nghiên cứu phân biệt về thực vật và hóa học của một số loài lysimachia l dùng làm thuốc tại việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ NGỌC VĂN NGHIÊN CỨU PHÂN BIỆT VỀ THỰC VẬT VÀ HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI Lysimachia L DÙNG LÀM THUỐC TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ NGỌC VĂN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGHIÊN CỨU PHÂN BIỆT VỀ THỰC VẬT VÀ HĨA HỌC CỦA MỘT SỐ LỒI Lysimachia L DÙNG LÀM THUỐC TẠI VIỆT NAM CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Viết Thân TS Nguyễn Quang Hưng HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi lời cảm ơn sâu sắc chân thành đến PGS.TS Nguyễn Viết Thân – Giảng viên môn Dược liệu, TS Nguyễn Quang Hưng – Viện sinh thái tài nguyên sinh vật, người thầy tận tình dìu dắt, hướng dẫn truyền đạt kinh nghiệm nghiên cứu cho tơi q trình thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới NCS Nguyễn Thanh Tùng – Giảng viên mơn Dược liệu, Ban giám hiệu, Phịng đào tạo sau đại học, thầy cô, anh chị kỹ thuật viên, bạn sinh viên môn Dược liệu giúp đỡ tận tình trình học tập, nghiên cứu trường Lời cuối xin bày tỏ lòng biết ơn đến anh chị, bạn bè đồng nghiệp ln khuyến khích, động viên giúp đỡ sống, công việc học tập Nghiên cứu tài trợ quỹ Phát triển khoa học công nghệ quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 106.03-2018.06 Hà Nội, Ngày 15 tháng 04 năm 2020 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ…………………………………………………………………… CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại, phân bố đặc điểm thực vật chi Lysimachia L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Lysimachia L 1.1.2 Đặc điểm phân bố chi Lysimachia L 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Lysimachia L 1.1.4 Các loài Lysimachia L có Việt Nam 1.2 Thành phần hóa học lồi Lysimachia L Việt Nam 14 1.2.1 Nhóm hợp chất Flavonoid 15 1.2.2 Nhóm hợp chất saponin 20 1.2.3 Các hợp chất thuộc nhóm khác 25 1.3 Cơng dụng lồi thuộc chi Lysimachia L 30 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.2 Phương tiện nghiên cứu 32 2.2.1 Thuốc thử, dung môi, hóa chất: 32 2.2.2 Phương tiện máy móc: 33 2.3 Phương pháp nghiên cứu 33 2.3.1 Nghiên cứu phân biệt đặc điểm hình thái thực vật 33 2.3.1.1 Phân tích đặc điểm hình thái thực vật mẫu nghiên cứu 33 2.3.1.2 Giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu 33 2.3.2 Nghiên cứu phân biệt đặc điểm hiển vi 34 2.3.2.1 Nghiên cứu giải phẫu thực vật 34 2.3.2.2 Nghiên cứu đặc điểm bột 34 2.3.3 Nghiên cứu phân biệt hóa học lồi Lysimachia L 34 2.3.3.1 Định tính nhóm chất hữu dược liệu phản ứng hóa học 34 2.3.3.2 Triển khai sắc ký lớp mỏng dịch chiết loài Lysimachia L thu hái Việt Nam 35 2.3.3.3 Định lượng polyphenol toàn phần dược liệu 36 2.3.3.4 Bán định lượng kaempferol loài L insignis Hemsl HPTLC 37 2.3.3.5 Bán định lượng myricetin loài L congestiflora Hemsl HPTLC 39 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 39 3.1 Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu 40 3.2 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi loài Lysimachia L 45 3.2.1 Đặc điểm giải phẫu (thân, lá) loài nghiên cứu 45 3.2.2 Đặc điểm bột loài nghiên cứu 50 3.3 Nghiên cứu hóa học loài Lysimachia L thu hái 54 3.3.1 Định tính nhóm chất hữu dược liệu phản ứng hóa học 54 3.3.2 Triển khai SKLM dịch chiết loài Lysimachia L 55 3.3.3 Định lượng polyphenol toàn phần dược liệu 57 3.3.4 Bán định lượng kaempferol loài L insignis Hemsl HPTLC 58 3.3.5 Bán định lượng myricetin loài L congestiflora Hemsl HPTLC 61 CHƯƠNG BÀN LUẬN 65 KẾT LUẬN 67 KIẾN NGHỊ 70 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT HPTLC P/ư TT L High performance thin layer chromatograph (Sắc ký lớp mỏng hiệu cao) Phản ứng Thuốc thử Lysimachia DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình Hình 1.1 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học keampferol, quercetin myricetin Cơng thức saponin nhóm olean-12-en nhóm 13β,28-eopxy oleanan Trang 15 21 Hình 3.1 Đặc điểm thực vật lồi L insignis Hemsl 41 Hình 3.2 Đặc điểm thực vật lồi L decurrens G Forst 42 Hình 3.3 Đặc điểm thực vật lồi L congestiflora Hemsl 43 Hình 3.4 Vi phẫu thân L insignis Hemsl 46 Hình 3.5 Vi phẫu L insignis Hemsl 46 Hình 3.6 Vi phẫu thân L decurrens G Forst 48 Hình 3.7 Vi phẫu L decurrens G Forst 48 Hình 3.8 Vi phẫu thân L congestiflora Hemsl 49 Hình 3.9 Vi phẫu L congestiflora Hemsl 49 Hình 3.10 Một số đặc điểm bột lồi L insignis Hemsl 51 Hình 3.11 Một số đặc điểm bột lồi L decurrens G Forst 52 Hình 3.12 Một số đặc điểm bột lồi L congestiflora Hemsl 53 Sắc kí đồ dịch chiết lồi Lysimachia L với hệ Hình 3.13 dung môi: Toluen – Ethyl acetat – Acid formic 56 (14:10:1) Sắc kí đồ dịch chiết lồi Lysimachia L với hệ Hình 3.14 dung mơi: Toluen – Ethyl acetat – Acid formic 56 (5:5:1) Sắc kí đồ dịch chiết lồi Lysimachia L với hệ Hình 3.15 dung môi: Ethylacetat - acid formic - acid acetic băng - 57 nước (100:11:11:26) Hình 3.16 Sắc kí đồ định lượng kaempferol L insignis Hemsl 59 Đồ thị pic hấp thụ UV Kaempferol chuẩn chụp Hình 3.17 bước sóng 366nm sau phun thuốc thử NP/PEG (Rf = 59 0,57) Hình 3.18 Hình 3.19 Hình 3.20 Hình 3.21 Hình 3.22 Hình 3.23 Hình 3.24 Đồ thị biểu diễn độ đặc hiệu độ chọn lọc phương pháp Đồ thị 3D biểu diễn diện tích pic sắc kí mẫu thử mẫu chuẩn Đồ thị đường chuẩn kaempferol Sắc kí đồ định lượng myricetin L congestiflora Hemsl Đồ thị pic hấp thụ UV myricetin chuẩn bước sóng 366nm sau phun thuốc thử NP/PEG (Rf= 0,30) Đồ thị biểu diễn độ đặc hiệu độ chọn lọc phương pháp Đồ thị 3D biểu diễn diện tích pic sắc kí mẫu thử 60 60 61 62 62 63 63 mẫu chuẩn Hình 3.25 Đồ thị đường chuẩn myricetin 64 DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Bảng 1.1 Bảng 1.2 Bảng 1.3 Bảng 1.4 Bảng 3.1 Các hợp chất flavonoid phân lập từ loài Lysimachia L Việt Nam Những hợp chất saponin phân lập từ loài Lysimachia L Việt Nam Các hợp chất khác phân lập từ chi Lysimachia L Việt Nam Các loài Lysimachia L dùng làm thuốc Việt Nam So sánh khác đặc điểm hình thái loài Lysimachia L Trang 15 21 26 30 44 So sánh khác đặc điểm giải phẫu loài Bảng 3.2 L insignis Hemsl., L decurrens G Forst., L 50 congestiflora Hemsl Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 So sánh khác đặc điểm bột loài Lysimachia L Kết định tính nhóm chất lồi Lysimachia L Kết định lượng polyphenol toàn phần dược liệu 54 54 58 ĐẶT VẤN ĐỀ Chi Trân Châu (Lysimachia L.) chi thực vật thuộc họ Anh thảo (Primulaceae Vent.) với 180 loài, phân bố chủ yếu vùng ôn đới nhiệt đới Bắc bán cầu [46] Trước năm 2005, Việt Nam có 17 loài thuộc chi Lysimachia L ghi nhận [6] năm gần đây, công bố thêm loài thuộc chi bao gồm: L vietnamensis L K Phan & C M Hu, L vittifomis F H Chen & C M Hu, L verbascifolia C M Hu & K L Phan [30], [31] Như vậy, nước ta có 20 lồi thuộc chi Lysimachia L Các loài chi Lysimachia L Việt Nam từ lâu sử dụng dân gian làm thuốc với nhiều công dụng khác như: Trân châu ba (L baviensis C M Hu) dùng để chữa thấp nhiệt, hoàng đản, tiểu tiện bất lợi, bạch đới, băng lậu [4], [10], [11], Trân châu đứng (L decurrens G Forst.) dùng để chữa đòn ngã [4], [10], [11], hay Trân châu ba (L insignis Hemsl.) dùng để chữa tê thấp, cao huyết áp [4], [10], [11], Trân châu hoa chụm (L congestiflora Hemsl.) dùng để chữa viêm gan, ho nhiều đờm [4], [10], [11]… Các tác dụng ghi lại nhiều tài liệu Việt Nam “Danh lục thuốc Việt Nam” (Viện dược liệu), “Từ điển thuốc Việt Nam” (Võ Văn Chi) Ở nước giới Trung Quốc, loài Lysimachia L sử dụng làm thuốc chữa bệnh [20], [26], [29], loài L christinae Hance đưa vào Dược điển Trung Quốc [12] Mặc dù sử dụng y học dân gian từ lâu, nhiên thông tin đặc điểm hình thái, giải phẫu thành phần hóa học lồi thuộc chi Lysimachia L Việt Nam hạn chế Cụ thể, 20 lồi Lysimachia L có Việt Nam, có loài bao gồm L clethroides Duby, L fortunei Maxim., L candida Lindl., L congestiflora Hemsl., L sikokiana Miq nghiên cứu nhóm nghiên cứu giới; Việt Nam chưa có nghiên cứu cơng bố Các thơng tin lồi Lysimachia L Việt Nam mô tả sơ đặc điểm hình thái cơng dụng số tài liệu Trong nhiều trường hợp khó phân biệt lồi dạng tươi phơi khơ, điều dẫn đến việc gặp khó khăn thu hái xác định lồi thuộc chi Chính vậy, nhằm cung cấp thêm thông tin khoa học giúp cho việc nhận biết phân biệt loài thuộc chi Lysimachia L., hướng tới việc hiểu biết sử dụng loài thuộc chi cách nhất, tiến hành đề tài “Nghiên cứu phân biệt thực vật hóa học số lồi Lysimachia L dùng làm thuốc Việt Nam” với nội dung chính: Mơ tả đặc điểm hình thái giám định tên khoa học số loài Lysimachia L dùng làm thuốc thu hái Việt nam Phân biệt đặc điểm hiển vi loài Lysimachia L thu hái được: đặc điểm vi phẫu bột dược liệu Phân biệt hóa học lồi Lysimachia L thu hái Định tính nhóm chất phản ứng hóa học, triển khai sắc kí lớp mỏng dịch chiết dược liệu, định lượng số thành phần lồi sắc kí lớp mỏng hiệu cao 31 Phan Ke Lộc, Chi‐Ming Hu (2011), "Lysimachia vietnamensis and L verbascifolia spp nov.(Primulaceae) from Vietnam", Nordic Journal of Botany, 29(5), pp 601-604 32 Sunita Maurya, Dhananjay Singh (2010), "Quantitative Analysis of Total PhenolicContent in Adhatoda vasica Nees Extracts", International Journal of PharmTech Research, 2(4), pp 2403-2406 33 Sweta Tiwari, et al (2011), "Quantitative analysis of glycyrrizic acid by HPTLC in herbal formulation", Asian Journal of Pharmacy & Life Science, 1(2), pp 124-127 34 Takhtajan Armen (2009), Flowering Plants, Springer, pp.212-216 35 The Editorial Committee of State Administration of Chinese Medicine of Chinese Materia Medica (2006), "The Editorial Committee of State Administration of Chinese Medicine of Chinese Materia Medica", Chinese Materia Medica 36 Wan Jin-Fu, et al (2011), "Chemical Constituents from Lysimachia clethroides", Natural Product Research and Development, 23, pp 59-62 37 Wang Ding-yong, Liu En-gui, Feng Yu-jing (2007), "Study on the Chemical Constituents of Lysimachia congestiflora [J]", Subtropical Plant Science, 36(02), pp 19-21 38 Wei Jin-feng, et al (2017), "Flavonoids in different parts of Lysimachia clethroides duby extracted by ionic liquid: analysis by HPLC and antioxidant activity assay", Journal of Chemistry, 2017, pp 1-10 39 Xia Xin, Wei Xiaoyi, Lin Lidong (2013), "Triterpenoid saponins from Lysimachia candida Lindl", Pharmacognosy Journal, 5(3), pp 119-122 40 Xia Xin, Liu MeiFang, Lin LiDong (2014), "Flavonoid metabolites from Lysimachia fortunei Maxim", Journal of Tropical and Subtropical Botany, 22(1), pp 93-95 41 Xu QM, et al (2010), "Isolation and Identification of 3-Op-Coumaroyloxyl Pentacyclic Triterpenoids from Lysimachia clethroides Duby", Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 45, pp 825-828 42 Yasukawa Ken, Sekine Hitoshi, Takido Michio (1989), "Two flavonol glycosides from Lysimachia fortunei", Phytochemistry, 28(8), pp 22152216 43 Zhang Shu-Lin, et al (2018), "Oleanane-type triterpenoid saponins from Lysimachia fortunei Maxim", Phytochemistry, 147, pp 140-146 44 Zhang Xiaorong, et al (1999), "Saponins from Lysimachia candida", Acta Botanica Sinica, 41(5), pp 534-536 45 Zhang XR, et al (1999), "Studies on the constituents of Lysimachia congestiflora", Acta pharmaceutica sinica, 34, pp 838-840 46 Zhengyi Wu, et al (1996), Flora of China, Science Press, Beijing, and Missouri Botanical Garden Press, St Louis, vol 15, pp.39-77 47 Zhu Shenqin, Liu Yamin, Huang Xin'an (2000), "Studies on the Constituents in Lysimachia Congestiflora", Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology (5) Tiếng Trung 48 Yue SM, et al (2011), "Chemical Constituents of Lysimachia clethroides Duby", Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 46, pp 341-343 49 Zhang Xiao-Rong, et al (2002), "A new triterpenoid saponin from Lysimachia candida", Chinese Traditional and Herbal Drugs, 33(6), pp 481-483 50 Zhang Xiaorong, et al (1998), "chemical constituents of Lysimachia candida [J]]", Chinese journal of applied and environmental biology, Tiếng Pháp 51 Chi - Ming Hu, Pham Hoang Hô (1992), Flore du cambodge du Laos et du Viêtnam, Muséum national D'histoire naturelle, pp.116-142 PHỤ LỤC Phụ lục Tiêu thực vật L insignis Hemsl Phụ lục Tiêu thực vật loài L decurrens G Forst Phụ lục Tiêu thực vật loài L congestiflora Hemsl Phụ lục Kết giám định tên khoa học loài L insignis Hemsl Phụ lục Kết giám định tên khoa học loài L decurrens G Forst Phụ lục Kết giám định tên khoa học loài L congestiflora Hemsl Phụ lục Các phản ứng hóa học dùng để định tính nhóm chất hữu dược liệu Phụ lục Tiêu thực vật L insignis Hemsl Phụ lục Tiêu thực vật loài L decurrens G Forst Phụ lục Tiêu thực vật loài L congestiflora Hemsl Phụ lục Kết giám định tên khoa học loài L insignis Hemsl Phụ lục Kết giám định tên khoa học loài L decurrens G Forst Phụ lục Kết giám định tên khoa học loài L congestiflora Hemsl Phụ lục Các phản ứng hóa học dùng để định tính nhóm chất hữu dược liệu 7.1 Định tính glycosid tim: Cho 20 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 250 ml, thêm 60 ml ethanol 25 %, lắc đều, ngâm 24 Lọc lấy dịch chiết, loại tạp (chất nhầy, chất nhựa) chì acetat 30% để dư Để lắng, lọc Loại chì acetat thừa dung dịch Na2SO4 bão hịa đến khơng cịn tủa với Na 2SO4 Lọc lấy dịch lọc vào bình gạn Lắc kỹ lần với hỗn hợp cloroform - ethanol (4:1), lần 20 ml, để lắng, gạn lấy dịch chiết, loại nước cách lọc qua Chia dịch chiết vào ống nghiệm sấy khô, đem cô cách thủy đến khô Cắn thu để làm phản ứng định tính - Phản ứng Liebermann – Burchardt (phản ứng khung steroid): Cho vào ống nghiệm có chứa cắn dược liệu 1ml anhydrid acetic, lắc cho tan hết cắn Nghiêng ống 450 Cho từ từ theo thành ống 0,5 ml acid H2SO4 đặc, tránh xáo trộn chất lỏng ống Nếu mặt tiếp xúc hai lớp chất lỏng xuất vịng màu tím đỏ; lớp chất lỏng phía có màu hồng, lớp có màu xanh Phản ứng dương tính - Phản ứng Baljet (phản ứng vòng lacton cạnh): + Pha thuốc thử Baljet: Cho vào ống nghiệm to phần dung dịch acid picric 1% phần dung dịch NaOH 10% Lắc + Cho vào ống nghiệm có chứa cắn dược liệu 0,5 ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Nhỏ giọt thuốc thử Baljet pha xuất màu đỏ cam phản ứng dương tính - Phản ứng Legal: Cho vào ống nghiệm có chứa cắn dược liệu 0,5 ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Nhỏ giọt thuốc thử natrinitroprussiat 0,5% giọt dung dịch NaOH 10% Lắc thấy xuất màu đỏ cam phản ứng dương tính - Phản ứng Keller-Kiliani (Phản ứng phần đường 2,6 – desoxy): Cho vào ống nghiệm chứa cắn dược liệu 0,5 ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Thêm vài giọt dung dịch sắt III chlorid 5% pha acid acetic Lắc Nghiêng ống 450 Cho từ từ theo thành ống 0,5 ml acid sulphuric đặc, tránh xáo trộn chất lỏng ống nghiệm Nếu mặt tiếp xúc hai lớp chất lỏng xuất vòng màu tím đỏ; lắc nhẹ, lớp chất lỏng phía có màu xanh phản ứng dương tính 7.2 Định tính alcaloid: Cho khoảng 10g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100 ml, thấm ẩm dung dịch amoniac đặc, đậy kín bình 30 phút Cho thêm 15 ml cloroform, lắc đều, ngâm 12 Lọc lấy dịch chiết cho vào bình gạn Sau chiết lỏng-lỏng lần, lần với 10 ml dung dịch H2SO4 1N Để phân lớp, gạn lấy dịch chiết acid, cho vào ống nghiệm, ống ml dịch chiết acid + Ống 1: ml dịch chiết + giọt TT Mayer + Ống 2: ml dịch chiết + giọt TT Bouchardat + Ông 3: ml dịch chiết + giọt TT Dragendorff Phản ứng dương tính ống nghiệm xuất tủa 7.3 Định tính saponin: Quan sát tượng tạo bọt: Cho 0,5 g bột dược liệu vào ống nghiệm có dung tích 20 ml, thêm vào ml nước cất, đun sơi nhẹ, lọc nóng qua bơng vào ống nghiệm có dung tích 20 ml, thêm ml nước cất Bịt ống nghiệm ngón tay cái, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc phút, để yên quan sát Nếu bọt cịn bền vững sau 15 phút sơ kết luận dược liệu có chứa saponin 7.4 Định tính anthranoid: Phản ứng Borntraeger: Lấy 3g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100ml, thêm 50 ml dung dịch H2SO4 10% Đun cách thủy sôi 15 phút Lọc nóng vào bình gạn Để nguội lắc với 5ml cloroform Gạn lớp cloroform để làm phản ứng Cho vào ống nghiệm ml dịch chiết cloroform, thêm ml dung dịch NaOH 10% Lắc nhẹ Phản ứng dương tính lớp nước có màu đỏ sim 7.5 Định tính flavonoid: Cho 5g bột dược liệu vào bình nón 250 ml, thêm 100 ml ethanol 90%, đun cách thủy 10 phút, lọc nóng Dùng dịch lọc để làm phản ứng - Phản ứng với kiềm: Phản ứng với amoniac: Nhỏ giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, sấy khô, quan sát ánh sáng thường thấy có màu vàng, sau hơ miệng lọ amoniac đặc, màu vàng tăng lên Phản ứng với NaOH: cho vào ống nghiệm ml dịch chiết, thêm vài giọt dung dịch NaOH 10% Phản ứng dương tính dịch chiết chuyển từ vàng sang vàng đậm, thêm 1ml nước cất tủa tan màu vàng dung dịch tăng thêm - Phản ứng Cyanidin: Cho ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm bột magie kim loại, nhỏ từ từ 4-5 giọt acid HCl đậm đặc Phản ứng dương tính dung dịch có màu từ hồng đến đỏ - Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%: Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 23 giọt dung dịch FeCl3 5%, lắc nhẹ Phản ứng dương tính dịch chiết chuyển sang màu xanh đen - Phản ứng Diazo: Cho ml dịch chiết vào ống nghiệm, kiềm hóa NaOH 10% Thêm vài giọt TT Diazoni, lắc đều, đun cách thủy vài phút phản ứng dương tính dung dịch xuất màu đỏ 7.6 Định tính coumarin: Cho 3g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100 ml, thêm 30 ml ethanol 90% Đun cách thủy sôi phút Lọc nóng Dịch lọc thu để làm phản ứng - Phản ứng mở, đóng vịng lacton: cho vào hai ống nghiệm mối ống ml dịch chiết cồn Ống 1: Thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10% Ống 2: Để nguyên Đun sôi hai ống nghiệm, để nguội Quan sát có tượng sau dương tính: Ống 1: Dung dịch có tủa vàng tủa đục có màu vàng Ống 2: Trong Thêm vào hai ống nghiệm, ống ml nước cất Lắc đều, thấy: Ống 1: Trong suốt Ống 2: Có tủa đục Acid hóa ống vài giọt HCl đặc, ống trở lại đục ống - Quan sát huỳnh quang vết coumarin ánh sáng tử ngoại sau tác dụng với dung dịch kiềm: Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy thấm Nhỏ tiếp vài giọt NaOH 5%, sấy nhẹ Che phần diện tích dịch chiết giấy lọc miếng kim loại (chìa khóa, đồng xu…) chiếu tia tử ngoại vài phút Bỏ miếng kim loại ra, quan sát tiếp đèn tử ngoại thấy: phần không bị che có huỳnh quang sáng phần bị che Nếu tiếp tục chiếu tia tử ngoại, phần bị che sáng dần lên Sau vài phút, hai phần phát quang 7.7 Định tính tanin: Cho vào ống nghiệm lớn g bột dược liệu, thêm 10ml nước cất, đun sôi trực tiếp phút Lọc qua giấy lọc gấp nếp Lấy dịch lọc làm phản ứng sau: - Ống 1: ml dịch lọc, thêm giọt FeCl3 5% Phản ứng dương tính xuất tủa xanh đen - Ống 2: ml dịch lọc, thêm giọt chì acetat 10% Phản ứng dương tính xuất tủa bơng - Ống 3: ml dịch lọc, thêm giọt dung dịch gelatin 1% Phản ứng dương tính xuất tủa trắng ... flavonoid phân l? ??p từ loài Lysimachia L Việt Nam Những hợp chất saponin phân l? ??p từ loài Lysimachia L Việt Nam Các hợp chất khác phân l? ??p từ chi Lysimachia L Việt Nam Các loài Lysimachia L dùng. .. Duby [23] L clethroides Duby [23] L clethroides Duby [23], L fortunei Maxim [43] L lobeliloides Wall [22] L lobeliloides Wall [22] L lobeliloides Wall [22] L lobeliloides Wall [22] L clethroides... khoa học số loài Lysimachia L dùng l? ?m thuốc thu hái Việt nam Phân biệt đặc điểm hiển vi loài Lysimachia L thu hái được: đặc điểm vi phẫu bột dược liệu Phân biệt hóa học l? ??i Lysimachia L thu