Khảo Sát Điều Kiện Nuôi Cấy Một Số Dòng Vi Khuẩn Kỵ Khí Sinh Tổng Hợp Cellulase Thủy Phân Mụn Dừa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY MỘT SỐ DỊNG VI KHUẨN KỴ KHÍ SINH TỔNG HỢP CELLULASE THỦY PHÂN MỤN DỪA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS VÕ VĂN SONG TOÀN ThS DƯƠNG THỊ HƯƠNG GIANG NGUYỄN VŨ HOÀNG SƠN MSSV:3064412 LỚP:CNSH K32 Cần Thơ, Tháng 5/2010 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (ký tên) SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) Dương Thị Hương Giang Nguyễn Vũ Hoàng Sơn DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2010 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) LỜI CẢM TẠ Trải qua bốn năm học tập rèn luyện trường Đại học Cần Thơ, nhận nhiều quan tâm động viên gia đình, hướng dẫn dạy tận tình q thầy với giúp đỡ nhiệt tình bạn Để hồn thành luận văn tốt nghiệp này, lời cảm ơn xin chân thành gửi đến: cô Dương Thị Hương Giang thầy Võ Văn Song Toàn cán hướng dẫn tận tình bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn: Cô Trần Thị Xuân Mai, cố vấn học tập động viên giúp đỡ lúc thực đề tài Các quý thầy cô giảng dạy truyền đạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập trường Cám ơn ba mẹ gia đình ln quan tâm, lo lắng động viên suốt trình học tập Thân gửi đến tập thể lớp Cơng nghệ sinh học K32 lời cảm ơn chân thành Tôi xin kính chúc q thầy bạn sinh viên dồi sức khỏe công tác tốt Cần Thơ, ngày tháng năm 2010 Nguyễn Vũ Hoàng Sơn TĨM LƯỢC Lần lượt 18 dịng vi khuẩn kỵ khí khảo sát hoạt tính thủy phân loại chất Carboxy Methyl Cellulose (CMC) mụn dừa Hầu hết dòng vi khuẩn này, hoạt tính thủy phân chất CMC mụn dừa khơng giống Đã chọn hai dịng vi khuẩn kỵ khí có hoạt tính mạnh chất mụn dừa (dịng 43 44) CMC khơng phải chất thích hợp cho sinh tổng hợp cellulase hai dòng Mụn dừa xử lý loại bỏ tanin chất thích hợp cho vi khuẩn phát triển so với mụn dừa chưa loại tanin Điều kiện thích hợp q trình sinh tổng hợp cellulase dịng 43 là: 1g/l (NH4)2SO4, pH 6, nhiệt độ 35oC Riêng dịng 44 hoạt tính thủy phân đạt giá trị cao với 1.15g/l (NH4)2SO4, pH 9, nhiệt độ 35 oC Thời gian thích hợp để vi khuẩn phát triển với hoạt tính cellulase cao 48 mơi trường lỏng với chất mụn dừa loại bỏ tanin, hiệu suất thủy phân chất mụn dừa 18% Từ khóa: Mụn dừa, cellulase, vi khuẩn kỵ khí, cellulose, CMC i MỤC LỤC Trang KÝ TÊN HỘI ĐỒNG LỜI CẢM TẠ TÓM LƯỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG vi DANH SÁCH HÌNH vii TỪ VIẾT TẮT ix CHƯƠNG I GIỚI THIỆU 01 CHƯƠNG II LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 03 2.1 Tổng quan dừa, xơ dừa, cellulose, Carboxy Methyl Cellulose (CMC) 03 2.1.1 Tổng quan dừa 03 2.1.2 Tổng quan xơ dừa 04 2.1.3 Tổng quan cellulose 05 2.1.4 Tổng quan CMC 07 2.2 Tổng quan cellulase 08 2.2.1 Vi sinh vật tổng hợp cellulase 08 2.2.2 Phân loại cellulase 08 2.2.3 Một số đặc tính cellulase từ vi khuẩn 09 2.2.4 Giá trị kinh tế cellulase 10 2.3 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 11 2.3.1 Trong nước 11 2.2.2 Ngoài nước 11 CHƯƠNG III PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 3.1 Phương tiện 13 3.1.1 Thời gian địa điểm 13 3.1.2 Nguyên liệu 13 ii 3.1.3 Các dòng vi khuẩn kỵ khí 13 3.2 Thiết bị hóa chất 13 3.2.1 Thiết bị 13 3.2.2 Hóa chất 14 3.2.3 Môi trường CMC 14 3.3.4 Môi trường mụn dừa 14 3.3 Phương pháp nghiên cứu 15 3.3.1 Chuẩn bị mụn dừa 15 3.3.2 Khảo sát hàm lượng cellulose mụn dừa 15 3.3.3 Xác định hàm ẩm mụn dừa 16 3.3.4 Xác định hàm lượng tro tổng số mụn dừa 17 3.3.5 Phương pháp nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí 18 3.3.6 Phương pháp đo đường kính thủy phân 18 3.3.7 Phương pháp xác định hoạt tính thủy phân dòng vi khuẩn 18 3.3.8 Phương pháp pha loãng vi sinh vật 18 3.3.9 Phương pháp định tính tanin 19 3.3.10 Phương pháp nhuộm Gram vi khuẩn 19 3.3.11 Định lượng protein phương pháp Bradford (1976) 20 3.3.12 Xác định đường khử phương pháp Nelson - Somogi (1942) 21 3.4 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh tổng hợp enzyme cellulase vi khuẩn kỵ khí 21 3.4.1 Ảnh hưởng chất: CMC mụn dừa 21 3.4.2 Ảnh hưởng tanin chất mụn dừa 22 3.4.3 Ảnh hưởng loại muối khác 23 3.4.4 Ảnh hưởng nồng độ muối 23 3.4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ pH 24 3.4.6 Khảo sát thời gian tối ưu cho phát triển dòng vi khuẩn thủy phân mụn dừa 24 3.4.7 Khảo sát ảnh hưởng chất cảm ứng CMC lên thủy phân mụn dừa 25 iii CHƯƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Nguyên liệu mụn dừa 27 4.1.1 Mụn dừa 27 4.1.2 Phần trăm cellulose có mụn dừa 27 4.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn kỵ khí 28 4.2.1 Ảnh hưởng chất: CMC mụn dừa 28 4.2.2 Ảnh hưởng tanin có chất mụn dừa 30 4.2.3 Ảnh hưởng số loại muối khác 32 4.2.4 Ảnh hưởng nồng độ muối (NH4)2SO4 đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 43 44 33 4.2.5 Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 43 44 35 4.2.6 Ảnh hưởng thời gian đến trình thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 43 37 4.2.7 Ảnh hưởng chất cảm ứng CMC đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 43 39 CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 40 5.1 Kết luận 40 5.2 Đề nghị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Các phương pháp sinh – hóa học Các phương pháp vi sinh 1.1 Phương pháp đếm mật số vi khuẩn phương pháp đếm sống 1.2 Phương pháp chuẩn bị hóa chất nhuộm gram 1.3 Phương pháp kiểm tra hoạt tính cellulase đường kính vịng trịn thủy phân iv Các phương pháp sinh hóa 2.1 Phương pháp định lượng protein (Bradford, 1976) 2.2 Phương pháp xác định hoạt tính cellulase (Nelson, 1942) Phụ lục 2: Số liệu kết phân tích thống kê Số liệu thí nghiệm khảo sát nguyên liệu 1.1 Hàm lượng cellulose, độ ẩm độ tro mụn dừa 1.2 Đường chuẩn dung dịch BSA 1.3 Đường chuẩn dung dịch glucose Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh tổng hợp enzyme cellulase vi khuẩn kỵ khí 2.1 Ảnh hưởng tanin có chất mụn dừa 2.2 Ảnh hưởng số loại muối 2.3 Ảnh hưởng nồng độ muối (NH4)2SO4 đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn kỵ khí sau ngày ủ 2.4 Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn kỵ khí sau ngày ủ 2.4.1 Dòng vi khuẩn 43 2.4.2 Dòng vi khuẩn 44 2.5 Ảnh hưởng thời gian đến trình thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 43 2.6 Ảnh hưởng chất cảm cứng CMC đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 43 v DANH SÁCH BẢNG Bảng số Tựa bảng Trang Bảng 1: Tỉ lệ trung bình thành phần dừa 04 Bảng 2: Thành phần hoá học sợi xơ dừa 05 Bảng 3: Thành phần môi trường CMC 18 Bảng 4: Thành phần môi trường mụn dừa 19 Bảng 5: Bảng thay đổi loại muối 22 Bảng 6: Bảng bố trí thay đổi nồng độ muối 23 Bảng 7: Bảng bố trí thay đổi thành phần phần trăm CMC mụn dừa 25 Bảng 8: Phần trăm cellulose mụn dừa 26 Bảng 9: Hoạt tính thủy phân dịng vi khuẩn kỵ khí mơi trường có chất CMC mụn dừa 28 Bảng 10: Bảng mô tả hai dòng vi khuẩn 43 44 28 Bảng 11: Phần trăm chất mụn dừa bị thủy phân theo thời gian 38 vi DANH SÁCH HÌNH Hình số Tựa hình Trang Hình 1: Cấu tạo dừa .03 Hình 2: Cấu trúc mặt cắt ngang sợi xơ dừa 05 Hình 3: Phân tử cellulose đơn phân phân tử cellulose 06 Hình 4: Liên kết hydro nội gian phân tử cellulose 06 Hình 5: Cấu trúc phân tử CMC 07 Hình 6: Quá trình thủy phân cellulose enzyme cellulase 10 Hình 7: Một số thiết bị thí nghiệm 13 Hình 8: Sơ đồ chuẩn bị mụn dừa 15 Hình 9: Các bước pha loãng mẫu 18 Hình 10: Qui trình nhuộm Gram vi khuẩn 20 Hình 11: Sơ đồ khảo sát hoạt tính dịng vi khuẩn mơi trường CMC mụn dừa 21 Hình 12: Quy trình kiểm tra hoạt tính enzyme cellulase ni vi khuẩn môi trường lỏng 24 Hình 13: Mụn dừa trước sau xử lý 26 HÌnh 14: Ảnh nhuộm gram dịng vi khuẩn 43 44 29 Hình 15: Phản ứng màu mụn dừa trước sau xử lý loại bỏ tanine 29 Hình 16: Biểu đồ thể ảnh hưởng tanin đến hoạt tính thủy phân mụn dừa vi khuẩn 30 Hình 17: Ảnh hưởng tanin lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 43 44 31 Hình 18: Biểu đồ thể ảnh hưởng số loại muối đến hoạt tính thủy phân dịng vi khuẩn 43 44 32 Hình 19: Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ muối (NH4)2SO4 đến hoạt tính thủy phân dịng vi khuẩn 43 44 33 vii Xây dựng đường chuẩn : Chuẩn bị dãy protein BSA chuẩn với nồng độ tăng dần từ 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180 µg/ml  Thí nghiệm lặp lại lần  Chuẩn bị ống eppendoft thêm vào chất theo bảng: Ống nghiệm Hóa chất Nồng độ BSA (µg/ml) 10 20 30 40 50 Thể tích BSA (µl) 10 20 30 40 50 Thể tích H2O cất (µl) 100 95 90 80 70 60 50  Lắc ống  Lấy 100 l dung dịch từ ống nghiệm cho vào dãy ống nghiệm đánh số thứ tự  Cho vào ống 2ml thuốc thử  Lắc ống máy vortex để tránh khơng có bọt khí  Sau 10 phút tiến hành đo OD ( định chuẩn máy quang phổ với dung dịch đệm (ống 1) bước sóng 595 nm Chỉnh OD giá trị Tiến hành đo ống lại  Ghi nhận lại kết  Tính giá trị trung bình lần lặp lại  Vẽ biểu đồ đường chuẩn BSA thể mối tương quan tuyến tính nồng độ protein (g/ml) với độ hấp thu (OD) bước sóng 595 nm Định lượng protein có mẫu:  Hàm lượng protein mẫu tiến hành đo đồng thời với việc dựng đường chuẩn Mẫu pha loãng lần, 10 lần 20 lần (đo lặp lại lần)  Lấy 100l mẫu pha loãng cho vào ml dung dịch thuốc thử  Ghi nhận kết quả, lấy giá trị trung bình ống  Từ phương trình đường chuẩn ta suy hàm lượng protein dung dịch đo 2.2 Khảo sát hoạt tính cellulase dịch ni cấy vi khuẩn phương pháp Nelson 1942) Mục đích: Xác định hoạt tính cellulase dịch ni cấy vi khuẩn Ngun tắc: Đây phương pháp xác định hoạt tính enzyme dựa vào lượng đường khử sinh thông qua phản ứng với thuốc thử Nelson (Nelson, 1942) Khi enzyme vi khuẩn phân cắt CMC cho đường glucose, đường tác dụng với thuốc thử đồng đun nóng cho màu đỏ gạch cho thuốc thử aseno moblybdate làm dung dịch chuyển sang màu xanh da trời hấp thu bước sóng 520nm Tiến hành thí nghiệm Chuẩn bị hóa chất thuốc thử: Hóa chất: 100mM dung dịch đệm Sodium Acetate 0.5M, pH=0.5, dung dịch CMC 0,5%, dung dịch chuẩn glucose 1mM 50mM dung dịch đệm Sodium acetate 0.5M pH = 5.0 Thuốc thử đồng: hỗn hợp A1:A2 Thuốc thử Asenomolybdate: hỗn hợp B3:B4 A1: Hòa tan 15g K - Na - tartrate H2O 30g Na2CO3 (khan) với khoảng 300ml nước cất Thêm 20g NaHCO3 Hòa tan 180g Na2SO4 (khan) với khoảng 500ml nước cất nóng đun sơi để loại khí Trộn hai dung dịch sau làm nguội hỗn hợp thêm nước đến lít A2: 5g CuSO4 45g Na2SO4 khan/250ml nước cất B1: 26.5g (NH4)6MoO24.4H2O/450ml nước cất Vừa khuấy vừa thêm 21ml H2SO4 đậm đặc B3: Hòa trộn B1 B2 với nhau, để tủ ủ 37oC 24 - 48 bảo quản tối B4: 1.5N H2SO4 (41ml H2SO4 đậm đặc/1 lít nước cất) Dựng đường chuẩn glucose:  Pha dung dịch đường chuẩn: chuẩn bị ống nghiệm, cho vào ống thành phần chất theo bảng sau: [Glucose] (mM) 0,0 0.2 0.4 0.6 0.8 Dung dịch glucose (ml) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 Amac pH 5.0 (ml) 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 Tổng thể tích (ml) 1 1 1  Dựng đường chuẩn: chuẩn bị dãy ống eppendoft (mỗi nghiệm thức lặp lại lần) [Glucose] (mM) 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 Dung dịch glucose (µl) 150 150 150 150 150 150 Thuốc thử Đồng (µl) 150 150 150 150 150 150 Đun sôi 10 phút, để nguội nhiệt độ phịng Thuốc thử Arseno-molybdate (µl) 150 150 150 150 150 150 Nước cất (ml) 1 1 1 Ủ 20 phút Ly tâm có cặn, đo quang phổ bước sóng 520nm  Ghi nhận kết Vẽ biểu đồ đường chuẩn Xác định hàm lượng đường khử sản phẩm thủy phân:  Cho vào ống 50l tinh bột 1% + 50l enzyme + Sodium Acetate 0.5M, pH  Ủ 30 phút 40 oC  Cho thuốc thử đồng vào  Đối chứng: lấy ống eppendoft khác, dùng enzyme bất hoạt (đun nóng 100oC 30 phút) (bố trí song song với thí nghiệm có enzyme chưa bất hoạt)  Xác định hàm lượng đường khử sinh mẫu theo đường chuẩn Tính tốn kết quả:  Đơn vị hoạt tính enzyme 1ml enzyme tính theo cơng thức: U= * K’ Trong đó: U: Hoạt tính enzyme (U/ml) X: Hàm lượng glucose dung dịch đo T: Thời gian phản ứng (30 phút) VE: Thể tích enzyme (50l) K’: Hệ số pha lỗng  Đơn vị hoạt tính riêng enzyme (hoạt tính đặc hiệu) số đơn vị hoạt tính 1mg protein U/mg PHỤ LỤC 2: SỐ LIỆU VÀ KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THỐNG KÊ Số liệu thí nghiệm khảo sát nguyên liệu 1.1 Hàm lượng cellulose, độ ẩm độ tro mụn dừa Bảng 15: Số liệu thành phần mụn dừa Thành phần L1 L2 L3 TB Cellulose (%) 36.73 36.10 37.44 36.76 Độ ẩm (%) 11.13 11.75 11.43 11.44 Độ tro (%) 0.0026 0.0018 0.0025 0.0023 1.2 Đường chuẩn dung dịch BSA (µg/ml) Bảng 16: Giá trị OD dung dịch protein chuẩn STT Nồng độ BSA (µg/ml) L1 L2 L3 TB 0.000 0.000 0.000 0.000 30 0.075 0.075 0.081 0.077 60 0.161 0.160 0.165 0.162 120 0.321 0.317 0.317 0.318 180 0.459 0.455 0.458 0.457 240 0.558 0.564 0.556 0.559 300 0.638 0.647 0.646 0.644 Đường chuẩn BSA y = 0.0022x + 0.0254 R2 = 0.987 0.800 OD 0.600 0.400 0.200 0.000 100 200 300 400 Hàm lượng BSA (m g/m l) Hình 27: Biểu đồ đường chuẩn protein (BSA) 1.3 Đường chuẩn dung dịch glucose chuẩn Bảng 17: Giá trị OD dung dịch glucose chuẩn Ống nghiệm [Glucose] (mM) L1 L2 Trung bình 0.085 0.082 0.084 0.2 0.134 0.135 0.135 0.4 0.213 0.211 0.212 0.6 0.307 0.311 0.309 0.8 0.356 0.361 0.359 0.49 0.484 0.487 Đường chuẩn đường khử 0.6 y = 0.3977x + 0.0655 0.5 R = 0.984 OD 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.2 0.4 0.6 0.8 Nồng độ Glucose (mM) 1.2 Hình 28: Biểu đồ đường chuẩn đường khử Kết số yếu tố yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh tổng hợp enzyme cellulase vi khuẩn kỵ khí 2.1.Khảo sát ảnh hưởng tanin có chất mụn dừa Bảng 18: Kết ảnh hưởng tanin đến hoạt tính thủy phân Mụn dừa Đã xử lý loại bỏ tanin Chưa xử lý tanin Hoạt tính thủy phân Hoạt tính thủy phân dịng vi khuẩn 43 dòng vi khuẩn 44 L1 L2 L3 TB L1 L2 L3 TB 3.11 3.22 2.88 3.07 2.90 3.00 2.82 2.91 2.00 1.86 1.91 1.92 2.10 2.11 1.93 2.00 Bảng 19: Kết thống kê hoạt tính thủy phân dịng vi khuẩn 43 sau ngày ủ mơi trường mụn dừa có xử lý khơng có xử lý loại bỏ tanin Multiple Range Tests for hoat tinh thuy phan by Xu li tanin -Method: 95.0 percent LSD Xu li tanin Count Mean Homogeneous Groups -1 1.92 X 3.07 X -* denotes a statistically significant difference Ghi chú: 1: Khơng có xử lý loại bỏ tanin : Đã xử lý để loại bỏ tanin Variance Check Cochran's C test: 0.856736 P-Value = 0.286528 Bartlett's test: 1.42718 P-Value = 0.286023 Hartley's test: 5.98013 Bảng 20: Thống kê hoạt tính thủy phân dòng vi khuẩn 44 sau ngày ủ mơi trường mụn dừa có xử lý khơng có xử lý loại bỏ tanin Multiple Range Tests for Hoat tinh thuy phan by Xu li tanin -Method: 95.0 percent LSD Xu li tanin Count Mean Homogeneous Groups -1 2.04 X 2.90 X -* denotes a statistically significant difference Ghi chú: 1: Khơng có xử lý loại bỏ tanin 2: Đã xử lý để loại bỏ tanin Variance Check Cochran's C test: 0.557169 P-Value = 0.885662 Bartlett's test: 1.0066 P-Value = 0.88463 Hartley's test: 1.2582 2.2 Ảnh hưởng số loại muối Bảng 21: Kết ảnh hưởng số loại muối khoáng lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn sau ngày ủ Loại muối Hoạt tính thủy phân Hoạt tính thủy phân dịng vi khuẩn 43 dòng vi khuẩn 44 L1 L2 L3 (NH4)2SO4 3.22 3.33 2.86 NH4Cl 1.56 1.67 NaNO3 1.00 KNO3 TB L1 L2 L3 TB 3.14 3.00 2.90 2.73 2.87 1.73 1.65 1.80 1.90 1.71 1.80 1.09 1.00 103 1.00 1.10 1.00 1.03 1.08 1.00 1.09 1.06 1.00 1.00 1.00 1.00 NH4NO3 2.13 2.22 2.00 2.12 1.92 2.20 2.29 2.13 NH4H2PO4 1.47 1.57 1.57 1.54 1.71 1.64 1.78 1.71 Bảng 22: Thống kê ảnh hưởng số loại muối lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 43 sau ngày ủ Multiple Range Tests for Hoat tinh thuy phan by Loai muoi -Method: 95.0 percent LSD Loai muoi Count Mean Homogeneous Groups -3 1.03 X 1.05 X 1.53 X 1.65 X 2.11 X 3.13 X -* denotes a statistically significant difference Ghi chú: 1: (NH4)2SO4; 2: NH4Cl; 3: NaNO3; 4: KNO3; 5: NH4NO3; 6: NH4H2PO4 Variance Check Cochran's C test: 0.682349 P-Value = 0.0194046 Bartlett's test: 2.10077 P-Value = 0.188774 Hartley's test: 24.8356 Bảng 23: Thống kê ảnh hưởng số loại muối lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 44 sau ngày ủ Multiple Range Tests for Hoat tinh thuy phan by Loai muoi -Method: 95.0 percent LSD Loai muoi Count Mean Homogeneous Groups -4 1.00 X 3 1.03 X 1.71 X 1.80 X 2.13 X 2.87 X -* denotes a statistically significant difference Ghi chú: 1: (NH4)2SO4; 2: NH4Cl; 3: NaNO3; 4: KNO3; 5: NH4NO3; 6: NH4H2PO4 Variance Check Cochran's C test: 0.509116 Bartlett's test: 1.45585 Hartley's test: 11.17 P-Value = 0.290326 P-Value = 0.536326 2.3 Kết ảnh hưởng nồng độ muối (NH4)2SO lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn sau ngày ủ Bảng 24: Kết ảnh hưởng nồng độ muối (NH 4)2SO4 lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn sau ngày ủ Hàm lượng muối (NH4)2SO4 (g/l) Hoạt tính thủy phân Hoạt tính thủy phân dòng vi khuẩn 43 dòng vi khuẩn 44 L1 L2 L3 TB L1 L2 L3 TB 0.71 1.00 1.11 1.00 1.04 1.11 1.10 1.00 1.07 0.85 1.10 1.13 1.22 1.05 1.11 1.13 1.10 1.11 1.00 3.33 3.11 3.30 3.25 1.42 1.44 1.50 1.45 1.15 2.17 2.08 2.44 2.23 2.27 2.17 2.25 2.23 1.30 1.10 1.11 1.00 1.07 1.09 1.00 1.00 1.03 1.45 1.11 1.00 1.00 1.04 1.00 1.00 1.00 1.00 Bảng 25: Thống kê ảnh hưởng nồng độ muối (NH 4)2SO4 lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 43, sau ngày ủ Multiple Range Tests for Hoạt tinh thuy phan by Nong muoi -Method: 95.0 percent LSD Ham luong muoi Count Mean Homogeneous Groups -6 1.03 X 1.03 X 1.07 X 1.15 X 2.23 X 3 324 X -* denotes a statistically significant difference Ghi chú: 1: 0.71 (g/l); 2: 0.85 (g/l); 3: (g/l); 4: 1.15 (g/l); 5: 1.30 (g/l); 6: 1.45 (g/l) Variance Check Cochran's C test: 0.54 P-Value = 0.123578 Bartlett's test: 1.54844 P-Value = 0.494352 Hartley's test: 9.48649 Bảng 26: Thống kê ảnh hưởng nồng độ muối (NH 4)2SO4 lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 44 sau ngày ủ Multiple Range Tests for Hoat tinh thuy phan by Nong muoi -Method: 95.0 percent LSD Ham luong muoi Count Mean Homogeneous Groups -6 1.00 X 1.03 X 1.07 XX 1.11 X 3 1.45 X 2.23 X -* denotes a statistically significant difference Ghi chú: 1: 0.71 (g/l); 2: 0.85 (g/l); 3: (g/l); 4: 1.15 (g/l); 5: 1.30 (g/l); 6: 1.45 (g/l) Variance Check Cochran's C test: 0.331343 Bartlett's test: 1.37479 Hartley's test: 15.8571 P-Value = 0.9995 P-Value = 0.617548 2.4 Kết thống kê ảnh hưởng pH nhiệt độ đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn sau kỵ khí, ngày ủ 2.4.1 Dòng vi khuẩn 43 Bảng 27: Thống kê ảnh hưởng pH nhiệt độ lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 43 sau ngày ủ Analysis of Variance for Hoat tinh thuy phan - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A: Nhiet 935044.0 233761.0 7277.74 0.0000 B: pH 114649.0 28662.2 892.35 0.0000 INTERACTIONS AB 203987.0 16 12749.2 396.92 0.0000 RESIDUAL 1606.0 50 32.12 TOTAL (CORRECTED) 1.25529E6 74 -All F-ratios are based on the residual mean square error Bảng 28 : Thống kê ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 43 sau ngày ủ Multiple Range Tests for Hoat tinh thuy phan by Nhiet Method: 95.0 percent LSD Nhiet Count LS Mean Homogeneous Groups -40 15 1.02 X 55 15 1.05 X 29 15 1.18 X 25 15 1.26 X 35 15 3.91 X -denotes a statistically significant difference Bảng 29: Thống kê ảnh hưởng pH lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 43 sau ngày ủ Multiple Range Tests for Hoat tinh thuy phan by pH -Method: 95.0 percent LSD pH Count LS Mean Homogeneous Groups 15 1.27 X 15 1.28 X 15 1.70 X 15 1.85 X 15 2.32 X -* denotes a statistically significant difference The StatAdvisor 2.4.2 Dòng vi khuẩn 44 Bảng 30 : Thống kê ảnh hưởng pH nhiệt độ lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 44, sau ngày ủ Analysis of Variance for Hoạt tinh thuy phan - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value MAIN EFFECTS A:Nhiet 22651.8 5662.95 82.87 0.0000 B:pH 2674.32 668.58 9.78 0.0000 INTERACTIONS AB 36415.4 16 2275.96 33.31 0.0000 RESIDUAL 3416.67 50 68.3333 TOTAL (CORRECTED) 65158.2 74 All F-ratios are based on the residual mean square error Bảng 31: Thống kê ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 44 sau ngày ủ Multiple Range Tests for Hieu suat thuy phan by Nhiet -Method: 95.0 percent LSD Nhiet Count LS Mean Homogeneous Groups -55 15 1.01 X 40 15 1.12 X 29 15 1.19 X 25 15 1.30 X 35 15 1.52 X -denotes a statistically significant difference Bảng 32: Thống kê ảnh hưởng pH lên hoạt tính thủy phân mụn dừa dòng vi khuẩn 44 sau ngày ủ Multiple Range Tests for Hoat tinh thuy phan by pH -Method: 95.0 percent LSD pH Count LS Mean Homogeneous Groups -8 15 1.14 X 15 1.19 XX 15 1.22 X 15 1.28 X 15 1.30 X -* denotes a statistically significant difference 2.5 Ảnh hưởng thời gian đến q trình thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 43 Bảng 33: Kết phần trăm chất mụn dừa bị phân hủy chất lượng đường khử tăng theo thời gian Thời gian thủy phân (h) % Mụn dừa bị phân hủy Giá trị OD Lượng đường khử sinh L1 L2 TB L1 L2 TB 6.33 5.89 6.11 0.023 0.018 0.0205 16 14.77 12.63 13.70 0.071 0.069 0.0700 24 14.94 14.64 14.79 0.304 0.311 0.3075 40 16.41 16.84 16.63 0.335 0.344 0.3395 48 16.47 15.82 16.15 0.351 0.355 0.3530 64 16.31 16.67 16.49 0.357 0.361 0.3590 72 16.49 16.42 16.46 0.359 0.365 0.3620 88 17.83 16.56 17.20 0.347 0.350 0.3485 95 17.62 17.91 17.77 0.307 0298 0.3025 112 17.69 16.16 16.93 0.273 0.286 0.2795 120 17.63 17.61 17.62 0.217 0.205 0.2110 Bảng 34: Kết thống kê phần trăm chất bị phân hủy theo thời gian Multiple Range Tests for % co chat su dung by thoi gian thuy phan -Method: 95.0 percent LSD Thời gian (h) Count Mean Homogeneous Groups -0 6.11 X 16 13.7 X 24 14.79 XX 48 16.145 XX 72 16.455 XX 64 16.49 XX 40 16.625 XX 112 16.925 XX 88 17.195 XX 120 17.6223 X 95 17.765 X -Variance Check Cochran's C test: 0.474884 P-Value = 0.144978 Bartlett's test: 5.90893 P-Value = 0.158458 Hartley's test: 7506.43 Bảng 35: Kết thống kê lượng đường khử tăng theo thời gian Multiple Range Tests for OD Duong khu by thoi gian thuy phan -Method: 95.0 percent LSD Thời gian (h) Count Mean Homogeneous Groups -0 0.0205 X 16 0.07 X 120 0.211 X 112 0.2795 X 95 0.3025 X 24 0.3075 X 40 0.3395 X 88 0.3485 XX 48 0.353 XX 64 0.359 XX 72 0.362 X -Variance Check Cochran's C test: 0.268254 P-Value = 0.93006 Bartlett's test: 1.69655 P-Value = 0.934653 Hartley's test: 42.25 2.6 Ảnh hưởng chất cảm ứng CMC đến hiệu suất thủy phân chất mụn dừa dòng vi khuẩn dòng vi khuẩn 43 Bảng 36: Kết % mụn dừa bị thủy phân dòng vi khuẩn 43 sau ngày ủ Nghiệm thức % Mụn dừa bị phân hủy L1 L2 TB 13.18 15.90 14.54 16.11 15.97 16.04 15.63 18.26 16.94 17.60 18.61 18.10 Ghi chú: 1: 25% mụn dừa + 75% CMC 2: 50% mụn dừa + 50% CMC 3: 75% mụn dừa + 25% CMC 4: 100% mụn dừa Bảng 37: Kết thống kê ảnh hưởng chất cảm ứng CMC đến hoạt tính thủy phân mụn dừa dịng vi khuẩn 43 sau ngày ủ Multiple Range Tests for hoat tinh thuy phan by nghiem thuc -Method: 95.0 percent LSD Nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -1 14.54 X 2 16.04 X 16.945 X 18.105 X -* denotes a statistically significant difference Ghi chú: 1: 25% mụn dừa + 75% CMC 2: 50% mụn dừa + 50% CMC 3: 75% mụn dừa + 25% CMC 4: 100% mụn dừa Variance Check Cochran's C test: 0.481824 P-Value = 0.7739 Bartlett's test: 3.81683 P-Value = 0.285996 Hartley's test: 377.469 ... có khả sinh tổng hợp cellulase để sản xuất phân hữu từ phụ phẩm Nông – Công nghiệp Đề tài “KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN NUỐI CẤY MỘT SỐ DỊNG VI KHUẨN KỴ KHÍ SINH TỔNG HỢP CELLULASE THỦY PHÂN MỤN DỪA” nhằm... vải 2.2 Tổng quan cellulase 2.2.1 Vi sinh vật tổng hợp cellulase Trong điều kiện tự nhiên vi sinh vật tổng hợp cellulase phong phú gồm: nấm mốc, xạ khuẩn, vi khuẩn nấm men Vi sinh vật phân huỷ... cellulose điều kiện kỵ khí hiếu khí, vi sinh vật tổng hợp enzyme hệ enzyme cellulase để phân hủy cellulose Tuy nhiên số lồi vi sinh vật khơng có khả tổng hợp lúc hệ enzyme cellulase điều kiện tự