Khảo sát khả năng sinh hợp chất kháng khuẩn của vi khuẩn lactic từ một số sản phẩm lên men truyền thống việt nam​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH HỢP CHẤT KHÁNG KHUẨN CỦA VI KHUẨN LACTIC TỪ MỘT SỐ SẢN PHẨM LÊN MEN TRUYỀN THỐNG VIỆT NAM : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngành Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : Ths Phạm Minh Nhựt Sinh viên thực MSSV: 1051110100 : Phan Thị Thùy Linh Lớp: 10DSH02 TP Hồ Chí Minh, 2014 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, hình ảnh, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu trước Nếu có gian dối nào, tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm Tp Hồ Chí Minh, ngày… tháng …năm 2014 Sinh viên Phan Thị Thùy Linh iii Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Trước tiên cho em xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc đến đến Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Kỹ Thuật Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, Quý thầy cô giảng dạy khoa Môi Trường Công Nghệ Sinh Học với tất thầy cô truyền dạy kiến cho em học kì vừa qua Những năm học vừa qua giúp em tích lũy kiến thức vơ quan trọng cần thiết cho em, kiến thức giúp em nhiều sống áp dụng vào cơng việc sau giúp ích cho xã hội, sống Đặc biệt, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến thầy Phạm Minh Nhựt, người hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian em thực đề tài Bên cạnh em xin cảm ơn thầy phịng thí nghiệm tạo hội cho em có khơng gian thực đồ án cảm ơn người bạn quan tâm gúp đỡ em nhiệt tình thời gian vừa qua Đồng thời em xin kính chúc Quý thầy cô trường Đại Học Kỹ Thuật Công nghệ thành phố Hồ Chí Minh ln mạnh khỏe để tiếp bước đường nghiệp “Trồng Người” Chúc bạn dồi sức khỏe thành công nghiệp Cuối cùng, gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ba mẹ, anh chị em gia đình quan tâm nâng đỡ khó khăn q trình học tập sống để có thành tựu hơm Tp Hồ Chí Minh, ngày…tháng …năm 2014 Sinh viên Phan Thị Thùy Linh iv Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM ƠN iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮC viii DANH SÁCH CÁC BẢNG ix DANH SÁCH CÁC HÌNH x MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu 3 Nội dung nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vi khuẩn lactic 1.2 Đặc điểm chung khuẩn lactic 1.2.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lactic 1.2.2 Đặc điểm sinh lý- sinh hóa 1.2.2.1 Nhu cầu dinh dưỡng vi khuẩn lactic 1.2.2.2 Quá trình trao đổi chất 1.2.3 Cơ sở sinh học trình hình thành hợp chất kháng khuẩn .10 1.2.3.1 Một số hợp chất kháng khuẩn vi khuẩn lactic sản sinh 11 1.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình sản xuất hợp chất kháng khuẩn vi khuẩn lactic 15 1.3.1 Môi trường nuôi cấy 15 1.3.2 Điều kiện nuôi cấy 16 1.3.3 Chất ức chế chất làm bất hoạt bacteriocin 17 1.4 phân bố vi khuẩn lactic 17 1.4.1 Sữa chua lên men 18 1.4.2 Rau cải muối chua 19 1.4.3 Các sản phẩm lên men từ thịt (nem chua) 20 1.5 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn lactic sinh hợp chất kháng khuẩn nƣớc 20 v Đồ án tốt nghiệp 1.5.1 Các nghiên cứu nước 20 1.5.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 22 CHƢƠNG NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Vật liệu 26 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 26 2.1.2 Thời gian thực 26 2.2 vật liệu nguyên cứu 26 2.2.1 nguồn mẫu phân lập vi khuẩn lactic 26 2.2.2 Vi khuẩn thị 26 2.2.3 Hóa chất dụng cụ thiết bị 27 2.2.3.1 Môi trường nuôi cấy phân lập 27 2.2.3.2 Dụng cụ thiết bị 27 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 28 2.3.1 Phương pháp thu, bảo quản chuẩn bị mẫu 28 2.3.2 Phương pháp pha loãng mẫu 28 2.3.3 Phương pháp tăng sinh 29 2.3.4 Phương pháp bảo quản giữ giống vi sinh vật 29 2.3.4.1 Phương pháp cấy truyền vi sinh vật 29 2.3.4.2 Phương pháp bảo quản lạnh sâu 30 2.3.5 Phương pháp định danh vi sinh vật 31 2.3.5.1 Phương pháp nhuộm Gram 32 2.3.5.2 Phương pháp nhuộm bào tử 32 2.3.5.3 Phương pháp thử nghiệm catalase 32 2.3.6 Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn 32 2.3.6.1 Phương pháp đo đường kính vịng tròn kháng khuẩn 32 2.3.6.2 Phương pháp đồng nuôi cấy 33 2.3.7 Phương pháp xử lý số liệu 33 2.4 Bố trí thí nghiệm 34 2.4.1 Thí nghiệm 1: Phân lập đinh danh sơ vi khuẩn lactic 35 2.4.1.1 Phân lập vi khuẩn lactic 35 2.4.1.2 Định danh sơ chủng vi khuẩn lactic 36 vi Đồ án tốt nghiệp 2.4.2 Thí nghiệm 2: Sàng lọc chủng vi khuẩn lactic có khả sinh hợp chất kháng khuẩn mạnh 36 2.4.2.1 Thí nghiệm 2.1: Sàng lọc chủng LAB có khả đối kháng mạnh vi khuẩn thị 36 2.4.2.2 Thí nghiệm 2.2: Sàng lọc chủng LAB có khả sinh hợp chất kháng khuẩn đối kháng mạnh với vi khuẩn thị 36 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Kết phân lập định danh sơ vi khuẩn lactic 38 3.1.1 Kết phân lâp khuẩn lactic 38 3.1.2 Kết định danh sơ vi khuẩn lactic 39 3.2 Kết sàng lọc chủng vi khuẩn lactic co khả đối kháng mạnh với vi khuẩn thị 41 3.2.1 Kết đánh giá khả đối kháng cua sinh khối khuẩn lactic vi khuẩn thị 41 3.2.2 Kết đánh giá khả sinh hợp chất kháng khuẩn chủng vi khuẩn lactic phân lập 45 KẾT LUÂN VÀ ĐỀ NGHỊ 49 Kết luận 49 Đề nghị 49 Tài liệu tham khảo 51 Phụ lục vii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮC EMP: Embden – Meyerhoff – Parnas LAB: Lactic Acid Bacteria WHO: World Health Organization viii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách mẫu phân lập vi khuẩn lactic 26 Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái chủng vi khuẩn lactic phân lập 37 Bảng 3.2 Kết định danh sơ vi khuẩn lactic 39 DANH MỤC CÁC ẢNH ix Đồ án tốt nghiệp Hình 1.1 Một số chủng lactic điển hình Hình 1.2 Chủng vi khuẩn Lactobacteriumbungaricus 18 Hình 1.3 Chủng vi khuẩn L brevis chủng Str Cremoris 19 Hình 2.1 Phương pháp pha lỗng mẫu 28 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 34 Hình 2.3 Quy trình phân lập vi khuẩn lactic 35 Hình 3.1 Hình dáng khuẩn lạc chủng SCPR03 quan sát kính hiển vi 39 Hình 3.2 Kết nhuộm gram nhuộm bào tử chủng SCYK 02 41 Hình 3.3 Mẫu thử catalase chủng NCTC02 NCTC03 41 Hình 3.5 Đường kính vòng kháng khuẩn vi khuẩn thị chủng SCPR01, SCPR02, SCPR03, SCYK01, SCYK02 VÀ SCYK03 (mm) 42 Hình 3.6 Đường kính vịng kháng khuẩn vi khuẩn chủng CPMC, NCVS, MCTC, KCHQ, NCTC01, NCTC02 VÀ CCTC (mm) 43 Hình 3.4.Vịng kháng vi khuẩn thị chủng vi khuẩn SCPR02 chủng SCPR03 44 Hình 3.4 Tỷ lệ ức chế vi khuẩn thị dịch sau ly tâm vi khuẩn lactic khơng trung hịa acid hữu 46 Hình 3.6 Tỷ lệ ức chế vi khuẩn thị dịch sau ly tâm vi khuẩn lactic trung hòa acid hữu 47 x Đồ án tốt nghiệp A.2 kết sàng lọc vi khuẩn lactic dựa vào tỷ lệ ức chế vi khuẩn thị (%) MCTC E.Coli 71.3 73.9 65.61 61.5 72.34 69.8 71.37 57.6 Sa 71.05 73.2 66.89 44.7 L.mono 71.1 68.85 70.41 48.2 S au 65.78 71.03 69.74 48 B Sub Đồ án tốt nghiệp CPMC E.Coli 59 57.6 58 B Sub 63.7 69.5 60.39 Sal 61.3 63.5 55.98 L.mono 51.7 52.8 46.61 S au 62.7 65.8 55.73 Đồ án tốt nghiệp A.3 Kết sàng lọc vi khuẩn lactic dựa vào tỷ lệ ức chế vi khuẩn thị (%) MCTC E.Coli 68.6 70.35 65.8 55.45 TH 68.54 69.3 65.4 49.95 Sa THl 62.24 63.5 61.7 49.95 61.24 62.2 60.73 40.01 72.7 72.3 71.46 39 TH B Sub L.mono TH S au TH Đồ án tốt nghiệp CPMC NCVS KCHQ SCPR01 E.Coli TH B Sub TH L.mono TH S au TH SCPR02 SCPR03 50.12 49.7 53.4 57.25 58.2 56.8 Sal TH 57.25 59.7 60.2 41.21 42.7 38.9 52.04 50.6 51.55 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC C: SỐ LIỆU THỐNG KÊ C.1 Vòng kháng vi khuẩn thị cua vi khuẩn lactic ANOVA Table for EColi by VI KHUAN LACTIC Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for EColi by VI KHUAN LACTIC Method: 95.0 percent LSD VI KHUAN LACTIC MCTC SCYK02 SCPR03 SCPR01 NCVS NCTC01 SCYK03 KCHQ CCTC CPMC SCPR02 SCYK01 NCTC02 Đồ án tốt nghiệp ANOVA Table for B sub by VI KHUAN LACTIC Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for B sub by VI KHUAN LACTIC Method: 95.0 percent LSD VI KHUAN LACTIC SCPR03 NCVS SCPR01 CPMC KCHQ SCPR02 MCTC SCYK02 NCTC01 SCYK03 CCTC NCTC02 SCYK01 Đồ án tốt nghiệp ANOVA Table for Salmonella by VI KHUAN LACTIC Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for Salmonella by VI KHUAN LACTIC Method: 95.0 percent LSD VI KHUAN LACTIC MCTC SCYK02 CCTC NCVS SCPR03 SCPR01 NCTC01 SCYK03 SCYK01 KCHQ SCPR02 CPMC NCTC02 Đồ án tốt nghiệp ANOVA Table for L mono by VI KHUAN LACTIC Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for L mono by VI KHUAN LACTIC Method: 95.0 percent LSD VI KHUAN LACTIC MCTC SCPR01 NCVS SCPR03 SCYK02 NCTC01 SCYK03 KCHQ CPMC SCPR02 SCYK01 CCTC NCTC02 10 Đồ án tốt nghiệp ANOVA Table for S aureus by VI KHUAN LACTIC Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for S aureus by VI KHUAN LACTIC Method: 95.0 percent LSD VI KHUAN LACTIC NCVS SCPR03 SCPR01 CCTC SCYK02 MCTC NCTC01 KCHQ CPMC SCPR02 SCYK03 SCYK01 NCTC02 11 Đồ án tốt nghiệp C.2 Tỷ lệ ức chế vi khuẩn thị dịch sau ly tâm vi khuẩn lactic chưa trung hòa acid Multiple Range Tests for EColi by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic SCPR02 CCTC KCHQ SCYK02 NCTC02 CPMC SCYK01 SCPR01 NCTC01 MCTC NCVS SCPR03 SCYK03 12 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for Smonella by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic SCPR02 CCTC KCHQ SCYK02 SCYK01 NCTC02 CPMC NCTC01 SCPR01 MCTC SCYK03 NCVS SCPR03 Multiple Range Tests for S au by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic CCTC SCPR02 KCHQ SCYK02 NCTC02 SCYK01 CPMC SCPR01 SCYK03 MCTC NCTC01 SCPR03 NCVS 13 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for l mono by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic CCTC SCPR02 KCHQ SCYK02 NCTC02 SCYK01 CPMC SCYK03 NCTC01 SCPR01 MCTC NCVS SCPR03 Multiple Range Tests for B sub by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic SCPR02 CCTC KCHQ SCYK02 NCTC02 SCYK01 CPMC NCTC01 SCPR01 MCTC SCYK03 NCVS SCPR03 14 Đồ án tốt nghiệp C.3 Tỷ lệ ức chế vi khuẩn thị dịch sau ly tâm vi khuẩn lactic trung hịa acid NaOH 2N vơ trùng Multiple Range Tests for E Coli TH by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic SCPR02 CCTC KCHQ SCYK02 NCTC02 CPMC SCYK01 SCPR01 NCVS NCTC01 MCTC SCPR03 SCYK03 15 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for b sub TH by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic SCPR02 CCTC KCHQ SCYK02 NCTC02 SCYK01 SCPR01 CPMC NCTC01 NCVS MCTC SCYK03 SCPR03 Multiple Range Tests for sal TH by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic SCPR02 CCTC KCHQ SCYK02 NCTC02 SCYK01 SCPR01 CPMC MCTC NCTC01 NCVS SCYK03 SCPR03 16 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for l mono TH by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic CCTC SCPR02 KCHQ SCYK02 NCTC02 SCYK01 CPMC SCPR01 NCVS NCTC01 MCTC SCYK03 SCPR03 Multiple Range Tests for S au TH by vi khuan lactic Method: 95.0 percent LSD vi khuan lactic CCTC KCHQ SCPR02 SCYK02 SCYK01 CPMC SCPR01 NCTC01 SCYK03 NCTC02 NCVS MCTC SCPR03 17 ... lệ sống động vật vi khuẩn gây bệnh xa ứng dụng y học Với ý nghĩa thực tiễn khoa học vậy, tiến hành thực đề tài ? ?Khảo sát khả sinh hợp chất kháng khuẩn vi khuẩn lactic từ số sản phẩm lên men truyền. .. đối kháng mạnh chủng vi khuẩn thị từ sản phẩm lên men truyền thống Nội dung nghiên cứu - Phân lập tiến hành định danh sơ vi khuẩn lactic Sàng lọc chủng vi khuẩn có khả sản sinh hợp chất kháng khuẩn. .. trao đổi chất Quá trình trao đổi chất lượng vi khuẩn lactic thực thông qua vi? ??c lên men lactic Dựa vào khả lên men lactic người ta chia vi khuẩn lactic làm hai nhóm: - Vi khuẩn lên men lactic đồng