Nghiên cứu tính độc tính và tác dụng điều trị bệnh gút mạn tính của viên nang cứng tam diệu gia vị trên thực nghiệm và lâm sàng tt

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Tại Việt Nam, tỷ lệ viêm khớp gút chiếm 10,6% bệnh khớp điều trị nội trú khoa Cơ xương khớp – Bệnh viện Bạch Mai giai đoạn 1996 - 2000 Nếu khơng chẩn đốn sớm điều trị kịp thời, bệnh tiến triển ngày nặng dẫn đến hủy hoại khớp ảnh hưởng đến chất lượng sống bệnh nhân gánh nặng cho gia đình xã hội Dựa lâm sàng người ta liên hệ gút với chứng “Thống phong” YHCT Tam diệu thang thuốc cổ phương sử dụng điều trị chứng phong thấp nhiệt tí, tương đương với tình trạng viêm khớp cấp tính YHHĐ Bài thuốc chứng minh tác dụng chống viêm hạ acid uric tốt thực nghiệm Việt Nam Trung Quốc Với mong muốn tìm loại thuốc sở kế thừa giá trị thuốc cổ phương Tam diệu thang (Hoàng Bá, Thương truật, Ngưu tất) kết hợp với vị thuốc có tác dụng hạ acid uric máu, chống viêm, giảm đau nghiên cứu thực nghiệm (Quế chi, Dây đau xương, Thiên niên kiện, Trử ma diệp, Râu ngơ) nhóm nghiên cứu chúng tơi tiến hành nghiên cứu độc tính tác dụng điều trị bệnh gút mạn tính viên nang cứng Tam diệu gia vị (TDGV) với ba mục tiêu: Nghiên cứu độc tính cấp bán trường diễn viên nang cứng TDGV thực nghiệm Đánh giá tác dụng hạ acid uric, chống viêm giảm đau viên nang cứng TDGV thực nghiệm Đánh giá tác dụng điều trị tác dụng không mong muốn viên nang cứng TDGV điều trị bệnh nhân gút mạn tính có tăng acid uric máu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Quan niệm Y học đại bệnh gút 1.1.1 Định nghĩa, nguyên nhân chế bệnh sinh Bệnh gút (Gout) bệnh rối loạn chuyển hóa bệnh viêm khớp phổ biến nam giới Gút nguyên phát chiếm tỉ lệ > 95% trường hợp tăng acid uric máu gút, ngun nhân cịn chưa rõ, nhiều yếu tố như: dinh dưỡng (ăn nhiều đạm, uống nhiều rượu bia …), gen di truyền Gút thứ phát chiếm tỉ lệ – 5% trường hợp gút Hai nguyên nhân suy thận mạn tính sử dụng thuốc lợi tiểu Gút bất thường enzym bệnh di truyền gặp thiếu hụt toàn phần enzym Hypoxanthine - guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT), tăng hoạt tính enzym Phosphoribosyl pyrophosphate (PRPP) Cơ chế bệnh sinh bệnh gút tích lũy acid uric mơ, tạo nên microtophi Khi hạt tophi sụn khớp bị vỡ khởi phát gút cấp; lắng đọng vi tinh thể cạnh khớp, màng hoạt dịch, mô sụn mô xương dẫn đến bệnh xương khớp mạn tính gút; có mặt vi tinh thể urat mô mềm, bao gân tạo nên hạt tophi, cuối cùng, viêm thận kẽ (bệnh thận gút) tinh thể urat lắng đọng tổ chức kẽ thận Acid uric niệu tăng toan hóa nước tiểu dẫn đến sỏi tiết niệu bệnh gút Khả di truyền gen gây tăng acid uric người 63% Trong có gen SLC2A9, SLC22A12 SLC22A11, ABCG2 có liên quan tới gút 1.1.2 Điều trị gút mạn tính Mục đích: tránh gút cấp, tránh tổn thương tạng Thường phải hạ acid uric máu 60 mg/l (360 mol/l) Để đạt mục tiêu cần thực tốt chế độ ăn chế độ dùng thuốc Thuốc điều trị gồm nhóm chính: Thuốc ức chế tổng hợp acid uric, Thuốc tăng thải acid uric, Thuốc tiêu acid uric: Uricase, Pegloticase Kết hợp kiềm hóa nước tiểu, phục hồi chức năng, chế độ dinh dưỡng vận động, điều trị ngoại khoa cần 1.2 Quan niệm Y học cổ truyền bệnh gút 1.2.1 Nguyên nhân chế bệnh sinh Theo YHCT, bệnh gút có tên Thống phong Ngồi cịn bệnh danh khác như: lịch tiết phong, bạch hổ lịch tiết phong, lịch tiết, tý chứng Thống phong thuộc phạm vi chứng tý (Tý có nghĩa bế tắc, khơng thơng) Theo lý luận Đông y, nguyên nhân gây bệnh thống phong nằm ba phạm trù gây bệnh, là: nội nhân, ngoại nhân bất nội ngoại nhân 1.2.2 Điều trị gút theo YHCT Thống phong chia thành thể , tùy thuộc vào thể lâm sàng mà có pháp điều trị cụ thể Thể phong thấp nhiệt pháp điều trị nhiệt thơng lạc, khu phịng trừ thấp Thể phong hàn thấp có pháp điều trị khu phong tán hàn, trừ thấp thông lạc Pháp điều trị thể đàm ứ hoạt huyết hóa ứ, hóa đàm tán kết Pháp điều trị thể khí huyết hư, can thận hư bổ khí huyết, bổ can thận, khu phong thắng thấp, thông kinh lạc, thống 1.3 Tổng quan số nghiên cứu điều trị gút thuốc YHCT Các nghiên cứu điều trị gút thuốc YHCT bao gồm nghiên cứu thực nghiệm lâm sàng Thực nghiệm tìm hiểu chế ức chế enzym xanthin oxidase vị thuốc Trên sở kết hợp y học đại y học cổ truyền, lâm sàng tiến hành nghiên cứu nhiều thuốc chữa thống phong tứ diệu tán gia giảm, viên Hổ trượng thống phong (Hổ trượng, Khương hoạt, toàn quy, Hoàng bá), thuốc Quế chi thược dược tri mẫu thang Nghiên cứu thuốc Việt Nam điều trị gút Thống phong hoàn, HPA, cốm tan Tứ diệu tán cho thấy tác dụng giảm đau hạ acid uric tốt 1.4 Tổng quan thuốc Tam diệu gia vị 1.4.1 Xuất xứ thuốc Viên nang cứng TDGV có xuất xứ từ thuốc Tam diệu thang tác phẩm Y học truyền nhóm nghiên cứu gia thêm vị thuốc Bài thuốc Tam diệu thang gồm Hoàng bá, Thương truật, Ngưu tất Tác dụng: Thanh nhiệt, táo thấp Chủ trị: thấp nhiệt hạ lưu, hai chân tê bì, nóng lửa thiêu Bài thuốc Tam diệu thang chứng minh tác dụng chống viêm hạ acid uric nghiên cứu thực nghiệm 1.4.2 Công thức thuốc Hoàng bá (Phellodendron amurense Rupr.) 100mg, Thương truật (Atractylodes lancea (Thunb.)) 100mg, Ngưu tất (Achyranthes bidentata Blume.) 40mg, Râu ngô (Stigmata Maydis) 40mg, Dây đau xương (Tinospora sinensis Merr) 100mg, Thiên niên kiện (Homalomena aromatica (Roxb)) 40mg, Trử ma diệp (Boehmeria nivea (L) Gaud.) 40mg, Quế chi (Cinnamomum cassia Blume) 40mg Phụ gia vừa đủ viên Dạng bào chế: Viên nang cứng 500mg Liều dùng: Ngày uống viên, chia lần sáng – chiều sau ăn 30 phút Chỉ định: thống phong thể đàm thấp ứ trệ 1.4.3 Cơ sở xây dựng thuốc Cơ sở lý luận: Bài thuốc cổ phương Tam diệu thang gồm vị thuốc Thương truật, Hoàng bá, Ngưu tất, kết hợp từ Nhị diệu tán (Hoàng bá, Thương truật) gia thêm Ngưu tất Hoàng bá đắng hàn nhiệt, Thương truật đắng ấm thấp, hai vị hợp lại có tác dụng nhiệt thấp Khi gia thêm Ngưu tất có tác dụng hoạt huyết, dẫn thuốc xuống Để tăng thêm hiệu thuốc, dựa kinh nghiệm điều trị bệnh gút lâm sàng, nhóm nghiên cứu gia thêm năm vị thuốc Trong đó, Dây đau xương, Thiên niên kiện hai vị thuốc phát tán phong thấp, làm mạnh gân xương Quế chi vị thuốc có tác dụng thông kinh lạc thống, dẫn thuốc đến chi Thấp theo khí hóa mà tiết ra, lợi tiểu tiện phương pháp trừ thấp tốt Râu ngô Trử ma diệp hai vị thuốc nam có tác dụng lợi niệu trừ thấp Cơ sở khoa học: Ngoài nghiên cứu tác dụng chống viêm hạ acid uric Tam diệu thang trình bày trên, nghiên cứu dược lý học đại khẳng định, vị thuốc YHCT cấu thành nên thuốc thông qua chế ức chế enzym XO giúp giảm acid uric máu Chương ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚU 2.1 Chất liệu nghiên cứu 2.1.1 Thuốc dùng nghiên cứu: Viên nang cứng TDGV 500mg Viên nang sản xuất Công ty CP Dược TW Mediplantex có chứng nhận đạt tiêu chuẩn sở 2.1.2 Thuốc đối chứng ❖ Thuốc đối chứng dùng nghiên cứu thực nghiệm Allopurinol STADA® 300 mg dạng viên nén Thành phần: Allopurinol 300mg; tá dược vừa đủ viên Nhà sản xuất: Công ty liên doanh TNHH Stada - Việt Nam Aspirin 100mg dạng viên bao tan ruột Thành phần: Acid acetylsalicylic 100mg, tá dược vừa đủ Nhà sản xuất: Công ty cổ phần Traphaco Codein phosphat dạng thuốc bột Thành phần: Codein phosphat Nhà sản xuất: Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương ❖ Thuốc đối chứng dùng nghiên cứu lâm sàng Allopurinol 300mg dạng viên nén Thành phần: Allopurinol 300mg, tá dược vừa đủ viên Nhà sản xuất: Công ty cổ phần XNK Domesco Đồng Tháp Liều dùng: Uống ngày viên sau ăn ❖ Placebo dùng nghiên cứu lâm sàng Placebo 1: dạng viên nén giống Allopurinol 300mg Nhà sản xuất: Công ty cổ phần XNK Domesco Đồng Tháp Liều dùng: uống ngày viên sau ăn Placebo 2: dạng viên nang cứng giống TDGV 500mg Nhà sản xuất: Công ty CP Dược TW Mediplantex Liều dùng: uống ngày viên, chia lần sau ăn 2.2 Đối tượng nghiên cứu 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu thực nghiệm Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, khỏe mạnh, trọng lượng 20 ± 2g Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp Chuột cống trắng chủng Wistar, giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 190 – 230g Trung tâm cung cấp động vật thí nghiệm Đan Phượng – Hà Tây cung cấp Thỏ chủng Newzealand White, lông trắng, giống, khỏe mạnh, trọng lượng 2,0 – 2,5kg Trung tâm G1 – Viện kiểm nghiệm thuốc Trung Ương cung cấp Động vật nuôi dưỡng theo chế độ tiêu chuẩn phịng thí nghiệm từ - ngày trước thực nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu ăn thức ăn chuẩn dành riêng cho chuột thỏ, uống nước tự 2.2.2 Đối tượng nghiên cứu lâm sàng Nghiên cứu tiến hành 64 bệnh nhân gút chia làm nhóm: nhóm nghiên cứu 32 bệnh nhân, nhóm chứng 32 bệnh nhân * Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân: Theo YHHĐ, bệnh nhân chẩn đoán gút mạn tính theo tiêu chuẩn Bennet Wood năm 1968 có tăng acid uric Ở Nam hàm lượng acid uric máu > 7,0 mg/l (420 µmol/l); Ở Nữ: hàm lượng acid uric máu > 6,0 mg/l (360 µmol/l) Theo YHCT, bệnh nhân khám theo tứ chẩn (vọng, văn, vấn, thiết), triệu chứng phù hợp với thể đàm thấp ứ trệ: vận động chậm chạp không linh hoạt, lưỡi bệu, rêu trắng nhờn, thở khơng Người mệt mỏi, tê bì, đau nhức khớp, chỗ đau cố định không di chuyển Các khớp chỗ có sưng nề Hạn chế vận động khớp, có biến dạng khớp Ăn kém, đại tiện phân nát Có cảm giác hoa mắt chóng mặt, nặng đầu Các khớp đau, sưng kéo dài, có nóng đỏ không, mạch huyền hoạt * Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân: Loại trừ bệnh nhân có tăng acid uric thứ phát (do bệnh ung thư, dùng nhóm lợi tiểu cholorothiazid …), bệnh nhân nữ có thai cho bú Bệnh nhân có kèm bệnh cấp tính khác: Viêm phổi, lao, suy gan, suy thận, nhồi máu tim… Bệnh nhân gút mạn tính khơng tăng acid uric máu Bệnh nhân có tiền sử dị ứng với thuốc Allopurinol Bệnh nhân không thuộc thể thể đàm thấp ứ trệ theo YHCT 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu thực nghiệm Nghiên cứu độc tính cấp xác định LD50 Viên nang cứng TDGV chuột nhắt trắng đường uống theo phương pháp Behrens Chuột chia thành nhiều lô khác nhau, lô 10 Cho chuột uống thuốc thử với liều tăng dần thể tích để xác định liều thấp gây chết 100% chuột liều cao khơng gây chết chuột Theo dõi tình trạng chung số lượng chuột chết lô 72 từ xác định LD50 (nếu có) Tiếp tục theo dõi tình trạng chuột đến hết ngày thứ sau uống thuốc thử lần đầu Nghiên cứu độc tính bán trường diễn viên nang cứng TDGV thỏ theo hướng dẫn WHO Thỏ chia làm lô, lô 10 con, nhốt riêng chuồng Lô chứng: uống nước cất ml/kg/ngày Lô trị 1: uống TDGV liều 240mg/kg/ngày (liều có tác dụng tương đương người, tính theo hệ số 3) Lô trị 2: uống TDGV liều 720mg/kg/ngày (gấp lần lô trị 1) Các số theo dõi kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau tuần uống thuốc sau tuần tình trạng chung, thể trạng thỏ, chức phận tạo máu, chức gan thận Nghiên cứu tác dụng hạ acid uric viên nang cứng TDGV thực ba mơ hình: In vivo: Mơ hình đánh giá tác dụng hạ acid uric máu mơ hình đánh giá tác dụng thải trừ acid uric qua đường tiết niệu động vật gây tăng acid uric kali oxonat In vitro: Mơ hình đánh giá tác dụng ức chế tổng hợp acid uric Mơ hình đánh giá tác dụng hạ acid uric máu: Gây mơ hình tăng acid uric máu chuột nhắt trắng cách tiêm màng bụng lần hỗn dịch kali oxonat liều 500 mg/kg Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 con: Lô (chứng sinh học): Uống nước cất; Lô (chứng bệnh): Uống nước cất + tiêm màng bụng hỗn dịch kali oxonat; Lô (chứng dương): Uống allopurinol liều 20 mg/kg + tiêm màng bụng hỗn dịch kali oxonat; Lô (TDGV liều thấp): Uống TDGV liều 0,72 g dược liệu/kg + tiêm màng bụng hỗn dịch kali oxonat; Lô (TDGV liều cao): Uống TDGV liều 2,16 g dược liệu/kg + tiêm màng bụng hỗn dịch kali oxonat Chuột uống dung môi pha thuốc (nước cất), thuốc đối chứng chế phẩm thử với thể tích 0,2 ml/10g trọng lượng chuột vào định hàng ngày vòng ngày trước gây mơ hình Trước dùng nước cất thuốc thử 1,5 giờ, chuột không ăn uống nước bình thường Ngày thứ năm nghiên cứu, trước uống thuốc lần cuối, chuột lô tiêm màng bụng kali oxonat liều 500 mg/kg (lô chứng sinh học tiêm dung môi pha kali oxonat CMC-Na 0,5%) với thể tích 0,1ml/10 g thể trọng chuột Sau uống thuốc lần cuối giờ, giết chuột, lấy máu động mạch cảnh định lượng nồng độ acid uric huyết Mơ hình đánh giá tác dụng tăng thải acid uric qua đường tiết niệu: Gây mơ hình tăng acid uric máu chuột nhắt trắng cách tiêm màng bụng lần hỗn dịch kali oxonat liều 500 mg/kg 7 Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 12 con: Lô 1(chứng sinh học): Uống nước cất 0,2 ml/10g Lô (chứng bệnh): Uống nước cất + tiêm màng bụng hỗn dịch kali oxonat Lô (TDGV liều thấp): Uống TDGV liều 0,72 g dược liệu/kg + tiêm màng bụng hỗn dịch kali oxonat Lô (TDGV liều cao): Uống TDGV liều 2,16 g dược liệu/kg + tiêm màng bụng hỗn dịch kali oxonat Chuột uống dung môi pha thuốc (nước cất), thuốc đối chứng chế phẩm thử với thể tích 0,2 ml/10g trọng lượng chuột vào định hàng ngày vịng ngày trước gây mơ hình Trước dùng nước cất thuốc thử 1,5 giờ, chuột không ăn uống nước bình thường Ngày thứ năm nghiên cứu, trước uống thuốc lần cuối, chuột lô tiêm màng bụng kali oxonat liều 500 mg/kg chuột nhắt trắng (lô chứng sinh học tiêm dung môi pha kali oxonat CMC-Na 0,5%) với thể tích 0,1 ml/10g thể trọng chuột Sau uống thuốc lần cuối, chuột lô đưa vào lồng hứng nước tiểu riêng Nước tiểu chuột thu khoảng thời gian giờ, ly tâm lấy dịch để định lượng nồng độ acid uric creatinin niệu Vào thời điểm kết thúc thí nghiệm, lấy máu chuột tất lô, ly tâm lấy huyết để định lượng nồng độ acid uric creatinin máu Mơ hình đánh giá tác dụng ức chế enzym xanthin oxidase in vitro: Đánh giá tác dụng ức chế xanthin oxidase mẫu thử đĩa UV 96 giếng Costar 3635 theo quy trình mơ tả Nguyen MT Duong NT Trên đĩa UV 96 giếng Costar 3635 gồm có: giếng chứng, giếng đối chiếu (quercetin) giếng thử Trong giếng chứng/đối chiếu/thử cho tương ứng gồm: 50µl dung dịch đệm/dung dịch quercetin/dung dịch thử, 35µl dung dịch đệm phosphat 70mM, pH= 7,5, 30µl dung dịch enzym (0,01U/ml dung dịch đệm phoshat 70mM, pH=7,5) chuẩn bị trước sử dụng Sau ủ 25 oC 15 phút, thêm 60µl xanthin 150µM, tiếp tục ủ 25oC 30 phút Ngừng phản ứng cách cho thêm 25µl HCl 1N, đo mật độ quang (OD) bước sóng 290nm Song song với mẫu chứng, mẫu đối chiếu, mẫu thử có mẫu trắng chứng, mẫu trắng đối chiếu, mẫu trắng thử tiến hành tương tự thay đổi trình tự cho enzym vào giếng (enzym cho vào sau HCl 1N) Thí nghiệm lặp lại lần cho nồng độ Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp hai mơ hình: Gây phù chân chuột carrageenin gây viêm màng bụng chuột Mơ hình gây phù chân chuột carrageenin: Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 Lô (chứng sinh học): uống nước cất 0,2 ml/10g Lô (Chứng dương): uống aspirin liều 400 mg/kg Lô (TDGV liều thấp): uống TDGV liều 0,72 g dược liệu/kg (liều tương đương với liều dùng lâm sàng với hệ số quy đổi chuột nhắt 12) Lô (TDGV liều cao): uống TDGV liều 2,16 g dược liệu/kg (liều gấp lần liều dùng lâm sàng) Chuột uống thuốc ngày liên tục trước gây viêm Ngày thứ 5, sau uống thuốc thử giờ, gây viêm cách tiêm carrageenin 1% (pha nước muối sinh lý) với thể tích 0,02 ml/chuột vào gan bàn chân sau, bên phải chuột Đo thể tích chân chuột (đến khớp cổ chân) máy đo viêm Plethysmometer No 7250 vào thời điểm: trước gây viêm (V0); sau gây viêm (V2), (V4), (V6) 24 (V24) Kết tính theo cơng thức Fontaine Mơ hình gây viêm màng bụng chuột: Chuột cống trắng chia ngẫu nhiên thành lô nghiên cứu sau: Lô (chứng sinh học): uống nước cất 0,2 ml/10g Lô (Chứng dương): uống aspirin liều 200 mg/kg Lô (TDGV liều thấp): uống TDGV liều 0,36 g dược liệu/kg (liều tương đương với liều dùng lâm sàng với hệ số quy đổi chuột cống 6) Lô (TDGV liều cao): uống TDGV liều 1,08 g dược liệu/kg (liều gấp lần liều dùng lâm sàng) Chuột uống nước cất thuốc ngày liền trước gây viêm Ngày thứ 7, sau uống thuốc thử giờ, gây viêm màng bụng chuột dung dịch carrageenin 0,1 g + formaldehyd 1,4 ml, pha vừa đủ 100 ml nước muối sinh lý, với thể tích tiêm ml/100g vào ổ bụng chuột Sau gây viêm 24 giờ, mở ổ bụng chuột hút dịch rỉ viêm, đo thể tích, đếm số lượng bạch cầu/ml dịch rỉ viêm định lượng protein dịch rỉ viêm Nghiên cứu tác dụng giảm đau viên nang cứng TDGV thực phương pháp mâm nóng, máy đo ngưỡng đau phương pháp gây quặn đau acid acetic Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 con: Lô (chứng sinh học): uống nước cất liều 0,2 ml/10g/ngày; Lô 2: uống codein phosphat 20 mg/kg; Lô 3: uống TDGV liều 0,72 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số quy đổi 12); Lô 4: uống TDGV liều 2,16 g dược liệu/kg/ngày Chuột uống nước thuốc ngày lần vào buổi sáng, với thể tích 0,2 ml/10g/ngày ngày liên tục Nghiên cứu tác dụng giảm đau phương pháp mâm nóng: Đo thời gian phản ứng với nhiệt độ chuột trước uống thuốc sau uống thuốc lần cuối Nghiên cứu tác dụng giảm đau máy đo ngưỡng đau: Đo thời gian phản ứng với đau chuột lực gây đau chuột (sử dụng máy Dynamic Plantar Aesthesiometer 37450 Ugo Basile) trước uống thuốc sau uống thuốc lần cuối So sánh thời gian phản ứng với kích thích đau trước sau uống thuốc thử Nghiên cứu tác dụng giảm đau phương pháp gây quặn đau acid acetic Ngày cuối cùng, sau uống thuốc giờ, tiêm vào ổ bụng chuột 0,2 ml dung dịch acid acetic 1% Đếm số quặn đau chuột phút phút thứ 30 sau tiêm acid acetic So sánh số quặn đau lô nghiên cứu 2.3.2 Nghiên cứu lâm sàng 2.3.2.1 Thiết kế nghiên cứu: Thử nghiệm lâm sàng, so sánh trước với sau điều trị, có đối chứng, mù kép 2.3.2.2 Quy trình nghiên cứu - Bệnh nhân chọn vào nghiên cứu chia thành nhóm đảm bảo tương đồng tuổi, giới, mức độ bệnh, thể bệnh YHCT - Nhóm chứng: 32 bệnh nhân, uống Allopurinol 300mg x 01 viên/ngày săn ăn Placebo 500mg x 06 viên/ngày chia lần sáng – chiều sau ăn tuần Nhóm nghiên cứu: 32 bệnh nhân, uống viên nang cứng TDGV 500mg x 06 viên /ngày chia lần sáng – chiều sau ăn Placebo 300mg x 01 viên/ngày sau ăn tuần 2.3.2.3 Các tiêu nghiên cứu - Các tiêu nghiên cứu lâm sàng: VAS (Visual Analog Scale), tỉ lệ bệnh nhân đau khớp, số khớp đau, vị trí khớp đau, triệu chứng lâm sàng YHCT tác dụng không mong muốn lâm sàng Các tiêu lâm sàng lượng giá vào ngày (T0), tuần thứ (T3) tuần thứ (T6) đợt điều trị sau dừng thuốc tuần (T10) - Các tiêu cận lâm sàng nồng độ acid uric máu, xét nghiệm huyết học sinh hóa hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, enzyme gan (ALT, AST), creatinin Các tiêu cận lâm sàng lượng giá vào T0 T6 đợt điều trị Chỉ số acid uric đánh giá lại sau tuần dừng điều trị (T10) 2.3.2.4 Phương pháp đánh giá kết - Đánh giá hiệu điều trị: + So sánh giá trị trung bình nồng độ acid uric máu nhóm Nghiên cứu với nhóm Chứng sau điều trị tuần, sau tuần dừng điều trị So sánh khác nhóm 10 + Phân loại hiệu cải thiện số acid uric máu: Tỉ lệ bệnh nhân có số acid uric máu tăng, có hạ acid uric số acid uric trở giá trị bình thường sau điều trị tuần; Tỉ lệ bệnh nhân trì số acid uric máu bình thường sau tuần dừng điều trị (T10); Mức độ hạ acid uric máu: + Theo nghiên cứu tác giả Nguyễn Minh Hà, phân loại hiệu hạ acid uric máu theo mức độ: Tốt: nồng độ acid uric máu giảm ≥ 30% Khá: nồng độ acid uric máu giảm 15-30% Trung bình: nồng độ acid uric máu giảm < 15% Kém: nồng độ acid uric máu không giảm tăng 2.3.2.5 Xử lý số liệu: Các số liệu thu thập xử lý theo thuật toán thống kê Y sinh học, sử dụng phần mềm SPSS 22.0 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 2.3.2.6 Đạo đức nghiên cứu: Nghiên cứu thông qua Hội đồng Đạo đức Y sinh học Trường Đại học Y Hà Nội Hội đồng khoa học Bệnh viện Đa khoa Y học cổ truyền Hà Nội Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết nghiên cứu thực nghiệm 3.1.1 Độc tính cấp bán trường diễn * Độc tính cấp: Sau uống TDGV tất lơ khơng có chuột chết vòng 72 Chuột uống TDGV theo liều tăng dần từ 10,0g dược liệu/kg thể trọng chuột đến 20,0g dược liệu/kg thể trọng chuột (gấp 21 lần liều dùng bình thường lâm sàng) khơng nhận thấy biểu ngộ độc chuột thí nghiệm Chuột ăn uống, vận động bình thường, ngồi phân khơ * Độc tính bán trường diễn: Trong thời gian thí nghiệm, thỏ lơ hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, mắt sáng, lông mượt, ăn uống tốt, phân khô Sau tuần dùng thuốc liên tục với liều 240mg dược liệu/kg thỏ 720mg dược liệu/kg thỏ (gấp lần liều dùng lâm sàng) khơng gây độc tính quan tạo máu không làm thay đổi chức gan thận thỏ xét nghiệm sinh hóa mô bệnh học 3.1.2 Tác dụng hạ acid uric, giảm đau, chống viêm 3.1.2.1 Tác dụng hạ acid uric máu 11 Bảng 3.1 Ảnh hưởng viên nang cứng TDGV lên nồng độ acid uric máu mơ hình gây tăng acid uric máu động vật thực nghiệm Acid uric Mức giảm so Lô nghiên cứu n (mg/dL) với lơ mơ hình Chứng bệnh 10 1,18 ± 0,18 Allopurinol 20 mg/kg 10 0,69 ± 0,18∆∆∆ 41,52% TDGV liều thấp 10 0,82 ± 0,14∆∆∆ 30,51% ∆ TDGV liều gấp 10 0,99 ± 0,14 16,10% Δ p 0,05 0,05 g/kg) p4-3> 0,05 p4-3> 0,05 * p 1520 phút > 20-25 phút > 25-30 phút 3,10 ± 0,74 16,90 ± 4,65 14,00 ± 2,49 12,40 ± 2,76 12,40 ± 1,90 11,60 ± 1,51 11,70 9,10 ± 9,00 ± 7,30 ± 5,10 ± ± 2,64*** 2,62* 2,31*** 1,91*** 3,43* 10,40 1,50 ± 10,10 ± 8,40 ± 8,50 ± 7,50 ± ± 0,53*** 2,56** 2,07** 2,07*** 1,96*** 3,41** 12,90 3,70 ± 11,60 ± 11,80 11,00 ± 9,20 ± Lô ± 1,25 2,37* ± 2,44 2,98 2,94* TDGV 2,16 3,78* p4-3< p4-3> p4-3< p4-3< p4-3> g/kg p4-3> 0,001 0,05 0,01 0,05 0,05 0,05 * p