Nghiên cứu điều chế cao từ cỏ sữa lá lớn (euphobia hirta l ) và ứng dụng chế biến thực phẩm dinh dưỡng kiểm soát glucose máu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DINH DƯỠNG QUỐC GIA NGUYỄN MẠNH THẮNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO TỪ CỎ SỮA LÁ LỚN (EUPHORBIA HIRTA L.) VÀ ỨNG DỤNG CHẾ BIẾN THỰC PHẨM DINH DƯỠNG KIỂM SOÁT GLUCOSE MÁU LUẬN ÁN TIẾN SĨ DINH DƯỠNG Hà Nội – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DINH DƯỠNG QUỐC GIA NGUYỄN MẠNH THẮNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO TỪ CỎ SỮA LÁ LỚN (EUPHORBIA HIRTA L.) VÀ ỨNG DỤNG CHẾ BIẾN THỰC PHẨM DINH DƯỠNG KIỂM SOÁT GLUCOSE MÁU Chuyên ngành: Dinh dưỡng Mã số: 9720401 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DINH DƯỠNG Hướng dẫn khoa học GS.TS Nguyễn Công Khẩn PGS.TS Trương Tuyết Mai Hà Nội – 2020 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi thực hướng dẫn GS.TS Nguyễn Công Khẩn PGS.TS Trương Tuyết Mai Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Tác giả Nguyễn Mạnh Thắng ii LỜI CẢM ƠN Trong trình thực luận án Viện Dinh dưỡng Quốc gia, nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy, cô, nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực bạn bè, đồng nghiệp gia đình Lời đầu tiên, tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám đốc Viện Dinh Dưỡng Quốc gia, Trung tâm Đào tạo Dinh dưỡng Thực phẩm khoa, phòng thuộc Viện Dinh dưỡng Quốc gia tạo điều kiện thuận lợi giúp hồn thành cơng trình Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Nguyễn Công Khẩn PGS.TS Trương Tuyết Mai, người thầy tận tình hướng dẫn, hết lịng giúp đỡ, tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu thực luận án Xin trân trọng cảm ơn đồng nghiệp, kỹ thuật viên Viện Dinh dưỡng Quốc gia; Viện Kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm Quốc gia; Trường Đại học Dược Hà Nội; Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương; Viện Dược liệu; Viện nghiên cứu Rau quả; Công ty TNHH Bia rượu nước giải khát AROMA nhiệt tình giúp đỡ cộng tác để hoàn thành luận án Cuối muốn gửi lời cảm ơn chân thành tới lãnh đạo đồng nghiệp Bộ Công Thương, người thân gia đình bạn bè quan tâm, động viên, chia sẻ ủng hộ, giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Tác giả Nguyễn Mạnh Thắng iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH ix ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Xu thế mơ hình bệnh tật thực trạng bệnh mạn tính khơng lây 1.1.1 Thực trạng bệnh mạn tính khơng lây 1.1.2 Bệnh đái tháo đường 1.1.3 Dịch tễ học đái tháo đường 10 1.1.4 Các giải pháp can thiệp hỗ trợ phòng, điều trị đái tháo đường rối loạn glucose máu 15 1.2 Polyphenol 19 1.2.1 Đặc điểm 19 1.2.2 Phân loại 19 1.2.3 Flavonoid 21 1.3 Cỏ sữa lớn 31 1.3.1 Đặc điểm thực vật thành phần hóa học cỏ sữa lớn .31 1.3.2 Các nghiên cứu đánh giá tính an toàn cỏ sữa lớn 35 1.3.3 Hiệu kiểm soát glucose máu cỏ sữa lớn 36 1.3.4 Một số chế phẩm từ cỏ sữa lớn ứng dụng kiểm sốt glucose máu 39 1.4 Q trình tách chiết điều chế cao chiết xuất từ thực vật 41 1.4.1 Khái niệm trình chiết 41 1.4.2 Điều chế cao chiết xuất từ thực vật 46 iv 1.5 Công nghệ sản xuất đồ uống từ thảo dược ứng dụng hỗ trợ phịng kiểm sốt glucose máu 48 1.5.1 Công nghệ sản xuất đồ uống pha chế 48 1.5.2 Một số sản phẩm đồ uống phòng hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường 50 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 53 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu 53 2.1.1 Nguyên liệu 53 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ 54 2.1.3 Động vật thí nghiệm 55 2.1.4 Thiết bị 56 2.1.5 Địa điểm nghiên cứu 57 2.2 Phương pháp nghiên cứu 57 2.2.1 Khảo sát đặc điểm thực vật, thành phần hóa học cỏ sữa lớn 57 2.2.2 Điều chế cao cỏ sữa lớn, đánh giá tính an tồn hiệu chế phẩm kiểm soát glucose máu 64 2.2.3 Ứng dụng cao cỏ sữa lớn thử nghiệm sản xuất đồ uống dinh dưỡng dùng kiểm soát glucose máu 73 2.3 Đạo đức nghiên cứu 78 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 79 3.1 Đặc điểm thực vật thành phần hóa học cỏ sữa lớn 79 3.1.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 79 3.1.2 Xác định thành phần hóa học 87 3.2 Điều chế cao cỏ sữa lớn, đánh giá tính an tồn hiệu chế phẩm kiểm soát glucose máu 93 3.2.1 Điều chế cao cỏ sữa lớn 93 3.2.2 Đánh giá tính an toàn cao cỏ sữa lớn 101 3.2.3 Đánh giá hiệu cao cỏ sữa lớn kiểm soát glucose máu .106 v 3.3 Ứng dụng cao cỏ sữa lớn để thử nghiệm sản xuất đồ uống dinh dưỡng dùng kiểm soát glucose máu 110 3.3.1 Nghiên cứu lựa chọn công thức sản phẩm .111 3.3.2 Nghiên cứu bao bì sản phẩm điều kiện trùng sản phẩm 112 3.3.3 Xây dựng quy trình sản xuất đồ uống dinh dưỡng cỏ sữa lớn 115 3.3.4 Đánh giá chất lượng, an toàn thực phẩm .116 3.3.5 Đánh giá khả chấp nhận cộng đồng 118 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 120 4.1 Đặc điểm thực vật thành phần hóa học cỏ sữa lớn 120 4.1.1 Đặc điểm thực vật 120 4.1.2 Thành phần hóa học 122 4.2 Điều chế cao cỏ sữa lớn, đánh giá tính an tồn hiệu chế phẩm kiểm sốt glucose máu .125 4.2.1 Điều chế cao cỏ sữa lớn .125 4.2.2 Đánh giá tính an tồn cao cỏ sữa lớn 131 4.2.3 Đánh giá tính hiệu cao cỏ sữa lớn kiểm soát glucose máu133 4.3 Ứng dụng cao cỏ sữa lớn để thử nghiệm sản xuất thực phẩm dinh dưỡng kiểm soát glucose máu .139 4.4 Những ưu điểm tính nghiên cứu 143 4.5 Những hạn chế nghiên cứu 144 KẾT LUẬN 145 KHUYẾN NGHỊ 147 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 148 TÀI LIỆU THAM KHẢO 149 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ACE Association Endocrinologist ADA: American diabetes CDA Canadian diabetes CSLL: Cỏ sữa lớn DALY: Disability adjusted ĐH Đường huyết ĐTĐ: Đái tháo đường IC50 Inhibitory concent IDF: International Deab HbA1c: Hemoglobin A1c HDL-C: High-density lipop OGTT: Oral glucose tolera LDL-C: Low-density lipop LD50 Lethal Dose 50% RLGM Rối loại glucose m SKLM: Sắc ký lớp mỏng T2DM Đái tháo đường typ WHO: World Health Orga vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán đái tháo đường tiền đái tháo đường dựa vào glucose máu theo Hiệp hội đái tháo đường Hoa Kỳ năm 2019 Bảng 1.2 Quốc gia có số người mắc bệnh đái tháo đường cao năm 2017 ước tính năm 2045 11 Bảng 1.3 Một số thực vật giàu flavonoid 23 Bảng 1.4 Thành phần hóa học cỏ sữa lớn Euphobia hirta L 34 Bảng 2.1 Sự phụ thuộc độ hấp thụ vào nồng độ quercitrin chuẩn .62 Bảng 2.2 Lựa chọn công thức phối trộn 74 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm hợp chất phần mặt đất cỏ sữa lớn 88 Bảng 3.2 Kết định tính phân đoạn dịch chiết n-hexan 89 Bảng 3.3 Kết định tính phân đoạn dịch chiết chloroform 90 Bảng 3.4 Kết định tính phân đoạn dịch chiết ethyl acetat 91 Bảng 3.5 Kết định lượng flavonoid toàn phần cỏ sữa lớn .92 Bảng 3.6 Kết điều chế cao cỏ sữa lớn quy mô kg nguyên liệu/mẻ 99 Bảng 3.7 Số liệu thử độc tính cấp cao chiết nước cỏ sữa 102 Bảng 3.8 Trọng lượng chuột thí nghiệm thời điểm theo dõi 102 Bảng 3.9 Các số huyết học lơ chuột thí nghiệm 103 Bảng 3.10 Các số sinh hóa lơ chuột thí nghiệm 104 Bảng 3.11 Tỷ lệ khối lượng quan so với khối lượng thể chuột thí nghiệm 105 Bảng 3.12 Hoạt tính ức chế enzyme α-amylase mẫu cao cỏ sữa lớn độ pha loãng khác 106 Bảng 3.13 Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase mẫu cao cỏ sữa lớn độ pha loãng khác 108 Bảng 3.14 Sự thay đổi nồng độ glucose máu HbA1c sau tuần điều trị cao chiết cỏ sữa lớn 110 viii Bảng 3.15 Một số tiêu hóa lý công thức phối chế đồ uống dinh dưỡng cao cỏ sữa lớn 111 Bảng 3.16 Kết đánh giá chất lượng cảm quan công thức phối chế đồ uống dinh dưỡng cỏ sữa lớn 112 Bảng 3.17 Chất lượng sản phẩm sau tháng bảo quản với bao bì khác 113 Bảng 3.18 Ảnh hưởng điều kiện trùng đến chất lượng đồ uống dinh dưỡng cỏ sữa lớn 114 Bảng 3.19 Chỉ tiêu hóa lý an tồn thực phẩm đồ uống dinh dưỡng cỏ sữa lớn 117 Bảng 3.20 Kết đánh giá chấp nhận cộng đồng đồ uống dinh dưỡng cỏ sữa lớn 118 Cao chiết CSLL chưa xay mịn Cao chiết CSLL xay mịn Pha chế nước giải khát CSLL Đóng gói nước giải khát CSLL Thanh trùng nước giải khát CSLL Nhãn sản phẩm dinh dưỡng dự kiến PHỤ LỤC – CÁC TÀI LIỆU LIÊN QUAN QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU Phiếu đánh giá chấp nhận cộng đồng Kết kiểm nghiệm sản phẩm Phòng thử nghiệm đạt tiêu chuẩn Quốc gia Dự thảo công bố sản phẩm đồ uống dinh dưỡng từ cỏ sữa lớn Cách tiến hành định tinh hợp chất cỏ sữa lớn phản ứng hóa học PHIẾU ĐÁNH GIÁ CHẤP NHẬN TẠI CỘNG ĐỒNG Mã số: Ngày ban hành: Họ tên (Ful name): Tình trạng sức khoẻ (Medical condition): Tên mẫu (Name of sample): ……………………………………… ………………………………… Ngày cảm quan (Date): ……………… ……………………………………… ……………………………………… …… Mục đích cảm quan: Đánh giá mức độ ưa thích (thị hiếu) khách hàng (How much you like or dislike the following sample) Mẫu đánh giá thang điểm 10 Mức độ ưa thích (Like scale) Màu sắc (Color) Mùi (Aroma) Vị (Taste) Ý kiến người sử dụng……………………………… …………………………………… ……………………… …………………………………… …………………………………… ………………………… Ký tên (Sign Dự thảo cơng bố sản phẩm CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc BẢN CÔNG BỐ SẢN PHẨM Số:01/2019/VDD I Thông tin tổ chức, cá nhân công bố sản phẩm Tên tổ chức: Viện Dinh dưỡng Quốc gia Địa chỉ: 48B - Tăng Bạt Hổ - Quận Hai Bà Trưng - Hà Nội Điện thoại: 02439.717.090 Fax: 02439.717.885 E-mail: ninvietnam@viendinhduong.vn Mã số doanh nghiệp: Số Giấy chứng nhận sở đủ điều kiện ATTP: ……… Ngày cấp/Nơi cấp: (đối với sở thuộc đối tượng phải cấp Giấy chứng nhận sở đủ điều kiện an tồn thực phẩm theo quy định) II Thơng tin sản phẩm Tên sản phẩm: Sản phẩm dinh dưỡng nước giải khát cỏ sữa thuộc nhóm Thực phẩm bảo vệ sức khỏe Thành phần: Trong 100ml sản phẩm chứa nguyên liệu: Cao chiết cỏ sữa lớn (Euphorbia hirta L.) : 2,5 g (tương đương 12,5 g cỏ sữa lớn khô) Mật ong (honey): 2,5 g Đường cỏ (stevia): 0,03 g Gừng (ginger): 1g Phụ liệu: Nước vừa đủ 100ml Chỉ tiêu chất lượng chủ yếu tạo nên công dụng sản phẩm (đối với thực phẩm bảo vệ sức khỏe): STT Chỉ tiêu đánh giá Flavonoid toàn phần (mg/L) Quercitin Chỉ tiêu chất lượng Chỉ tiêu đánh giá STT Màu sắc Mùi, Vị Trạng thái Độ axit (theo acid citric) Hàm lượng cacbon dioxit (CO2) Hàm lượng đường tổng số Chỉ tiêu an toàn Chỉ tiêu đánh giá STT I Kim loại nặng AI Pb (mg/L) Sn (mg/L) Độc tố vi nấm Patulin (µg/L) III Dư lượng thuốc bảo vệ thực vật Piperonyl butoxid, mg/l 2-Phenylphenol, mg/l Propargit, mg/l Mức chất STT IV Chỉ tiêu đánh giá Diphenylamin, mg/l Carbaryl, mg/l Malathion, mg/l Vi Sinh Tổng số vi sinh vật hiếu khí, CFU/ml Coliforms, CFU/ml E coli, CFU/ml Streptococci faecal, CFU/ml Pseudomonas aeruginosa, CFU/ml Staphylococcus aureus, CFU/ml Clostridium perfringens, CFU/ml Tổng số nấm men nấm mốc, CFU/ml Salmonella spp (CFU/25 ml) Thời hạn sử dụng sản phẩm: tháng Quy cách đóng gói chất liệu bao bì: Đóng gói lon nhơm, 200ml Tên địa sở sản xuất thử nghiệm sản phẩm: Viện nghiên cứu Rau Địa chỉ: Trâu Quỳ, Gia Lâm, Hà Nội Mẫu nhãn sản phẩm (đính kèm mẫu nhãn sản phẩm mẫu nhãn sản phẩm dự kiến) IV Yêu cầu an toàn thực phẩm Tổ chức, cá nhân sản xuất, kinh doanh thực phẩm đạt yêu cầu an toàn thực phẩm theo: - Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia sản phẩm đồ uống không cồn QCVN 6-2:2010/BYT; - Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 7041 : 2009 dồ uống không cồn Chúng xin cam kết thực đầy đủ quy định pháp luật an toàn thực phẩm hoàn toàn chịu trách nhiệm tính pháp lý hồ sơ cơng bố chất lượng, an toàn thực phẩm sản phẩm công bố đưa sản phẩm vào sản xuất, kinh doanh cấp Giấy tiếp nhận đăng ký công bố sản phẩm./ BI Hà Nội, ngày… tháng… Năm 2019 ĐẠI DIỆN TỔ CHỨC, CÁ NHÂN (Ký tên, đóng dấu) Cách tiến hành định tính hơp chất cỏ sữa lớn phương pháp hóa học *Tiến hành chiết xuất dịch chiết cồn để định tính flavonoid, courmarin Cân 10 g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100 ml Thêm 50 ml ethanol 90%, đun sôi cách thuỷ sôi 10 phút, lọc nóng Dịch lọc thu đem cách thủy cho bay hết dung môi Cắn thu hịa 20 ml nước cất đun sơi, lọc nóng Dịch lọc thu đem cô cách thủy cho bay hết nước, cắn lại hòa tan 15 ml ethanol 90% Dịch thu đem định tính flavonoid, courmarin Định tính flavonoid - Phản ứng Cyanidin (phản ứng Shinoda): Cho vào ống nghiệm nhỏ ml dịch chiết cồn, thêm bột magnesi kim loại (~10 mg) Nhỏ giọt HCl đặc (3-5 giọt) Để yên 1-2 phút Hiện tượng: Dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu đỏ Phản ứng dương tính (+) - Phản ứng với kiềm: + Phản ứng với NH3: Nhỏ 1-2 giọt dịch chiết cồn lên mảnh giấy lọc Hơ khô để lên miệng lọ amoniac đặc mở nút Hiện tượng: Màu vàng vết dịch chiết tăng lên Phản ứng dương tính (+) + Phản ứng với dung dịch NaOH: Cho vào ống nghiệm nhỏ ml dịch chiết cồn Thêm vài giọt dung dịch NaOH 10% Sau thêm ml nước cất Hiện tượng: Sau thêm NaOH dung dịch xuất kết tủa vàng, thêm ml nước cất kết tủa tan, màu vàng dung dịch đậm lên Phản ứng dương tính (+) - Phản ứng với dd FeCl3 5%: Cho vào ống nghiệm nhỏ ml dịch chiết cồn Thêm vào 2-3 giọt dd FeCl3 5% Hiện tượng: Dung dịch xuất tủa màu xanh đen Phản ứng dương tính (+) Kết luận: Mẫu cỏ sữa lớn nghiên cứu có flavonoid Định tính coumarin - Phản ứng mở, đóng vịng lacton Cho vào ống nghiệm nhỏ, ống ml dịch chiết cồn Ống 1: Thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10% Ống 2: Để nguyên Đun cách thuỷ ống đến sôi, để nguội, quan sát tượng Hiện tượng: Ống 1: Xuất tủa đục màu vàng Ống 2: Trong (phản ứng dương tính) Thêm vào ống nghiệm ống ml nước cất Lắc quan sát thấy: Ống 1: Dung dịch suốt có màu vàng đậm lên Ống 2: Trong (phản ứng âm tính) Acid hóa ống vài giọt HCl đặc Ống suốt (phản ứng âm tính) - Quan sát tượng huỳnh quang Nhỏ lên khoanh giấy thấm vết dịch chiết cồn (mỗi vết 2-3 giọt dịch chiết) Nhỏ 2-3 giọt dung dịch NaOH 5% lên vết dịch chiết Sấy nhẹ Che vết dịch chiết giấy thấm miếng kim loại, chiếu tia tử ngoại vài phút Bỏ miếng kim loại ra, quan sát tượng Hiện tượng: Vết dịch chiết không bị che có huỳnh quang khơng sáng vết dịch chiết bị che Kết luận: Mẫu cỏ sữa lớn nghiên cứu khơng có coumarin Định tính saponin - Quan sát tượng tạo bọt Cho g bột dược liệu vào bình định mức 250 ml, thêm 50 ml ethanol 70% Đun cách thủy đến sôi 30 phút Lọc nóng Dịch lọc thu đem cách thủy đến cắn Hòa tan lượng cắn thu ml nước nóng Lọc vào ống nghiệm 1,6 cm x 16 cm để nguội, thêm nước cho đủ 10 ml, dung ngón tay bịt miệng ơng nghiệm lắc mạnh theo chiều dọc ống nghiệm phút Để yên ống nghiệm Quan sát thấy cột bọt bền 15 phút Kết luận: Mẫu cỏ sữa lớn nghiên cứu có saponin Định tính glycosid tim Cân 10 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 200 ml Thêm 100 ml ethanol 25 % ngâm 24 Gạn lấy dịch chiết vào cốc có mỏ có dung tích 100 ml Thêm vào dịch chiết ml chì acetat 30%, khuấy Lọc qua giấy lọc gấp nếp vào cốc có mỏ dung tích 100 ml Nhỏ vài giọt dịch lọc vào ống nghiệm, thêm giọt chì acetat Nếu xuất tủa ngừng lọc, thêm khoảng ml chì acetat 30% vào dịch chiết, khuấy đều, lọc lại, tiếp tục thử đến dịch lọc không cịn tủa với chì acetat Chuyển tồn dịch lọc vào bình gạn dung tích 125 ml Lắc kỹ lần với hỗn hợp chloroform: ethanol (4:1), lần với ml Gạn dịch chiết chloroform vào cốc có mỏ, loại nước natri sulfat khan Chia dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ sấy khô đem bốc nồi cách thủy đến khô Cắn thu đem tiến hành phản ứng sau: - Phản ứng Liebermann- Burchard: Cho vào ống nghiệm chứa cắn ml anhydrid acetic, lắc cho tan hết cắn Nghiêng ống nghiệm 45º Cho từ từ theo thành ống 0,5 ml H2SO4 đặc, tránh xáo trộn chất lỏng ống Quan sát tượng Hiện tượng: Ở hai lớp chất lỏng thấy xuất vịng màu tím đỏ Phản ứng dương tính (+) - Phản ứng Legal: Hòa tan cắn ống nghiệm 0,5 ml ethanol 90% Nhỏ giọt thuốc thử natri nitroprussinat 0,5% giọt dung dịch NaOH 10% Lắc Hiện tượng: Ống nghiệm không thấy xuất màu đỏ cam Phản ứng âm tính (-) - Phản ứng Baljet: Hồ tan cắn ống nghiệm 0,5 ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Nhỏ giọt thuốc thử Baljet (gồm phần dung dịch acid picric 1% phần dung dịch NaOH 10%) Hiện tượng: Ống nghiệm không thấy xuất màu đỏ cam Phản ứng âm tính (-) - Phản ứng Keller- Kiliani: Hịa tan cắn ống nghiệm 0,5 ml ethanol o 90 Lắc cho tan hết cắn Nhỏ vài giọt dung dịch FeCl 5% acid acetic, lắc o Nghiêng ống nghiệm 45 cho từ từ theo thành ống 0,5 ml H 2SO4 đặc, tránh xáo trộn chất lỏng ống Hiện tượng: Ở hai lớp chất lỏng thấy xuất vịng màu tím đỏ Phản ứng dương tính (+) Kết luận: Mẫu cỏ sữa lớn nghiên cứu khơng có glycosid tim Định tính alcaloid Cân 15 g bột dược liệu cho vào bình cầu dung tích 250 ml Kiềm hóa NH4OH 25% Thêm 50 ml chloroform Đun hồi lưu giờ, lọc nóng vào cốc có mỏ 100 ml, để nguội Chuyển tồn dịch vào bình gạn dung tích 100 ml Lắc kỹ lần với dung dịch acid sulfuric 2%, lần ml Gộp dịch chiết nước thu cho vào ống nghiệm: - Ống 1: ml dịch chiết + giọt thuốc thử Mayer Hiện tượng: Ống nghiệm xuất tủa trắng Phản ứng dương tính (+) - Ống 2: ml dịch chiết + giọt thuốc thử Bouchardat Hiện tượng: Ống nghiệm xuất tủa nâu Phản ứng dương tính (+) - Ống 3: ml dịch chiết + giọt thuốc thử Dragendorff Hiện tượng: Ống nghiệm xuất tủa vàng Phản ứng dương tính (+) Kết luận: Mẫu cỏ sữa lớn nghiên cứu có alcaloid Định tính anthranoid Phản ứng Borntraeger: Lấy g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100ml Thêm 10 ml dung dịch H2SO4 1N Đun trực tiếp nguồn nhiệt đến sơi khoảng 15 phút Lọc dịch chiết cịn nóng qua giấy lọc vào bình gạn dung tích 50 ml Để nguội dịch lọc Thêm ml chloroform, lắc nhẹ, gạn bỏ lớp nước, giữ lớp chloroform để làm phản ứng Lấy ml dịch chiết chloroform, cho vào ống nghiệm nhỏ Thêm ml dung dịch NaOH 10% Lắc nhẹ Hiện tượng: Lớp nước không chuyển sang màu đỏ sim Phản ứng âm tính (-) Kết luận: Mẫu cỏ sữa lớn nghiên cứu khơng có anthranoid *Tiến hành chiết xuất dịch chiết nước để làm phản ứng định tính tanin, acid hữu cơ, acid amin, polysaccharid, đường khử Cân g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100 ml Thêm 50 ml nước cất, đun sơi cách thuỷ 20 phút, lọc nóng Dùng dịch lọc làm phản ứng Định tính tanin a Định tính chung Cho vào ống nghiệm nhỏ, ống ml dịch chiết nước, làm phản ứng sau: - Phản ứng với dung dịch gelatin 1%: thêm 2-3 giọt dung dịch gelatin 1% pha vào ống nghiệm chứa dịch chiết nước Hiện tượng: Xuất tủa bơng trắng Phản ứng dương tính (+) - Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%: Cho vào ống nghiệm chứa dịch chiết nước 23 giọt dd FeCl3 5% Hiện tượng: Xuất kết tủa màu xanh đen Phản ứng dương tính (+) - Phản ứng với dung dịch chì acetat: cho vào ống nghiệm chứa dịch chiết nước 23 giọt dung dịch chì acetat 10% Hiện tượng: Xuất tủa bơng trắng Phản ứng dương tính (+) b Định tính phân biệt loại tanin: phản ứng Stiasny Lấy 20 ml dịch chiết nước cho vào cốc có mỏ dung tích 50 ml Cho 5ml thuốc thử Stiasny (formol HCl đặc tỷ lệ 2:1), đun nóng, khuấy Thấy xuất tủa màu đỏ gạch Lọc qua giấy lọc gấp nếp vào cốc có mỏ dung tích 50 ml nhỏ vài giọt dịch lọc vào ống nghiệm, thêm giọt thuốc thử Stiasny Nếu xuất tủa ngừng lọc, tiếp ml thuốc thử Stiasny vào dịch chiết, khuấy đều, lọc lại tiếp tục thử đến dịch lọc khơng cịn tủa với thuốc thử Stiasny Thêm vào dịch lọc thu natri acetat đến dư Lấy ml dịch lọc cho vào ống nghiệm nhỏ Nhỏ 23 giọt dung dịch FeCl3 5% (TT) vào ống nghiệm Xuất tủa màu xanh đen Kết luận: Mẫu cỏ sữa lớn nghiên cứu có hai loại tanin: tanin pyrogallic tanin pyrocatechic Định tính đường khử Cho vào ống nghiệm nhỏ ml dịch chiết nước Thêm vào 0,5 ml thuốc thử Fehling A 0,5 ml Fehling B, đun cách thuỷ 10 phút Quan sát tượng Hiện tượng: Xuất kết tủa đỏ gạch Phản ứng dương tính (+) Kết luận: Mẫu cỏ sữa lớn nghiên cứu có chứa đường khử Định tính polysaccharid Lấy ống nghiệm lớn, cho vào ống: Ống 1: ml dịch chiết nước giọt thuốc thử Lugol Ống 2: ml nước cất giọt thuốc thử Lugol ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DINH DƯỠNG QUỐC GIA NGUYỄN MẠNH THẮNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO TỪ CỎ SỮA L? ? L? ??N (EUPHORBIA HIRTA L. ) VÀ ỨNG DỤNG CHẾ BIẾN THỰC PHẨM DINH DƯỠNG KIỂM SOÁT GLUCOSE MÁU... 93 3.2.1 Điều chế cao cỏ sữa l? ??n 93 3.2.2 Đánh giá tính an tồn cao cỏ sữa l? ??n 101 3.2.3 Đánh giá hiệu cao cỏ sữa l? ??n kiểm soát glucose máu .106 v 3.3 Ứng dụng cao cỏ sữa l? ??n để thử... 4.2.1 Điều chế cao cỏ sữa l? ??n .125 4.2.2 Đánh giá tính an toàn cao cỏ sữa l? ??n 131 4.2.3 Đánh giá tính hiệu cao cỏ sữa l? ??n kiểm soát glucose máu1 33 4.3 Ứng dụng cao cỏ sữa l? ??n để