Nghiên cứu đặc tính điện hóa của atorvastatin, fenofibrat và quy trình xác định chúng trong mẫu dược phẩm và mẫu huyết tương

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI BÁO CÁO TỔNG KẾT KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI KH&CN CẤP ĐẠI HỌC QUỐC GIA Tên đề tài: Nghiên cứu đặc tính điện hóa atorvastatin, fenofibrat quy trình xác định chúng mẫu dược phẩm mẫu huyết tương Mã số đề tài: QG.15.14 Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Kim Thường Hà Nội, 2017 PHẦN I THÔNG TIN CHUNG 1.1 Tên đề tài: Nghiên cứu đặc tính điện hóa atorvastatin, fenofibrat quy trình xác định chúng mẫu dược phẩm mẫu huyết tương 1.2 Mã số: QG 15.14 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài TT Chức danh, học vị, họ tên Đơn vị cơng tác Vai trị thực đề tài TS Nguyễn Thị Kim Thường Khoa Hóa học, ĐHKHTN - Viết đề cương, chuyên đề; báo cáo kỳ tổng kết - Khảo sát tính chất điện hóa, nghiên cứu quy trình phân tích Atorvastatin Fenofibrat mẫu dược phẩm mẫu huyết tương phương pháp von-ampe vòng von-ampe hòa tan hấp phụ - Bàn luận kết khoa học - Viết báo khoa học PGS TS Tạ Thị Thảo Khoa Hóa học, ĐHKHTN - Tham gia nghiên cứu quy trình phân tích Atorvastatin fenofibrat mẫu dược phẩm phương pháp vonampe hòa tan hấp phụ - Bàn luận kết khoa học - Tham gia viết báo khoa học PGS.TS Phạm Thị Ngọc Mai Khoa Hóa học, ĐHKHTN - Tham gia nghiên cứu quy trình phân tích Atorvastatin Fenofibrat mẫu huyết tương phương pháp vonampe hòa tan hấp phụ - Bàn luận kết khoa học - Tham gia viết báo khoa học CN Lê Sĩ Hưng Khoa Hóa học, ĐHKHTN Nghiên cứu tính chất điện hóa atorvastatin fenofibrat phương pháp von-ampe vòng - Tham gia phân tích mẫu thuốc - Bàn luận kết khoa học CN Hoàng Quốc Anh Khoa Hóa học, ĐHKHTN - Phối hợp lấy mẫu, bảo quản mẫu - Tham gia phân tích mẫu thuốc - Đánh giá kết phân tích hai phương pháp 1.4 Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Khoa học tự nhiên 1.5 Thời gian thực hiện: 1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 02 năm 2015 đến tháng 02 năm 2017 1.5.2 Gia hạn (nếu có): đến tháng… năm… 1.5.3 Thực thực tế: từ tháng 02 năm 2015 đến tháng 02 năm 2017 1.6 Những thay đổi so với thuyết minh ban đầu (nếu có): (Về mục tiêu, nội dung, phương pháp, kết nghiên cứu tổ chức thực hiện; Nguyên nhân; Ý kiến Cơ quan quản lý) 1.7 Tổng kinh phí phê duyệt đề tài:200 triệu đồng PHẦN II TỔNG QUAN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Viết theo cấu trúc báo khoa học tổng quan từ 6-15 trang (báo cáo đăng tạp chí khoa học ĐHQGHN sau đề tài nghiệm thu), nội dung gồm phần: Đặt vấn đề Trong năm gần đây, số người bị bệnh máu nhiễm mỡ, cholesterol triglicerid máu cao tăng đáng kể Điều đáng lo ngại người có hàm lượng cholesterol cao máu lại dễ bị bệnh tim mạch nghẽn mạch vành tim, nhồi máu tim, tái biến mạch máu não Chính coi kẻ thù số một, tồn xã hội quan tâm ý Những người bị máu nhiễm mỡ, cholesterol cao cần có chế độ ăn uống đặc biệt, uống thuốc hàng ngày Hai thuốc thường bệnh nhân bị cholesterol cao sử dụng atorvastatin fenofibrat Chính cần có phương pháp kiểm tra xác, nhanh hoạt chất thuốc để kiểm sốt chất lượng thuốc thị trường Có nhiều phương pháp xác định hai nhóm thuốc hạ cholesterol máu phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao ( HPLC), phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử nhóm phương pháp von-ampe Trong dược điển Việt Nam, fenofibrat xác định phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao Tuy nhiên phương pháp phân tích phức tạp, thiết bị tương đối đắt, thời gian phân tích lâu Hơn nữa, atorvastatin chưa có phương pháp thường quy dược điển để xác định Do đó, với mong muốn nghiên cứu quy trình xác định atorvastatin fennofibrat mẫu thuốc mẫu sinh học có độ đúng, độ xác cao, đơn giản, chi phí phân tích khơng cao để kiểm tra chất lượng thuốc song hành với phương pháp dược điển, lựa chọn phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ Mục tiêu Phát triển quy trình xác định atorvastatin fenofibrat mẫu dược phẩm, mẫu huyết tương phương pháp von-ampe von-ampe hòa tan hấp phụ Phương pháp nghiên cứu Phương pháp von-ampe vòng Phương pháp von-ampe hịa tan hấp phụ sóng vng Phương pháp von – ampe hòa tan hấp phụ xung vi phân Tổng kết kết nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu quy trình xác định atorvastatin mẫu thuốc mẫu huyết tương 4.1.1 Nghiên cứu đặc tính điện hóa atorvastatin I (A) Để nghiên cứu đặc tính điện hóa atorvastatin bề mặt điện cực giọt thủy ngân treo (HMDE), tiến hành ghi đường von-ampe vòng khoảng rộng điều kiện khơng hấp phụ có hấp phụ 60s Kết thu sau: Qua kết khảo sát đường von-ampe vịng cho thấy, đường phân cực catot có píc khử xuất hiện, đường phân cực anot khơng có píc oxi hóa, nên atorvastatin chất oxi hóa điện -10.0n cực HMDE, píc khử bất thuận nghịch So sánh đường von-ampe vòng đường 2) đường a) thấy rằng, có thời gian hấp phụ 60 -20.0n s -0,9 V cường độ dịng píc khử cao so với đường von-ampe vịng khơng có giai c đoạn hấp phụ Đường b) đường c) -30.0n đường von-ampe vòng ghi liên tục sau đường a) b giọt tín hiệu cường độ dịng đường b) c) thấp so với đường a) a -40.0n cao đường 2) -800m -1.00 -1.20 -1.40 -1.60 U (V) Điều chứng tỏ atorvastatin có hấp phụ bề mặt điện cực HMDE - 0,9V, tượng hấp phụ đa lớp nên sau ghi đường hịa tan vịng (đường a) chất hấp phụ chưa bị hịa tan hết nên tín hiệu vịng 2, cao tín hiệu đường khơng có hấp phụ Hình 1: Đường von-ampe vịng atorvastatin 10-7mol.L-1, đường 1) mẫu trắng, đường 2) atorvastatin 10-7 mol.L-1 khơng có thời gian hấp phụ, đường a) atorvastatin 10-7 mol.L-1 có thời gian hấp phụ 60s, đường b,c) ghi liên tục sau đường a), tốc độ quét 100 mV/s Để nghiên cứu khả hấp phụ atorvastatin bề mặt điện cực HMDE, ghi đường von-ampe vòng phụ thuộc vào tốc độ quét từ 10 - 1000 mV s–1, kết thấy tốc độ quét tăng cường độ dịng píc tăng tuyến tính với tốc độ qt theo phương trình log ip = 0,946 logν - 0,679; R2 = 0,998 Hệ số góc phương trình 0,946 gần tức phản ứng xảy bề mặt, điều có nghĩa có q trình hấp phụ xảy bề mặt điện cực Để nghiên cứu đặc tính điện hóa atorvastatin điện cực than gương (glassy cacbon) chúng tơi ghi đường von-ampe vịng hai trường hợp khơng có hấp phụ có hấp phụ 60 s V Kết đo biểu diễn hình Hình 2: Đường a đường CV mẫu trắng có thời gian hấp phụ 60s, đường b): CV Atorvastatin 5.10-5M không hấp phụ, đường c): CV Atorvastatin 5.10-5 M có hấp phụ làm giàu 60s Qua đường von-ampe vịng hình cho thấy, đường a) đường von-ampe vịng khơng có dung dịch chất phân tích nên đường phân cực anot catot khơng có píc xuất Đường b) đường c) đường von-ampe vịng có dung dịch chất phân tích atorvastatin cho píc oxi hóa đường phân cực anot từ V đến +1,3 V, đường phân cực catot từ +1,3 V đến V không thấy có píc khử Như vậy, q trình oxy hóa atorvastatin điện cực than gương bất thuận nghịch Mặt khác, đường c) có thời gian hấp phụ 60s V giá trị cường độ dịng tăng gấp 1,5 lần khơng có hấp phụ làm giàu ( đường b), điều chứng tỏ, atorvastatin có hấp phụ bề mặt điện cực than gương Khi khảo sát ảnh hưởng tốc độ quét từ mV/s đến 700 mV/s thấy rằng, tăng tốc độ qt giá trị cường độ dịng tăng phụ thuộc tốc độ quét logv cường độ dòng logIp đường thẳng tuyến tính biểu diễn theo phương trình: logIp =0,63xlogv - 5,61.Theo kết nghiên cứu, hệ số góc đường thẳng 0,63, có phản ứng điện hóa xảy bề mặt điện cực, chứng tỏ có q trình hấp phụ xảy Tuy nhiên, hệ số hấp phụ xa với nên atorvastatin có hấp phụ bề mặt điện cực V không mạnh điện cực HMDE Hơn nữa, trình bất thuận nghịch píc oxi hóa cịn khẳng định tốc độ quét tăng đỉnh píc dịch chuyển phía dương Như vậy, qua kết khảo sát phương pháp von- ampe vòng kết luận rằng, điện cực HMDE atorvastatin thể chất oxi hóa, píc khử hịa tan bất thuận nghịch có hấp phụ Trên điện cực glassy bon atorvastatin chất khử cho píc oxi hóa bất thuận nghịch có hấp phụ 4.1.2.Tối ưu hóa điều kiện xác định atorvastatin phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ điện cực HMDE 4.1.2.1 Khảo sát ảnh hưởng pH Thành phần dung dịch nền, pH định độ dẫn điện nền, dạng tồn khả hấp phụ chất phân tích lên bề mặt điện cực tức ảnh hưởng đến cường độ dịng, đỉnh píc độ phân giải píc Vì việc tìm điều kiện pH tối ưu quan trọng Do đó, tơi tiến hành khảo sát ảnh hưởng pH khoảng từ pH 7,0 đến 11,0, sử dụng đệm Britton-Robinson, nồng độ chất phân tích 5.10-7 M, tốc độ quét 150 mV/s Kết trình bày hình Hình Sự phụ thuộc cường độ dịng píc vào pH Qua kết khảo sát ảnh hưởng pH từ 7,0 đến 11,0 thấy rằng, khoảng pH từ 8,5 đến 9,0 cường độ dịng píc cao ổn định Vì vậy, tơi chọn pH dung dịch đệm 9,0 cho nghiên cứu sau 4.1.2.2 Khảo sát ảnh hưởng hấp phụ Để nghiên cứu đặc tính hấp phụ chất, chúng tơi tiến hành khảo sát ảnh hưởng hấp phụ với điều kiện đo: Nồng độ atorvastatin 5.10-7M, tốc độ quét 150 mV/s, thời gian hấp phụ 60s, thay đổi hấp phụ khoảng từ V đến -1,0 V Qua kết khảo sát ảnh hưởng hấp phụ từ 0V đến -1V cường độ dịng píc phụ thuộc vào hấp phụ, -0,9V tín hiệu cường độ dịng cao, píc cân đối chọn lọc 4.1.2.3 Khảo sát ảnh hưởng thời gian hấp phụ Trong phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ, độ nhạy phụ thuộc vào thời gian hấp phụ, nồng độ chất phân tích nhỏ cần nhiều thời gian hấp phụ so với nồng độ chất phân tích lớn Cho nên việc chọn thời gian hấp phụ phù hợp với nồng độ chất phân tích yếu tố quan trọng Chính mà tiến hành khảo sát ảnh hưởng thời gian hấp phụ hai mức nồng độ 5.10-7M 10-8M với điều kiện đo dung dịch đệm BR pH = 9,0, hấp phụ -0,9V a b Hình Sự phụ thuộc cường độ dịng píc vào thời gian hấp phụ (a): 5×10–7mol L–1 (b) 10–8mol L–1, Eacc.= - 0,4 V, a=50 mV, f =50 Hz Qua kết khảo sát cho thấy, với nồng độ atorvastatin 5.10-7 M, tăng thời gian hấp phụ từ đến 90s cường độ dịng píc tăng dần, tiếp tục tăng thời gian hấp phụ cường độ dịng píc giảm dần Tại nồng độ atorvastatin 10-8 M, tăng thời gian hấp phụ từ 20 đến 300s cường độ dịng píc tăng dần thời gian hấp phụ lớn 300s cường độ dịng píc giảm dần, điều cho thấy hấp phụ đa lớp Vì sau cường độ dịng píc đạt cực đại, tiếp tục tăng thời gian hấp phụ cường độ dịng bị giảm chất hấp phụ thành nhiều lớp (đa lớp) nên hòa tan khơng hồn tồn Với kiểu hấp phụ đa lớp nên chọn thời gian hấp phụ khoảng tuyến tính tín hiệu đo cường độ dòng lặp lại chọn lọc Do vậy, với nồng độ atorvastatin 5.10-7M chúng tơi chọn thời gian hấp phụ 90s với nồng độ chất phân tích 10-8 M chúng tơi chọn thời gian hấp phụ 300s 4.1.2.4 Khảo sát thời gian cân Thời gian cân khoảng thời gian cần thiết để chất phân tích phân bố bề mặt điện cực có ảnh hưởng đến cường độ dịng píc Để chọn thời gian cân thích hợp cho phép đo điện hóa, thay đổi thời gian cân từ 0s đến 30s với điều kiện khác tương tự mục 4.1.2.3 Qua kết khảo sát, chọn thời gian cân 10s 4.1.2.5 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ quét Tốc độ quét ảnh hưởng đến giá trị cường độ dịng píc Trong phương pháp vôn - ampe, tốc độ quét tăng cường độ dịng píc tăng, nhiên trường hợp hấp phụ đa lớp, tốc độ quét q lớn chất phân tích khơng hịa tan hết nên cường độ dịng píc giảm Vì vậy, tơi tiến hành khảo sát tốc độ qt, với điều kiện: đệm BR pH = 9,0, hấp phụ -0,9 V, thời gian hấp phụ 90s, thời gian cân 10s, nồng độ atorvastatin 5.10-7M, thay đổi tốc độ quét từ 10mV/s đến 300mV/s Qua kết khảo sát thấy tốc độ quét tăng cường độ dịng píc tăng tín hiệu píc dịch chuyển theo chiều âm Khi tốc độ qt 300 mV/s tín hiệu píc đẹp cân đối nhất, tốc độ quét lớn 450 mV/s cường độ dịng píc bắt đầu giảm Vì vậy, tơi chọn tốc độ qt 300 mV/s cho nghiên cứu Sau khảo sát điều kiện tối ưu để xác định atorvastatin phương pháp vonampe hịa tan hấp phụ sóng vng, lựa chọn điều kiện sau: Dung dịch đệm vạn với pH = 9,0, hấp phụ -0,9V, thời gian hấp phụ 90s với nồng độ 5.10-7 M 300s với nồng độ 10-8M, thời gian cân 10s, tốc độ quét 300 mV/s 4.1.2.6 Đánh giá phương pháp - Khoảng tuyến tính: Đường chuẩn xây dựng hai khoảng nồng độ từ 1×10-8 mol.L-1 đến 1×10-7 mol.L-1 (tacc.= 90 s) từ 1×10–7 mol.L-1 đến 1×10-6 mol.L-1 (tacc.= 30 s) Sự phụ thuộc cường độ dịng píc vào nồng độ atorvastatin đường thẳng tuyến tính theo phương trình tương ứng ip = 10,71C.10-8 mol.L-1 - 0,033 ip = 30,47 C.10-7 mol.L-1 + 0,41 + Giới hạn phát giới hạn định lượng phương pháp tính tốn dựa vào đường chuẩn k.S.Da/b, k = cho giới hạn phát k = 10 cho giới hạn định lượng, S.Da độ lệch chuẩn b hệ số góc đường chuẩn Dựa vào kết tính tốn LOD 9,6.10-10 mol.L-1 LOQ 3.2.10-9 mol.L-1 sau thời gian hấp phụ 90s + Độ lặp lại phương pháp đo lặp lại dung dịch 5.10-7 mol.L-1, thời gian hấp phụ 30s, độ lệch chuẩn tương đối (RSD) 0,42% 4.1.3 Áp dụng quy trình phân tích mẫu thuốc mẫu huyết tương 4.1.3.1 Quy trình phân tích mẫu thuốc Cân 10 viên thuốc cân phân tích để tính khối lượng trung bình (A g) viên thuốc Đem 10 viên thuốc nghiền mịn cối mã não, trộn mẫu thuốc Cân xác a g (khoảng 0,1g) mẫu thuốc bột mịn cân phân tích, cho vào cốc 100 ml, thêm 15 ml metanol, rung siêu âm 45 phút cho thuốc tan hết Chuyển dung dịch vào bình định mức 25,0 ml, định mức tới vạch nước cất lần, lọc dung dịch giấy lọc băng xanh dung dịch A có nồng độ C0 (M) Lấy 1,0 ml dung dịch A định mức 100,0 ml dung dịch B có nồng độ C1 (M) Từ dung dịch B có nồng độ C1(M) lấy 1,00 ml dung dịch B 10 ml dung dịch đệm BR pH = 9,0 định mức bình 25ml dung dịch C có nồng độ Cx (M) Nồng độ atorvastatin (Cx) viên thuốc xác định phương pháp thêm chuẩn Hàm lượng atorvastatin viên thuốc tính theo cơng thức: Áp dụng quy trình phân tích mẫu thuốc lipivastin 20mg Mekofar avastor 10 mg công ty dược Boston Hàm lượng atorvastatin xác định viên thuốc 19,0 mg 8,1 mg 4.1.3.2 Quy trình phân tích mẫu huyết tương Mẫu huyết tương đông lạnh sau lấy mẫu bảo quản nhiệt độ - 400C để hạn chế chuyển hóa axit lactone Trước phân tích, mẫu huyết tương lấy ra, để giã đơng nhiệt độ phịng Sau mẫu giã đơng đến nhiệt độ phòng, lấy 1,0 ml mẫu huyết tương trắng 1,0 ml huyết tương tiêm thêm chất chuẩn atorvastatin, cho vào ống nghiệm, thêm tiếp 1ml dung dịch đệm Briston-Robinson (đệm BR, pH = 9,0), đem lắc Vortex phút đem quay ly tâm tốc độ 1600 vòng 15 phút + Q trình hoạt hóa cột C18 (thể tích 3ml): Trước tiên, cho qua cột 2ml nước cất lần ml metanol Sau đó, mẫu qua cột với tốc độ 0,4 ml/ phút + Rửa tạp 1ml H2O ml hỗn hợp metanol: H2O (5:95 v/v) + Rửa giải chất phân tích 1ml hỗn hợp dung dịch metanol: đệm (BR, pH = 9) theo tỉ lệ 95:5 (v/v) Các điều kiện đo mẫu phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ: pH = 9,0, thời g ian hấp phụ 30 s, hấp phụ -0,9 V, tốc độ quét 300 mV/s Đường von-ampe hịa tan atorvastatin có nồng độ khác mẫu huyết tương xử lý theo quy trình biểu diễn hình -20.0n -40.0n I (A) -60.0n -80.0n -100n -1.00 -1.10 -1.20 -1.30 -1.40 U (V) Hình 5: Đường von–ampe hịa tan atovastatin mẫu huyết tương (1) Atorvastatine 1.0 x10-7, (2) 1.5 x 10-7 , (3) 2.0 x 10-7, (4) 2.5x10-7 molL-1 , Eacc = - 0,9 V, tacc = 30 s, a = 50 mV, f = 50 Hz and BR buffer of pH = 9,0 Kết cho thấy, đường von-ampe hịa tan tăng tuyến tính với nồng độ atorvastatin mẫu huyết tương Sự phụ thuộc cường độ dòng Ip nồng độ chất atorvastatin tuân theo phương trình Ip = 29,88 C.10-8 + 13,26 với hệ số tương quan R2 = 0,996 Độ lặp lại phương pháp xác định atorvastatin mẫu huyết tương kiểm tra với mẫu khác Hiệu suất thu hồi atovastatin mẫu huyết tương xác định theo quy trình xây dựng đường chuẩn 94,7 ± 0,93% 4.1.4 Nghiên cứu quy trình xác định atorvastatin phương pháp von-ampe hòa tan điện cực than gương 4.1.4.1 Tối ưu hóa điều kiện xác định atorvastatin Điều kiện đo: nồng độ atorvastatin 5.10-5 mol.L-1, tích lũy + 0,5V, thời gian tích lũy 30s, thời gian cân 5s, tốc độ quét 15 mV/s, thay đổi pH từ 3,0 đến 10,0 Kết cho thấy, thay đổi pH cường độ dịng píc đỉnh píc thay đổi, pH = 4,0 cường độ dịng píc đạt giá trị cao Như vậy, pH = 4,0 atorvastatin tồn dạng axit (pKa = 4,6), atorvastatin hấp phụ bề mặt điện cực, q trình hịa tan q trình oxi hóa Trong phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ, hấp phụ thời gian hấp phụ hai thông số quan trọng ảnh hưởng đến độ nhạy độ chọn lọc phương pháp Qua kết khảo sát hấp phụ thời gian hấp phụ thấy rằng, hấp phụ thay đổi khoảng từ - 0,1 V đến + 0,7 V không ảnh hưởng nhiều đến giá trị cường độ dịng píc hịa tan, đồng thời việc tăng thời gian hấp phụ mức nồng độ 5.10-5 mol.L-1 khơng tăng đáng kể tín hiệu píc hịa tan Tuy nhiên, có hấp phụ +0,5 V với thời gian 30 s píc hịa tan cân đối, đẹp hẳn khơng có hấp phụ Do vậy, với đối tượng phân tích mẫu thuốc chọn thời gian hấp phụ 30 s hấp phụ +0,5 V Các điều kiện đo khác tốc độ quét, biên độ xung, thời gian cân ảnh hưởng đến cường độ dịng píc Qua khảo sát, chọn biên độ xung 50 mV, tốc độ quét 10 mV/s, thời gian cân 10 s 4.1.4.2 Đánh giá phương pháp Từ kết khảo sát xây dựng đường chuẩn khoảng nồng độ từ 10-6 mol.L-1 đến 10-4 mol.L-1 với điều kiện thích hợp pH = 4,0, thời gian hấp phụ 30s, hấp phụ + 0,5V, tốc độ quét 10 mV/s, biên độ xung 50 mV Kết biểu diễn hình Đường chuẩn tuyến tính khoảng nồng độ từ 10-6 mol.L-1 đến 10-4 mol.L-1, phương trình hồi quy tuyến tính ip = 15,32 *Cx.10-6 + 0,39, hệ số tương quan hồi quy R2 = 0,998 Giới hạn phát 3,1.10-7 mol.L-1 giới hạn định lượng 1,0.10-6 mol.L-1 Hình : Đường chuẩn Atorvastatin 10-6 -10-4 mol.L-1 Độ lệch chuẩn tương đối trung bình 1,5 % dung dịch có nồng độ n.10-6 mol.L-1 4.1.4.3 Xác định hàm lượng atorvastatin mẫu thuốc Quy trình xác định: Cân xác 10 viên thuốc cân phân tích Đem nghiền mịn cối mã não Cân xác khoảng 0,45 ÷ 0,5 g thuốc cân phân tích cho vào cốc, hịa tan khoảng mL metanol, khuấy rung siêu âm 15 phút Sau đó, lọc dung dịch qua giấy lọc Whatman 0,45µm vào bình 25,0 mL, định mức nước cất đến vạch Lấy xác 5,0 mL dung dịch trên, định mức thành 25,0 mL nước cất, sau lấy 2,5 mL dung dịch pha lỗng thêm dung dịch đệm, định mức 25,0 mL cho vào bình cực phổ tiến hành đo với điều kiện thời gian hấp phụ 30 s, hấp phụ + 0,5V, tốc độ quét 10 mV/s, biên độ xung 50 mV Hàm lượng atorvastatin mẫu thuốc xác định phương pháp thêm chuẩn Kết hàm lượng atorvastatin viên thuốc trình bày bảng Bảng 1: Kết phân tích hàm lượng atorvastatin mẫu thuốc (* giá trị trung bình 10 lần thí nghiệm làm lặp lại) Số lơ Hàm lượng trung bình xác định được(mg)* ± RSD Sai khác hàm lượng xác định ghi nhãn (%) TNHH thành viên DP&SHYT 231214 9,70 ± 0,55 -3,0 Lipistad TNHH Stada-VN 80515 10,03 ± 0,42 +0,3 Atostin CP DP Trường Thọ 1303 9,27 ± 0,78 -7,3 Leninarto CP DP SaVi 1412837 10,53 ± 0,64 +5,3 Leninarto CP DP SaVi 2412837 10,23 ± 0,70 +2,3 Tên thuốc (atorvastatin 10 mg) Công ty Stanagi Qua kết phân tích số mẫu thuốc atorvastatin thấy khác hàm lượng phân tích so với hàm lượng ghi nhãn nhà sản xuất không đáng kể Kết phân tích đáng tin cậy, đáp ứng yêu cầu phân tích 4.2 Nghiên cứu quy trình xác định fenofibrat mẫu thuốc mẫu huyết tương 4.2.1 Nghiên cứu đặc tính điện hóa fenofibrat điện cực giọt thủy ngân treo Để nghiên cứu trình điện hóa xảy bề mặt điện cực giọt thủy ngân treo, sử dụng phương pháp von - ampe vòng với điều kiện: Nồng độ fenofibrat 1x10-6 mol.L-1, đệm pH = 8,5, bắt đầu quét V, kết thúc -1,5 V, tốc độ quét 10 mV/s Tín hiệu đường CV biểu diễn hình 7: Hình 7: Đường von - ampe vịng fenofibrat; đường a) Mẫu trắng, pH = 8,5; đường b) fenofibrat 1x10-6M khơng hấp phụ; c) fenofibrat 1x10-6M có hấp phụ Trên đường phân cực catot từ V đến -1,50 V; xuất píc khử -1,22 V Trên đường phân cực anot từ -1,50 V đến V khơng xuất pic oxi hóa Do vậy, xảy trình khử fenofibrat trình khử bất thuận nghịch So sánh giá trị cường độ dịng píc khử đường (c) cường độ dịng píc khử đường (b) thấy chất giữ V với thời gian hấp phụ 60 s tín hiệu cường độ dòng tăng 7,6 lần so với trường hợp khơng có hấp phụ (đường b) Điều chứng tỏ fenofibrat hấp phụ điện cực giọt thủy ngân treo có áp V trước ghi tín hiệu hịa tan Đây sở để nhóm nghiên cứu chọn phương pháp von - ampe hịa tan hấp phụ, phương pháp có độ nhạy độ chọn lọc cao, đáp ứng yêu cầu phân tích lượng vết siêu vết có đối tượng nghiên cứu Từ kết nghiên cứu đường von - ampe vịng kết luận q trình khử fenofibrat khơng thuận nghịch, có hấp phụ điện cực HMDE Tiến hành quét đường von - ampe vòng lần liên tiếp Điều kiện đo: Nồng độ fenofibrat -6 1x10 M, đệm B - R pH = 8,5, bắt đầu quét V, kết thúc -1,5 V, tốc độ quét 10 mV/s, hấp phụ V, thời gian hấp phụ 60 s Tín hiệu thu hình 5: Hình 8: Đường von - ampe vòng quét vòng liên tục Đường CV qt vịng, vịng giá trị cường độ dịng cao hơn, vịng sau giá trị cường độ dịng píc catot thấp Ngun nhân do: qt vịng thứ tín hiệu hịa tan fenofibrat hấp phụ bề mặt điện cực, vòng 2,3,4,5 quét liên tiếp Sau qt vịng thứ chất hịa tan khỏi bề mặt điện cực, vòng thứ cao vịng 3,4,5 có lẽ chất chưa hịa tan hồn tồn khỏi bề mặt điện cực Các vịng 3,4,5 giá trị cường độ dịng thấp gần khơng thay đổi, tín hiệu cường độ dịng vịng 3,4,5 tương tự khơng có q trình tích lũy Điều khẳng định thêm fenofibrat có hấp phụ điện cực thủy ngân 4.2.2 Tối ưu hóa điều kiện xác định fenofibrat 4.2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng pH Điều kiện đo: Nồng độ fenofibrat 1x10-7 mol.L-1, hấp phụ - 0,8 V, thời gian hấp phụ 30 s, khoảng quét (- 0,8 V - 1,5 V), tốc độ quét 10 mV/s, thay đổi pH từ 5,0 đến 10,0 Qua kết nghiên cứu cho thấy, tăng pH đỉnh píc dịch chuyển phía âm Cường độ dịng píc tăng 10 pH tăng từ 5,0 đến 8,5 giảm dần pH lớn 10 Tại pH = 8,5 cho cường độ dịng píc cao chân píc cân đối Vì vậy, tơi chọn pH = 8,5 cho tất điều kiện khảo sát 4.2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng thời gian hấp phụ Điều kiện đo: Dung dịch fenofibrat 1x10-7 M; pH = 8,5; hấp phụ = - 0,8 V; tốc độ quét 0,01 V/s, thay đổi thời gian hấp phụ từ s đến 220 s Từ kết khảo sát ảnh hưởng thời gian hấp phụ đến tín hiệu cường độ dịng đỉnh píc thấy tăng thời gian hấp phụ từ - 90 s cường độ dịng píc tăng Khi thời gian hấp phụ lớn 90 s cường độ dịng đỉnh píc tăng chậm bề mặt điện cực bão hòa Tại t = 60 s cho cường độ tín hiệu tương đối cao, píc cân đối Vì vậy, chọn thời gian hấp phụ 60 s điều kiện tối ưu cho khảo sát 70 60 I (nA) 50 40 30 20 10 0 50 100 150 200 250 Thời gian hấp phụ (s) Hình 9: Sự phụ thuộc cường độ dịng đỉnh píc vào thời gian hấp phụ 4.2.2.3 Khảo sát ảnh hưởng hấp phụ Tương tự, thay đổi hấp phụ từ V đến -1,1 V nhận thấy, - 0,5 V cường độ píc cao píc cân đổi nên chúng tơi chọn hấp phụ -0,5V Ngoài ra, tiến hành khảo sát ảnh hưởng tốc độ quét chọn tốc độ quét thích hợp cho phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ xung vi phân 10 mV/s Như vậy, sau khảo sát điều kiện pH, thời gian hấp phụ, hấp phụ, tốc độ quét lựa chọn điều kiện thích hợp: pH = 8,5; Ehp = - 0,5V; t hp = 60 s; V = 10 mV/s 4.2.2.4 Đánh giá phương pháp phân tích Đường chuẩn tuyến tính khoảng nồng độ từ 1x10-7 mol.L-1 đến 1x10-6 mol.L-1 theo phương trình Ip = 10,25 * Cx.10-7 + 0,03 Giới hạn phát phương pháp LOD = 2,2.10-8 mol.L-1 giới hạn định lượng LOQ = 7,3.10-8 mol.L-1 Độ lặp lại phương pháp RSD từ 0,6 % đến 1,8 %, đánh giá thông qua phép đo độ lặp lại lần dung dịch có nồng độ 1x10-7 mol.L-1, 5x10-7 mol.L-1, 1x10-6 mol.L-1 4.2.3 Ứng dụng quy trình phân tích mẫu thuốc mẫu huyết tương Quy trình phân tích mẫu thuốc Cân khối lượng 10 viên thuốc cân phân tích có độ xác ± 0,0001 g Tính khối lượng trung bình viên (m) Cân a (g) thuốc nghiền mịn cân phân tích, thêm 20,00 mL metanol vào cốc 100,00 mL, rung siêu âm 20 phút cho thuốc tan hết, định mức vào bình 25,0 ml Lọc dung dịch qua giấy lọc băng xanh thu dung dịch A có nồng độ C0 (M) Hút 0,25 mL dung dịch A định mức 25,00 mL dung dịch B có nồng độ C1 (M) Từ dung dịch B có nồng độ C1(M), ta lấy 0,25 mL dung dịch B 10,00 mL dung dịch đệm B - R pH = 8,5 định mức 11 bình 25,00 mL, ta dung dịch C có nồng độ Cx (M) Nồng độ fenofibrat (Cx) viên thuốc xác định phương pháp thêm chuẩn Khối lượng fenofibrat viên thuốc tính theo cơng thức: Cx.360,83.250.1000.m m fenofibrat  (1) a đó: + mfenofibrat: hàm lượng fenofibrat viên thuốc (mg) + m: khối lượng viên thuốc (g) + a: khối lượng thuốc đem phân tích(g) + Cx: nồng độ mol/l dung dịch đo Nồng độ Cx dung dịch đo xác định phương pháp thêm chuẩn, kết phân tích mẫu thuốc trình bày bảng sau Bảng 1: Kết phân tích mẫu thuốc STT Mẫu thuốc Hàm lượng fenofibrat xác Hàm lượng fenofibrat ghi định (mg/viên) nhãn (mg/viên) Sando 297,03 300 Fenbrat 97,16 100 Fenbrat 299,27 300 Hafenthyl 193,44 200 Fenofibrat 194,23 200 Quy trình xử lý mẫu huyết tương Lấy 1,00 mL huyết tương thêm fenofibrat chuẩn 4,00 mL dung dịch axetonnitrin 99,8% vào ống nghiệm có nắp xốy Sau đem lắc votex phút đem quay ly tâm 4000 vòng/phút 15 phút Dịch thu đem lọc qua màng lọc 0,45 µm Sau hút 2,50 mL dịch lọc, thêm 10,00 mL đệm B – R vào, định mức bình 25,00 mL Với quy trình xử lý mẫu huyết tương nghiên cứu được, tiến hành xây dựng đường chuẩn khoảng nồng độ 10-5 mol.L-1 đến 15.10-5 mol.L-1 Giới hạn phát phương pháp LOD = 2,6 x 10-6 mol.L-1 giới hạn định lượng LOQ = 8,7 10-6 mol.L-1 Hiệu suất thu hồi xác định fenofibrat mẫu huyết tương từ 91,5% đến 103,5% Đánh giá kết đạt kết luận Phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ xác định atorvastatin fenofibrat phương pháp có độ nhạy, độ xác độ chọn lọc cao, quy trình phân tích khơng q phức tạp, thích hợp với việc kiểm định chất lượng thuốc Đã nghiên cứu đặc tính điện hóa atorvastatin, fenofibrat điện cực giọt thủy ngân treo điện cực glassy bon Nghiên cứu quy trình xác định atorvastatin fenofibrat mẫu thuốc mẫu huyết tương Tóm tắt kết (tiếng Việt tiếng Anh) Atorvastatin chất oxi hóa điện cực giọt thủy ngân chất khử điện cực glassy bon Píc khử píc oxi hóa điện cực giọt thủy ngân treo điện cực glassy bon bất thuận nghịch có hấp phụ bề mặt điện cực 12 Đã nghiên cứu quy trình xác định atorvastatin phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ điện cực giọt thủy ngân treo với điều kiện thích hợp: pH = 9,0, hấp phụ -0,9V, thời gian hấp phụ 90s với nồng độ 5.10-7 M 300s với nồng độ 10-8M, thời gian cân 10s, tốc độ quét 300 mV/s, khoảng tuyến tính 10 -8 M đến 10-6 M, LOD 9,6.10-10 mol.L-1 LOQ 3.2.109 mol.L-1 Ứng dụng quy trình xác định atorvastatin mẫu thuốc mẫu huyết tương Đã nghiên cứu quy trình xác định atorvastatin mẫu thuốc phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ điện cực than gương với điều kiện pH = 4,0, thời gian hấp phụ 30s, hấp phụ +0,5V, tốc độ quét 10 mV/s, biên độ xung 50 mV, khoảng tuyến tính từ 10-6 mol.L-1 đến 10-4 mol.L-1, giới hạn phát 3,1.10-7 mol.L-1 giới hạn định lượng 1,0.10-6 mol L-1 Các đặc tính điện hóa fenofibrat nghiên cứu phương pháp von-ampe vòng, điện cực giọt thủy ngân treo chất oxi hóa, píc khử bất thuận nghịch có hấp phụ điện cực Đã nghiên cứu quy trình xác định fenofibrat điện cực giọt thủy ngân: pH = 8,5; Ehp = - 0,5V; t hp = 60 s; V = 10 mV/s, khoảng tuyến tính từ 1x10-7 mol.L-1 đến 1x10-6 mol.L-1, giới hạn phát LOD = 2,2.10-8 mol.L-1 giới hạn định lượng LOQ = 7,3.10-8 mol.L-1 Atorvastatine is oxidized substance on the hanging mercury dropping electrode and reduced subtance on the glassy carbon Oxidation peak current and reduction peak current are irreversible and adsorption on the electrode surface Adsorptive stripping voltammetry is used for the determination of atorvastatine with suitable condition: pH = 9,0, accumulation potential is -0,9V, accumulation time is 90s with atorvastatine 5.10-7 M and 300s with atorvastatine 10-8M, scan rate is 300 mV/s, linear range from 10-8 M to 10-6 M The detection limits (LOQ) of a standard solution are estimated to be 9.6 x 10-10 mol.L-1 and quantitation limits (LOQ) are 3.2.10-9 mol.L-1 (ater accumulation for 90 s) The methods were fully validated and successfully applied to the high through put determination of the drug in pharmaceutical formulation, human plasma with good recoveries Adsorptive stripping voltammetry on the glassy carbon is used for the determination of atorvastatine with suitable condition: pH = 4,0, accumulation potential is + 0,5V, accumulation time is 30s, scan rate is 10 mV/s, linear range from 10-6 M to 10-4 M The detection limits (LOQ) is 3.1 x 10-7 mol.L-1 and quantitation limits (LOQ) are 1.0.10-6 mol.L-1 The electrochemical properties of fenofibrate have been investigated by cyclic voltammetry and differential pulse adsorptive stripping voltammetry method using hanging mercury dropping electrode Reduction of drug was irreversible and strong adsorptive The suitable conditions have been studied: Britton Robinson buffer pH = 8.5, adsorption potential - 0.5V, adsorption time 60s, pulse amplitude 0.05V; sweep rate 10 mV/s and linear range from 10-7 mol.L-1 to 10-6 mol.L-1 The LOD and LOQ are 2.2 x 10-8 mol.L-1 and 7.3 x10-8 mol.L-1, respectively The relative standard devitation is 1.8 % at fenofibrate concentration of 10-7 mol.L-1 The method has been successfully applied to the determination of fenofibrate in spike human plasma 13 PHẦN III SẢN PHẨM, CÔNG BỐ VÀ KẾT QUẢ ĐÀO TẠO CỦA ĐỀ TÀI 3.1 Kết nghiên cứu TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học hoặc/và tiêu kinh tế - kỹ thuật Đăng ký Đạt Quy trình xác định atorvastatin fenofibrat mẫu dược phẩm Quy trình phân tích atorvastatin fenofibrat mẫu thuốc: Cụ thể điều kiện tối ưu thông số máy đo, quy trình phân tích phải đơn giản, xác, ứng dụng để kiểm tra chất lượng thuốc cách nhanh Giới hạn định lượng cn t khong 0,01 ữ 0,02àg.mL-1 -Quy trỡnh phõn tích atorvastatin mẫu thuốc: pH = 9,0, hấp phụ -0,9V, thời gian hấp phụ 60s, thời gian cân 10s, tốc độ quét 300 mV/s, LOQ = 0,002 µg.mL-1( 3,2.10-9 mol.L-1) -Quy trình phân tích fenofibra mẫu thuốc: pH = 8,5, hấp phụ -0,5V, thời gian hấp phụ 60 s; tốc độ quét 10 mV/s, thời gian cân 10s, LOD = 0,02 µg.mL-1 (7,3.10-8 mol.L-1) Quy trình xác định atorvastatin fenofibrat mẫu huyết tương Quy trình phân tích atorvastatin fenofibrat mẫu huyết tương: Các điều kiện xử lý mẫu huyết tương, điều kiện đo, quy trình phân tích phải đơn giản, đảm bảo độ độ xác phương pháp Giới hạn định lng cn t khong 0,01 ữ 0,02àg.mL-1 Quy trỡnh phân tích atorvastatin mẫu huyết tương: ml huyết tương, thêm 1ml dung dịch đệm BR pH = 9,0; lắc dung dịch cho qua cột C18 Rửa tạp 1ml dung dịch metanol : H2O = 05 : 95 (v/v ), rửa giải chất phân tích 1ml dung dịch metanol : đệm = 95 : (v/v) chuyển dung dịch vào bình định mức 25 ml, thêm 10 ml đệm BR pH = 9,0, định mức đến vạch đo mẫu với điều kiện điện hấp phụ -0,9 V, thời gian hấp phụ 30 s, tốc độ quét 300 mV/s, LOQ = 0,01 µg.mL-1 -Quy trình phân tích fenofibrat mẫu huyết tương: 1,00 mL mẫu huyết tương, thêm 4,00 mL acetonitrin 99,8 %, lắc Voltex, li tâm Lấy 2,50 mL dung dịch sau xử lý, thêm 10,00 mL đệm pH = 8,5 đo điện hóa với thời gian hấp phụ 60 s hấp phụ -0,5 V, tốc độ quét 10 mV/s, LOQ = 0,02 µg.mL -1 … 14 3.2 Hình thức, cấp độ cơng bố kết Ghi địa cảm ơn tài trợ Sản phẩm TT ĐHQGHN quy định Cơng trình cơng bố tạp chí khoa học quốc tế theo hệ thống ISI/Scopus 1.1 Thi Kim Thuong Nguyen, Thi Đã in Đã cảm ơn Thao Ta, Minh Huong Giang Dang theo and Thi Thanh Hai Nguyen, quy định Cathodic adsorptive stripping voltammetry for the determintation of atorvastatine drug in pharmaceutical formulation and spike human plasma, Int J Chem Sci.: 14(3), 2016, 1349-1361 Tình trạng (Đã in/ chấp nhận in/ nộp đơn/ chấp nhận đơn hợp lệ/ cấp giấy xác nhận SHTT/ xác nhận sử dụng sản phẩm) 1.2 2.1 2.2 3.1 3.1 4.1 4.2 Đánh giá chung (Đạt, không đạt) Đạt Sách chuyên khảo xuất ký hợp đồng xuất Đăng ký sở hữu trí tuệ Bài báo quốc tế không thuộc hệ thống ISI/Scopus Bài báo tạp chí khoa học ĐHQGHN, tạp chí khoa học chuyên ngành quốc gia báo cáo khoa học đăng kỷ yếu hội nghị quốc tế 5.1 Nguyễn Thị Kim Thường, Nguyễn Đã in Thị Thanh Hải, Văn Thị Bích, Đã cảm ơn Nghiên cứu đặc tính điện hóa theo atorvastatin phương pháp quy định von-ampe, Tạp chí Hóa học, 53(4E), ( 2015), pp 149-152 5.2 Nguyễn Thị Kim Thường, Phạm Đã in Đã cảm ơn Thị Hương, Nghiên cứu đặc theo tính điện hóa Atorvastatin quy định điện cực than gương ứng dụng phân tích mẫu thuốc phương pháp Von-ampe hịa tan hấp phụ, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 32, Số (2016) 30-34 Nguyễn Thị Kim Thường, Đỗ Thị Đã in Đã cảm ơn Kim Dung, Trịnh Ngọc Anh Chi, theo Nghiên cứu đặc tính điện hóa quy định Fenofibrat phương pháp Đạt Đạt Đạt 15 von-ampe ứng dụng phân tích mẫu huyết tương, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 32, Số (2016) 257-261 Báo cáo khoa học kiến nghị, tư vấn sách theo đặt hàng đơn vị sử dụng 6.1 6.2 Kết dự kiến ứng dụng quan hoạch định sách sở ứng dụng KH&CN 7.1 7.2 Ghi chú: - Cột sản phẩm khoa học công nghệ: Liệt kê thông tin sản phẩm KHCN theo thứ tự - Các ấn phẩm khoa học (bài báo, báo cáo KH, sách chuyên khảo…) chấp nhận có ghi nhận địa cảm ơn tài trợ ĐHQGHN theo quy định - Bản phơ tơ tồn văn ấn phẩm phải đưa vào phụ lục minh chứng báo cáo Riêng sách chuyên khảo cần có phơ tơ bìa, trang đầu trang cuối có ghi thơng tin mã số xuất 3.3 Kết đào tạo Thời gian kinh phí Cơng trình cơng bố liên quan Họ tên tham gia đề tài Đã bảo vệ TT (Sản phẩm KHCN, luận án, luận văn) (số tháng/số tiền) Cử nhân Nguyễn Thị tháng/5 triệu Khóa luận Đã bảo vệ Thanh Hải Trịnh Ngọc tháng Khóa luận Đã bảo vệ Anh Chi Nguyễn Thị tháng/ triệu Khóa luận Đã bảo vệ Thanh Thúy Phạm Thị tháng Khóa luận Đã bảo vệ Hương Học viên cao học Đỗ Thị Kim 15 tháng/ 10 triệu Luận văn Đã bảo vệ Dung Đặng Minh 10 tháng /10 triệu Luận văn Đã bảo vệ Hương Giang Ghi chú: - Gửi kèm photo trang bìa luận án/ luận văn/ khóa luận giấy chứng nhận nghiên cứu sinh/thạc sỹ học viên bảo vệ thành công luận án/ luận văn; - Cột công trình cơng bố ghi mục III.1 16 PHẦN IV TỔNG HỢP KẾT QUẢ CÁC SẢN PHẨM KH&CN VÀ ĐÀO TẠO CỦA ĐỀ TÀI Sản phẩm Số lượng Số lượng TT đăng ký hồn thành Bài báo cơng bố tạp chí khoa học quốc tế theo hệ thống 01 01 ISI/Scopus Sách chuyên khảo xuất ký hợp đồng xuất Đăng ký sở hữu trí tuệ Bài báo quốc tế khơng thuộc hệ thống ISI/Scopus Số lượng báo tạp chí khoa học ĐHQGHN, 01 03 tạp chí khoa học chuyên ngành quốc gia báo cáo khoa học đăng kỷ yếu hội nghị quốc tế Báo cáo khoa học kiến nghị, tư vấn sách theo đặt hàng đơn vị sử dụng Kết dự kiến ứng dụng quan hoạch định sách sở ứng dụng KH&CN Đào tạo/hỗ trợ đào tạo NCS Đào tạo thạc sĩ 01 02 PHẦN V TÌNH HÌNH SỬ DỤNG KINH PHÍ TT A Nội dung chi Chi phí trực tiếp Th khốn chun mơn Ngun, nhiên vật liệu, Thiết bị, dụng cụ Cơng tác phí Dịch vụ th Hội nghị, Hội thảo, kiểm tra tiến độ, nghiệm thu In ấn, Văn phịng phẩm Kinh phí duyệt (triệu đồng) Kinh phí thực (triệu đồng) Ghi 102 102 07 CĐ 59 59 18 18 5 16 8 200 16 8 200 Chi phí khác B Chi phí gián tiếp Quản lý phí Chi phí điện, nước Tổng số Xây dựng đề cương chi tiết viết tổng quan tư liệu 17 PHẦN V KIẾN NGHỊ (về phát triển kết nghiên cứu đề tài; quản lý, tổ chức thực cấp) Kết nghiên cứu đề tài áp dụng để kiểm tra mẫu thuốc thị trường Nếu cấp thêm kinh phí chúng tơi phát triển phương pháp để kiểm tra hàm lượng atorvastatin fenofibrat mẫu sinh hóa ( mẫu nước tiểu, mẫu máu) PHẦN VI PHỤ LỤC (minh chứng sản phẩm nêu Phần III) Các phụ lục đính kèm bao gồm: - Quy trình xác định atorvastatin fenofibrat mẫu dược phẩm: 01 - Quy trình xác định atorvastatin fenofibrat mẫu huyết tương: 01 - Bài báo cơng bố tạp chí khoa học theo hệ thống ISI/Scopus: 01 - Bài báo đăng tạp chí khoa học ĐHQGHN, tạp chí chuyên ngành quốc gia: 03 - Thạc sĩ ( định HĐ chấm luận văn, biên bản, trang bìa): 02 ThS - Cử nhân ( trang bìa khóa luận): 04 CN - Thuyết minh đề tài Khoa học Công nghệ cấp ĐHQGHN Hà Nội, ngày 10 tháng 04 năm 2017 Đơn vị chủ trì đề tài (Thủ trưởng đơn vị ký tên, đóng dấu) Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Nguyễn Thị Kim Thường 18