32.1 36.1 30.1 43.1 35.1 28.3 33.2 39.0 29.0 25.5 16.2 19.6 18.4 32.1 32.4 34.5 3-Hydroxy-D:B-friedoolean-5-ene (CDCl3) [31] δH (ppm) δC (J-Hz) (ppm) 1.49 (m) 1.67 (m), 1.86 (m) 3.47 (dd, J = 2.6, 3.1) 5.63 (m) 1.86 (m), 1.53 (m) 1.52 (m) 1.99 (m) 1.40 (m), 1.53 (m) 1.35 (m) 1.27 (m), 1.46 (m) 1.38 (m), 1.53 (m) 1.58 (m) 1.25 (m), 1.37 (m) 1.25 (m), 1.46 (m) 0.93 (m), 1.56 (m) 1.04 (s) 1.14 (s) 0.85 (s) 1.09 (s) 1.01 (s) 1.16 (s) 0.99(s) 0.95 (s) 18.2 27.8 76.4 40.8 141.7 122.1 23.7 47.5 34.9 49.7 34.6 30.4 37.9 39.3 32.1 36.1 30.0 43.1 35.1 28.3 33.2 39.0 29.0 25.5 16.2 19.6 18.4 32.1 32.4 34.5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ Chìa vôi thu hái huyện Bến Cát, tỉnh Bình Dương, phương pháp ngâm dầm để điều chế cao methanol thô, chiết lỏng – lỏng với dung môi có độ phân cực tăng dần thu cao ethyl acetate Cao ethyl acetate sắc kí cột thu phân đoạn cao EA1, tiếp tục sắc kí cột nhiều lần với hệ dung môi khác nhau, cô lập hợp chất kí hiệu CM1, CM2, CM3, CM4, CM6, CM8, CM9 Bằng phương pháp phổ nghiệm, hợp chất phân lập xác định cấu trúc bao gồm: Emodin, oleanolic acid, lasiodiplodin, vitexin 4'-methyl ether, trans-4hydroxymellein, lup-20(29)-en-3-one, 3-hydroxy-D:B-friedo-olean-5-ene, Emodin (CM1) Oleanolic acid (CM2) Lasiodiplodin (CM3) Vitexin 4'-methyl ether (CM4) rans-4-Hydroxymellein (CM6) Lup-20(29)-en-3-one (Lupenone) (CM8) 3-Hydroxy-D:B-friedo-olean-5-ene (CM9) Các hợp chất lần đầu tìm thấy chi Cissus Kiến nghị  Tiếp tục nghiên cứu phân lập hợp chất phân đoạn cao chưa khảo sát Chìa vôi  Khảo sát hoạt tính kháng số vi khuẩn hợp chất cô lập TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Panthong A, Supraditaporn W, Kanjanapothi D, Taesotikul T, Reutrakul V Analgesic, anti‑inflammatory and venotonic effects of Cissus quadrangularis Linn J Ethnopharmacol, 110, 264‑70, 2007 [2] Potu B K, Nampurath G K, Rao M S, Bhat K M Effect of Cissus quadrangularis Linn on the development of osteopenia induced by ovariectomy in rats Clin Ter, 162, 307-312, 2010 [3] Shirwaikar A, Khan S, Malini S Antiosteoporotic effect of ethanol extract of Cissus quadrangularis Linn on ovariectomized rat, J Ethnopharmacol, 89, 245‑250, 2003 [4] Jainu M, Devi CS, In vitro and In vivo evaluation of free radical scavenging potential of Cissus quadrangularis, Afr J Biomed Res, 8, 95-99, 2005 [5] Balasubramaniana P, Jayalakshmib K, Vidhyab V, Prasada R, Khaleefathullah SA, Kathiravana G Antiviral activity of ancient system of ayurvedic medicinal plant Cissus quadrangularis L, J Basic Clin Pharm, 1, 37‑40, 2010 [6] Flavio L B, Greisiele L P, Dani L D, Benedito P D F, Roberto B B, Diogenes A G C, Evaluation of the antidiabetic and antibacterial activity of Cissus sicyoides, Braz Arch Boil Technol, 45(1), 21-25, 2002 [7] Viana G S B, Medeiros A C C, Lacerda A M R, Leal L K M, Vale1T G, Matos F J A, Hypoglycemic and anti-lipemic effects of the aqueous extract from Cissus sicyoides, BMC Pharmacology, 4(9), 1-7, 2004 [8] Chang C W, Chang W T, Liao J C, Chiu Y J, Hsieh M T, Peng W H, Lin Y C, Analgesic and anti-Inflammatory activities of methanol extract of Cissus repens in mice, Evid Based Complememt Alternat Med, 1-10, 2012 [9] Ahmadu A A, Onanuga A, Aquino, Flavonoid glycosides from leaves of Cissus ibuensis Hook (Vitaceae), Afr J Trad CAM, 7(3), 225 – 230, 2010 [10] Lin C F, Hwang T L, Lin S Y, Huang Y L, Bioactive isocoumarin from Cissus pteroclada, J Chin Med, 23(1), 41-49, 2012 [11] Đo T L, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 2004, 505-506 [12] Aswar U M, Bhaskaran S, Mohan V, Bodhankar S L, Estrogenic activity of friedelin rich fraction (IND-HE) separated from Cissus quadrangularis and its effect on female sexual function, Pharmacogn Res, 2, 138-45, 2010 [13] Potu B K, Rao M S, Nampurath G K, Chamallamudi M R, Prasad K, Nayak S R Evidence-based assessment of antiosteoporotic activity of petroleum-ether extract of Cissus quadrangularis Linn on ovariectomy‑induced osteoporosis Ups J Med Sci , 114, 140-148, 2009 [14] Julius O, Dieudonne K, Gabriel A, Claudia M, Xavio T, The use of a Cissus quadrangularis formulation in the management of weight loss and metabolic syndrome, Lipids Health Di, 5(24), 2006 [15] Mariana P F, Catarine M N, Leonardo N S, Anne L D, Monica L F, Luiz C DS,Wagner V, Clelia A HL, Gastroprotective effect of Cissus sicyoides (Vitaceae): Involvement of microcirculation, endogenous sulfhydryls and nitric oxide, J Ethnopharmacology, 117, 170-174, 2008 [16] Quilez A M, Saenz M T, Garcia M D, Puerta R, Phytochemical analysis and antiallergic study of Agave intermixta Trel and Cissus sicyoides L., J Pharm Pharmaco, 56(9), 1185-1189, 2004 [17] Unnati S Cissus Quadrangularis L.: Phylochemicals, traditional use and pharmacological activities – A review, Int J Pharm Pharm Sci, 3(4), 41-44, 2011 [18] Edvaldo R A, Krissia R O R, Geraldo B L C, Ana B M I, Anxiolytic and anticonvulsant effects on mice of flavonoids, linalool, and α-tocopherol presents in the extract of leaves of Cissus sicyoides L (Vitaceae), J Bio Biotechno, 1-6, 2009 [19] Flavio L B, Antonio G F, Diogenes A G C, Coumarin glycoside from Cissus sicyoides, Nat Prod Lett, 16(4), 213–216, 2002 [20] Fengming X, Hisashi M, Hiroki H, Kaoru S, Seikou N, Masayuki Y, Structures of new flavonoids and benzofuran-type stilbene and degranulation inhibitors of rat basophilic leukemia cells from the Brazilian Herbal medicine Cissus sicyoide, Chem Pharm Bull 57(10), 1089-1095, 2009 [21] Li C S , Anti-Diabetic Activity of a Fraction from Cissus verticillata and tyramine, its main bioactive constiuent, in alloxan-induced diabetic rats, Am J Pharmacol Toxicol, 2(4), 178-188, 2007 [22] Wang Y H, Zhang Z K, He H P, Wang J S, Zhou H, Ding M, Hao X J, Stilbene C- glucosides from Cissus repens, J Asian Nat Prod Res, 9(7), 631–636, 2007 [23] Ibrahim H, Mdau B B, Ahmed A, Ilyas M, Anthraquinones of Cissus Populnea Guil & Perr (Amplicaeae), Afr J Tradit Complement Altern Med 8(2), 140-143, 2011 [24] Xie Y H, Deng P, Zhang Y Q, Yu W S, Studies on the chemical constituents from Cissus assamica, Zhong Yao Cai, 32(2), 210-213, 2009 [25] Knut D, Dagfinn W A, George W F, NMR Study of Some Anthraquinones from Rhubarb, Magnetic Resonance in chemistry, 30, 359-363, 1992 [26] Martins D, Lucas Carrion L, Fernandes Ramos D, Schwanka Salomé K, Almeida da Silva P E, Barison A, Nunez C V, Triterpenes and the Antimycobacterial Activity of Duroia macrophylla Huber (Rubiaceae), BioMed Research International, 2013, 7, 2013 [27] Bracher F, Schulte B, Enantiodivergent synthesis of both enantiomers of the macrocyclic lactone lasiodiplodin, J Chem SOC., Perkin Trans I, 1996 [28] Le C V C, Do T T, Nguyen T C, Nguyen X N, Pham H Y, Hoang L T A, Le M H, Chau V M, Phan V K, flavonoid glycosides from Antidesma ghaesembilla, Vietnam journal of chemistry, 53(2e), 94-97, 2015 [29] Tasso G C M, Felipe A R R, Paula C J, Alysson L A, Vania M M M, Edson R F, Maria da C F de O, Letcia V C-L, Cytotoxic activity of fungal strains isolated from the Ascidian eudistoma vannamei, Chemistry & Biodiversity, 9, 2203-2209, 2012 [30] Feng X, Xulong H, Hongmei W, Xiangpei W, Beneficial health effects of lupenone triterpene: A review, Biomedicine & Pharmacotherapy, 103, 198–2003, 2018 [31] Frederico N V, Roqueline R S de M, Gabriela S de O, Gracia D F S, Lucienir P D, Sidney A V F, Constituents of fruit pulp of Maytenus salicifolia and complete 1D/2D NMR data of 3-hydroxy-D:B-friedo-olean-5-ene, Chemistry of Natural Compounds, 46(5), 2010 ... sát thành phần hóa học Chìa vôi C modeccoides Planch Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn cao ethyl acetate EA1 Chìa vôi C modeccoides Plach Đối tượng nghiên cứu Phân. .. nghiên cứu Phân đoạn cao ethyl acetate EA1 Chìa vôi C modeccoides Planch Nhiệm vụ nghiên cứu Phân lập xác định cấu trúc hợp chất phân đoạn cao ethyl acetate EA1 Chìa vôi C modeccoides Planch 5... ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Nguyễn Ngọc Tín NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN CAO ETHYL ACETATE EA1 CÂY CHÌA VƠI (Cissus modeccoides Planch. ) Chun ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114