Nghiên cứu tiến hành xác định thành phần hóa học của keo ong rừng Eawy (Đắk Lắk) so sánh với một mẫu keo ong châu Âu và một mẫu keo ong thương mại. Mẫu keo ong châu Âu có thành phần hóa học là flavonoid, acid phenolic và este liên quan đến keo ong loại poplar.
60 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệSố Phân lập, ịnh l ợng thành phần thu t r ng nhiệt i Việt Nam ợc mẫu keo ong Trần Thị Mỹ Ki u*, Hoàng Thị Tho , Đỗ Thị Bích Ngọc Kho D ợc, Đại học Nguyễn Tất Thành *ttmkieu@ntt.edu.vn Tóm tắt Tình hình chung mục tiêu nghiên cứu: Keo ong m t loại nh a t nhi n, ợc thu thập ong mật (Apis mellifera) Ong mật thu thập keo ong t ch i c a loại khác V i s ạng c a keo ong vùng nhiệt i, nhóm nghiên cứu ti n h nh x c ịnh thành phần hóa học c a keo ong r ng Eawy (Đắk Lắk) so sánh v i m t mẫu keo ong châu Âu m t mẫu keo on th ơn mại Mẫu keo ong châu Âu có thành phần hóa học flavonoid, acid phenolic st li n qu n n keo ong loại poplar Và chi t xuất keo ong khác t r ng Eawy cho thấy s diện c a hợp chất v c c polyph nol kh c nh u Ph ơn ph p n hi n cứu: Phân tích sắc kí flash c a dịch chi t t nolic thu ợc 14 phân oạn, số ợc phân tích HPLC/UV HPLC/MS, NMR Kết : M t hợp chất c a keo ong ã ợc tinh ch v ợc phân tích NMR Đó m t flavanone cụ th pinocembrine ® 2019 Journal of Science and Technology - NTTU Đ t vấn K o on l hỗn hợp nh t nhi n v phức tạp, v i nhi u th nh phần kh c K o on o on mật (Apis mellifera) thu thập t ch i cây, nh cây, ho c nhữn lo i th c vật kh c nh u K o on s p, nh , polyph nol v c c ẫn xuất c ch n [1] Hiện n y, th nh phần c k o on c th th y ổi tùy thu c v o hệ th c vật ị ph ơn Nhờ s ạn c k o on r n nhiệt i, nh m n hi n cứu kh m ph th nh phần h học c k o on thu ợc so v i sản phẩm th ơn mại v m t mẫu k o on châu Âu nh i hiệu suất chi t v th nh phần h học c k o on 1 K o on châu Phi - Tây Phi: Nghiên cứu c a E.A Ophori c ng s t keo ong mi n nam Nigeria sắc kí lỏng k t hợp v i máy dò tán xạ ánh sáng chứng minh s diện c a isoflavonoid prenylated stilbenoid m i keo ong, v i ngu n th c vật có th Macaranga Schweinfurthii Ở Ghana, hai hoạt chất thu c nhóm stilbene m i ợc phân lập t k o on v x c ịnh HPLC-MS prenyl phloroglucinone tetrahydroxy-stilbene prenylated t ngu n th c vật Dorstenia poinsettifolia var anyusta Engl (Moraceae)[1] Đại học Nguyễn Tất Thành Nhận 28.02.2019 Đ ợc duyệt 18.11.2019 Công bố 25.12.2019 T khóa keo ong Eawy, thành phần hóa học, sắc kí flash, HPLC-MS - Bắc Phi: Nghiên cứu v m t loại keo ong Ai Cập cho thấy hợp chất keo ong (ngu n th c vật có th : Macaranga spp.) geranyl flavanones anthra-quinones[2] - Nam Phi: Phân tích UPLC-ESI-MS c a 39 mẫu keo ong t Nam Phi (ngu n th c vật có th : Dalbergia ecastophyllum) ã o c o 15 ci ph nolic ch nh[3] flavonoid, chất là: acid cafeic, quercetin, galangin, chrysin, pinobanksin, pinobanksin 5-methyl ether, pinocembrin[4] - Đ n Phi: M t k o on ợc thu hoạch Kenya (ngu n th c vật có th : Phyllanthus myrtifolius) chứa hai phytoestrogen m i: tetrahydrojusticidin B 6methoxydiphylline Ngoài ra, thành phần kh c ã ợc x c ịnh keo ong Kenya là: phyllamyricin, triterpenes, arylnaphthalene, macarangine, schweinfurthines A B[5] Zhang c ng s cũn ã hợp chất keo ong triterpen ch y u dẫn xuất c a amyrin lupeol[6] Các hợp chất hóa học ợc tìm thấy mẫu t phía tây bắc Cameroon (ngu n th c vật: Mangifera indica) là: prenyl geranyl stilbenes, prenylat phloroglucinone, triterpenoid, phloroglucinonone, α βamyrin, lupeol, cycloartenol, lignans, flavonoid geranylat acid mangi-feronic, ambonic, mangiferolic, ambolic[1,7] tetrahydro-justicidine B, 6-methoxydiphylline[8] 1.2 Keo ong châu Âu Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số K o on châu Âu th ờng bao g m flavonoid, acid cinnamic este Keo ong t Bulgaria, Ý, Thụy Sĩ v Pháp có hợp chất ch nh nh pinoc m rin, pinobanksin, chrysin, galangin prenyl este c a acid caffeic, ferulic[9-12] Keo ong dính nhiệt 20ºC trở lên Ở nhiệt thấp hơn, keo ong trở nên cứng giòn Th c t , trình thu thập mật hoa phấn hoa, ong mật cũn ng thời thu thập nh a t ch i cây, hoa khác khu v c sinh sống c ch n S u , nh a ợc ong mật nhai, k t hợp v i n c bọt c on hình thành m t hỗn hợp chất m i gọi l k o on K o on ợc ong sử dụn ổn ịnh cấu trúc c a tổ ong, giảm rung cho tổ ong, sửa chữa v t rách, kẽ hở không mong muốn c a tổ on , tăn c ờng phòng th cho tổ ong niêm phong lối vào, n ăn n a kí sinh trùng vi khuẩn xâm nhập, hạn ch s phát tri n c a vi khuẩn, nấm mốc, chống s thối rữa phòng chống khả năn lây l n c c ệnh có khả năn nguy hại tổ ong Đ n n y, v i c n n hệ chi t xuất ti n ti n cũn nh ợc nhi u c c nh kho học n y lẫn tây y n hi n cứu v ph t tri n, k o on ã ợc x c nhận l th nh phần, ph ơn thuốc qu , t c ụn k o on tốt v ợc sử ụn r n rãi tron cu c sốn nh : t c ụn kh n khuẩn, chốn virus, nấm, nhiễm trùn , chốn vi m, i u hò miễn ịch, tăn c ờn sức kh n , chốn loét, l m ch n l nh v t th ơn v k ch th ch m u l n non v i c c th nh phần hợp chất qu nh : prot in, ci min, vit min, kho n chất, c c l vonoi [13] Ti n n hi n cứu Việt N m Ở n c t , n on mật cho thu hoạch ợc khoản ,2k n năm o c thù c iốn on , vùn n uy n liệu nhi u hạn ch v c iệt l n ời nu i on cũn ch ch trọn v o sản phẩm k o on n n ch n t ch c n u n k o on tốt Năm 17, N uyễn Thị Th nh M i v c c n n hiệp ph t r rằn k o on c Apis mellifera, ợc nu i Việt N m, c h m l ợn l vonoi v polyph nol thấp k o on c Br zil, ấp 3-1 lần V vậy, k o on Việt N m c t c ụn chốn oxi h v hoạt t nh kh n khuẩn y u Tuy nhi n, k o on Việt N m c hoạt t nh chốn un th mạnh, c iệt l un th n tụy[14] N i un v ph ơn ph p n hi n cứu 2.1 Nguyên liệu máy móc 1 K o on th mẫu k o on th ợc thu thập n ẫu nhi n t r n E wy v o hè năm 18 v mẫu k o on th châu Âu c sẵn t ợt n hi n cứu tr c , thu khu r n ph n m B rc lon v o hè năm 17 2 K o on th ơn mại ( t v chất lỏn ) K o on th ơn mại t phòn th n hiệm Coop r (M lun) c h i ạn : chi t xuất kh ( t mịn, mùi ễ chịu, 25 ) v 61 chi t xuất chất lỏn (V = l t, m u nâu) M y m c sử ụn • M y qu n phổ NMR JEOL 27 MHz cho NMR 1H • M y phân t ch HPLC-UV, MS • Đầu ọc micropl qu TECAN In init 2 2 Ph ơn ph p n hi n cứu 2 Dịch chi t mẫu k o on th t r n E wy v mẫu k o on châu Âu ợc ảo quản lạnh (sử ụn nitơ lỏn ) tăn iện t ch ti p x c tr c chi t Qui tr nh chi t t nolic (EEP) ợc th c v i mẫu k o on thu ợc v t k o on th ơn mại (H nh 1) Hình Qui tr nh chi t th nol c k o on th S u , qui tr nh chi t xuất li n ti p v i c c un m i kh c nh u ợc th c nh qui tr nh H nh Hình Qui trình chi t liên tục v i dung mơi 2.2.2 Sắc kí l p mỏng Phân t ch ằn sắc k l p mỏn ợc th c tr n ALUGRAM Xtr SIL G UV254, y ,2 mm, silic l v i thị luor sc nc UV254 M i tr ờn sử ụn l hỗn hợp cycloh x n v thyl c t t v i tỉ lệ :2 ho c :3 (COP-EEP) tùy v o phân c c c ịch chi t ho c phân oạn c k o on th ơn mại V nilin sul uric ợc l chọn l m chất thử m u Đại học Nguyễn Tất Thành 62 Tạp chí Khoa học & Công nghệSố 2 Định l ợng 2 Định l ợng polyphenol toàn phần Tỉ lệ polyph nol to n phần ợc x c ịnh th o ph ơn ph p o m u Folin-Cioc lt u [13,14] nh n ti n h nh tr c ti p tron micropl qu µl ịch chi t ( ,5m ml tron M OH) ợc tr n v i µl n c v µl chất phản ứn Folin-Cioc lt u S u lắc ph t, 12 µl H2O v µl un ịch N 2CO3 % ợc th m v o (th c lần phản ứn cùn l c) Đ hấp thu o ợc 76 nm s u ph t tron tối M t mẫu trắn ợc chuẩn ị t ơn t nh n th y ịch chi t ằn M OH Dùn ci llic l m t ơn qu n so s nh n thị ( - ,8m ml ; y= ,425x ; r2 = ,999, n=3) Tỉ lệ polyph nol to n phần i u thị ằn mili r m t ơn ơn ci llic so v i ịch chi t ( r m) (m GAE ) Hình Định l ợng polyphenol tồn phần 2 Định l ợng flavonoid toàn phần Tỉ lệ l von l vonol ợc x c ịnh ằn ph ơn ph p c Woisky v S l tino[16] v ợc ti n h nh tr c ti p tron micropl qu µl th nol 95% ợc tr n v i µl ịch chi t (ở 1,5m ml tron M OH), r i th m µl un ịch n c c AlCl3 4%, µl un ịch n c c k li c t t ,4M (th c phản ứn lần) S u ph t nhiệt phòn , o hấp thu 415nm Dun ịch n c c AlCl3 4% ợc th y ằn Milli Q tron mẫu trắn Chrysin ợc sử ụn nh l chất chuẩn v ợc chuẩn ị n n ,1 , 15 , µ ml xây n thị (y= ,32 x ; r = ,997, n=3) Tỉ lệ l von l vonol ợc i u thị ằn mili r m c Chrysin t ơn ơn th o r m ịch chi t (m CE ) Phân t ch n y ợc th c tr n HPLC W t rs 2695 DAD 2996 v c t Licrosph rđ RP-18 (125 ì 4mm, µm) Đi u kiện rử iải: ph n ,1% ci ormic (A) v M OH (B), r i nt 25-1 % B ( -4 ph t), % B (4 45 ph t), -25 % B (45-46 ph t), 25% B (46-55 ph t), tốc 1ml ph t Sắc k ợc hi nhận cs n (254 v 28 nm) 2.2.5 Sắc kí flash 2 Dịch chi t EEP 12 , t k o on ợc chi t th o qui tr nh EEP (EtOH 96%, × ml tron iờ) Hiệu suất chi t l ,8% , ịch chi t tr c ợc hò t n tron l ợn tối thi u DCM v c ton, v c qu y cho n thu ợc t mịn S u th m 15,4 Silic Sắc k phân oạn ợc th c tr n Com iFl sh T l yn ISCO, c t R is p Silic 12 (CV 225ml), l u l ợn ml ph t v i hệ thốn rử iải (cycloh x n (A) + AcOEt (B)) nh s u: ( -1 ph t) % B; (1 -9 ph t) -1 % B; (9 ph t) % B Sắc k ợc l u c s n 254 v 28 nm 22 tuýp ã ợc thu thập v chi th nh 14 phân oạn (t A n P) 2 Phân oạn G m ịch chi t kh c phân oạn G ợc hò t n tron l ợn tối thi u DCM v c ton, v c qu y cho n thu ợc t mịn s u th m m Silic Sắc k phân oạn ợc th c tr n cùn m y v i c t R is p C18 (6 ), tốc ml ph t v i hệ thốn rử iải (H2O (A) + M OH (B)) nh s u: ( -15 ph t) 25% B; (1525 ph t) % B; (25-43,5 ph t) 45% B; (43,5-44,7 ph t) 48,8 % B; (44,7-5 ,1 ph t) % B; (5 ,1- ph t) % B; (6 -62 ph t) % B; (62-72 ph t) % B; (72-74 ph t) % B; (74-84 ph t) % B Sắc k ợc l u 254 v 28 nm 54 tuýp ợc thu thập 2.2.6 HPLC-MS Đi u kiện t ch iốn nh HPLC-DAD, sử ụn m y HPLC W t rs 2795 W t rs 2487 Du l Phân t ch khối l ợn ợc th c v i ESI (El ctrospr y Ionis tion) ạn âm t nh v ơn t nh, i u kiện : G z v ct r, H ; khu ch ại năn l ợn c t ơn t c, 1,3V ; kh kh v m y phun s ơn , N2, 7l ph t ; p suất kh , psi; nhiệt sấy, 34 ºC ; tốc , 1, ml ph t ; tỉ lệ 1:9; phạm vi o m z -1 K t v thảo luận Hình Định l ợng flavonoid toàn phần 2.2.4 HPLC- DAD Dịch chi t kh ợc hò t n tron M OH (1 m ml) v li tâm 13 rpm tron ph t tr c ti m mẫu (1 µl) Đại học Nguyễn Tất Thành 3.1 Chi t xuất 3.1.1 Keo ong thô Hiệu suất c a chi t xuất keo ong châu Âu khoảng 70% Các mẫu kh c c năn suất EEP t 23 n 47% Đối v i chi t xuất liên ti p, hiệu suất khác t mẫu sang mẫu khác Đối v i chi t xuất cyclohexan, hiệu suất nằm khoảng t n 52%, ối v i chi t xuất DCM, hiệu suất th y ổi t n 26%, cuối chi t xuất MeOH có tỉ lệ 1-6% K o on th ơn mại 3.1.2.1 B t keo ong Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 63 Hiệu suất EEP c k o on th ơn mại cũn nh sản phẩm chi t xuất liên ti p mức thấp (12% 3,9-7,8%) 3.1.2.2 Keo ong lỏng N n c a dịch chi t ợc tính t liệu Bảng Bảng N n t nh ằn m ml c k o on COF Số V (ml) M (m ) 13,5 25 ,7 2 27,7 251,3 Trun C (m nh ml) Định l ợng Polyphenol toàn phần (PT) bằn ph ơn pháp Folin-Ciocalteu K t ịnh l ợn PT tron Bản Bảng K t ịnh l ợn PT L ợn PT Dịch chi t (m GAE ) COP-EEP 246,3 ± 5,5 COP-M OH 279,1 ± 4,5 COP-DCM 21 ,6 ± 8,6 COF L ợn PT (m GAE ) 179,4 ± 6,7 C th thấy s kh c iệt n k v l ợn PT c ịch chi t k o on th ơn mại ằn c c loại un m i kh c nh u tron ản k t Th o ki n, n n PT c o tron chi t xuất EtOH v M OH C c tỉ lệ n y t ơn ứn v i c c i trị ợc t m thấy tron t i liệu cho loại k o on "popl r" 3 Định l ợn Fl vonoi to n phần (FT) ằn ph ơn ph p tạo phức AlCl3 Bảng C c hợp chất ợc th tron Bản Bảng K t ịnh l ợn FT Dịch chi t L ợn FT (m CE ) COP-EEP 582, ± 5,4 COP-M OH Dịch chi t COP-DCM 518,3 ± 3,1 251, Dịch chi t K t ịnh l ợn FT COF L ợn FT (m CE ) 452, ± 7,3 457, ± 5,6 T k t này, v i 45 n 580mg CE/g dịch chi t, không th so sánh tr c ti p v i giá trị c a tài liệu, k t hi m ợc bi u thị bằn t ơn ơn chrysin, nên ợc thảo luận phần k t luận d a giá trị c a keo ong Cooper (ở phần cuối báo cáo này) 3.4 Sắc kí lỏng hiệu năn c o Sắc k c a mẫu EEP keo ong châu Âu dịch chi t c a k o on th ơn mại l t ơn t Các peak số quan s t ợc khoảng t n 30 phút V i mẫu EEP 1, c c ỉnh số ợc quan sát khoảng t 25 n 30 phút (các hợp chất hầu nh kh n phân c c) N ợc lại, EEP c c ỉnh khoảng t n 10 phút (các hợp chất phân c c) Sắc k c a mẫu EEP 3, EEP v EEP l t ơn t nh u, c c ỉnh ch nh ợc quan sát khoảng t n phút (các hợp chất phân c c) t 35 n 45 phút (các hợp chất không phân c c) 3.5 Nhận diện cấu trúc hợp chất ch y u mẫu Phân oạn F Dữ liệu ESI-MS v ʎm x cho hợp chất ã x c ịnh ợc o c o tron Bản ợc x c ịnh tron phân oạn F Số HPLC Tr (phút) 1 ,6 CTCT/ M C7H6O2 122 Tên hoạt chất Aci nzoïqu 22,5 C15H12O4 256 Pinoc m rin 29,8 C16H12O4 268 T ctochrysin 3.5.2 Fraction G Phân oạn G ợc tinh t h Thông tin khối lượng [M+H]+ = 123 [M+H]+ = 257 [M+ N ]+ = 269 [M-H]- = 267 ʎmax 23 , 273 nm 29 , 33 nm 268, 312 nm ằn sắc k l sh v phân t ch ằn HPLC-UV v MS (H nh 5) Hình Sắc k l sh v k t phân t ch HPLC-UV, MS Đại học Nguyễn Tất Thành 64 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệSố Hình Phổ NMR proton c GF -29 Th o phân t ch HPLC-UV, HPLC-MS, hợp chất số l ci nzoic ã ợc x c ịnh tron phần tr c V i phổ 1H NMR, nh m m thoxy ợc nhận iện δ 3,31 M t proton δ 12,15, hy roxyl t o vị tr v i cầu nối H-O c r onyl vị tr H i mũi i δ 5,59 (J = 1Hz) n m t H-6 v H-8 M t i số năm proton δ 7,39-7,54 ã x c nhận s kh n th y th c vòn B Đ c i m c NMR 1H l s vắn m t c proton l v non H-3 i n h nh v s iện c hệ thốn ABX Phần X xuất i ạn c p son son o H-2 v phần AB, l h i c p son son c m t proton v i nh u δ 2,75 v 2,82 t ơn ứn v i H-3 (cis) v H-3 (tr ns) T ữ liệu k t hợp v i t i liệu th m khảo, c th o n cấu tr c n y l c (S) -5-hy roxy-7m thoxy l v non h y pinostro in K t luận v ki n n hị K t luận - Đối v i k o on th C c k t li n qu n n năn suất chi t xuất k o on châu Âu (EEP khoản %), c c phân t ch SKLM v HPLC ẫn n iả thuy t rằn k o on n y thu c loại "popl r"[12] C c mẫu kh c c hiệu suất chi t EEP t 23 n 47% v i c c hợp chất số kh n phân c c, c c polyph nol chi m thi u số (n hi n cứu n ợc ti n h nh) Li n qu n n việc chi t xuất li n ti p, kh n th phân t ch ợc o tổn thất n k tron qu tr nh lọc (l n t i 85% cho k o on số 1) Do số l ợn nhỏ vật liệu ợc cun cấp, th n hiệm n y kh n th l p lại Sắc k c EEP châu Âu v h i k o on th ơn mại l t ơn t nh u C c ỉnh số ợc qu n s t tron khoản t n ph t Đối v i EEP số 1, c c p k số ợc qu n s t tron khoản t 25 n ph t (hợp chất số kh n phân c c) N ợc lại, EEP số c c p k ch nh tron khoản t n ph t (c c hợp chất phân c c) Sắc k c mẫu số v (tr n c c o v c ph ) v mẫu số l t ơn t nh u C c ỉnh số ợc qu n s t tron khoản t n ph t (c c hợp chất phân c c) tron khoản t 35 n 45 ph t (c c hợp chất kh n phân c c) - Đối v i k o on th ơn mại Đại học Nguyễn Tất Thành Phân t ch HPLC c k o on th ơn mại ần iốn v i k o on Ph p Tuy nhi n, hiệu suất chi t xuất c t k o on thấp so v i k o on Ph p ã n hi n cứu tr c ây (11,8% so v i 68,4%)[12] K t c c c thử n hiệm l vonoi to n phần cho t v ịch chi t t ơn ứn l 582 ± 5,4m CE v 457 ± 5,6m CE ịch chi t kh Phân t ch sắc k l sh c chi t xuất th nol c k o on th ơn mại ạn t thu ợc 14 phân oạn, phân t ch HPLC MS v NMR c tron số i p x c ịnh m t số hợp chất c k o on n y: ci nzoic, v l vonoi (pinostro in, pinoc m rin, t ctochrysin) Ki n n hị N hi n cứu v k o on E wy n ợc ti p tục v i mục ch x c ịnh th nh phần c c hợp chất ( phần kh n phân c c v m t số polyph nol); m t kh c l t m ki m n u n ốc th c vật c c c mẫu n y v nh i c c hoạt t nh sinh học, c iệt l hoạt t nh chốn un th N o i r , v i ý t ởn t sản phẩm k o on x nh c Br zil, nh m n hi n cứu ti p tục t i v i mon muốn tạo r sản phẩm k o on nhiệt i cho t c ụn phòn chốn un th Lời cám ơn N hi n cứu n y ợc t i trợ ởi Quĩ Ph t tri n Kho học v C n n hệ Tr ờn Đại học N uyễn Tất Th nh, mã số t i 18 32 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 65 Tài liệu tham khảo Elnakady, Yasser A., et al "Characteristics, chemical compositions and biological activities of propolis from Al-Bahah, Saudi Arabia." Scientific reports (2017): 41453 El Hady, Faten K Abd, and Ahmed G Hegazi "Egyptian propolis: Chemical composition, antiviral and antimicrobial activities of East Nile Delta propolis." Zeitschrift für Naturforschung C57.3-4 (2002): 386-394 Acikelli, Ali Haydar, et al "Flavonoids isolated from Caribbean propolis show cytotoxic activity in human cancer cell lines." International journal of clinical pharmacology and therapeutics 51.1 (2013): 51-53 Aghel, Sara, et al "Effect of Iranian propolis on salivary total antioxidant capacity in gamma-irradiated rats." Journal of dental research, dental clinics, dental prospects 8.4 (2014): 235 Ali, Fatma H., Gehan M Kassem, and Osama A Atta-Alla "Propolis as a natural decontaminant and antioxidant in fresh oriental sausage." Veterinaria italiana 46.2 (2010): 167-172 Alvareda, Elena, et al "196 Antiinflamatory activity of phenolic compounds extracted from Uruguayan propolis and grape." Journal of Biomolecular Structure and Dynamics 33.sup1 (2015): 129-129 Noori, A L., et al "Synergistic effects of honey and propolis toward drug multi-resistant Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans isolates in single and polymicrobial cultures." International journal of medical sciences 9.9 (2012): 793 Amoros, M., et al "Comparison of the anti-herpes simplex virus activities of propolis and 3-methyl-but-2-enyl caffeate." Journal of natural products 57.5 (1994): 644-647 Aso, Keiko, et al "Inhibitory effect of propolis on the growth of human leukemia U937." Biological and Pharmaceutical Bulletin 27.5 (2004): 727-730 10 Bankova, V., et al "Antibacterial diterpenic acids from Brazilian propolis." Zeitschrift für Naturforschung C 51.5-6 (1996): 277-280 11 Barud, Hernane da Silva, et al "Antimicrobial Brazilian propolis (EPP-AF) containing biocellulose membranes as promising biomaterial for skin wound healing." Evidence-based complementary and alternative medicine 2013 (2013) 12 Bazvand, Leila, et al "Antibacterial effect of triantibiotic mixture, chlorhexidine gel, and two natural materials Propolis and Aloe vera against Enterococcus faecalis: An ex vivo study." Dental research journal 11.4 (2014): 469 13 Brumfitt, W., J M Hamilton-Miller, and I Franklin "Antibiotic activity of natural products: Propolis." Microbios 62.250 (1990): 19-22 14 Nguyen, Hai Xuan, et al "A New Alkenylphenol from the Propolis of Stingless Bee Trigona minor." Natural Product Communications 13.1 (2018): 1934578X1801300121 Isolation, quantification of the active pharmaceutical compounds in propolis in Vietnam’s rainforests Tran Thi My Kieu*, Hoang Thi Thoa, Do Thi Bich Ngoc Nguyen Tat Thanh University * ttmkieu@ntt.edu.vn Abstract Introduction: Propolis is a natural resin, collected by honeybees (Apis mellifera) from buds of different plants, added with beewax and salivary secretions, in order to repair and disinfect the beehive Firstly, the diversity of propolis in tropical areas led us to explore the chemical compositions of Vietnam propolis, especially five samples from Eawy The one rom Europ h n unusu l ch mic l composition ( l vonoi s, ph nolic ci s n st rs) ssoci t with “pol r” typ propolis The five other propolis extracts showed the presence of major apolar compounds and different minor polyphenols Materials and methods: A fractionation by Flash chromatography of the ethanolic extract of Eawy propolis resulted in14 fractions, of which were analysed by dereplication (HPLC/UV and HPLC/MS) Results: One of the major compounds of this kind of propolis was purified and analysed by proton NMR It is a flavanone namely pinocembrine Keywords Eawy propolis, chemical compositions, flash chromatography, HPLC-MS Đại học Nguyễn Tất Thành ... li tâm 13 rpm tron ph t tr c ti m mẫu (1 µl) Đại học Nguyễn Tất Thành 3.1 Chi t xuất 3.1.1 Keo ong thô Hiệu suất c a chi t xuất keo ong châu Âu khoảng 70% Các mẫu kh c c năn suất EEP t 23 n 47%... thảo luận phần k t luận d a giá trị c a keo ong Cooper (ở phần cuối báo cáo này) 3.4 Sắc kí lỏng hiệu năn c o Sắc k c a mẫu EEP keo ong châu Âu dịch chi t c a k o on th ơn mại l t ơn t Các peak... lên Ở nhiệt thấp hơn, keo ong trở nên cứng giịn Th c t , q trình thu thập mật hoa phấn hoa, ong mật cũn ng thời thu thập nh a t ch i cây, hoa khác khu v c sinh sống c ch n S u , nh a ợc ong mật