Xác định một số dạng selen bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép nối khối phổ nguồn plasma cảm ứng cao tần (HPLC-ICP-MS)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Ngơ Q Trung XÁC ĐỊNH MỘT SỐ DẠNG SELEN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO GHÉP NỐI KHỐI PHỔ NGUỒN PLASMA CẢM ỨNG CAO TẦN (HPLC-ICP-MS) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Ngơ Q Trung XÁC ĐỊNH MỘT SỐ DẠNG SELEN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO GHÉP NỐI KHỐI PHỔ NGUỒN PLASMA CẢM ỨNG CAO TẦN (HPLC-ICP-MS) Chun ngành: Hố phân tích Mã số: 8440112.03 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS CHU ĐÌNH BÍNH TS NGUYỄN THỊ KIM THƯỜNG LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nội dung luận văn cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn TS Chu Đình Bính TS Nguyễn Thị Kim Thường Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ ràng nguồn gốc Tác giả luận văn LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu tài trợ Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số: 104.04-2017.19 Lời em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới hai người hướng dẫn giúp em hoàn thành đề tài luận văn TS Chu Đình Bính TS Nguyễn Thị Kim Thường Em xin trân trọng cảm ơn Th.S Nguyễn Mạnh Hà tạo điều kiện giúp đỡ em trình sử dụng hệ máy HPLC ghép nối ICP-MS phòng máy- Khoa hoá học, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô phụ trách phịng thí nghiệm, thầy làm việc phịng thí nghiệm hố phân tích tạo điều kiện giúp đỡ em trình làm luận văn thạc sĩ Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè luôn quan tâm, khích lệ, động viên em suốt q trình học tập nghiên cứu Xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 28/11/2018 Học viên cao học Ngơ Q Trung MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1.Tổng quan selen 1.1.1 Tính chất lý, hoá selen 1.1.2 Các dạng tồn chuyển hố dạng selen mơi trường .4 1.1.3 Độc tính, ứng dụng ảnh hưởng selen đến sức khoẻ người 1.1.3.1 Độc tính selen 1.1.3.2 Ứng dụng selen 1.1.3.3 Ảnh hưởng selen đến sức khoẻ người 10 1.2 Các phương pháp xác định selen 11 1.2.1 Các phương pháp phân tích selen tổng số .11 1.2.1.1 Phương pháp phân tích quang phổ hấp thụ phân tử 11 1.2.1.2 Phương pháp phân tích điện hố 12 1.2.1.3 Phương pháp khối phổ (MS) 13 1.2.1.4 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 13 1.2.1.5 Phương pháp quang phổ phát xạ nguyên tử (AES) 13 1.2.2 Các phương pháp tách detector phát phân tích dạng Se 14 1.2.3 Các phương pháp phân tích dạng Se .14 1.2.3.1 Phương pháp động học xúc tác trắc quang 14 1.2.3.2 Phương pháp Von-Ampe hoà tan sử dụng điện cực HMDE 15 1.2.3.3 Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao ghép nối với hệ quang phổ hấp thụ nguyên tử sử dụng kĩ thuật hydrua hóa (HPLC-HG-AAS) 17 1.2.3.4 Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao ghép nối với hệ quang phổ phát xạ nguyên tử sử dụng kĩ thuật hydrua hóa (HPLC-HG-AFS) 17 1.2.3.5 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ghép nối plasma cao tần cảm ứng - phổ khối (HPLC-ICP-MS) 18 1.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ghép nối plasma cao tần cảm ứng phổ khối (HPLC-ICP-MS) phân tích dạng selen 18 1.3.1 Giới thiệu phương pháp HPLC-ICP-MS 18 1.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến cường độ tín hiệu selen phân tích dạng 20 1.3.2.1 Ảnh hưởng cácbon tới cường độ tín hiệu Se phân tích dạng .20 1.4 Một số cơng trình phân tích dạng Se Việt Nam Thế Giới 25 1.5 Kết luận 26 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 27 2.1 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị .27 2.1.1 Hóa chất 27 Pha dung dịch chuẩn 27 2.1.2 Dụng cụ 29 2.1.3 Thiết bị 29 2.2 Phương pháp nghiên cứu 31 2.2.2 Phương pháp lấy mẫu, chuẩn bị mẫu 32 2.2.3 Phương pháp phân tích mẫu 32 2.3 Thực nghiệm 33 2.3.1 Khoảng tuyến tính, LOD, LOQ 33 2.3.2 Đánh giá độ xác, độ độ chụm phương pháp .34 2.3.3 Chiết mẫu thực, lựa chọn dung môi, đánh giá hiệu suất thu hồi .34 2.3.4 Ứng dụng phân tích dạng selen mẫu dược phẩm thực phẩm chức 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Tách xác định dạng selen 38 3.1.1 Tối ưu điều kiện phân tích Se ICP-MS 38 3.1.1.1 Công suất nguồn cao tần cảm ứng plasma .38 3.1.1.2 Tốc độ tạo sol khí .40 3.1.1.3 Thế thấu kính hội tụ ion 41 3.1.2 Kết khảo sát, lựa chọn điều kiện tách tối ưu 43 3.1.2.1 Lựa chọn cột sắc kí 43 3.1.2.2 Tối ưu thành phần pha động pH 44 3.1.2.3 Ảnh hưởng tốc độ pha động chương trình gradient rửa giải pha động .49 3.1.2.4 Ảnh hưởng thành phần pha động tới tín hiệu phân tích dạng Se .53 3.1.3 Các đại lượng đặc trưng phân tích dạng Se 56 3.1.3.1 Xác định thời gian lưu dạng Se 56 3.1.3.2 Khoảng tuyến tính đại lượng đặc trưng phương pháp phân tích 57 3.1.4 Đánh giá độ lặp lại thiết bị .61 3.1.5 Độ thu hồi 63 3.2 Kết phân tích định lượng dạng selen mẫu dược phẩm thực phẩm chức giàu selen .65 3.2.1 Hàm lượng selen tổng số 65 3.2.2 Hàm lượng dạng selen 66 CHƯƠNG KẾT LUẬN .68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 PHỤ LỤC 77 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Tính chất vật lý selen Bảng 1.2 Các dạng thường gặp selen Bảng 1.3 Một số hợp chất selen độc tính (thí nghiệm chuột) Bảng 1.4 Một số thực phẩm giàu selen Bảng 1.5 Lượng selen cho phép theo độ tuổi 10 Bảng 1.6 Một số phương pháp phân tích dạng selen .16 Bảng 1.7 Xác suất phản ứng chuyển điện tích mảnh có chứa cácbon nguyên tố khó ion hóa 24 Bảng 2.1 Bảng pha dung dịch chuẩn gốc 28 Bảng 2.2 Chương trình phá mẫu đo tổng Se lị vi sóng 36 Bảng 3.1 Tương quan tín hiệu cơng suất ICP-MS với cường độ tín hiệu Se .39 Bảng 3.2 Ảnh hưởng tốc độ tạo sol khí với cường độ tín hiệu Se 40 Bảng 3.3 Tín hiệu phân tích phụ thuộc vào thấu kính ion 42 Bảng 3.4 Chương trình gradient dùng cho tách dạng Se hệ thống HPLC Shimadzu LC 10A 51 Bảng 3.5 Thống kê lại điều kiện tối ưu cho tách dạng Se hệ thống HPLC-ICP-MS 53 Bảng 3.6 Hiệu suất thu hồi dạng Se cột tách trao đổi anion PRP X100 56 Bảng 3.7 Tỷ số diện tích dạng Se so với nội chuẩn 58 Bảng 3.8 Diện tích pic trung bình dạng Se 58 Bảng 3.9 So sánh phương trình hồi quy với hệ số tương quan 59 Bảng 3.10 Các đại lượng đặc trưng phép phân tích dạng Se phương pháp HPLC-ICP-MS 60 Bảng 3.11 Độ lặp lại tín hiệu phân tích có không sử dụng nội chuẩn 61 Bảng 3.12 Kết đo độ lặp lại mẫu trắng thêm chuẩn 100ppb 64 Bảng 3.13 Kết đo tổng hàm lượng Se có mặt mẫu thực 65 Bảng 3.14 Kết tổng hợp dạng selen có mẫu thuốc, TPCN nấm men có sử dụng nội chuẩn 67 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Chu trình Allaway: Chuyển hố dạng Se .4 Hình 1.2 Giản đồ phân bố dạng Selen phụ thuộc oxh- khử (Eh) pH môi trường (Drever,1997) Hình 1.3 Sơ đồ hệ ghép nối HPLC-HG-AAS 17 Hình 1.4 Sơ đồ thiết bị sắc kí HPLC ghép nối với ICP-MS 19 Hình 1.5 Cường độ tín hiệu thu cho g/l 20 g/l dung dịch chứa cácbon so với dung dịch tương ứng cácbon cho nguyên tố khác so với lượng ion hóa chúng 21 Hình 1.6 Ảnh hưởng Qg cường độ tín hiệu 82 Se+ với 1% MeOH, 1%HNO3 2%MeOH công suất 1150 W, Ql 0,5 ml/phút 23 Hình 2.1 Hệ thống HPLC LC 10A ( Shimadzu, Japan ) 29 Hình 2.2 Hệ thống ICP-MS ELAN 9000 ( Perkin Elmer, Mỹ ) 30 Hình 2.3 Sơ đồ khối hệ HPLC-ICP-MS với bơm mẫu sau cột dùng để bơm nội chuẩn nghiên cứu trình xảy plama rửa giải gradient 30 Hình 2.4 Quy trình xác định tổng hàm lượng Se mẫu 35 Hình 2.5 Quy trình chiết mẫu thuốc, nấm men với PBS 36 Hình 3.1 Sự phụ thuộc tín hiệu phân tích vào cơng suất nguồn ion hóa 39 Hình 3.2 Tín hiệu phân tích Se phụ thuộc vào tốc độ khí tạo sol 41 Hình 3.3 Tín hiệu phân tích phụ thuộc vào thấu kính phép đo ICP-MS để phân tích Se .43 Hình 3.4 Sắc đồ đo chuẩn dạng Selen nồng độ 200ppb với pha động 45 (NH4)2CO3, pH=5,0 gồm kênh A= 10mM B= 100mM 45 Hình 3.5 Sắc đồ đo chuẩn dạng Selen nồng độ 200ppb với pha động 45 (NH4)2CO3, pH=9,0 gồm kênh A= 10mM B= 100mM 45 Hình 3.6 Sắc đồ đo chuẩn dạng Selen nồng độ 300ppb với pha động CH3COONH4, gồm kênh A= 25mM B= 250mM .46 Hình 3.7 Sắc đồ đo chuẩn dạng Selen nồng độ 200ppb với pha động CH3COONH4, gồm kênh A= 25mM B= 250mM .46 [30] I Ipolyi, Z Stefánka, and P Fodor (2001), “Speciation of Se(IV) and the selenoamino acids by high-performance liquid chromatography-direct hydride generation-atomic fluorescence spectrometry,” Anal Chim Acta, 435(2), 367– 375 [31] Julie Louise Gerberding, M.D, M.P.H (2003), “Toxicological profile for Selenium”, Agency for Toxic Substances and Disease Registry, U.S Department of health and human services, 30-130 [32] J Morton and Z Quinn (2009), Handbook of Hyphenated ICP-MS Applications, 2nd Edition, Agilent Technologies [33] J J Sloth, E H Larsen, S H Bügel, and S Moesgaard (2003), “Determination of total selenium and 77Se in isotopically enriched human samples by ICPdynamic reaction cell-MS”, J Anal At Spectrom, 18(4), 317–322 [34] J Zhang, X Wang, and T T Xu (2008), “Elemental selenium at nano size (Nano-Se) as a potential chemopreventive agent with reduced risk of selenium toxicity: Comparison with se-methylselenocysteine in mice,” Toxicol Science, 101(1), 22–31 [35] K L Caldwell, R L Jones, C P Verdon, J M Jarrett, S P Caudill, and J D Osterloh (2009), “Levels of urinary total and speciated arsenic in the US population: National Health and Nutrition Examination Survey 2003–2004,” J Expo Sci Environ Epidemiol, 19(1), 59–68 [36] Kraisid Tontisirin, Guy Nantel (2001), “Chapter 15: Selenium”, Human Vitamin and Mineral Requirements, Food and Nutrition Division FAO Rome, 235-248 [37] L Kozak, M Rudnicka, and P Niedzielski (2012), “Determination of Inorganic Selenium Species in Dietary Supplements by Hyphenated Analytical System HPLC-HG-AAS,” Food Anal Methods, 5(6), 1237–1243 [38] L V Papp, J Lu, A Holmgren, and K K Khanna (2007), “From Selenium to Selenoproteins: Synthesis, Identity, and Their Role in Human Health,” Antioxid Redox Signal, 9(7), 775–806 72 [39] M H Soruraddin, R Heydari, M Puladvand, and M M Zahedi (2011), “A New Spectrophotometric Method for Determination of Selenium in Cosmetic and Pharmaceutical Preparations after Preconcentration with Cloud Point Extraction,” Int J Anal Chem, 2011, 1–8, [40] M Kovačevič and W Goessler (2005), “Direct introduction of volatile carbon compounds into the spray chamber of an inductively coupled plasma mass spectrometer: Sensitivity enhancement for selenium,” Spectrochim Acta - Part B At Spectrosc, 60(9), 1357–1362 [41] M Kotrebai, M Birringer, J F Tyson, E Block, and P C Uden (2000), “Selenium speciation in enriched and natural samples by HPLC-ICP-MS and HPLC-ESI-MS with perfluorinated carboxylic acid ion-pairing agents,” Analyst, 125(1), 71–78 [42] M Mathew and B Narayana (2006), “An easy spectrophotometric determination of selenium using azure B as a chromogenic reagent,” Indian J Chem Technol, 13(5), 455–458 [43] M Matek, M Blanusa, and J Grgic (1999), “Comparison of two methods using atomic absorption spectrometry for determination of selenium in food.,” Arh Hig Rada Toksikol, 50(3), 283–288 [44] M Ochsenkühn-Petropoulou and F Tsopelas (2002), “Speciation analysis of selenium using voltammetric techniques,” Anal Chim Acta, 467(1–2), 167– 178 [45] M Stadlober, M Sager, and K J Irgolic (2001), “Identification and quantification of selenium compounds in sodium selenite supplemented feeds by HPLC-ICP-MS,” Bodenkultur, 52(4), 233–241 [46] Mei Tie, B Li, T Sun, W Guan, Y Liang, and H Li (2016), “HPLC-ICP-MS speciation of selenium in Se-cultivated Flammulina velutipes,” Arabian Journal of Chemistry, Available online 22 May 2017 [47] M Verlinden, H Deelstra, and E Adriaenssens (1981), “The determination of selenium by atomic-absorption spectrometry: A review,” Talanta, 28(9), 637–646 73 [48] N Institutes, F Sheet, and H Professionals (2018), “Introduction Sources of Selenium” [49] N V C Ralston, J Unrine, and D Wallschläger (2010), “Biogeochemistry and Analysis of Selenium and its Species,” North Am Met Counc, 1, 1–58 [50] P Allain, L Jaunault, Y Mauras, J M Mermet, and T Delaporte (1991), “Signal Enhancement of Elements Due to the Presence of Carbon-Containing Compounds in Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry,” Anal Chem., 63(14), 1497–1498 [51] P C Nascimento, C L Jost, L M de Carvalho, D Bohrer, and A Koschinsky (2009), “Voltammetric determination of Se(IV) and Se(VI) in saline samples-Studies with seawater, hydrothermal and hemodialysis fluids,” Anal Chim Acta, 648(2), 162–166 [52] P Moreno, M A Quijano, A M Gutiérrez, M C Pérez-Conde, and C Cámara (2004), “Study of selenium species distribution in biological tissues by size exclusion and ion exchange chromatagraphy inductively coupled plasma-mass spectrometry,” Anal Chim Acta, 524(1–2), 315–327 [53] P Niedzielski et al (2016), “Selenium species in selenium fortified dietary supplements,” Food Chem, 190, 454459 [54] R Inam, G Ekmekỗi, and G Somer (2000), “Differential pulse polarographic determination of selenium(IV) in whole blood using the catalytic hydrogen wave,” Talanta, 51(4), 825–830 [55] R İnam, G Somer (2000), “A direct method for the determination of selenium and lead in cow's milk by diferential pulse stripping voltammetry”, Food Chemistry, 69, 345-350 [56] Rodrigo Moreno, R.Eyes , C.Arl Suetens (1998), “Kashin–beck osteoarthropathy in rural tibet in relation to selenium and iodine status”, The new england journal of medicine, Massachusetts Medical Society, 1112-1120 [57] Royal society of chemistry (2019), “Selenium”, http://www.rsc.org/periodic-table/element/34/selenium 74 periodic table, [58] Rugayah Mohamed & Leong Wei Lee (2005), “Analysis of selenium species using cathodic stripping voltammetry”, Jurnal Teknologi, 44(C) Jun 2006, 55– 66 [59] S Design and C Examination (1998), “The new england journal of medicine selenium and iodine status” [60] Bernhard Michalke(2016), “Part II Metallomics in Environment and Nutrition”, Metallomics: Analytical Techniques and Speciation Methods, 72-165 [61] S S Kannamkumarath, K Wrobel, K Wrobel, A Vonderheide, and J A Caruso (2002), “HPLC-ICP-MS determination of selenium distribution and speciation in different types of nut,” Anal Bioanal Chem, 373(6), 454–460 [62] S Sounderajan, G K Kumar, and A C Udas (2010), “Cloud point extraction and electrothermal atomic absorption spectrometry of Se (IV)-3,3′Diaminobenzidine for the estimation of trace amounts of Se (IV) and Se (VI) in environmental water samples and total selenium in animal blood and fish tissue samples,” J Hazard Mater, 175(1–3), 666–672 [63] T Guérin et al (2011), “Determination of 20 trace elements in fish and other seafood from the French market,” Food Chem, 127(3), 934–942 [64] T Kawano et al (2005), “Determination of selenium in biological samples by slurry sampling-electrothermal vaporization-in situ fusion-isotope dilutionmicrowave- induced nitrogen plasma mass spectrometry,” Spectrochim Acta Part B At Spectrosc, 60(3), 327–331 [65] T M Bricker, F G Smith, and R S Houk (1995), “Charge transfer reactions between xenon ions and iron atoms in an argon-xenon inductively coupled plasma,” Spectrochim Acta Part B At Spectrosc, 50(11), 1325–1335 [66] Office of Dietary Supplements (ODS) (2018), Selenium Fact Sheet for Health Professionals, National Institutes of Health [67] Ulf Örnemark, Gunnar Mattsson, Leif Nyholid and ÅKe Olin (1995), “Determination of selenium in freshwaters by cathodic stripping voltammetry after uv irradiation”, Talanta, 42(6), 817-825 75 [68] Vladimír Pavlík, Ondrej Hegedűs a, Alžbeta Hegedűsová b, Silvia Šimková, Klaudia Jomová (2008), “Evaluation of the ET-AAS and HG-AAS methods of selenium determination in vegetables”, J Biochem Biophys Methods, 70, 1287–1291 [69] Vanesa Dı´az Huerta, Laura Hinojosa Reyes, Juan Manuel Marchante-Gayo´n, Marı´a Luisa Ferna´ndez Sa´nchez and Alfredo Sanz-Medel (2003), “Total determination and quantitative speciation analysis of selenium in yeast and wheat flour by isotope dilution analysis ICP-MS”, The Royal Society of Chemistry 2003, 18, 1243-1247 [70] Wikipedia (2018), “Selenium”, The free encyclopedia, https://en.wikipedia.org [71] Xiaoou Wang (2010), “Selenium Speciation in Arabidopsis Thaliana,” Master thesis 60 credits 2011 Department of plant and environmental science, 7-37 [72] Y Shibata, M Morita, K Fuwa (1992), “Selenium and arsenic in biology:Their chemical forms and biological functions”, Advances in Biophysics, 28, 31-80 [73] Y Xia, K E Hill, D W Byrne, J Xu, and R F Burk (2005), “Effectiveness of selenium supplements in a low-selenium area of China,” Am J Clin Nutr, 81(4), 829–834 [74] Z Hu, S Hu, S Gao, Y Liu, and S Lin (2004), “Volatile organic solventinduced signal enhancements in inductively coupled plasma-mass spectrometry: A cAAS study of methanol and acetone,” Spectrochim Acta Part B At Spectrosc, 59(9), 1463–1470 76 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Đồ thị đường chuẩn dạng SeMeCys Se (IV) khơng có nội chuẩn 77 Đồ thị đường chuẩn dạng Se-DLMet Se (VI) khơng có nội chuẩn 78 Đồ thị đường chuẩn dạng SeMeCys Se (IV) có nội chuẩn Se (VI) 100ppb 79 Đồ thị đường chuẩn dạng Se-DLMet Se (VI) có nội chuẩn Se (VI) 100ppb 80 PHỤ LỤC RT: 0,00 - 25,23 NL: 2,19E4 TIC MS std100pbbL 18,35 20000 18000 16000 14,53 14000 Intensity 0,98 12000 14,72 10000 1,18 1,54 8000 6000 18,76 8,53 8,69 14,27 12,28 9,31 2,49 7,91 11,57 5,00 5,76 3,72 8,37 15,08 15,41 18,98 19,83 22,78 24,25 4000 2000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 24 Lần 1: Sắc đồ thêm chuẩn 100ppb Hỗn hợp dạng Se, gradient pha động CH3COONH4 25;250mM;pH=8,0; MeOH 2% RT: 0,00 - 25,23 NL: 2,09E4 TIC MS std100pbbL 18,39 20000 18000 16000 14000 Intensity 0,85 12000 14,26 18,65 14,47 10000 1,06 8000 14,03 1,32 2,44 3,02 6000 7,11 6,59 7,40 7,54 11,59 12,32 13,95 14,69 14,97 15,62 16,21 18,92 19,63 22,94 23,91 24,56 4000 2000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 24 Lần 2: Sắc đồ thêm chuẩn 100ppb Hỗn hợp dạng Se, gradient pha động CH3COONH4 25;250mM;pH=8,0; MeOH 2% 81 RT: 0,00 - 25,23 NL: 2,22E4 TIC MS std100pbbL 18,46 22000 20000 18000 16000 0,76 14000 Intensity 14,30 12000 14,55 14,16 10000 14,78 14,90 1,05 8000 1,20 6000 2,13 7,05 7,09 7,52 8,52 5,76 6,15 11,47 11,98 18,84 15,56 19,01 19,96 22,09 23,95 4000 2000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 24 Lần 3: Sắc đồ thêm chuẩn 100ppb Hỗn hợp dạng Se, gradient pha động CH3COONH4 25;250mM;pH=8,0; MeOH 2% RT: 0,00 - 25,23 NL: 2,09E4 TIC MS std100pbbL 18,43 20000 18000 16000 14000 0,93 Intensity 14,38 12000 10000 1,32 1,42 8000 6000 7,26 7,57 2,07 3,34 5,93 6,70 7,71 11,43 11,57 11,74 14,73 14,79 14,90 15,34 16,23 18,76 18,80 18,89 19,27 20,85 24,11 4000 2000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 24 Lần 4: Sắc đồ thêm chuẩn 100ppb Hỗn hợp dạng Se, gradient pha động CH3COONH4 25;250mM;pH=8,0; MeOH 2% 82 RT: 0,00 - 25,23 NL: 2,10E4 TIC MS std100pbbL 18,46 20000 18000 0,79 16000 Intensity 14000 12000 14,36 10000 0,86 1,00 1,13 8000 7,20 2,22 3,05 6000 6,69 7,38 7,47 8,32 14,59 14,71 14,94 15,22 12,17 12,51 11,28 16,52 18,90 19,09 21,45 23,15 24,46 4000 2000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 24 Lần 1: Sắc đồ thêm chuẩn 100ppb Hỗn hợp dạng Se, gradient pha động CH3COONH4 25;250mM;pH=8,0; MeOH 2% Se (VI) RT: 0,00 - 25,23 SM: 7G NL: 4,78E3 m/z= 81,5082,50 MS std100pbbL RT: 18,40 AH: 4592 SN: 52 4500 4000 3500 Se-DLMet Intensity 3000 RT: 14,52 MH: 2116 SN: 15 2500 RT: 0,97 AH: 1850 SN: 17 2000 SeCys 1500 Se (IV) RT: 8,58 RT: 12,80 MH: 632 MH: 421 SN: 13 8,94 1,29 8,30 12,28 SN: 1,48 7,87 11,91 2,20 3,44 4,37 5,91 1000 500 15,05 15,31 16,50 19,10 20,21 23,59 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 24 Sắc đồ tính LOD, LOQ phương pháp, nồng độ 100ppb dạng Se 83 PHỤ LỤC RT: 0,00 - 25,23 0,75 Se(VI) nội chuẩn 26000 Se(IV) 24000 11,12 11,30 11,48 10,97 11,72 10,84 22000 20000 18000 10,55 16000 Intensity NL: 2,67E4 TIC MS Nammen2 14000 10,35 1,14 10,20 12000 1,39 1,59 10000 10,05 2,06 3,46 8000 5,31 5,68 9,00 9,77 11,93 12,23 12,33 12,62 12,75 12,87 13,06 13,28 13,52 14,28 15,35 17,66 24,06 20,83 21,54 6000 4000 2000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 24 Sắc đồ phân tích mẫu nấm men có nội chuẩn Se (VI) 100ppb RT: 0,00 - 25,23 0,75 NL: 3,86E4 TIC MS Selazn Se(VI) nội chuẩn 35000 30000 Intensity 25000 Se? Se? 20000 1,83 1,99 15000 2,15 2,34 3,26 3,87 4,36 6,90 10000 8,39 9,64 11,06 11,83 13,58 14,47 17,97 19,89 20,90 23,23 24,90 5000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 Sắc đồ phân tích mẫu Selazn có nội chuẩn Se (VI) 100ppb 84 24 RT: 0,00 - 25,23 NL: 4,97E4 TIC MS Colaf 2,02 Se? 45000 40000 35000 Intensity 30000 Se(VI) nội chuẩn 25000 0,74 20000 2,37 15000 2,64 2,97 3,49 10000 5,28 7,37 7,63 10,15 11,81 12,46 13,42 15,46 16,95 20,17 22,45 23,85 5000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 24 Sắc đồ phân tích mẫu Colaf có nội chuẩn Se (VI) 100ppb RT: 0,00 - 25,23 NL: 7,36E4 TIC MS Centrum 17,59 70000 Se(VI) 65000 60000 55000 50000 Intensity 45000 40000 35000 30000 Se(VI) nội chuẩn 25000 0,77 20000 1,04 1,40 1,87 15000 10000 4,45 4,51 7,84 8,62 10,89 11,98 12,57 18,27 14,20 21,24 22,86 24,51 5000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 Sắc đồ phân tích mẫu Centrum có nội chuẩn Se (VI) 100ppb 85 24 RT: 0,00 - 25,23 0,63 NL: 5,91E4 TIC MS TPCN2 Se(VI) nội chuẩn 55000 50000 45000 40000 Intensity 35000 30000 25000 17,91 Se-DLMet Se(VI) 20000 15000 13,15 1,22 10000 2,42 4,27 5,69 7,82 9,52 10,21 13,47 13,76 14,14 12,69 17,62 16,33 18,29 18,47 21,08 23,50 25,21 5000 0 10 12 14 Time (min) 16 18 20 22 Sắc đồ phân tích mẫu TPCN có nội chuẩn Se (VI) 100ppb 86 24