Xác định độ nhạy cảm của muỗi Ae. aegypti với hóa chất diệt côn trùng tại điểm nghiên cứu; (2) Xác định đột biến gen kdr của muỗi Ae. aegypti tại các điểm nghiên cứu thông qua kỹ thuật thử sinh học bioassays và kỹ thuật sinh học phân tử.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học 39-45 XÁC ĐỊNH ĐỘ NHẠY CẢM VỚI HÓA CHẤT VÀ ĐỘT BIẾN GEN KDR CỦA CÁC QUẦN THỂ MUỖI AEDES AEGYPTI THU THẬP TẠI MỘT SỐ VÙNG NÔNG THÔN TỈNH BÌNH ĐỊNH, 2017-2018 Đỗ Văn Nguyên*, Nguyễn Xuân Quang*, Huỳnh Hồng Quang* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Muỗi Ae aegypti xem véc tơ quan trọng truyền bệnh sốt xuất huyết Dengue Bệnh chưa có vaccine thuốc điều trị đặc hiệu, kiểm soát véc tơ dựa vào hóa chất xem biện pháp hiệu để phòng chống bệnh Tuy nhiên sử dụng hóa chất thường xuyên tác động lên quần thể làm cho muỗi Ae aegypti tăng sức chịu đựng kháng với hóa chất diệt trùng, nhóm hóa chất pyrethroid - nhóm hóa chất sử dụng phổ biến để kiểm soát muỗi Ae aegypti Việt Nam giới Mục tiêu: (1) Xác định độ nhạy cảm muỗi Ae aegypti với hóa chất diệt trùng điểm nghiên cứu; (2) Xác định đột biến gen kdr muỗi Ae aegypti điểm nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu: Kỹ thuật thử sinh học bioassays kỹ thuật sinh học phân tử Kết quả: Muỗi Ae aegypti thu thập huyện Phù Cát huyện Vĩnh Thạnh tỉnh Bình Định kháng với alphacypermethrin, lambdacyhalothrin, deltamethrin permethrin nhạy với malathion Đột biến L982W (50%) V1016G (50%) gen kdr phát quần thể muỗi Ae aegypti thu thập Phù Cát có đột biến L982W (100%) tìm thấy muỗi Ae aegypti thu thập Vĩnh Thạnh Từ khóa: nhạy cảm, đột biến gen kháng ngã gục (kdr), hóa chất ABTRACT IDENTIFYING THE INSECTICIDES SUSCEPTIBILITY AND KDR GENE MUTATIONS OF AEDES AEGYPTI POPULATIONS FROM SOME RURAL AREAS OF BINH DINH PROVINCE FROM 2017 TO 2018 Do Van Nguyen, Nguyen Xuan Quang, Huynh Hong Quang * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 289 – 296 Background: The Ae Aegypti mosquito is the main vector that transmits the viruses that cause dengue There is currently no commercial vaccine or specific antiviral drug treatment for dengue so dengue prevention is based on the control of vector with insecticide The class of pyrethroid insecticides are widely used to control adult Ae aegypti mosquito, especially during diseases outbreaks Objectives: (1) To identify the susceptibility to some insecticides of Aedes aegypti mosquito at study sites (2) Evaluate mutation of kdr gene of Aedes aegypti mosquito at study sites Methods: A cross sectional study and laboratory techniques Results: Ae aegypti population from Phu Cat and Vinh Thanh were resistant to alphacypermethrin, lambdacyhalothrin, deltamethrin, and permethrin However Ae aegypti remained susceptible to malathion with 100% mortality rate in all the sites Kdr gene mutation L982W (50%) and V1016G (50%) were detected in Ae aegypti populations from Phu Cat In Vinh Thanh, only kdr mutation L982W (100%) were detected in all the samples Viện sốt rét-KST-CT Quy Nhơn Tác giả liên lạc: ThS Đỗ Văn Nguyên Chuyên Đề Y Tế Công Cộng ĐT: 0905531667 Email: Dovannguyen2007@gmail.com 289 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2018 Key words: susceptibility, kdr mutation, insecticide ĐẶT VẤN ĐỀ tỉnh Bình Định Muỗi Ae aegypti xem véc tơ quan trọng truyền bệnh sốt xuất huyết Dengue (SXHD), ngồi chúng truyền bệnh virus Chikungunya Zika cộng đồng Trong số bệnh muỗi Ae aegypti truyền SXHD vấn đề y tế cộng đồng toàn cầu Tỷ lệ mắc SXHD tăng 30 lần sau 50 năm nhiều quốc gia lần báo cáo dịch, bệnh muỗi Aedes truyền có tốc độ lây lan nhanh giới(22,24) Mục tiêu nghiên cứu Ở Việt Nam, SXHD mười bệnh truyền nhiễm có tỷ lệ mắc tử vong cao 10 năm trở lại Bệnh lưu hành hầu hết tỉnh/thành phố chủ yếu miền Nam Nam Trung Tỉnh Bình Định tỉnh trọng điểm SXHD miền Trung-Tây Nguyên(3) Năm 2016 năm ghi nhận số ca mắc tăng cao Bình Định (4.378 ca), năm có số ca mắc cao từ trước đến số ca mắc phân bố nhiều vùng khác kể các vùng nông thôn đồng bằng, nông thôn miền núi huyện Phù Cát huyện Vĩnh Thạnh(3) Hiện biện pháp phun hóa chất diệt muỗi trưởng thành xem biện pháp hiệu để phòng chống muỗi Ae aegypti(22,24) Tuy nhiên việc sử dụng hóa chất thường xuyên kéo dài tác động mạnh đến muỗi Ae aegypti làm cho muỗi kháng với hóa chất nhóm pyrethroid-hóa chất sử dụng phổ biến giới Việt Nam(1,25) Hóa chất nhóm pyrethroid có tác động lên kênh vận chuyển natri nằm tế bào thần kinh muỗi gây tượng kháng ngã gục (KDR) muỗi Đây vấn đề lớn gây khó khăn, thách thức cho cơng tác phịng chống bệnh muỗi Ae aegypti truyền Do vậy, việc cần thiết phải đánh giá mức độ kháng hóa chất mức độ sinh học xác định đột biến gen KDR (Knockdown Resistance) liên quan đến kháng hóa chất diệt trùng quần thể muỗi huyện Phù Cát huyện Vĩnh Thạnh 290 Xác định độ nhạy muỗi Ae aegypti với hóa chất diệt trùng điểm nghiên cứu Xác định đột biến gen kdr muỗi Ae aegypti điểm nghiên cứu ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Muỗi Aedes aegypti Địa điểm thời gian nghiên cứu Điểm nghiên cứu tỉnh Bình Định(5) gồm: Sinh cảnh nông thôn đồng bằng: chọn xã Cát Trinh Ngơ Mây, huyện Phù Cát, có mật độ dân số trung bình 283 người/km2 người dân sống chủ yếu nơng thơn Vị trí điểm điều tra nằm tọa độ 1400'18" vĩ bắc 109°3'54" kinh đông, độ cao khoảng 17 m so với mực nước biển Sinh cảnh nông thôn miền núi: chọn xã Vĩnh Thịnh Vĩnh Thạnh thuộc huyện Vĩnh Thạnh, có mật độ dân số thấp khoảng 40 người/km2 Điểm nghiên cứu tọa độ 14005'52" vĩ bắc 108°47'10" kinh đông, với độ cao khoảng 54 m so với mực nước biển Nghiên cứu phịng thí nghiệm Kỹ thuật thử sinh học PCR-giải trình tự DNA thực khoa Côn trùng khoa sinh học phân tử, Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Quy Nhơn Phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu ngang mô tả kỹ thuật phịng thí nghiệm Cỡ mẫu Cỡ mẫu thử nhạy cảm muỗi Ae aegypti với hóa chất diệt côn trùng: Số muỗi thử = loại hóa chất x 150 cá thể muỗi x huyện =1.500 Cỡ mẫu xác định đột biến liên quan đến kháng hóa chất diệt trùng muỗi Ae aegypti Tổng số cá thể muỗi cần phân tích Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học đột biến gen kdr cho hai điểm nghiên cứu 50 cá thể muỗi Ae aegypti kháng với pyrethroids thực theo hướng dẫn nhà sản xuất Vật liệu nghiên cứu Giấy thử nhạy cảm Tổ chức Y tế giới cấp gồm: Nhóm pyrethroid (Lambdacyhalothrin 0,05%; alphacypermethrin 30 mg/m2; deltamethrin 0,05%; permethrin 0,75%); nhóm phốt hữu (malathion 5%) Bộ thử nhạy cảm WHO dụng cụ thu thập bọ gậy Thực theo Kawada cộng (2016) nhằm xác định đột biến Sử dụng cặp mồi AaSCF1 (5’-AGA CAA TGT GGA TCG CTT CC3’) AaSCR4 (5’-GGA CGC AAT CTG GCT TGT TA-3’) vùng gen có kích thước khoảng 650 bp thuộc exon 20 exon 21 gen quy định kênh natri(10) Quy trình thử nhạy cảm Tinh QIAquick PCR purification kit (Qiagen) Các bước thực theo hướng dẫn nhà sản xuất Thu thập bọ gậy/lăng quăng từ loại dụng cụ chứa nước khác điểm điều tra Muỗi bọ gậy Aedes định loại hình thái ngồi Quy trình thử nhạy cảm áp dụng quy trình hướng dẫn Bộ Y tế (2010) Tổ chức Y tế giới (WHO, 2016)(25) Nhận xét kết thử nghiệm (Bộ Y tế, 2010): Nếu tỷ lệ muỗi chết lơ đối chứng >20% kết thử nghiệm không chấp nhận Cần phải tiến hành lại thử nghiệm; Nếu tỷ lệ muỗi chết lô đối chứng