Xác định một số chất kích thích sinh trưởng tổng hợp nhóm cytokinin trong giá đỗ bằng phương pháp LC MS MS

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN SỸ CHỨC XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG TỔNG HỢP NHÓM CYTOKININ TRONG GIÁ ĐỖ BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ HÀ NỘI-2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN SỸ CHỨC MÃ SINH VIÊN: 1501066 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG TỔNG HỢP NHĨM CYTOKININ TRONG GIÁ ĐỖ BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ Người hướng dẫn: ThS Vũ Ngọc Tú PGS TS Lê Đình Chi Nơi thực hiện: Viện Kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm Quốc gia HÀ NỘI – 2020 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến ThS Vũ Ngọc Tú PGS.TS Lê Đình Chi – người thầy trực tiếp hướng dẫn bảo tận tình cho em suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn Ths Bùi Cao Tiến cán công tác Khoa Độc học Dị Nguyên – Viện Kiểm nghiệm An toàn Vệ Sinh Thực Phẩm Quốc Gia đồng hành hỗ trợ em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giáo Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành tốt đề tài tốt nghiệp Cuối xin gửi lời cảm ơn đến bạn bè, gia đình ln bên cạnh ủng hộ, động viên để em hồn thành khóa luận cách tốt Trong trình thực hiện, dù cố gắng khơng tránh khỏi nhiều thiếu sót, kính mong nhận bảo, đánh giá từ quý thầy cô người Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 22 tháng 06 năm 2020 Sinh viên Nguyễn Sỹ Chức MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Cytokinin 1.1.1 Cytokinin- giới thiệu chung 1.1.2 Độc tính chất nhóm Cytokinin 1.1.3 Quy định hành Cytokinin sản phẩm nông sản 1.2 Phương pháp phân tích .6 1.2.1 Kĩ thuật xử lí mẫu 1.2.2 Phương pháp xác định CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tượng nghiên cứu .13 2.2 Thiết bị, vật liệu, hóa chất 13 2.2.1 Thiết bị 13 2.1.2 Dung mơi, hóa chất 14 2.1.3 Chất chuẩn 14 2.3 Nội dung nghiên cứu 15 2.3.1 Khảo sát điều kiện LC-MS 15 2.3.2 Khảo sát điều kiện xử lí mẫu .15 2.3.3 Khảo sát ảnh hưởng 16 2.3.4 Thẩm định phương pháp phân tích 16 2.3.5 Áp dụng phương pháp để phân tích mẫu thực tế 17 2.4 Phương pháp nghiên cứu 17 2.4.1 Điều kiện LC-MS dự kiến 17 2.4.2 Phương pháp xử lí mẫu dự kiến 17 2.4.3 Phương pháp thẩm định .19 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích 21 3.1.1 Tối ưu hóa điều kiện phân tích LC-MS .21 3.1.2 Tối ưu quy trình xử lí mẫu 24 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 28 3.2.1 Độ đặc hiệu 28 3.2.2 Giới hạn định lượng, giới hạn phát 30 3.2.3 Đường chuẩn .30 3.2.4 Độ độ lặp lại 32 3.3 Ứng dụng phương pháp phân tích dư lượng Cytokinin từ mẫu thực 34 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt 6-BA 6-Benzyladenin 6-Benzyladenin ACN Acetonitrile Acetonitril Association of Official Analytical Hiệp hội cộng đồng phân tích Communities thức CPPU Forchlorfenuron Forchlorfenuron CGB Graphit carbon black Than chì d-SPE Dispersive Solid Phase Extraction Chiết phân tán pha rắn Enzyme-linked Immune-sorbent Kỹ thuật thử miễn dịch liên kết Assay enzyme ESI Electrospray Ionization Ion hóa phun điện tử GC-MS Gas chromatography Sắc ký khí AOAC ELISA HPLC LC-MS/MS High Performance Liquid Chromatography Liquid chromatography tandem mass spectrometry Sắc ký lỏng hiệu cao Sắc ký lỏng khối phổ hai lần LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng m/z Mass to charge ratio Tỷ số khối lượng/điện tích MeOH Methanol Methanol MRM Multi reaction monitoring Theo dõi đa phản ứng MRL Maximun residue limit Giới hạn dư lượng tối đa MS Mass spectrometry Khối phổ i Từ viết tắt MCX PSA Tiếng Anh Tiếng Việt Mixed-mode, strong CationeXchange Primary Secondary Amine Amine bậc 1, bậc Quick, Easy, Chep, Effective, Quy trình nhanh, hiệu quả, đơn Rugged, Safe giản, ổn định, an toàn Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối QuEChERS RSD Cột chiết pha rắn trao đổi ion ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số Cytokinin điển hình .2 Bảng 1.2 Giới hạn tồn dư Cytokinin tổng hợp ban hành số nước Bảng 1.3 Kết số nghiên cứu sử dụng quy trình SPE Bảng 1.4 Kết số nghiên cứu sử dụng quy trình QuEChERS .8 Bảng 1.5 Kết số nghiên cứu sử dụng phương pháp ELISA 10 Bảng 1.6 Kết số nghiên cứu sử dụng phương pháp LC-MS 12 Bảng 2.1 Các Cytokinin nghiên cứu……………………………………………13 Bảng 3.1 Kết phân tách mảnh điều kiện tối ưu cho hai Cytokinin ……….21 Bảng 3.2 Các thông số tối ưu thiết bị MS 21 Bảng 3.3 Chương trình griadient pha động tối ưu 23 Bảng 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng 28 Bảng 3.5 Kết so sánh tỉ số ion 29 Bảng 3.6 Yêu cầu số điểm IP theo Hội đồng châu Âu 29 Bảng 3.7 Giá trị LOQ, LOD chất .30 Bảng 3.8 Đường chuẩn hai chất phân tích 31 Bảng 3.9 Kết độ đúng, độ thu hồi 33 iii DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ Hình 3.1 Sắc kí đồ khảo sát dung môi bổ sung Acid formic 22 Hình 3.2 Sắc kí đồ khảo sát dung môi bổ sung đệm Amoni format .22 Hình 3.3 Kết khảo sát dung mơi chiết 24 Hình 3.4 Kết khảo sát loại chất hấp phụ 25 Hình 3.5 Kết khảo sát kĩ thuật thao tác chiết 26 Hình 3.6 Kết khảo sát lượng PSA bước d-SPE .26 Hình 3.7 Đồ thị đường chuẩn dung môi chuẩn trắng hai Cytokinin 28 Hình 3.8 Sắc kí đồ thẩm định độ đặc hiệu chất 6-BA 29 Hình 3.9 Sắc kí đồ mức LOD 6-BA 30 Hình 3.10 Đường chuẩn hai chất phân tích 31 Hình 3.11 Kết phân tích mẫu giá đỗ thực tế 35 Hình 3.12 Kết sắc kí đồ phân tích mẫu thực tế, chất 6-BA 35 iv ĐẶT VẤN ĐỀ Trong ẩm thực Việt Nam, giá đỗ loại thực phẩm quen thuộc thường xuyên dùng để chế biến thành nhiều ăn khác nhờ hương vị ngon hàm lượng dinh dưỡng cao Phương pháp trồng giá đỗ có từ lâu đời, bao gồm cơng đoạn ngâm hạt ủ mầm, sử dụng nước nên giá đỗ sản xuất an toàn cho người sử dụng Tuy nhiên, nay, để đáp ứng nhu cầu tiêu thụ cao thị trường, nhiều xưởng trồng giá đỗ sử dụng chất kích thích tăng trưởng thực vật nhóm Cytokinin 6-Benzyladenin Forchlorfenuron sản xuất nhằm giảm cơng chăm sóc, đẩy nhanh tốc độ sản xuất, tăng sản lượng thu hoạch dẫn tới ảnh hưởng tiêu cực đến môi trường sức khỏe người tiêu dùng Forchlorfenuron 6-Benzyladenin chất kích thích sinh trưởng thực vật tổng hợp, cịn gọi Cytokinin, khơng nằm Danh mục thuốc bảo vệ thực vật phép sử dụng Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn ban hành [1], việc sử dụng hai chất sản xuất giá đỗ bất hợp pháp Tuy nhiên, thời gian qua ghi nhận xuất thị trường sản phẩm giới thiệu dùng cho sản xuất giá đỗ, thành phần hoạt chất xác định 6-Benzyladenin Forchlorfenuron Thực tế cho thấy việc sử dụng Forchlorfenuron 6Benzyladenin trái phép sản xuất giá đỗ nhiều khả diễn bất chấp quy định pháp luật hành Hiện nay, Việt Nam chưa ban hành quy định kiểm soát giới hạn hàm lượng Cytokinin sản phẩm nơng nghiệp nói chung giá đỗ nói riêng chưa có phương pháp thức xác định chất giá đỗ Vì vậy, việc xây dựng phương pháp xác định 6-Benzyladenin Forchlorfenuron để phục vụ công tác ban hành quy định kiểm tra, đánh giá chất lượng giá đỗ cần thiết cấp bách Từ nhu cầu thực tế trên, đề tài “Xác định số chất kích thích sinh trưởng thực vật tổng hợp nhóm Cytokinin giá đỗ phương pháp LC-MS/MS” xây dựng với mục tiêu: Xây dựng phương pháp xác định số chất kích thích sinh trưởng thực vật tổng hợp nhóm Cytokinin sử dụng kỹ thuật LC-MS/MS Ứng dụng phương pháp để xác định số Cytokinin giá đỗ phải lưu tâm Về phía người sản xuất giá đỗ người cung cấp sản phẩm kích thích tăng trưởng thực vật, rõ ràng ý thức an toàn vệ sinh thực phẩm sức khỏe người tiêu dùng chưa lưu tâm mức Thực trạng cho thấy cần có biện pháp liệt hơn, kết hợp nâng cao ý thức với chế tài nghiêm khắc để giảm bớt tình trạng lạm dụng chất danh mục cho phép ni trồng, chế biến nơng sản nói chung mặt hàng giá đỗ nói riêng Kết phân tích mẫu giá đỗ 100.00 90.25 Hàm lượng (ng/g) 90.00 80.00 70.00 55.04 60.00 47.29 50.00 40.00 38.87 30.45 30.00 20.00 MRL 4.52 10.00 0.00 R1 R2 R3 6-BA R4 R5 R6 CPPU Hình 3.11 Kết phân tích mẫu giá đỗ thực tế Hình 3.12 Kết sắc kí đồ phân tích mẫu thực tế, chất 6-BA 35 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ - KẾT LUẬN: Sau trình nghiên cứu, đề tài đạt mục tiêu đề ra, cụ thể: Xây dựng thành công phương pháp phân tích xác định chất Cytokinin 6-BA CPPU giá đỗ phương pháp LC-MS/MS với điều kiện cột sắc kí pha đảo, pha động chạy chế độ gradient với kênh H2O MeOH có bổ sung thêm đệm Amoni Format, điều kiện khối phổ chọn ion mẹ hai ion tương ứng cho chất với nguồn ion hóa ESI chế động ion dương Quy trình xử lí mẫu tối ưu theo phương pháp QuEChERS sử dụng ACN làm dung môi pha động, PSA làm chất hấp phụ cho hiệu suất thu hồi đạt xấp xỉ 100% Thẩm định phương pháp xây dựng đáp ứng yêu cầu theo tiêu chuẩn Hội đồng châu Âu AOAC, qua phương pháp có khả phân tích mẫu giá đỗ chứa hàm lượng Cytokinin mức 3ng/g với độ xác phù hợp Ứng dụng phương pháp xây dựng phát năm tổng số sáu mẫu phân tích giá đỗ chứa hàm lượng cao 6-BA vượt xa tiêu chuẩn MRL châu Âu - KIẾN NGHỊ: Mở rộng nghiên cứu đối tượng mẫu khác cà chua, rau, củ,… đối tượng chất kích thích sinh trưởng thực vật tổng hợp nhóm khác Auxin, Giberrelin Tìm kiếm thơng tin ban hành quy định giới hạn tồn dư tối đa cho phép chất kích thích sinh trưởng 36 mẫu nông sản TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn (2019), Thông tư ban hành Danh mục thuốc bảo vệ thực vật phép sử dụng, cấm sử dụng Việt Nam, Hà Nội Trần Cao Sơn, Thẩn định phương pháp phân tích hóa học sinh vật, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, pp 16-59 Trần Tử An (2007), Hóa Phân Tích, Nhà xuất Y học, Hà Nội, pp 123-144 Tiếng Anh Anagnostopoulos Chris J, Liapis Konstantinos, et al (2013), "Simultaneous determination of different classes of plant growth regulator in high water content agricultural products by liquid chromatography tandem mass spectrometry and time of flight mass spectrometry", Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 36(3), pp 315-335 Anastassiades Michelangelo, Lehotay Steven J, et al (2003), "Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and “dispersive solid-phase extraction” for the determination of pesticide residues in produce", Journal of AOAC international, 86(2), pp 412-431 AOAC Official Methods of Analysis, Appendix F: Guidelines for standard method performance requirements 2012 Bai Yu, Du Fuyou, et al (2010), "Determination strategies of phytohormones: recent advances", Analytical Methods, 2(12), pp 1867-1873 Basra Amarjit (2000), Plant growth regulators in agriculture and horticulture: their role and commercial uses, CRC Press, pp Bu Q., Wang X., et al (2019), "180 Day Repeated-Dose Toxicity Study on Forchlorfenuron in Sprague-Dawley Rats and Its Effects on the Production of Steroid Hormones", J Agric Food Chem, 67(36), pp 10207-10213 10 Cao Shurui, Zhou Xue, et al (2017), "Determination of 17 plant growth regulator residues by ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole linear ion trap mass spectrometry based on modified QuEChERS method", Food Analytical Methods, 10(9), pp 3158-3165 11 Chandra GR, Worley JF, et al (1973), "Effect of 6-Benzyladenine on the initiation of adventitious roots on mung bean hypocotyl", Plant and cell physiology, 14(6), pp 1209-1212 12 Chen Xiaoman, Yan Kuanglin, et al (2016), "Analysis of forchlorfenuron and thidiazuron in fruits and vegetables by surface‐enhanced Raman spectroscopy after selective solid‐phase extraction with modified β‐cyclodextrin", Journal of separation science, 39(12), pp 2340-2346 13 Ge Liya, Yong Jean Wan Hong, et al (2006), "Determination of cytokinins in coconut (Cocos nucifera L.) water using capillary zone electrophoresis‐tandem mass spectrometry", Electrophoresis, 27(11), pp 2171-2181 14 George Edwin F, Hall Michael A, et al (2008), "Plant growth regulators II: cytokinins, their analogues and antagonists", Plant propagation by tissue culture, Springer, pp 205-226 15 Gong Guiyi, Kam Hiotong, et al (2019), "Cardiotoxicity of forchlorfenuron (CPPU) in zebrafish (Danio rerio) and H9c2 cardiomyocytes", Chemosphere, 235, pp 153-162 16 Jin Mi-cong, Ren Yi-ping, et al (2007), "Determination of 6-Benzyladenine in bean sprout by LC–ESI-IT-MS–MS", Chromatographia, 66(5-6), pp 407-410 17 Kang Ju-Seop (2012), "Principles and applications of LC-MS/MS for the quantitative bioanalysis of analytes in various biological samples", Tandem mass spectrometry-Applications and principles, IntechOpen, pp 18 Kim Leesun, Lee Danbi, et al (2019), "Review of the QuEChERS method for the analysis of organic pollutants: Persistent organic pollutants, polycyclic aromatic hydrocarbons, and pharmaceuticals", Trends in Environmental Analytical Chemistry, 22, pp e00063 19 Kruve Anneli, Rebane Riin, et al (2015), "Tutorial review on validation of liquid chromatography–mass spectrometry methods: Part I", Analytica chimica acta, 870, pp 29-44 20 Kruve Anneli, Rebane Riin, et al (2015), "Tutorial review on validation of liquid chromatography–mass spectrometry methods: Part II", Analytica chimica acta, 870, pp 8-28 21 Lehotay Steven J, Son Kyung Ae, et al (2010), "Comparison of QuEChERS sample preparation methods for the analysis of pesticide residues in fruits and vegetables", Journal of Chromatography A, 1217(16), pp 2548-2560 22 Liu Sijie, Wu Yongning, et al (2017), "Simultaneous Determination of 19 Plant Growth Regulator Residues in Plant-originated Foods by QuEChERS and Stable Isotope Dilution–Ultra Performance Liquid Chromatography–Mass Spectrometry", Analytical Sciences, 33(9), pp 1047-1052 23 Lu Qian, Wu Jian-Hong, et al (2014), "Using pollen grains as novel hydrophilic solid-phase extraction sorbents for the simultaneous determination of 16 plant growth regulators", Journal of Chromatography A, 1367, pp 39-47 24 Ma Liyan, Zhang Hongyan, et al (2013), "Simultaneous determination of 15 plant growth regulators in bean sprout and tomato with liquid chromatography– triple quadrupole tandem mass spectrometry", Food Analytical Methods, 6(3), pp 941-951 25 Masiá Ana, Suarez-Varela Maria Morales, et al (2016), "Determination of pesticides and veterinary drug residues in food by liquid chromatography-mass spectrometry: A review", Analytica Chimica Acta, 936, pp 40-61 26 Mercader Josep V, Suárez-Pantaleón Celia, et al (2008), "Hapten synthesis and monoclonal antibody-based immunoassay development for detection of the fungicide trifloxystrobin", Journal of agricultural and food chemistry, 56(8), pp 2581-2588 27 Ministry of Agriculture (2016), "National food safety standard—maximum residue limits for pesticides in food (GB 2763)", pp 28 Oulkar Dasharath P, Banerjee Kaushik (2011), "Multiresidue analysis of plant growth regulators in grapes by triple quadrupole and quadrupole–time of flightbased liquid chromatography/mass International, 94(6), pp 1715-1721 spectrometry", Journal of AOAC 29 Payá Paula, Anastassiades Michelangelo, et al (2007), "Analysis of pesticide residues using the Quick Easy Cheap Effective Rugged and Safe (QuEChERS) pesticide multiresidue method in combination with gas and liquid chromatography and tandem mass spectrometric detection", Analytical and bioanalytical chemistry, 389(6), pp 1697-1714 30 Pu Chieh-Han, Lin Shao-Kai, et al (2018), "Modified QuEChERS method for 24 plant growth regulators in grapes using LC-MS/MS", journal of food and drug analysis, 26(2), pp 637-648 31 Rejczak Tomasz, Tuzimski Tomasz (2015), "A review of recent developments and trends in the QuEChERS sample preparation approach", Open Chemistry, 1(open-issue), pp 32 Saito T, Shibata Y, et al (1979), "Inhibitory effect of cytokinins on PHAinduced human lymphocyte stimulation", Experientia, 35(5), pp 685-686 33 Shuiying Ren, Hongfei Wan, et al (2016), "Determination of 21 plant growth regulators in tomatoes using an improved ultrasound-assisted QuEChERS technique combined with a liquid chromatography tandem mass spectrometry method", Analytical Methods, 8(24), pp 4808-4815 34 Suárez-Pantaleón Celia, Esteve-Turrillas Francesc A, et al (2012), "Development and validation of a direct competitive monoclonal antibodybased immunoassay for the sensitive and selective analysis of the phytoregulator forchlorfenuron", Analytical and bioanalytical chemistry, 403(7), pp 2019-2026 35 Tuija Pihlström Swedish Food Agency, SFA, Uppsala, Sweden, Amadeo R Fernández-Alba EURL-FV, University of Almería, Almería, Spain, et al., Analytical quality control and method validation procedures for Pesticide residues in food and feed, Commissson European, Editor 2020 36 Wang Fei, Zhang Wenfen, et al (2015), "Simultaneous determination of six plant growth regulators in fruits using high performance liquid chromatography based on solid-phase extraction and cleanup with a novel mixed-mode functionalized calixarene sorbent", Analytical Methods, 7(15), pp 6365-6371 37 Wang Mingwei, Zhang Hua, et al (2018), "An Extraction Method for Determination of 6-Benzyladenine in Bean Sprout by Graphene Oxide/Polypyrrole Composite Adsorbent", Food Analytical Methods, 11(6), pp 1832-1839 38 Wang Weixiang, Wang Binrong, et al (2019), "Developmental toxicity and alteration of gene expression in zebrafish embryo exposed to 6- benzylaminopurine", Chemosphere, 233, pp 336-346 39 Weaver Robert J (1972), "Plant growth substances in agriculture", Plant growth substances in agriculture., pp 40 Weiler EW (1984), "Immunoassay of plant growth regulators", Annual review of plant physiology, 35(1), pp 85-95 41 Zhang Hua, Yang Xin, et al (2010), Residue analysis of forchlorfenuron in fruit and vegetable by RP-HPLC, 2010 4th International Conference on Bioinformatics and Biomedical Engineering, IEEE,pp 1-4 42 Zhang Wei, He Lishan, et al (2016), "Development of a monoclonal antibodybased enzyme-linked immunosorbent assay for the analysis of 6- benzylaminopurine and its ribose adduct in bean sprouts", Food Chemistry, 207, pp 233-238 43 Zhen YAN, Ji-Yun NIE, et al (2017), "Simultaneous Determination of Plant Growth Regulators in Fruit by Ultra-performance Liquid ChromatographyTandem Mass Spectrometry Coupled with Modified QuEChERS Procedure", Chinese Journal of Analytical Chemistry, 45(5), pp e1719-e1725 PHỤ LỤC Phụ lục Kết khảo sát thành phần quy trình xử lí mẫu Phụ lục Kết skhảo sát thơng số kĩ thuật quy trình xử lí mẫu Phụ lục Sắc kí đồ ion mảnh Cytokinin .4 Phụ lục Sắc kí đồ giá trị LOQ hai chất Cytokinin Phụ lục Sắc kí đồ đường chuẩn hai Cytokinin Phụ lục Kết độ đúng, độ lặp lại PL-1 Phụ lục Kết khảo sát thành phần quy trình xử lí mẫu Kết khảo sát 6-BA Kết khảo sát CPPU PL-2 Phụ lục Kết khảo sát thông số kĩ thuật quy trình xử lí mẫu Kết khảo sát 6-BA Kết khảo sát CPPU PL-3 Phụ lục Sắc kí đồ ion mảnh Cytokinin Sắc kí đồ mảnh ion 1- 6-BA chuẩn dung môi chuẩn trắng Sắc kí đồ mảnh ion 2- 6-BA chuẩn dung mơi chuẩn trắng Sắc kí đồ mảnh ion 1- CPPU chuẩn dung môi chuẩn trắng Sắc kí đồ mảnh ion 2- CPPU chuẩn dung mơi chuẩn trắng PL-4 Phụ lục Sắc kí đồ giá trị LOQ hai chất Cytokinin Sắc kí đồ mức LOQ 6-BA Sắc kí đồ mức LOQ CPPU PL-5 Phụ lục Sắc kí đồ đường chuẩn hai Cytokinin Sắc kí đồ đường chuẩn CPPU Sắc kí đồ đường chuẩn 6-BA PL-6 Phụ lục Kết độ đúng, độ lặp lại Kết sắc kí mẫu thêm chuẩn mức 3ppb, 10ppb, 20ppb đường chuẩn 6-BA PL-7 Kết sắc kí mẫu thêm chuẩn mức 3ppb, 10ppb, 20ppb đường chuẩn CPPU PL-8 ... đề tài ? ?Xác định số chất kích thích sinh trưởng thực vật tổng hợp nhóm Cytokinin giá đỗ phương pháp LC- MS/ MS” xây dựng với mục tiêu: Xây dựng phương pháp xác định số chất kích thích sinh trưởng. .. HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN SỸ CHỨC MÃ SINH VIÊN: 1501066 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG TỔNG HỢP NHĨM CYTOKININ TRONG GIÁ ĐỖ BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC- MS/ MS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ Người... tổng hợp nhóm Cytokinin sử dụng kỹ thuật LC- MS/ MS Ứng dụng phương pháp để xác định số Cytokinin giá đỗ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Cytokinin 1.1.1 Cytokinin- giới thiệu chung Trong nhóm chất