Xác định sự phân bố các genotype của HCV ở bệnh nhân đến khám và điều trị tại bệnh viện bệnh nhiệt đới trung ương năm 2010 2011

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ NHƢ HÀ XÁC ĐỊNH SỰ PHÂN BỐ CÁC GENOTYPE CỦA HCV Ở BỆNH NHÂN ĐẾN KHÁM VÀ ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN BỆNH NHIỆT ĐỚI TRUNG ƢƠNG NĂM 2010-2011 Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS NGUYỄN VŨ TRUNG HÀ NỘI - 2012 CÁC CHỮ VIẾT TẮT AIDS Acquired Immune Deficiency Syndrome (Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải) ALT Alanine Transaminase (men gan ALT) AST Aspartate Transaminase (men gan AST) BVBNĐTƢ Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương CD4 Cluster of Differentiation (Cụm biệt hoá 4) CDC Centers for Disease Control and Prevetion (Trung tâm Kiểm sốt Phịng ngừa bệnh tật) CO Cut off (Chứng ngưỡng) dNTP Deoxynucleoside triphosphate ELISA Enzym-Linked Immunosorbent Assay (Thử nghiệm miễn dịch gắn men) EtOH Ethanol HCC Hepatocellular carcinoma (Ung thư tế bào gan) HCV Hepatitis C virus (Vi rút viêm gan C) HIV Human Immunodeficiency Virus (Vi rút gây suy giảm miễn dịch người) LiPA Line Probe Assay (Thử nghiệm line đầu dò) OD Optical Density (Mật độ quang học) PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) QHTDKAT Quan hệ tình dục khơng an tồn RT-PCR Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp chép ngược) TCMT Tiêm chích ma tuý WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vi rút viêm gan C 1.1.1 Hình thái cấu trúc hạt vi rút 1.1.2 Chu trình tái HCV 1.2 Viêm gan vi rút C 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Đường lây nhiễm 1.2.3 Diễn biến tự nhiên 1.2.4 Chẩn đốn phịng thí nghiệm 1.2.5 Điều trị viêm gan vi rút C 1.3 Các đặc trưng kiểu gen HCV 1.3.1 Kiểu gen HCV phân bố theo địa dư 1.3.2 Kiểu gen HCV với nguy lây nhiễm 1.3.3 Kiểu gen HCV với mô bệnh học 1.3.4 Kiểu gen HCV với đáp ứng dự đoán đáp ứng với điều trị 1.3.5 Kiểu gen HCV với thời gian điều trị 1.3.6 Kiểu gen HCV với liều lượng thuốc điều trị 1.3.7 Kiểu gen hỗn hợp HCV 1.3.8 Gan nhiễm mỡ mối liên quan đến kiểu gen HCV 1.3.9 Kiểu gen diễn tiến bệnh viêm gan C mạn tính 1.3.10 Kiểu gen ghép gan nhiễm HCV 1.4 Tình hình bệnh viêm gan vi rút C nghiên cứu CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Vật liệu nghiên cứu .25 2.2.1 Sinh phẩm, hóa chất 25 2.2.2 Dụng cụ, thiết bị 26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 26 2.4 Quy trình nghiên cứu 27 2.4.1 Thu thập bảo quản mẫu huyết 227 2.4.2 Quy trình xác định Anti-HCV .28 2.4.3 Quy trình xác định tải lượng vi rút 29 2.4.4 Tách chiết RNA từ mẫu huyết .32 2.4.5 Xác định kiểu gen HCV kỹ thuật giải trình tự gen 33 2.4.6 Thu thập thông tin từ hồ sơ bệnh án 37 2.5 Thời gian nghiên cứu 37 2.6 Địa điểm nghiên cứu 37 2.7 Xử lý số liệu 38 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 3.1 Đặc điểm chung mẫu nghiên cứu 39 3.1.1 Đặc điểm tuổi 39 3.1.2 Đặc điểm giới 40 3.1.3 Tiền sử nhiễm vi rút viêm gan C 41 3.1.4 Tỷ lệ đồng nhiễm HIV HCV 42 3.1.5 Tải lượng vi rút HCV 43 3.2 Phân bố kiểu gen HCV bệnh nhân đến khám điều trị BVBNĐTƯ 44 3.2.1 Lý lựa chọn kỹ thuật sequencing khu vực core để xác định kiểu gen kiểu gen phụ HCV ……44 3.2.2 Phân bố kiểu gen HCV 45 3.2.3 Phân bố kiểu gen phụ HCV 47 3.3 Mối liên quan kiểu gen HCV với số đặc điểm dịch tễ học cận lâm sàng .53 3.3.1 Mối liên quan kiểu gen HCV tuổi 53 3.3.2 Mối liên quan kiểu gen HCV giới .54 3.3.3 Mối liên quan kiểu gen HCV tiền sử phơi nhiễm HCV 55 3.3.4 Đặc điểm kiểu gen HCV nhóm đối tượng có đồng nhiễm HIV khơng đồng nhiễm HIV 56 3.3.5 Mối liên quan kiểu gen HCV mức độ biến đổi chức gan 56 3.3.6 Mối liên quan kiểu gen HCV tải lượng vi rút 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .63 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự mồi 25 Bảng 3.1: Phân bố bệnh nhân theo tuổi 39 Bảng 3.2 Đặc điểm tiền sử phơi nhiễm viêm gan C .42 Bảng 3.3 Đặc điểm tải lượng vi rút mẫu nghiên cứu 43 Bảng 3.4 Mối liên quan kiểu gen HCV tuổi 53 Bảng 3.5 Mối liên quan kiểu gen HCV giới 54 Bảng 3.6 Mối liên quan kiểu gen HCV tiền sử phơi nhiễm HCV 55 Bảng 3.7 Đặc điểm phân bố kiểu gen HCV nhóm đối tượng có đồng nhiễm HIV không đồng nhiễm HIV 56 Bảng 3.8 Mối liên quan kiểu gen HCV men gan ALT 57 Bảng 3.9 Mối liên quan kiểu gen HCV men gan AST 57 Bảng 3.10 Mối liên quan kiểu gen HCV Bilirubin toàn phần 58 Bảng 3.11 Mối liên quan kiểu gen HCV tải lượng vi rút 59 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Phân bố giới 403 Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ đồng nhiễm HCV HIV 42 Biểu đồ 3.3 Đặc điểm phân bố kiểu gen HCV 469 Biểu đồ 3.4 Phân bố kiểu gen phụ HCV 481 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Mơ hình cấu trúc HCV 10 Hình 2: RNA HCV 11 Hình 3: Chu trình sống HCV 12 Hình 4: Sơ đồ tiến triển bệnh nhân nhiễm HCV 15 Hình 5: Tỷ lệ kiểu gen HCV khu vực giới 19 Hình 6: Tỷ lệ kiểu gen HCV tạicác nước Châu Á 20 Hình 7: Tỷ lệ kiểu gen HCV Việt Nam 21 Hình 8: Tỷ lệ nhiễm HCV khu vực giới 24 Hình 9: Cây phát sinh lồi kiểu gen phụ 1a 50 Hình 10: Cây phát sinh loài kiểu gen phụ 1b 514 Hình 11: Cây phát sinh loài kiểu gen HCV 525 MỞ ĐẦU Bệnh viêm gan vi rút C vấn đề y tế toàn cầu Theo ước tính Tổ chức Y tế Thế giới, tỉ lệ nhiễm HCV giới khoảng 3,1%, tương đương 170 triệu người, với số nhiễm 3-4 triệu người năm [10] [24] [57] Tổng chi phí y tế dành cho chẩn đoán điều trị phịng viêm gan vi rút C dự đốn tăng từ 30 tỷ USD vào năm 2009 lên đến 85 tỷ USD vào năm 2024 Nếu không điều trị, viêm gan vi rút C diễn biến thành biến chứng xơ gan, ung thư gan dẫn đến tử vong [31] [57] Tỉ lệ nhiễm HCV dẫn đến xơ gan 15-20% sau 20 năm Tỷ lệ ung thư gan bệnh nhân nhiễm HCV chiếm khoảng 1,4-3,3% năm, đó, tử vong 2,6-4% [57] Ở Việt Nam 510% dân số nhiễm HCV [12] Viêm gan vi rút C bệnh nguy hiểm triệu chứng lâm sàng thường khơng rõ ràng, 90% trường hợp khơng có triệu chứng, hậu bệnh để lại thường nặng nề Có 50%-80% viêm gan vi rút C chuyển thành mạn tính, 20%-25% bệnh nhân mạn tính diễn tiến qua xơ gan ung thư gan [4] [30] Do đó, xác định xác tác nhân HCV mục tiêu quan tâm hàng đầu bác sĩ Vi rút viêm gan C phân thành kiểu gen ký hiệu số từ đến phân kiểu gen phụ ký hiệu chữ a,b,c,… [52] Ngồi xét nghiệm tìm kháng thể kháng HCV, xác định số lượng vi rút máu để chẩn đốn tình trạng nhiễm HCV, xác định kiểu gen trước điều trị tiên đốn khả đáp ứng, xác định thời gian điều trị dự đoán hiệu điều trị kháng vi rút hành từ năm 1994 [21] [28] Tại Việt nam, nghiên cứu kiểu gen HCV tiến [40] , nhiên, từ đến nay, có số nghiên cứu thực khn khổ hợp tác nghiên cứu với nước ngồi thực nước Ngoài ra, số lượng nghiên cứu cịn hạn chế Thêm vào đó, nhiều nghiên cứu phân loại kiểu gen dựa vào trình tự đoạn 5’ khơng mã hóa gen HCV Nhưng nay, việc phân loại theo hình thức khơng xác vi rút thuộc kiểu gen HCV có trình tự đoạn giống với chủng thuộc kiểu gen nên có phân loại nhầm lẫn hai kiểu gen Do vậy, tác giả khuyến cáo sử dụng trình tự đoạn core, E1 NS5B cho phân loại kiểu gen HCV Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương sở hàng đầu chẩn đoán, điều trị bệnh truyền nhiễm nói chung, đặc biệt bệnh viêm gan có viêm gan vi rút C nói riêng Vì vậy, nhu cầu chẩn đốn bệnh sớm xác cấp thiết Từ năm 2010, tiến hành triển khai kỹ thuật xác định kiểu gen HCV kỹ thuật giải trình tự gen vùng core HCV giúp chẩn đoán điều trị bệnh Qua năm triển khai thu kết định Vì tiến hành đề tài “Xác định phân bố genotype HCV kỹ thuật giải trình tự gen bệnh nhân đến khám điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương năm 2010-2011” với mục tiêu sau: Xác định kiểu gen HCV bệnh nhân đến khám điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương kỹ thuật giải trình tự gen Đánh giá mối liên quan kiểu gen HCV với số đặc điểm dịch tễ học cận lâm sàng CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vi rút viêm gan C 1.1.1 Hình thái cấu trúc hạt vi rút Vi rút viêm gan C phát năm 1989 nhóm nghiên cứu M Houghto Chiron California Mỹ kết hợp với nhóm nghiên cứu D.W.Bradley CDC Sau nhiều năm nghiên cứu, lần lịch sử ngành Vi sinh học, tác nhân gây bệnh khám phá kỹ thuật sinh học phân tử trước có hiểu biết hình thái vi rút, cấu trúc protein, tính kháng nguyên, trước tác nhân nuôi cấy, phân lập thành công Vi rút viêm gan C thành viên họ Flaviviridae, thể hình cầu có đường kính 55-65 nm, có vỏ ngồi với gai nhú nhỏ khoảng nm, bao quanh cấu trúc nucleocapsid 30-35 nm có cấu trúc đối xứng 20 mặt Glycoprotein vỏ Lõi RNA Vỏ 60nm Hình 1:Mơ hình cấu trúc HCV 10 [58] [5] [6] [51] cứu rằng, bệnh nhân viêm gan vi rút C mạn tính có kiểu gen 1b thường diễn biến nặng chịu ảnh hưởng với Interferon alpha điều trị Kiểu gen 3a phổ biến nhóm người tiêm chích ma túy Châu Âu Mỹ [12] Trong đó, Việt Nam, kiểu gen lại chiếm tỷ lệ thấp Trong nghiên cứu chúng tơi, có trường hợp có kiểu gen 3b chiếm 2,78%, khơng có trường hợp có kiểu gen 3a (Biểu đồ 3.4) Theo nghiên cứu Tomoaki cs, kỹ thuật giải trình tự gen khu vực 5’UTR-Core, tác giả phát trường hợp có kiểu gen 3a (1,5%) trường hợp có kiểu gen 3b (4,1%) [54] Nghiên cứu Thành phố Hồ Chí Minh năm 2006 phát trường hợp có kiểu gen 3b (0,3%) [4] Các nghiên cứu khác Bệnh viện Trung Ương Quân đội 108 năm 2004 Bệnh viện MEDLATEC năm 2011 không phát trường hợp có kiểu gen [3] [9] Kiểu gen HCV phát chủ yếu nước Đông Nam Á Singapore, Lào, Thái Lan, Việt Nam nước lân cận miền nam Trung Quốc, Hồng Kông, Đài Loan, Ma Cao Kiểu gen HCV kiểu gen đa dạng với 22 phân nhóm ký hiệu theo thứ tự bảng chữ từ 6a đến 6v [17] Kiểu gen 6a, 6d, 6e, 6h, 6l 6t kiểu gen phát chủ yếu Việt Nam [17] Trong nghiên cứu chúng tơi, có 21 trường hợp có kiểu gen 6a chiếm 19,4%, 11 trường hợp có kiểu gen 6e (10,2%), trường hợp có kiểu gen 6h 6,5%, trường hợp có kiểu gen 6k (2,78%) trường hợp có kiểu gen 6l (0,94%) (Biểu đồ 3.4) Cùng kỹ thuật chúng tôi, xác định kiểu gen giải trình tự gen khu vực core, theo tác giả Phạm Đức Anh cs, có 26 trường hơp có kiểu gen 6a chiếm 37,1%, trường hợp có kiểu gen 6e (8,6%) trường hợp có kiểu gen 6l (1,4%) [39] Một nghiên cứu khác Hà nội xác định trường hợp có kiểu gen 6a (22,22%) trường hợp có kiểu gen 6c (2,78%) [9] Kiểu gen đánh giá có đáp ứng tốt với điều trị Interferon alpha so với kiểu gen [17] , nhiên chưa có nhiều nghiên cứu khả đáp ứng với điều trị kiểu gen phụ Kiểu gen 2a 2b tương đối phổ biến Bắc Mỹ, Châu Âu Nhật Bản, kiểu gen HCV phổ biến Bắc Phi Trung Đông 49 [12] Tuy nhiên, Việt nam, kiểu gen HCV kiểu gen HCV chiếm tỷ lệ thấp Trong nghiên cứu Nguyễn Nghiêm Luật cs, có bệnh nhân có kiểu gen 2a chiếm 5,56%, khơng có trường hợp có kiểu gen 2b kiểu gen HCV [9] Nghiên cứu tiến hành Hải phòng năm 2010 phát trường hợp kiểu gen 2a (0,5%) [54] Trong nghiên cứu chúng tơi, khơng phát trường hợp có kiểu gen HCV kiểu gen HCV Để tìm hiểu mối quan hệ kiểu gen chủng thu Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương, chúng tơi tiến hành phân tích trình tự gen thu phương pháp phả hệ, sử dụng chương trình MEGA5.1 Các trình tự gen tham khảo gồm: 1a JN214680 (Mỹ); 1a HQ229265 (Thái Lan); 1a AB522986 (Việt Nam); 1b JQ888223 (Bangladesh); 1b JN214848 (Mỹ) Hình 9: Cây phát sinh lồi kiểu gen phụ 1a 50 Hình 10: Cây phát sinh lồi kiểu gen phụ 1b Phân tích kiểu gen 1a dựa trình tự gen vùng core, chúng tơi thấy trình tự gen có kiểu gen phụ 1a gần với kiểu gen 1a phân lập Hải Phịng, Thái Lan Mỹ (Hình 9) Về kiểu gen phụ 1b, trình tự phân lập nghiên cứu chúng tơi có quan hệ gần gũi với kiểu gen phụ 1b phân lập từ Bangladesh từ Mỹ (Hình 10) Phân tích hai kiểu gen 1a 1b thấy kiểu gen nghiên cứu chúng tơi có mối quan hệ gần gũi với kiểu gen HCV từ Mỹ, điều gợi ý có lây truyền kiểu gen lục địa qua nhiều đường khác Cây phát sinh kiểu gen HCV dựa trình tự gen vị trí core (Hình 11) cho thấy kiểu gen HCV1 HCV6 có mối quan hệ gần so với kiểu gen HCV3 Tác giả Phạm Đức Anh cs nghiên cứu 70 bệnh phẩm người cho máu có anti- HCV dương tính Viện Huyết Học Truyền máu Trung Ương, Hà Nội cho kết tương tự [39] Trong đó, kiểu gen HCV kiểu gen phụ 6a 6k có mối quan hệ gần nhau, kiểu gen phụ 6e gần với kiểu gen phụ 6h, tương tự kết thu tác giả Tomoaki Tanimoto nghiên cứu 323 đối tượng tiêm chích ma tuý nhiễm HCV Hải Phịng 51 [54] Hình 11: Cây phát sinh loài kiểu gen HCV 52 3.3 Mối liên quan kiểu gen HCV với số đặc điểm dịch tễ học cận lâm sàng 3.3.1 Mối liên quan kiểu gen HCV tuổi Bảng 3.4 Mối liên quan kiểu gen HCV tuổi Tuổi Kiểu gen Tổng Ký hiệu – số lượng 0,05) (Bảng 3.4) Nghiên cứu tác giả Nguyễn Thanh Hảo cs cho thấy kiểu gen HCV tỷ lệ nhóm tuổi ≤ 40 cao so với nhóm tuổi 40 (59,3% so với 40,7%) Nhưng kiểu gen HCV 6, tỷ lệ nhóm tuổi 40 lại thấp so với nhóm tuổi 40 (44,4% so với 55,6%) [5] Tuy nhiên khác biệt không nhiều, cỡ mẫu nghiên cứu nghiên cứu nhỏ nhiều so với 3.3.2 Mối liên quan kiểu gen HCV giới Bảng 3.5 Mối liên quan kiểu gen HCV giới Giới Kiểu gen Tổng Ký hiệu – số lượng 2x10 sao/ml Đây ngưỡng để đánh giá lượng vi rút viêm gan C máu cao hay thấp [16] Bảng 3.11 Mối liên quan kiểu gen HCV tải lƣợng vi rút Tải lƣợng VR Kiểu gen Tổ Trong nghiên cứu chúng tơi, có trường hợp kiểu gen HCV trường hợp kiểu gen HCV có tải lượng vi rút máu >2x10 sao/ml Còn lại phần lớn có tải lượng vi rút ≤ 2x10 sao/ml (Bảng 3.11) trường hợp có kiểu gen HCV có tải lượng vi rút máu nhỏ 2x10 sao/ml Nghiên cứu Hồ Tấn Đạt cho thấy rằng, kiểu gen HCV 1, có 91/137 bệnh nhân có tải lượng vi rút cao >2x10 sao/ml, có 46/137 bệnh nhân có tải lượng vi rút ≤ 2x10 sao/ml, số bệnh nhân có tải lượng vi rút cao kiểu gen HCV nhiều nhóm có tải lượng vi rút thấp (32 sao/ml 27 59 sao/ml) Tuy nhiên, khác biệt khơng có ý nghĩa thông kê [4] Nghiên cứu khác giới kiểu gen HCV thường gắn liền với lượng vi rút cao máu [56] Tuy nhiên, nghiên cứu chưa thấy khác biệt tải lượng vi rút nhóm kiểu gen khác 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Từ kết thu trình nghiên cứu trên, rút số kết luận sau: Về phân bố kiểu gen kiểu gen phụ vi rút viêm gan C bệnh nhân đến khám điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ƣơng Có kiểu gen HCV 1, HCV HCV tương ứng tỷ lệ 57,41 %; 2,78% 39,81% Kiểu gen HCV có kiểu gen phụ 1a chiếm 31,5% 1b chiếm 25,9%; Kiểu gen 3b chiếm 2,78%; Kiểu gen HCV có kiểu gen phụ gồm: 6a (19,4%); 6e (10,2%); 6h (6,5%); 6k (2,78%) 6l (0,94%) Về mối liên quan kiểu gen HCV với số đặc điểm dịch tễ học cận lâm sàng Tỷ lệ nam cao nữ tất kiểu gen Khơng có khác biệt phân bố kiểu gen nhóm nhiễm viêm gan vi rút C đơn nhóm đồng nhiễm HCV/HIV Ở nhóm TCMT, kiểu gen chiếm tỷ lệ cao (62,5%), nhóm có tiền sử truyền máu chế phẩm máu, kiểu gen HCV lại có tỷ lệ cao (66,7%) Giá trị ALT trung bình kiểu gen HCV 78,56 ± 8,24 UI/L, kiểu gen HCV 81,4 ± 10,96UI/L, kiểu gen HCV 38,33 ± 11,35UI/L Giá trị AST trung bình kiểu gen HCV 67,85 ± 8,67UI/L, kiểu gen HCV 56,84 ± 5,13UI/L, kiểu gen HCV 69,33 ± 30,99UI/L Kiến nghị Tiến hành xác định kiểu gen HCV kiểu gen phụ HCV phương pháp giải trình tự gen hai đoạn gen để xác định đồng nhiễm với bệnh nhân có định điều trị viêm gan vi rút C để có hướng điều trị tiên lượng bệnh trước điều trị 61 [1] 1, Trần Hữu Bích, Nguyễn Thúy Quỳnh, Nguyễn Ngọc Bích et al., Điều tra dịch tễ tình hình nhiễm vi rút viêm gan B C Hà Nội Bắc Giang, Y Học TP Hồ Chí Minh 14 (phụ Số 4) (2010), pp 71-82 [2] 2, Phạm Thị Ngọc Bích, and Phạm Thị Diễm Thảo, Định lượng nộng độ virus khảo sát tỷ lệ loại genotype HCV quy trình kỹ thuật Real-time RT-PCR bệnh nhân xét nghiệm bệnh viện Đại học Y dược công ty Việt Á, Trường Đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch, 2010 [3] 3, and Nguyễn Trọng Chính, Nhiễm Vi rút viêm gan C bệnh nhân mắc bệnh gan genotype viruts viêm gan C, Tạp chí Y Dược học quân (2004), pp 93-97 [4] 4, Hồ Tấn Đạt, Phạm Thị Thu Thủy, Nguyễn Thanh Tòng et al., Kiểu gen siêu vi viêm gan C Việt Nam, Y Học TP Hồ Chí Minh 10 (2006), pp 28 -34 [5] 5, and Nguyễn Thanh Hảo, Xác định genotype vi rút viêm gan C Việt Nam, Tạp chí Y Học Dự phòng X, số (45) (2000), pp 39-43 [6] 6, and L.T.H Lê Thanh Hoà, Định typ (genotyping) virus viêm gan C (HCV) sử dụng thị 5’UTR bệnh nhân viêm gan virus Hà Nội, Y học Việt Nam (2007), pp 29-36 [7] 7, and Khổng Minh Huệ, Nghiên cứu tạo sinh phẩm phát HIV, HBV HCV kỹ thuật PCR, Luận văn thạc sĩ khoa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội 2009 [8] 8, and Liên, Tìm hiểu thứ type di truyền vi rút viêm gan C thành phố Hồ Chí Minh, Y học Thực Hành (2006), pp 72-75 [9] 9, and Nguyễn Nghiêm Luật; Đoàn Văn Thuyết, Phát kiểu gen (genotypes) kiểu gen phụ (subtypes) vi rút viêm gan C lây nhiễm khu vực Hà nội kỹ thuật giải trình tự gen trực tiếp, Y Học Việt Nam (2011), pp 170-175 [10] 10, and N.N.L Cao Minh Nga, Tình trạng nhiễm HCV, HIV, HBV Lao đối tượng nghiện ma tuý, Y học TP Hồ Chí Minh Tập số (2005), pp 73-78 [11] 11, and Trịnh Thị Ngọc, Lưu hành genotype viêm gan C bệnh nhân có tiền sử tiêm chích ma túy giá trị tiên lượng điều trị, Tạp chí Vệ sinh phòng dịch VI, Số 1(26) (1996), pp 47-51 [12] 12, and Võ Minh Quang, Các yếu tố dịch tễ, lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân viêm gan siêu vi C điều trị bệnh viện Bệnh nhiệt đới TP.HCM - Năm 2006-2007, Y Học TP Hồ Chí Minh 13 (2009), pp 268-273 [13] 13, and Nguyễn Thị Tuyết Vân, Tình hình nhiễm vi rút viêm gan C người nghiện chích ma túy trại giam Đăk Trung, Gia Trung trung tâm giáo dục xã hội Tây Nguyên, Y Học TP Hồ Chí Minh 12(Phụ số 1) (2008) [14] A Hawkins, F.Davidson, and P Simmonds, Comparison of Plasma Virus Loads among Individuals Infected with Hepatitis C Virus (HCV) Genotypes 1, 2, and by Quantiplex HCV RNA Assay Versions and 2, Roche Monitor Assay, and an In-House Limiting Dilution Method, J Clin Microbiol 35 (1997), pp 187-192 [15] Alan Flanciscus, HCV Diagnostic Tools: Genotype, Subtype and Quasispecies, Hepatitis C support project (2011) Available at www.hcvadvocate.org [16] Considering-HCV-treatment., Know your genotype and viral load, HCV Advocate (2003) [17] D T Chao, K Abe, and M H Nguyen, Systematic review: epidemiology of hepatitis C genotype and its management, Aliment Pharmacol Ther 34 (2011), pp 286-96 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=21623850 [18] Deok Ja Oh, Prevalence of Hepatitis C virus infections and Distribution of Hepatitis C virus genotypes among Korean Blood Donors, Annals of Laboratory Medicine 32 (2012), pp 210-215 [19] Di Martino V, Rufat, Boyer, Renard et al., The influence of human immunodeficiency virus coinfection on chronic hepatitis C in injection drug users: a long-term retrospective cohort study, Hepatology 34 (2001), pp 1193-9 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=11732009 [20] Dodd R.Y, Notari E.P.t., and S.L., Current prevalence and incidence of infectious disease markers and estimated window-period risk in the American Red Cross blood donor population, Transfusion 42(8) (2002), pp 975-979 [21] Doi H, Hepatittis C virus (HCV) subtype prevalence in Chiang Mai, Thailand, and identification of novel subtypes of HCV major type 6, J Clin Microbiol 34 (1996), pp 569-574 [22] Fuat Kurbanov, Hepatitis C virus molecular epidemiology in Uzbekistan, Journal of Medical Virology 69 (2003), pp 367-375 [23] GC, New hepatitis C guidlines for the Asia-Pacific region: APASL consensus statements on the diagnosis, management and treatment of hepatitis C virus infection, J Gastroenterol Hepatol 22 (2007), pp 607-610 [24] Global burden of hepatitis C working group, Global burden of disease (GBD) for hepatitis C, j Clin Pharmacol 44 (1) ( 2004), pp 20-29 [25] Gordon S C., and R.S., The pathology of hepatitis C as a function of mode of transmission blood transfusion VS intravenous drug user, Hepatology 18 No6 (1993), pp 1338-1343 [26] Jean-Francois Cantaloube, Laperche, Gallian, Bouchardeau et al., Analysis of the 5' noncoding region versus the NS5b region in genotyping hepatitis C virus isolates from blood donors in France, J Clin Microbiol 44 (2006), pp 2051-6 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16757597 [27] Johannes Bircher, Clinical Hepatology, second ed, oxford university press, 1999 [28] Legrand-Abravanel F, Influence of the HCV subtype on the virological response to pegylated interferon and ribaverin therapy, J Med virol 81(12) (2009), pp 2029-2035 [29] Lesens O, Deschênes M, Steben M, Bélanger G et al., Hepatitis C virus is related to progressive liver disease in human immunodeficiency virus-positive hemophiliacs and should be treated as an opportunistic infection, J Infect Dis 179(5) (1999), pp 1254-1258 [30] Lothar Thomas, Clinical Laboratory Diagnostics, Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, TH-Books (1999), pp 1273-1278 [31] Milliman, Consequenceces of hepatitis C virus (HCV): costs of a baby boomer epidemic of liver disease (2009) [32] Ming-Lung Yu, and Wan-Long Chuang, Treatment of chronic hepatitis C in Asia: When East meets West Journal of Gastroenterology and Hepatology 24 (2009), pp 336-345 [33] Miriam J Alter, Epidemiology of viral hepatitis and HIV co-infection, J Hepatol 44 (2006), pp S6-9 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi? cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16352363 [34] -, Epidemiology of hepatitis C virus infection, World J Gastroenterol 13 (17) (2007), pp 2436-2441 [35] Nakano T, LuL, LiuP, and Pybus OG, Viral gene sequences reveal the variable history of hepatitis C virus infection among countries, Journal of Infectious Diseases 190 (2004), pp 1098–1108 [36] Nizar N Zein, Clinical Significance of Hepatitis C Virus Genotypes, Clinical Microbiology Reviews 13 No2 (2000), pp 223-235 [37] Norah A Terrault, and Sanjiv Chopra, Screening for and diagnostic approach to hepatitis C virus infection, Nguồn: www.uptodate.com (2011) [38] P.Simmonds, Evolutionary analysis of variants of hepatitis C virus found in South-East Asia: comparison with classifications based upon sequence similarity [39] Pham DA, High prevalence of Hepatitis C virus genotype in Vietnam, Asian Pac J Allergy Immunol 27 (2009), pp 153-160 [40] Pham Song, Markers of hepatitis C and B virus infections among blood donors in Ho Chi Minh city and Hanoi, Vietnam, Clinical and diagnostic laboratory immunology 1(4) (1994), pp 413-418 [41] Ragni M V, and Belle S H, Impact of human immunodeficiency virus infection on progression to end-stage liver disease in individuals with hemophilia and hepatitis C virus infection, J Infect Dis 183 (2001), pp 1112-5 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=11237838 [42] Raymond D, Hepatitis C virus (HCV) and HIV/HCV coinfection: A critical review of research and treatment, Treatment Action Group 16 (2004), pp 266-288 [43] Roche Diagnostic GmbH, COBAS AmpliPrep/COBAS TagMan COBAS HCV Test for in vitro dianostic use, Roche Diagnostic GmbH, 2009, pp 18 [44] Sanjiv Chopra, Characteristics of the hepatitis C virus, Nguồn: www.uptodate.com (2009) [45] Schreiber G.B, Michael.B Busch, Steven H Kleinman, and Korelitz James J, The risk of transfusion-transmitted viral infections The Retrovirus Epidemiology Donor Study, The New England Journal of Medicine 334(26) (1996), pp 1685-1690 [46] Silini E, Bottelli R, Asti M, Bruno S et al., Hepatitis C virus genotypes and risk of hepatocellular carcinoma in cirrhosis: a case-control study, Gastroenterology 111 (1996), pp 199–205 [47] Simmonds P, Alberti, Alter, Bonino et al., A proposed system for the nomenclature of hepatitis C viral genotypes, Hepatology 19 (1994), pp 1321-4 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=8175159 [48] Simmonds P, Bukh, Combet, Deleage et al., Consensus proposals for a unified system of nomenclature of hepatitis C virus genotypes, Hepatology 42 (2005), pp 962-73 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16149085 [49] Stephane Chevaliez, Hepatitis C virus (HCV) genotype subtype identification in new HCV drug development and future clinical practice, PLoS One (2009), pp e8209 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=19997618 [50] Sueli M Nakatani, Santos, Riediger, Krieger et al., Development of hepatitis C virus genotyping by real-time PCR based on the NS5B region, PLoS One (2010), pp e10150 Available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=20405017 [51] Svetlozar Natov, Daignosis of hepatitis C virus infection in patients on dialysis, Nguồn: www.uptodate.com (2011) [52] T.Chung, Chronic Hepatitis C, Gut and Liver 5(2) (2011), pp 117-132 [53] Takada N, S Takase, A Takada, and Date, Differences in the hepatitis C virus genotypes in different countries, J Hepatol 17 (1993), pp 277-283 [54] Tomoaki Tanimoto, Nguyen Hung Cuong, Azumi Ishizaki, Phan Thi Thu Chung et al., Multiple Routes of Hepatitis C Virus Transmission Among Injection Drug Users in Hai Phong, Northern Vietnam Journal of Medical Virology 82 (2010), pp 1355-1363 [55] Toshiyuki Shinji, and Norio Koide, Three type hepatitis C virus subgroups among blood donors in the Yangon area of Myanmar are identified as subtypes 6m and 6n, and a novel subtype by sequence analysis of the Core region, Acta Med Okayama 60(6) (2006), pp 345-349 [56] Vincent Soriano, Amanda Mocroft, Juergen Rockstroh, Bruno Ledergerber et al., Spontaneous Viral Clearance, Viral Load, and Genotype Distribution of Hepatitis C Virus (HCV) in HIV-Infected Patients with Anti-HCV Antibodies in Europe, The Journal of Infectious Diseases 198 (2008), pp 1337-44 [57] WHO, Hepatitis C, 2011 ... đến khám điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương năm 2010- 2011? ?? với mục tiêu sau: Xác định kiểu gen HCV bệnh nhân đến khám điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương kỹ thuật giải trình tự... 0,05 38 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Từ tháng 12 năm 2010 đến 30 tháng 11 năm 2011, thu thập 108 mẫu máu bệnh nhân đến khám nằm điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương xác định nhiễm viêm gan... core HCV giúp chẩn đoán điều trị bệnh Qua năm triển khai chúng tơi thu kết định Vì tiến hành đề tài ? ?Xác định phân bố genotype HCV kỹ thuật giải trình tự gen bệnh nhân đến khám điều trị Bệnh viện