Khảo sát khả năng kháng khuẩn trong cao chiết lá đắng (vemonia amygdalina del)​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN TRONG CAO CHIẾT LÁ ĐẮNG (VEMONIA AMYGDALINA DEL) Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hƣớng dẫn :Th.S NGUYỄN THỊ THU HƢƠNG Sinh viên thực : TỪ CÔNG TÍNH MSSV: 1311100768 Lớp: 13DSH05 TP Hồ Chí Minh, 2017 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đồ án nghiên cứu riêng đƣợc thực sở lý thuyết, tiến hành nghiên cứu thực tiễn dƣới hƣớng dẫn ThS Nguyễn Thị Thu Hƣơng Các số liệu, kết nêu đồ án trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan TP Hồ Chí Minh, ngày 27 tháng 07 năm 2017 Sinh viên Từ Cơng Tính Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu Trƣờng Đại học Cơng Nghệ Tp Hồ Chí Minh, q thầy giảng dạy Khoa Công nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trƣờng tất thầy cô truyền dạy kiến thức quý báu cho em suốt năm học vừa qua Qua em xin đƣợc bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Nguyễn Thị Thu Hƣơng, ngƣời định hƣớng nghiên cứu, quan tâm, tận tình hƣớng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian làm khoá luận tốt nghiệp Bên cạnh em xin cảm ơn thầy Phịng Thí nghiệm Khoa Cơng nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trƣờng anh chị, bạn bè nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình ln bên cạnh, động viên lúc khó khăn, nản lịng suốt thời gian học tập, nghiên cứu nhƣ sống Tp Hồ Chí Minh, ngày 27 tháng 07 năm 2017 Sinh viên Từ Cơng Tính Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu đắng 1.1.1 Nguồn gốc Cây đắng thuộc họ Cúc (Asteraceae) họ lớn phổ biến rộng rãi nay, bao gồm 1000 chi 20,000 loài, phân bố khắp nƣớc giới Cây đắng sống đƣợc nhiều mơi trƣờng khác Ở nƣớc ta, có 125 chi 350 loài, phân bố rộng rãi từ vùng ven biển đến vùng núi cao tới 3000 m so với mặt biển [1] 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm phân bố 1.1.4 Tính chất dược lý đắng 1.2 Tổng quan hợp chất thứ cấp có khả kháng khuẩn thực vật 1.2.1 Alkaloid 1.2.2 Flavonoid 1.2.3 Steroid 12 1.2.4 Tanin 13 1.3 Các phƣơng pháp tách chiết hợp chất từ thực vật 16 1.3.1 Định nghĩa tách chiết hợp chất hợp chất từ thực vật 16 1.3.2 Các phương pháp tách chiết cao từ thực vật 17 1.3.3 Phương pháp tách chiết cao số chất từ thực vật 24 1.4 Cơ sở khoa học kháng khuẩn hợp chất thứ cấp có thực vật 26 1.4.1 Khái niệm hoạt tính kháng khuẩn 26 1.4.2 Cơ chế kháng khuẩn số hợp chất thực vật 26 1.4.3 Tình hình nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn thực vật giới Việt Nam 28 1.4.4 Nồng độ ức chế tối thiểu (Minimum inhibitory concentration - MIC) cao chiết thực vật 29 i Đồ án tốt nghiệp 1.5 Các nhóm vi khuẩn gây hại phổ biến ngƣời 30 1.5.1 Nhóm Escherichia coli 30 1.5.2 Nhóm Samonella 32 1.5.3 Bacillus sppp 34 1.5.4 Staphylococcus arueus 35 1.5.5 Nhóm Listeria spp 36 CHƢƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 38 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 38 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 38 2.2 Vật liệu nghiên cứu 38 2.2.1 Nguồn mẫu 38 2.2.2 Vi sinh vật thị 38 2.2.3 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 39 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 40 2.3.1 Phương pháp xử lí nguồn mẫu 40 2.3.2 Phương pháp bảo quản giữ giống vi sinh vật 40 2.3.3 Phương pháp pha loãng mẫu 40 2.3.4 Phương pháp tăng sinh vi sinh vật thị 41 2.3.5 Phương pháp tách chiết thu nhận cao thực vật 41 2.3.6 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn từ cao chiết thực vật 42 2.3.7 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 42 2.3.8 Phƣơng pháp xử lí số liệu 43 2.4 Bố trí thí nghiệm 43 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hiệu suất thu hồi cao từ đắng 45 2.4.2 Thí nghiệm 2: khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn cao chiết từ đắng 46 2.4.3 Thí nghiệm 3: xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) .47 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49 3.1 Kết hiệu suất thu hồi cao chiết dung môi khác từ đắng 49 ii Đồ án tốt nghiệp 3.2 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết từ đắng 3.2.1 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết trê 3.2.2 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết dung m Bacillus Cereus 3.2.3 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết loại du nhóm Salmonella 3.2.4 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết dung m Aureus 3.2.5 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết dung m nhóm Listeria monocytogenes KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Kiến nghị TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC A Kết thu hồi cao chiết từ đắng PHỤ LỤC B 1.1 Đánh giá hoạt tín 1.2 Đánh giá hoạt tín Bacillus Cereus 1.3 Đánh giá hoạt tín nhóm Salmonella 1.4 Đánh giá hoạt tín Aureus 1.5 Đánh giá hoạt tín nhóm Listeria monocytogenes PHỤ LỤC C Kết xử lý số liệu đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nhóm vi khuẩn 1.1 Kết xử lý số 1.2 Kết xử lý số 1.3 Kết xử lý số 1.4 Kết xử lý số iii Đồ án tốt nghiệp 1.5 Kết xử lý số liệu Listeria monocytogenes 11 iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT - NB: Nutrient Broth - NA: Nutrient Agar - EMB: Eosin Methylene Blue Agar - XLD: Xylose Lysine Desoxycholate Agar - DMSO: dimethylsulfoxid v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết khảo sát hoạt tính kháng E.coli cao chiết dung môi 50 Bảng 3.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng Bacillus cereus cao chiết dung môi 52 Bảng 3.3 Kết khảo sát hoạt tính kháng Salmonella cao chiết dung môi 54 Bảng 3.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng S.aureus cao chiết dung mơi 56 Bảng 3.5 Kết khảo sát hoạt tính kháng Listeria monocytogenes cao chiết dung môi 58 vi Đồ án tốt nghiệp KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận - Tách chiết thu hồi đƣợc cao chiết nƣớc, ethanol 50%, ethanol 70%, eth-anol 90% từ đắng Trong cao chiết ethanol 70% cho hiệu suất cao lớn (12,3 ± 1,1) - Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết loại dung môi khác từ đắng vi sinh vật thị cho thấy cao chiết ethanol 70% thể hoạt tính kháng khuẩn mạnh - Từ kết xác định số MIC nhận thấy giá trị MIC cao chiết ethanol 70% có giá trị dao động từ 50 – 100 mg/ml Kiến nghị - Xác định số nồng độ ức chế tối thiểu cao chiết ethanol 70% nồng độ chia nhỏ - Thử nghiệm độc lực cao chiết ethanol 70% mơ hình chuột - Thử nghiệm khả ức chế với chủng vi khuẩn cao chiết ethanol 70% mơ hình chuột - Sản xuất trà Lá Đắng dƣới dạng túi lọc 61 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Hoàng Thị Sáu, Phân loại học thực vật.: NXB giáo dục Việt Nam, 2012 1] R.H.F Manske, the alkaloid – chemistry and Physiology, volume XIV, 2] Academic Press – New York – London, 1973 Cây Lá Đắng - Vernonia Amygdalina (2016, Apr.) Y DƢỢC VIỆT 3] NAM [Online] http://ydvn.net/contents/view/11998.cay-la-dang-vernoniaamygdalina.html Phan Đình Châu, sở kỹ thuật tổng hợp hóa dược, tài liệu giảng dạy 4] sau.: Đại học trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội., 1997 Ngô Văn Thụ ,., 1978 5] G P Moss., “Nomenclature of Steroids (Recommendations 1989)” 6] Pure & Appl Chem.61 (10): 1783–1822., 1989 Nguyễn Thị Kim Ngân, "“Nghiên cứu thành phần alkaloid, flavonoid 7] hoạt tính chống oxy hóa sen nelumbo nucifera”," Trƣờng Đại học Công nghệ TP HCM, TP Hồ Chí Minh., Đồ án tốt nghiệp 2015 Nguyen Thi Huong, "Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn bƣớc đầu xác 8] định thành phần hóa học số cao chiết từ Eupatorium sp," Trƣờng Đại học Cơng Nghệ Tp.HCM, Hồ Chí Minh, Đồ án tốt nghiệp 2015 Tiểu luận môn học hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học (2015, 9] May) 123doc [Online] http://123doc.org/document/2699012-nhom-hop-chatflavonoid-tong-quan- hoat-tinh-sinh-hoc-cac-phuong-phap-chiet-suat-va-ungdung.htm?page=7 Đại cƣơng chiết pha rắn ứng dụng chiết pha rắn (2013, Aug.) tai 10] lieu com [Online] http://tai-lieu.com/tai-lieu/dai-cuong-chiet-pha-ran-va-ung- 62 Đồ án tốt nghiệp dung-cua-chiet-pha- ran-566/ Giới thiệu số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật- Dƣơng Văn Hợp, 11] Nguyễn Lân Dũng (2007, Mar.) vietsciences [Online] http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/kythuatbaoquanvisinhvat.ht m Phạm Minh Nhựt, Thực hành vi sinh đại cương.: Trƣờng Đại học Công 12] Nghệ Tp HCM, 2013 Lê Ngọc Thuỳ Trang, "Phân lập khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến khả 13] sinh hợp chất kháng khuẩn vi khuẩn Lactobacillus plantarum," Trƣờng Đại học Cơng Nghệ Tp.HCM , Khố luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Công nghệ Sinh học 2013 Nguyễn Thƣợng Đông Đặng Quang Chung, Kỹ thuật chiết xuất dược 14] liệu.: NXB Khoa học kỹ thuật, 2008 Tiểu luận mơn học hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học 123doc [Trực tuyến] 2015 http://123doc.org/document/2699012-nhom-hop-chatflavonoid-tong-quan- hoat-tinh-sinh-hoc-cac-phuong-phap-chiet-suat-va-ung- dung.htm?page=7 10 Đại cƣơng chiết pha rắn ứng dụng chiết pha rắn tai lieu com [Trực tuyến] 2013 http://tai-lieu.com/tai-lieu/dai-cuong-chiet-pha-ran-va-ungdung-cua-chiet-pha- ran-566/ Tài liệu nước R.H.F Manske the alkaloid – chemistry and Physiology, volume XIV, G P Moss “Nomenclature of Steroids (Recommendations 1989)” Pure & Appl Chem.61 (10): 1783–1822 1989 63 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC A Kết thu hồi cao chiết từ đắng Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết dung môi khác nhóm vi khuẩn 1.1 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm E Coli Hình Đƣờng kính vịng ức chế vi khuẩn E.coli cao chiết đắng từ dung môi khác Đồ án tốt nghiệp 1.2 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết dung mơi khác Bacillus Cereus Hình Đƣờng kính vịng ức chế vi khuẩn B Cereus cao chiết đắng từ dung môi khác Đồ án tốt nghiệp 1.3 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết loại dung mơi nhóm Salmonella Hình Đƣờng kính vịng ức chế vi khuẩn Samonella cao chiết đắng từ dung môi khác Đồ án tốt nghiệp 1.4 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết dung mơi S Aureus Hình Đƣờng kính vịng ức chế vi khuẩn S Aureus cao chiết đắng từ dung môi khác Đồ án tốt nghiệp 1.5 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết dung mơi khác nhóm Listeria monocytogenes Dung môi Nƣớc ETHANOL 50% ETHANOL 70% ETHANOL 90% KHÁNG SINH Hình Đƣờng kính vịng ức chế vi khuẩn L monocytogenes cao chiết đắng từ dung môi khác Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC C Kết xử lý số liệu đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nhóm vi khuẩn 1.1 Kết xử lý số liệu S.Aurius Đồ án tốt nghiệp 1.2 Kết xử lý số liệu B Cereus Đồ án tốt nghiệp 1.3 Kết xử lý số liệu Samonella Đồ án tốt nghiệp 1.4 Kết xử lý số liệu E Coli 10 Đồ án tốt nghiệp 1.5 Kết xử lý số liệu Listeria monocytogenes 11 Đồ án tốt nghiệp ... nhận dịch chiết lá đắng kỹ thuật chiết ngâm dầm ethanol 50%, 70%, 90% nƣớc - Đánh giá hiệu suất thu hồi cao từ lá đắng - Khảo sát khả kháng khuẩn cao chiết từ lá đắng chủng vi khuẩn - Khảo sát nồng... nhận dịch chiết lá đắng kỹ thuật chiết ngâm dầm ethanol 50%, 70%, 90% nƣớc - Đánh giá hiệu suất thu hồi cao từ lá đắng - Khảo sát khả kháng khuẩn cao chiết từ lá đắng chủng vi khuẩn - Khảo sát nồng... 3.1 Kết khảo sát hoạt tính kháng E.coli cao chiết dung môi 50 Bảng 3.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng Bacillus cereus cao chiết dung môi 52 Bảng 3.3 Kết khảo sát hoạt tính kháng Salmonella