Đặc điểm của gen isoflavone synthase 1 phân lập từ hai giống đậu tương đt26 và đt84

ĐAỊ HOCC̣ THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐAỊ HOCC̣ SƢ PHAM HÀ THU NGA ĐẶC ĐIỂM CỦA GEN ISOFLAVONE SYNTHASE (IFS1) PHÂN LẬP TỪ HAI GIỐNG ĐẬU TƢƠNG ĐT26 và ĐT84 LUÂṆ VĂN THACC̣ SĨSINH HOCC̣ THÁI NGUYÊN - 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn ĐAỊ HOCC̣ THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ THU NGA ĐẶC ĐIỂM CỦA GEN ISOFLAVONE SYNTHASE (IFS1) PHÂN LẬP TỪ HAI GIỐNG ĐẬU TƢƠNG ĐT26 và ĐT84 Chuyên ngành : Di truyền hocC̣ Mã số: 60.42.01.21 LUÂṆ VĂN THACC̣ SĨSINH HOCC̣ Ngƣời hƣớng dẫn khoa hocC̣: GS.TS Chu Hoàng Mâu Thái nguyên, 4- 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu tơi dƣới hƣớng dẫn GS.TS Chu Hồng Mậu Các số liệu, kết luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Mọi thơng tin trích dẫn luận văn đƣợc ghi rõ nguồn gốc Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm kết quảtrong luận văn Thái Nguyên, ngày 20 tháng năm 2016 Tác giả luận văn Hà Thu Nga i LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS TS Chu Hoàng Mậu đa ̃tận tình bảo, hƣớng dẫn suốt thời gian nghiên cứu , thực vàhoàn thành luận văn thacC̣ sỹ sinh hocC̣ Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Bô C̣môn Di truyền &Sinh học hiêṇ đaị, Khoa Sinh hocC̣ , trƣờng Đại học sƣ phạm - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ thời gian học tập nhƣ thực đề tài luâṇ văn thacC̣ si ̃ Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Văn Sơn cán Phịng Cơng nghệ DNA ứng dụng, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ tốt để tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin đƣợc bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới gia đình, đồng nghiệp bạn bè ln động viên, khích lệ, chia sẻ khó khăn tơi suốt q trình học tập nghiên cứu hồn thiện luận văn Thái Nguyên, ngày 20 tháng năm 2016 Tác giả luận văn Hà Thu Nga ii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC .iii ́ ́ DANH MUCC̣ NHƢ ̃NG TƢƢ̀ VÀCHƢ ̃ VIÊT TĂT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu .2 ̉̉ ̀ Chƣơng TÔNG QUAN TAI LIÊỤ .3 1.1 CÂY ĐÂỤ TƢƠNG 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại học vàđặc điểm sinh học đậu tƣơng 1.1.2 Thành phần hóa học hạt đậu tƣơng 1.2 ĐẶC ĐIỂM CỦA ISOFLAVONE 11 1.2.1 Cấu trúc thành phần isoflavone 11 1.2.2 Cơ chế hoạt động chƣ́c isoflavone 13 ̉ 1.3 CHUYÊN HÓA ISOFLAVONE VÀGEN MÃHÓA ISOFLAVONE SYNTHASE 14 1.3.1 Chu trinhƢ̀ chuyển hóa isoflavone hạt đậu tƣơng 14 1.3.2 Con đƣờng sinh tổng hợp isoflavone 15 1.3.3 Isoflavone synthase vàgen ma h ̃ óa IFS 16 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 19 ́ ̉ 2.1 VÂṬ LIÊỤ, HÓA CHẤT, THIÊT BI C̣VÀĐIẠ ĐIÊM NGHIÊN CƢ́U .19 2.1.1 Vật liệu 19 2.1.2 Hóa chất 20 2.1.3 Thiết bị 21 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu 21 iii 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CƢ́U 21 2.2.1 Phƣơng pháp phân tich́ hàm lƣợng isoflavone mẫu đậu tƣơng ĐT26, DT90, DT84 21 2.2.2 Phƣơng pháp tách chiết mRNA tổng số 22 2.2.3 Phƣơng pháp nhân đoạn mã hóa gen GmIFS1 23 2.2.4 Tách dòng phân tƣ̉ 25 2.2.5 Phƣơng pháp xác định phân tích trình tự nucleotide gen 28 2.2.6 Phân tich́ vàxƣ̉ lýdƣ ̃liêụ 28 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 HÀM LƢỢNG ISOFLAVONE TRONG HẠT NẢY MẦM CỦA BA ́ GIÔNG ĐÂỤ TƢƠNGĐT26, ĐT90, ĐT84 29 3.2 TÁCH DÒNG VÀ XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE CỦ A GEN GmIFS TƢƢ̀ mRNA CỦA ĐÂỤ TƢƠNG 32 3.2.1 Thiết kế cặp mồi PCR vànhân gen GmIFS 32 3.2.2 Tách dịng phân tử đoạn mã hóa gen GmIFS E.coli .34 3.2.3 Trình tự gen GmIFS phân lâpC̣ tƣƢ̀ hai giống đâụ tƣơng ĐT26 ĐT84 35 Ƣ̀ 3.3 SƢC̣ĐA DANGC̣ VÊTRÌNH TƢC̣NUCLEOTIDE VÀAMINO ACID SUY ̃ DIÊN CỦA GEN GmIFS1 42 3.3.1 Sƣ đC̣ a dangC̣ vềtrinhƢ̀ tƣ C̣nucleotide gen GmIFS1 42 3.3.2 Sƣ đC̣ a dangC̣ vềtrinhƢ̀ tƣ aC̣ mino acid suy diêñ gen GmIFS1 44 ́ ̀ KÊT LUÂṆ VÀĐÊNGHI C̣ 47 Kết luâṇ 47 Đềnghi .C̣ 47 ́ ́ CÔNG TRÌNH CÔNG BÔLIÊN QUAN ĐÊN LUÂṆ VĂN 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 iv DANH cs bp kb kDa DEPC DNA dNTP cDNA mRNA IFS PCR RNA TAE X-gal E coli iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần phản ứng tổng hợp cDNA 23 Bảng 2.2 Trình tự cặp mồi PCR sƣ̉ dungC̣ nghiên cƣ́u 23 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng PCR 24 Bảng 2.4 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 24 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng nối gen GmIFS1 vào vector pBT 26 Bảng 3.1 Hàm lƣợng daidzein , genistein vàisoflavo ne haṭnảy mầm ngày tuổi giống đâụ tƣơng ĐT26, ĐT90 ĐT84 31 Bảng 3.2 Sự sai khác trình tự nucleotide gen GmIFS1 giƣ ̃a giống đậu tƣơng ĐT26, ĐT84 NM_001249093 39 Bảng 3.3 Các vị trí sai khác trình tự amino acid suy diễn từ gen GmIFS1 giƣ ̃a ba giống đâụ tƣơng ĐT26, ĐT84, NM_001249093 41 Bảng 3.4 Trình tự gen GmIFS1 giống đậu tƣơng ĐT26, ĐT84 trình tự có mã số Ngân hàng gen quốc tế đƣợc sử dụng phân tích 43 Bảng 3.5 Hê sC̣ ốtƣơng đồng vàhê C̣sốphân ly giống đâụ tƣơng dƣạ trình tự nucleotide gen GmIFS1 44 Bảng 3.6 Hê sC̣ ốtƣơng đồng vàhê C̣sốphân ly giống đâụ tƣơng dƣạ trình tự amino acid suy diễn gen GmIFS1 v 45 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc hoá học aglucone Hình 1.2 Cấu trúc hố học ß-glucoside Hình 1.3 Con đƣờng sinh tổng hơpC̣ isoflavone IFS màu xanh dƣơng) [14] Hình 2.1 Sơ đồ vector pBT Hình 3.1 Hình ảnh hạt đậu tƣơngnảy mầm ngày tuổi đƣợc sử dụng chiết rút daidzein genistein A ĐT26, B: ĐT90, C: ĐT84 Hình 3.2 Sắc ky đồphân tich daidzein , genistein tƣ haṭnay mầm ngày tuổi ́́ giống đậu tƣơng A: ĐT26, B: ĐT90, C: ĐT84 Hình 3.3 Biểu đồso sanh ham lƣơngC̣ daidzein va genistein haṭnay mầm ́́ giƣa ba giống đâụ tƣơngĐT 26, ĐT90, ĐT84 (mg/100 g) Thanh ́ ̃ đƣng cột biểu đồ biểu thị sai số chuẩn ( ́́ Hình 3.4 Kết qua điêṇ di kiểm tra san phẩm PCR nhân gen ́̉ giống đâụ tƣơng ĐT26 ĐT84 Hình 3.5 A: Kết điện di kiểm tra sản phẩm colony SoyIFS-NcoI-F/ SoyIFS-NotI-R từ dòng khuẩn lạc co kiểu hinh trắng đƣơcC̣ lƣạ choṇ ngâũ nhiên M: thang DNA kb; giếng 1, 2: ĐT26; giếng 3,4: ĐT84 Hình 3.6 Trình tự nucleotide gen GmIFS1 phân lâpC̣ tƣƢ̀ hai giống đâụ tƣơng ĐT26 ĐT84 so với trinhƢ̀ tƣ C̣gen IFS1 giống đậu tƣơng mang mã số NM_001249093 Ngân hàng Gen 37 Hình 3.7 Trình tự amino acid suy diễn từ gen GmIFS giống đâụ tƣơng ĐT 26, ĐT84 từ gen IFS phân lâpC̣ tƣƢ̀ hai mang ma s ̃ ố NM_001249093 Ngân hàng Gen 40 Hình 3.8 Vị trí gen GmIFS1 phân lâpC̣ tƣƢ̀ hai giống đâụ tƣơng ĐT 26 ĐT84 .42 Hình 3.9 Sơ đồ hình mơ tả mối quan hệ mơṭsốgiống đậu tƣơng dƣạ trình tự nucleotide gen GmIFS1 44 Hình 3.10 Sơ đồ hình mơ tả mối quan hệ mơṭsốgiống đậu tƣơng dƣạ trình tự amino acid suy diêñ gen GmIFS1 46 vi Bảng 3.4 Trình tự gen GmIFS1 giống đậu tƣơng ĐT 26, ĐT84 trình tự có mã số Ngân hàng gen quốc tế đƣơcC̣ sƣ̉ dungC̣ phân tích TT Giớng/ Mã sớ GenBank IFS -ĐT26 IFS-ĐT84 NM_001249093 KP843618 JN133900 JQ934956 EU526830 GU062790 EU391460 10 EU391468 11 EU391472 12 EU391474 13 EU391475 14 DQ835285 15 AF195798 Tiến hành phân tich́ so sánh trình tự nucleotide vàtrinhƢ̀ tƣ C̣amino acid suy diêñ gen GmIFS1 giống đậu tƣơng để xác định hệ số tƣơng đồng hệ số phân ly (Bảng 3.5), thiết lập sơ đồ hình vềmối quan dC̣ i truyền giƣ ̃a giống đâụ tƣơng (Hình 3.9) Kết quảphân tich ́ sC̣ ốtƣơng đồng vàhê C̣sốphân ly dƣạ trinhƢ̀ tƣ nC̣ ucleotide gen GmIFS1 ở bảng 3.5 cho thấy sC̣ ốtƣơng đồng dao đơngC̣ tƣƢ̀ 98,6% đến 100%, cịn hệ số phân ly từ 0,0% đến 1,4% Mối quan dC̣ i truyền giƣ ̃a giống đâụ tƣơng dƣạ trinh Ƣ̀ tƣ C̣nucleotide gen GmIFS1 đƣơcC̣ thểhiêṇ ởsơ đồhinhƢ̀3.9 Dƣạ trinhƢ̀ tƣ nC̣ ucleotide gen GmIFS1, sơ đồhinhƢ̀ cho thấy 15 giống đâụ tƣơng chia làm hai nhánh chinh,́ phân bốtrong nhóm Nhánh I có giống ĐT26, nhánh II gồm giống ĐT84 (nhánh phụ 43 II-1) 13 giống cịn laịphân bốtrong nhóm ở nhánh phụ II -2 Khoảng cách di truyền giƣ ̃a giống ĐT84 giống khác 0,7% Bảng 3.5 Hê sC̣ ốtƣơng đồng vàhê C̣sốphân ly giống đâụ tƣơng dƣạ trình tự nucleotide gen GmIFS1 II-2 II II-1 I Hình 3.9 Sơ đồ hình mơ tả mối quan hệ mơṭsốgiống đậu tƣơng dƣạ tr ên trình tự nucleotide gen GmIFS1 3.3.2 Sƣ C̣đa dangC̣ vềtrinh̀ tƣ C̣amino acid suy diêñ gen GmIFS1 Tiếp tucC̣ phân tich tinh đa dangC̣ di truyền dƣạ trinh tƣ C̣amino acid suy diêñ cua gen ́̉ giống đậu tƣơngdựa trình tự amino acid suy diễn gen GmIFS1 đƣơcC̣ thểhiêṇ ởbảng 3.6 44 Bảng 3.6 Hê sC̣ ốtƣơng đồng vàhê C̣sốphân ly giống đâụ tƣơng dƣạ trình tự amino acid suy diêñ gen GmIFS1 Bảng 3.6 cho thấy C̣sốtƣơng đồng giƣ ̃a giống đâụ tƣơng tƣƢ̀ 97,3% đến 100% hệ số phân ly từ 0% đến 2,9% Mối quan C̣ di truyền giƣ ̃a giống đâụ tƣơng dƣạ trinhƢ̀ tƣ C̣ amino acid suy diêñ gen GmCHI đƣơcC̣ thểhiêṇ ởsơ đồ hình 3.10 Trên hinhƢ̀ 3.10, mƣời lăm giống đâụ tƣơngphân bốtrong hai nhánh Nhánh thứ có giống ĐT 84 14 giống cịn laịthcC̣ nhánh thứ hai với khoảng cách di truyền 1,5% Trong nhánh chinh́ thƣ́ hai (II) lại chia làm hai nhánh phụ (II-1 II -2) nhánh phụ II -1 có giống ĐT 26, nhánh phụ II -2 gồm 13 giống laị Nhƣ vâỵ sƣ̉ dungC̣ trinh Ƣ̀ tƣ aC̣ mino acid suy diêñ gen GmIFS1 để phân tích mối quan C̣của 15 giống đâụ tƣơngcho thấy giống đâụ tƣơngphân bốở nhóm, đónhóm có giống ĐT 26 nhóm có giống ĐT 84 45 II-2 II II-1 I % Hình 3.10 Sơ đồ hình mơ tả mối quan hệ mơṭsốgiống đậu tƣơng dƣạ trình tự amino acid suy diêñ gen GmIFS1 Kết qua phân tich dƣạ trinh tƣ aC̣ mino acid suy diêñ cua gen GmIFS1 ở ́̉ sơ đồhinhƢ̀ 3.10 thấy giống ĐT 26 ĐT 84 phân bốởhai nhánh khác Điều có liên quan đến khác biệt vềhàm lƣơngC̣ isoflavone giƣ ̃a hai giống ĐT 26 ĐT84 vấn đề cần tiếp tục nghiên cứu 46 ́ ̀ KÊT LUÂṆ VÀĐÊNGHI C̣ Kết luân 1.1 Hàm lƣợng daidzein, genistein haṭnảy mầm ngày tuổi ba giống đâụ tƣơng ĐT 26, ĐT90 ĐT 84 dao đôngC̣ tƣƢ̀ 29,43% đến 64,27% Giống đâụ tƣơng ĐT 26 có hàm lƣợng daidzein , genistein haṭnảy mầm ngày tuổi cao vàthấp ởgiống ĐT 84 1.2 Gen ma h ̃ óa isoflavone synthase đa p ̃ hân lâpC̣ thành công tƣƢ̀ mARN giống đâụ tƣơng ĐT 26 ĐT84 Kích thƣớc gen GmIFS1 1566 nucleotide, mã hóa 521 amino acid Hê sC̣ ốtƣơng đồng vềtrinhƢ̀ tƣ C̣nucleotide gen GmIFS1 ở hai giống đậu tƣơng ĐT 26, ĐT84 98,7% tƣơng đồng với giống đậu tƣơng mang ma s ̃ ốNM_001249093 GenBank là99,0% 1.3 Khoảng cách di truyền giống ĐT 26 ĐT 84 so với 13 giống đâụ tƣơng có trình tự gen IFS GenBank dƣạ trinhƢ̀ tƣ nC̣ ucleotide GmIFS1 0,6% -0,7% dựa trình tự amino acid suy diêñ là1,35% -1,5% Đềnghi C̣ Cần tiếp tục nghiên cứu để tìm mối liên quan khác biệt trình tự nucleotide trình tự amino acid với hàm lƣợng daidzein genistein Trình tự gen GmIFS1 phân lâpC̣ tƣƢ̀ giống đâụ tƣơ ng ĐT 26 có hàm lƣợng daidzein, genistein cao (64,27 mg/100 g) đề nghị sử dụng làm nguyên liệu để thiết kếvector chuyển gen mucC̣ đich́ nâng cao hàm lƣơngC̣ isoflavone đâụ tƣơng kỹthuâṭchuyển gen 47 ́ ́ CÔNG TRÌNH CÔNG BÔLIÊN QUAN ĐÊN LUÂṆ VĂN Hà Thu Nga , Lê Thi HồngC̣ Trang , Lê ĐinhƢ̀ Chắc , Hoàng Phú Hiệp , Chu Hoàng Mậu (2016) Đặc điểm gen GmIFS phân lâpC̣ tƣƢ̀ hai giống đâụ tƣơngkhác vềhàm lƣơngC̣ isoflavone Kỷ yếu Hợi nghị Khoa học tồn quốc nghiên cứu giảng dạy sinh học ởViêṭNam ĐàNẵng 5-2016: 551 -559 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Viêṭ Vũ Đình Chính (2010), Cây đậu tương kỹ thuật trồng trọt, Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội Ngô Thế Dân (1999), Cây đậu tương, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Ý Đức (2000), Dinh dưỡng sức khỏe, Nxb Y học, TP Hồ Chí Minh Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội Chu Hoàng Mâụ (2008), Phƣơng pháp phân tich́ di truyền hiêṇ đaịtrong choṇ giống trồng Nxb ĐaịhocC̣ Thái Nguyên Phạm Văn Thiều, (2002), Cây đậu tương - Kỹ thuật trồng chế biến sản phẩm, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Tiếng Anh AccorsiNeto A., Haidar M., Simoes R., Simoes M., Soares J., Baracat E (2009), “Effects of isoflavones on the skin of postmenopausal women: a pilot study”, Clinics (Sao Paulo), 64(6), 505-510 Anderson J.W., Johnstone B.M., Cook Newell M.E (1995), “Meta- analysis of effects of soy protein intake on serum lipids in humans”, New England Journal of Medicine, 333, 276-282 Bolanos R., Del Castillo A., Francia J (2010), “Soy isoflavones versus placebo in the treatment of climacteric vasomotor symptoms: systematic review and meta-analysis”, Menopause, 17(3), 660-666 10 Bong G.K., Song Y.K., Hee S.S., Chan L., Hor G.H., Su I.K., Joong H.A (2003), “Cloning and Expression of the Isoflavone Synthase Gene (IFS-Tp) fromTrifoliumpratense”, Mol Cells, 15(3), 301-306 11 Cheng H, Wang J, Chu S, Yan HL, Yu D, 2013 “Diversifying selection on flavanone 3-hydroxylase and isoflavone synthase genes in cultivated soybean and its wild progenitors” PLoS One ;8(1), 154 12 11 Dixon RA, Ferreira D (2002), “Genistein”, Phytochemistry 60(3):205- 49 13 Eduardo F., Luis G., Gilda C., Elba L., Rodrigo M.C and Ivan P (2013), “Soybean - Bio-Active Compounds", Agricultural and Biological Sciences, 25(8), 521-545 14 Gutierrez-Gonzalez JJ, Guttikonda SK, Tran LS, Aldrich DL, Zhong R, Yu O, Nguyen HT, Sleper DA (2010), “Differential expression of isoflavone biosynthetic genes in soybean during water deficits”, Plant cell physiol, 51(6) 15 Hao Chen, Yuegang Zuo, Yiwei Deng (2001) Separation and determination of flavonoids and other phenolic compounds in cranberry juice by highperformance liquid chromatography”, Journal of Chromatography A, 913: 387395 16 Ho S.C., Chan A.S., Ho Y.P (2007), “Effects of soy isoflavone supplementation on cognitive function in Chinese postmenopausal women: a double-blind, randomized, controlled trial”, Menopause, 14(3), 489-499 17 Jin-Ae Kim, Seung-Beom Hong, Woo-suk Jung, Chang-Yeon Yu, Kyung-Ho Ma, Jae-Goon Gwang, Ill-Min Chung, (2007) “Comparison of isoflavones composition in seed, embryo, cotyledon and seed coat of cookedwith-rice and vegetable soybean (Glycine max (L.)) varieties”, Food Chemistry, Volume 102, Isue 3, 738-744 18 Jung W, Yu O, Lau SM, Odell J, Fader G, McGonigle B, (2000), "Identification and expression of isoflavone synthase, the key enzyme for biosynthesis of isoflavones in legumes", Nature biotechnology, 18(2):208-212 19 Keshun L (2004), Soybeans as Functional Foods and Ingredients, University of Missouri Columbia, Missouri, AOCS Publishing 20 LinlsakovaP., RiecanskyI., Jagla F (2010), “The Physiological Actions of Isoflavone Phytoestrogens”, Physiol Res,59(1), 651-664 21 LIX, Qin JC, Wang QY, Wu X, Lang CY, Pan HY, Gruber MY, Gao MJ(2011), “Metabolic engineering of isoflavonegenistein in Brassica napus with soybean isoflavone synthase”, Plant Cell Rep.2011 Aug;30(8):14351442 50 22 Lyle Ralston,2 Senthil Subramanian, Michiyo Matsuno, Oliver Yu (2005), Partial Reconstruction of Flavonoid and Isoflavonoid Biosynthesis in Yeast Using Soybean Type I and Type II Chalcone Isomerases Plant Physiol 2005 Apr; 137(4): 1375-1388 23 Maria G.Campos, Miguel P.Matos, Maria T.Camara, Margarida M.Cunha; (2007) "The variability of isoflavones in soy seeds and the possibility of obtaining extracts for over the counter tablet preparations that can be standardized" Industrial Crops and Products, 26: 85-92 24 Matsura M., Akio O (2006) β-Glucosidases from Soybeans Hydrolyze Daidzin and Genistin”, Journal of Food Science, 58(1): 144 - 147 25 Messina M.J (2003), “Emerging evidence on the role of soy in reducing prostate cancer risk”, Nutr Rev, 61(4), 117-131 26 Oliver Y., Brian M.G.(2005) Metabolic engineering of isoflavone biosynthesis Advances in Agronomy 86: 147-190 27 Pendleton J M., Tan W.W., Anai S (2008), “Phase II trial of isoflavone in prostate-specific antigen recurrent prostate cancer after previous local therapy”, BMC Cancer, 8(1), 13 28 Redondo - Cuenca M.J.Villanueva - Suarez, M.D.Rodriguez - Sevilla, I.Mateos - Aparicio, (2006) “Chemical composition and dietary fibre of yellow and green commercial soybeans (Glycinemax)”, Food Chemistry 101: 12161222 29 Ribeiro M.L.L , J.M.G Mandarino, M.C Carrão-Panizzi, M.C.N de Oliveira, C.B.H Campo, A.L Nepomuceno, E.I Ida (2007), “Isoflavone content and β-glucosidase activity in soybean cultivars of different maturity groups” Journal of Food Composition and Analysis, 20(1): 19-24 30 Rimbach G, Boesch-Saadatmandi C, Frank J, Fuchs D, Wenzel U, Daniel H, Hall WL, Weinberg PD, (2008) “Dietary isoflavones in the prevention of cardiovascular diseasea Apr;46(4):1308-1319 molecular perspective”, Food ChemToxicol 51 31 Sacks F.M., Lichtenstein A., Van H.L., Harris W., Kris E.P., Winston M (2006), “Soy protein, isoflavones, and cardiovascular health: an American Heart Association Science Advisory for professionals from the Nutrition Committee”, American Circulation, 113(7), 1034-1044 32 Sambrook J., Fritsch E F., Maniatis T (2001), “Molecular Cloning: A Laboratory Manual” New York, Cold Spring Harbor Laboratory Press 33 Setchell K.D., Brown N.M., Lydeking O.E (2002), “The clinical importance of the metabolite equol-a clue to the effectiveness of soy and its isoflavones”, Japanese Nutrition, 132(12), 3577-3584 34 Shuichi K (2006), “Fundamental concepts in the safety assessment of food containing soy isoflavones for the purpose of specified health use”, Food Safety Commission, Novel Foods Expert Committee, Japanese 35 Sohn SI, Kim YH, Kim SL, Lee JY, Oh YJ, Chung JH and Lee KR (2015) Glycine max isoflavone synthase (IFS1), mRNA GenBank, ACCESSION: NM_001249093 36 Sohn SI, Kim YH, Kim SL, LeeJY, Oh Yj, Chung JH, LeeKR (2014), “Genistein production in rice seed via transformation with soybean IFS genes”, Plant Sci 217-218: 27-35 doi: 10.1016/j.plantsci.2013.11.015 37 V S Sreevidya, C Srinivasa Rao, S B Sullia, Jagdish K Ladha and Pallavolu M Reddy, (2006) “Metabolic engineering of rice with soybean isoflavone synthase for promoting nodulation gene expression in rhizobia”, Journal of Experimental Botany, Vol 57, No, 1957-1969 38 Vantyghem S.A., Wilson S.M., Postenka C.O., Al-Katib W., Tuck A.B., Chambers A F (2005), “Dietary genistein reduces metastasis in a postsurgical orthotopic breast cancer model” Cancer Res,65(1), 3396-3403 39 Wang L.Q (2002), “Mammalian phytoestrogens: enterodiol and enterolactone”, J Chromatogr B AnalytTechnol Biomed Life Sci, 1(2), 289-309 40 Wei P., Liu M., Chen Y., Chen D.C (2012), “Systematic review of soy isoflavone supplements on osteoporosis in women”, Asian Pac J Trop Med, 5(3), 243-248 52 41 White L.R., Petrovitch H., Ross G.W., et al (2000), “Brain aging and midlife tofu consumption”, J Am Coll Nutr, 19(2), 242-255 42 Wiseman H., Casey K., Clarke B.D., Bowey E (2002), “isoflaoneaglycone and gluconjugate content of high and low soy UK foods used in nutritional studies”, J Agric Food Chem, 50 (1), 1404-1410 43 Woosuk Jung, Oliver Yu, Sze-Mei Cindy Lau, Daniel P O'Keefe, Joan Odell, Gary Fader & Brian McGonigle, “Identification and expression of isoflavone synthase, the key enzyme for biosynthesis of isoflavones in legumes”, Nature Biotechnology 18, 208 - 212 (2000) doi:10.1038/72671 44 Zhao L., Brinton R.D (2007), “WHI and WHIMS follow-up and human studies of soy isoflavones on cognition”, Expert Rev Neurother, 7(11), 15491564 III Trang web 45 http://text.123doc.org/document/23325-xay-dung-quy-trinh-chuyen- gen-gus-vao-giong-dau-tuong-dt26-thong-qua-vi-khuan-agrobacteriumtumefaciens-va-quy-trinh-tai-sinh-cay.htm 46 http://www.hoasenlk.com/tin-tuc/dau-tuong-166.html 47 http://www.slideshare.net/TranDangLoc/10-isoflavones-tinh-cht-mm- u-nnh-novasoy 48 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_001249093.1 53 ... phân loại học v? ?đặc điểm sinh học đậu tƣơng 1. 1.2 Thành phần hóa học hạt đậu tƣơng 1. 2 ĐẶC ĐIỂM CỦA ISOFLAVONE 11 1. 2 .1 Cấu trúc thành phần isoflavone 11 1. 2.2 Cơ chế... 200 10 0 -10 0 0.0 A mAU 260nm,4nm (1. 00) 400 300 /10 .264/7748 51 200 10 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10 .0 12 .5 15 .0 17 .5 12 .5 15 .0 17 .5 B mAU 260nm,4nm (1. 00) 400 /10 .404/808 519 300 200 10 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10 .0... HỌC SƢ PHẠM HÀ THU NGA ĐẶC ĐIỂM CỦA GEN ISOFLAVONE SYNTHASE (IFS1) PHÂN LẬP TỪ HAI GIỐNG ĐẬU TƢƠNG ĐT26 và ĐT84 Chuyên ngành : Di truyền hocC̣ Mã số: 60.42. 01. 21 LUÂṆ VĂN THACC̣ SĨSINH