Sản xuất nấm paecilomyces sp để phòng trừ tuyến trùng meilodogyne sp gây hại trên cây hồ tiêu​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP SẢN XUẤT NẤM PAECILOMYCES SP ĐỂ PHÒNG TRỪ TUYẾN TRÙNG MEILODOGYNE SP GÂY HẠI TRÊN CÂY HỒ TIÊU Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực : PHAN ÁNH NGÂN MSSV: 1211100132 Lớp: 12DSH02 TP Hồ Chí Minh, 2016 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan nội dung đồ án tốt nghiệp công trình nghiên cứu thực cá nhân em hướng dẫn TS Nguyễn Thị Hai – giảng viên Khoa Công Nghê Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường, trường Đại học Công Nghệ Tp HCM Đề tài thực dựa sở nghiên cứu lý thuyết tiến hành nghiên cứu thực nghiệm phịng thí nghiệm Cơng Nghệ Sinh Học, Khoa Cơng Nghê Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường, trường Đại học Công Nghệ Tp HCM Tất số liệu, hình ảnh, kết nghiên cứu hồn tồn trung thực Đồ án không chép hình thức nào, có phát gian lận em xin hoàn toàn chịu trách nhiệm Tp HCM, ngày 15 tháng năm 2016 Sinh viên thực Phan Ánh Ngân i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian từ bắt đầu học tập trường đến nay, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ q Thầy Cơ, gia đình bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến quý Thầy Cô Khoa Công Nghệ Sinh học – Thực Phẩm – Môi Trường, Trường Đại học Công Nghệ Tp HCM với tri thức tâm huyết để truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho chúng em suốt thời gian học tập trường Và đặc biệt, học kỳ Nếu khơng có lời hướng dẫn, dạy bảo thầy em nghĩ thu hoạch em khó hồn thiện Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn thầy Bài báo cáo đồ án tốt nghiệp thực khoảng thời gian tháng Bước đầu vào thực tế em hạn chế nhiều bỡ ngỡ Do vậy, khơng tránh khỏi thiếu sót điều chắn, em mong nhận ý kiến đóng góp q báu q Thầy Cơ bạn học lớp để kiến thức em lĩnh vực hoàn thiện Em xin gởi lời cảm ơn chân thành tri ân sâu sắc thầy cô trường Đại học Công Nghệ Tp HCM, đặc biệt TS Nguyễn Thị Hai, giảng viên khoa Công Nghệ Sinh học – Thực Phẩm – Môi Trường trường tạo điều kiện cho em để em hồn thành tốt báo cáo đồ án tốt nghiệp Và em xin chân thành cám ơn thầy phịng thí nghiệm, anh chị, bạn nhiệt tình hướng dẫn giúp đỡ em hoàn thành báo cáo đồ án tốt nghiệp Trong trình thực đồ án tốt nghiệp, trình làm báo cáo, khó tránh khỏi sai sót đồng thời trình độ lý luận kinh nghiệm thực tiễn cịn hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp Thầy/Cơ để em học thêm nhiều kinh nghiệm áp dụng vào công việc tới Em xin chân thành cảm ơn ! ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC .iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG .vii DANH MỤC HÌNH viii ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC ĐÍCH NỘI DUNG CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Giới thiệu nấm Paecilomyces sp 1.1.1 Phân loại khoa học 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Cơ chế tiết độc tố nấm Paecilomyces 1.1.4 Chu kỳ sống chế tác động nấm Paecilomyces spp tuyến trùng 1.1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển nấm Paecilomyces sp .7 Tổng quan tuyến trùng Meloidogyne sp gây bệnh bướu rễ hồ tiêu 11 1.2.1 Tổng quan tuyến trùng ký sinh thực vật 11 1.2.2 Phân loại khoa học 14 Các nghiên cứu nước ngồi nhân ni sử dụng nấm Paecilomyces sp phòng từ tuyến trùng hại trồng 19 Các nghiên cứu nước nhân nuôi sử dụng Paecilomyces sp phòng trừ tuyến trùng hại 22 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 24 Thời gian địa điểm nghiên cứu 24 iii Vật liệu nghiên cứu, thiết bị hóa chất 24 2.2.1 Vật liệu nghiên cứu 24 2.2.2 Thiết bị 24 2.2.3 Các loại môi trường sử dụng 25 Phương pháp nghiên cứu 26 2.3.1 Hoạt hóa nguồn nấm Paecilomycse sp 27 2.3.2 Phương pháp giữ giống thạch nghiêng 28 2.3.3 Các phương pháp xác định số lượng tế bào vi sinh vật 28 2.3.4 Phương pháp tách tuyến trùng từ rễ tiêu (dẫn theo Lê Thị Mai Châm, 2014) 29 2.3.5 Khảo sát phát triển nấm Paecilomyces sp loại môi trường nhân sinh khối (theo Lê Hữu Phước, 2009) 30 2.3.6 Khảo sát ảnh hưởng loại chất khác lên phát triển nấm Paecilomyces sp 30 2.3.7 Ảnh hưởng thuốc trừ sâu, bệnh đến phát triển nấm Paecilomyces sp 31 2.3.8 Khảo sát khả kí sinh tuyến trùng Meloidogyne sp nấm Paecilomyces sp 35 2.3.9 Đánh giá tác động chế phẩm nấm Paecilomyces sp việc phòng trừ tuyến trùng Meloidogyne sp hồ tiêu 36 2.3.10 Phương pháp xử lý số liệu 37 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 Kết hoạt hóa nguồn nấm Paecilomyces sp 38 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm, trừ sâu đến phát triển Paecilomyces sp 39 iv 3.2.1 Ảnh hưởng loại thuốc trừ sâu đến phát triển Paecilomyces sp 39 3.2.2 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm đến phát triển Paecilomyces sp 41 3.2.3 Khảo sát khả đồng sinh trưởng nấm Trichoderma sp Paecilomyces sp 43 Khảo sát ảnh hưởng loại môi trường dinh dưỡng đến hình thành phát triển nấm Pacilomyces sp (môi trường lỏng) 44 3.3.1 Khảo sát môi trường tối ưu cho sinh trưởng phát triển nấm Paecilomyces sp 44 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng loại mơi trường dinh dưỡng đến hình thành phát triển nấm Paecilomyces sp (môi trường rắn) 49 Khảo sát khả phòng trừ tuyến trùng hồ tiêu chế phẩm nấm Paecilomyces sp 52 3.4.1 Trong điều kiện phịng thí nghiệm 52 3.4.2 Trên đồng ruộng 55 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 Kết luận 58 Kiến nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 Tài liệu tiếng việt 59 Tài liệu tiếng anh 59 Tài liệu từ internet 61 PHỤ LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CDB: Czapeck – Dox CMB: Complete Media NSC: ngày sau cấy NT: nghiệm thức PDA: Potato D – Glucose Agar SDAY1: Sabourand dextrose Yeast SDAY3: Sabourand dextrose Yeast bổ sung khoáng vi DANH MỤC BẢNG Bảng Bố trí thí nghiệm 31 Bảng 2 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng thuốc trừ sâu 32 Bảng Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng thuốc trừ nấm 33 Bảng Bố trí thí nghiệm khả đồng sinh trưởng Trichoderma sp Paecilomyces sp 35 Bảng Bố trí thí nghiệm đánh giá tác động chế phẩm Paecilomyces sp 37 Bảng Đường kính tản nấm Paecilomyces sp loại mơi trường trừ nấm 40 Bảng Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm đến phát triển nấm Paecilomyces sp 40 Bảng 3 Đường kính tản nấm Paecilomyces sp 41 Bảng Tỷ lệ khuẩn lạc bị ức chế 41 Bảng Đường kính tản nấm Paecilomyces sp 43 Bảng Đường kính tản nấm Trichoderma sp cấy đồng thời với nấm Paecilomyces sp 43 Bảng Mật độ bào tử nấm Paecilomyces sp sau thời gian nuôi cấy môi trường lỏng lắc 44 Bảng Mật độ bào tử nấm Paecilomyces sp tính theo logarit 46 Bảng Số lượng bào tử sau 14 ngày nuôi cấy 51 Bảng 10 Mật độ bào tử nấm Paecilomyces sp nhân nuôi khay ngô mảnh gạo 52 Bảng 11 Tỷ lệ phần trăm số tuyến trùng Meloidogyne sp bị nấm Paecilomyces sp ký sinh 53 Bảng 12 Đánh giá cấp hại tuyến trùng hồ tiêu 55 vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Đại thể nấm Paecilomyces sp nuôi môi trường PDA .4 Hình 1.2 Nấm Paecilomyces sp, chụp kính hiển vi .5 Hình 1.3 Cấu trúc Leucinostatins (paecilotoxin) Hình 1.4 Cấu tạo tuyến trùng ký sinh thực vật 15 Hình 1.5 Vòng đời tuyến trùng Meloidogyne sp 17 Hình 1.6 Một số chế phẩm từ nấm Paecilomyces sp phịng trừ tuyến trùng 22 Hình 3.1 Nấm Paecilomyces sp môi trường PDA 38 Hình 3.2 Tản nấm Paecilomyces sp mơi trường PDA có bổ sung loại thuốc hóa học (A: Actara 25WG; B: Sherpa 25EC; C: Plutel 1,8 EC; D: Oshin 20WP; E: đối chứng) 39 Hình 3.3 Nấm Paecilomyces sp mơi trường PDA có bổ sung loại thuốc hóa học (A: Antracol 70WP; B: Cup 2,9 SL; C: Saizole 5SC; D: Carbenzin 50WP; E: đối chứng) 42 Hình 3.4 Đĩa nấm cấy đồng thời Trichoderma sp Paecilomyces sp 44 Hình 3.5 Dịch ni cấy nấm Paecilomyces sp loại môi trường (A: Môi trường CDB; B: Môi trường CMB; C: Môi trường SDAY1; D: Môi trường SDAY3) 45 Hình 3.6 Mật độ bào tử tính theo logarit bốn loại mơi trường lỏng .48 Hình 3.7 Hình nấm Paecilomyces sp nuôi cấy loại môi trường rắn(A: môi trường ngô mảnh, B: môi trường gạo tấm, C: môi trường lúa, D: môi trường cám) 50 Hình 3.8 Mật độ tế bào sau 14 ngày lên men rắn loại môi trường 51 Hình 3.9 Nấm Paecilomyces sp nhân ni khay 52 Hình 3.10 Tỷ lệ tuyến trùng Meloidogyne sp bị chết ngày sau lây nhiễm Error! Bookmark not defined Hình 3.11 Nấm Paecilomyces sp cơng trứng tuyến trùng Meloidogyne sp.; (A, B: tuyến trùng trước lây nhiễm nấm; C, E: tuyến trùng bị lây nhiễm nấm soi kính hiển vi; D, F: viii mang túi trứng tuyến trùng bị nhiễm nấm Paecilomyces sp soi kính hiển vi sau nhuộm Methylene blue) 54 Hình 3.12 Người dân pha chế phẩm Paecilomyces sp tưới vào gốc hồ tiêu 56 Hình 3.13 Trước tưới 57 Hình 3.14 Sau tưới 57 ix Đồ án tốt nghiệp The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for KQ Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Number of Means Critical Range Duncan Grouping Mean N MTLONG A 9.6090 SDAY3 B A 9.3109 SDAY1 B C 8.7888 CDB C 8.2753 CMB Ở thời điểm ngày The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels MTLONG Values CDB CMB SDAY1 SDAY3 Number of observations Mat tren MT long 6N 16:55 Tuesday, January 6, 2004 14 The ANOVA Procedure Dependent Variable: KQ Sum of Source DF Model Error Corrected Total R-Square Squares Mean Square F Value Pr > F 0.44147837 32.39 0.0029 1.32443510 0.05452325 0.01363081 1.37895835 Coeff Var Root MSE 15 KQ Mean Đồ án tốt nghiệp 0.960 Source MTLONG Duncan's Multiple Range Test for KQ Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Number of Means Critical Range Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping B B Ở thời điểm ngày The ANOVA Procedure Dependent Variable: KQ Source Model Error Corrected Total R-Square 0.761126 Source MTLONG Đồ án tốt nghiệp Mat tren MT long 9N 16:55 Tuesday, January 6, 2004 23 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for KQ NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Number of Means Critical Range B B B Ở thời điểm 12 ngày The ANOVA Procedure Dependent Variable: KQ Source Model Error Corrected Total R-Square 0.960681 Source MTLONG Mat tren MT long 12N Đồ án tốt nghiệp The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for KQ Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Number of Means Critical Range Duncan Grouping A A B B Ở thời điểm 14 ngày The ANOVA Procedure Dependent Variable: KQ Source Model Error Corrected Total R-Square 0.969872 Source MTLONG Mat tren MT long 14N The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for KQ Đồ án tốt nghiệp Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Number of Means Critical Range Duncan Grouping A A B B A.7 MẬT ĐỘ BÀO TỬ NẤM TRÊN MÔI TRƯỜNG RẮN TÍNH THEO LOGARIT Mat 16:44 Tuesday, January 6, 2004 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels MT Values Bap Cam Gao Lua Number of observations 12 Mat 16:44 Tuesday, January 6, 2004 The ANOVA Procedure Dependent Variable: KQ Sum of Source DF Model Error Corrected Total R-Square Squares Mean Square F Value Pr > F 0.97232857 269.93 F 0.07666667 R-Square Source F Value Anova SS KQ Mean 4.716667 Mean Square 0.48166667 0.48166667 F Value 6.28 Pr > F 0.0663 18:36 Friday, January 16, 2004 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for KQ Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.076667 Number of Means Critical Range 6277 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N DK A 5.0000 DC A 4.4333 Tricho Ở thời điểm ngày Number of observations The SAS System 18:36 Friday, January 16, 2004 10 The ANOVA Procedure Dependent Variable: KQ Sum of Source DF Model Squares Mean Square F Value 4.50666667 4.50666667 21 Pr > F 22.92 0.0087 Đồ án tốt nghiệp Error 0.78666667 Corrected Total 0.19666667 5.29333333 R-Square Coeff Var Root MSE 0.851385 7.825962 0.443471 Source DF DK The SAS System Anova SS KQ Mean 5.666667 Mean Square 4.50666667 4.50666667 F Value 22.92 Pr > F 0.0087 18:36 Friday, January 16, 2004 12 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for KQ Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.196667 Number of Means Critical Range 1.667 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N DK A 6.5333 DC B 4.8000 Tricho Ở thời điểm ngày The ANOVA Procedure Dependent Variable: KQ Sum of Source DF Model 11.20666667 1.02666667 Corrected Total Source Mean Square 11.20666667 Error Squares 43.66 Pr > F 0.0027 0.25666667 12.23333333 R-Square Coeff Var Root MSE 0.916076 7.307060 0.506623 DF F Value Anova SS KQ Mean 6.933333 Mean Square 22 F Value Pr > F Đồ án tốt nghiệp DK The SAS System Means with the same letter are not significantly different B XỬ LÝ EXCEL B.1 ẢNH HƯỞNG CỦA THUỐC TRỪ SÂU Tỷ lệ ức chế (%) ĐC Sherpa 25EC Plutel Oshin 20WP Actara 25WG ĐC Sherpa 25EC Plutel Đồ án tốt nghiệp Oshin 20WP Actara 25WG ĐC Sherpa 25EC Plutel Oshin 20WP Actara 25WG B.2 ẢNH HƯỞNG CỦA THUỐC TRỪ SÂU Tỷ lệ ức chế (%) ĐC Carbenzin 50WP Cup 2,9 SL Saizole 5SC Antracol 70WP ĐC Carbenzin 50WP Cup 2,9 SL Saizole 5SC Antracol 70WP ĐC Carbenzin 50WP 24 Đồ án tốt nghiệp Cup 2,9 SL Saizole 5SC Antracol 70WP B.3 KHẢ NĂNG ĐỒNG SINH TRƯỞNG CỦA NẤM PAECILOMYCES SP VÀ TRICHODERMA SP Đường kính tản nấm Paecilomyces sp (cm) ĐC Pae Pae ĐC Pae Pae ĐC Pae Pae Đường kính tản nấm Trichoderma sp (cm) DC Tricho DC Tricho DC Tricho B.4 MẬT ĐỘ BÀO TỬ NẤM PAECILOMYCES SP TRÊN MÔI TRƯỜNG LỎNG THEO LOGARIT CDB Đồ án tốt nghiệp CMB SDAY1 SDAY3 CDB CMB SDAY1 SDAY3 B.5 MẬT ĐỘ BÀO TỬ NẤM PAECILOMYCES SP TRÊN MÔI TRƯỜNG RẮN Gao Bap Lua Cam Gao Bap Lua Cam Gao Bap Lua Cam B.6 SỐ LƯỢNG TUYẾN TRÙNG CÁI LÂY NHIỄM NẤM PAECILOMYCES SP Đồ án tốt nghiệp C HÌNH ẢNH 27 Đồ án tốt nghiệp 28 Đồ án tốt nghiệp 29 ... đề tài: ? ?Sản xuất nấm Paecilomyces sp để phòng trừ tuyến trùng Meloidogyne sp gây hại hồ tiêu” Đồ án tốt nghiệp MỤC ĐÍCH Chọn mơi trường tốt cho sinh trưởng phát triển nấm Paecilomyces sp đánh... động chế phẩm nấm Paecilomyces sp việc phòng trừ tuyến trùng Meloidogyne sp hồ tiêu ❖ Mục đích: xác định hiệu phòng trị tuyến trùng hại hồ tiêu đồng ruộng chủng nấm Paecilomyces sp ❖ Bố trí thí... mẫn cảm tuyến trùng, thực trước trồng, sau thu hoạch bảo quản Các nghiên cứu nước ngồi nhân ni sử dụng nấm Paecilomyces sp phòng từ tuyến trùng hại trồng Nấm gây bệnh cho tuyến trùng tuyến trùng