Nghiên cứu đột biến trên gen FLT3 ở một số bệnh nhân lơ xê mi cấp dòng tủy : Luận văn ThS. Sinh học: 60 42 01 14

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - HOÀNG NHẬT LỆ NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN TRÊN GEN FLT3 Ở MỘT SỐ BỆNH NHÂN LƠ XEMI CẤP DÒNG TỦY Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS LÊ XUÂN HẢI GS.TS PHAN TUẤN NGHĨA Hà Nội - Năm 2014 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến GS.TS Phan Tuấn Nghĩa, TS Lê Xuân Hải người thầy tận tâm hướng dẫn, dìu dắt, dành nhiều thời gian quí báu, tạo điều kiện tốt tâm huyết giúp đỡ cho em hoàn thành luận văn Tơi bày tỏ lịng cảm ơn chân thành đến TS Phạm Bảo Yên, ThS Trịnh Lê Phương, ThS Ngơ Kim Tốn tồn thể bạn sinh viên thực tập Phịng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Enzyme protein giúp đỡ chia sẻ kinh nghiệm thực tế trình thực thí nghiệm phân tích đột biến gen Tơi xin cảm ơn chân thành tới GS.TS Nguyễn Anh Trí, Viện trưởng Viện Huyết học- Truyền máu TW, tạo điều kiện để tơi hồn thành chương trình học đào tạo học viên cao học Tơi chân thành cảm ơn Phịng Sau đại học, Khoa Sinh học Bộ môn Sinh lý thực vật Hóa sinh, thầy Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên giúp đỡ tận tình thời gian tơi học hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới tập thể Khoa H7, Phòng Kế hoạch tổng hợp, Khoa Huyết học nhóm máu, Khoa Lưu Trữ Phân phối máu, Phòng Tổ chức cán Khoa phịng Viện ln tạo điều kiện tốt cho suốt năm tháng học tập thực luận văn Cuối cùng, xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình thân u tơi đồng hành, động viên mặt tinh thần vật chất để tơi n tâm hoc tập, cơng tác hoàn thành luận văn Hoàng Nhật Lệ DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AML: Lơ xê mi cấp dòng tủy (Acute myelogenlous leukemia) BN: Bệnh nhân ddNTP: Dideoxynucleoside triphosphate dNTP: Deoxynucleoside triphosphate FAB: French - American - British FLT3: FMS related tyrosin kinase Hb: Hemoglobin HC: Hồng cầu ITD: Internal tandem duplication KLB: Không lui bệnh LBHT: Lui bệnh hoàn toàn LBMP: Lui bệnh phần LXM: Lơ xê mi NCCN: National Comprehensive Cancer Network NST: Nhiễm sắc thể SLBC: Số lượng bạch cầu SLTC: Số lượng tiểu cầu WHO: Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) TB: Tế bào TBBT: Tế bào bất thường TKD: Tyrosin kinase domain MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung AML 1.1.1 Lịch sử phát AML 1.1.2 Phân loại bệnh AML 1.1.3 Phân loại bệnh theo FAB 1.2 Tình trạng mắc bệnh AML 1.2.1 Tình trạng mắc bệnh AML giới 1.2.2 Tình trạng mắc bệnh AML Việt Nam 10 1.3 Một số nguyên nhân gây bệnh AML 11 1.3.1.Yếu tố di truyền 11 1.3.2 Yếu tố môi trường 11 1.3.3 Virus 12 1.3.4 Bất thường nhiễm sắc thể 12 1.3.5 Các yếu tố khác 13 1.3.6 Cơ chế bệnh sinh AML 13 1.4 Gen FLT3 loại đột biến gen FLT3 14 1.4.1 Cấu trúc chức gen FLT3 (hình 1.6 hình 1.7) 14 1.4.2 Ý nghĩa xét nghiệm phát đột biến gen FLT3 tiên lượng điều trị AML 17 1.4.3 Các loại đột biến gen FLT3 18 1.4.4 Phương pháp phát đột biến gen FLT3 20 Chƣơng : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.2 Vật liệu nghiên cứu 22 2.3 Các thiết bị máy móc dùng nghiên cứu 23 2.4 Các phương pháp nghiên cứu 24 2.4.1 Đánh giá tình trạng bệnh nhân tiêu chí lâm sàng 24 2.4.2 Tách chiết định lượng DNA tổng số 25 2.4.3 Tách chiết DNA plasmid phương pháp Bibdo 26 2.4.4 Điện di phân tách DNA gel agarose 27 2.4.5 Nhân gen PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu gen FLT3 27 2.4.6 Nhân dòng gen FLT3 vào E coli 29 2.4.7 Xác định trình tự gen theo nguyên lý Sanger cộng 30 2.5 Phân tích, xử lý số liệu theo phương pháp nghiên cứu 31 Chƣơng : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 32 3.1 Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân AML chọn nghiên cứu có mặt đột biến gen FLT3 32 3.1.1 Tỷ lệ % mắc bệnh AML theo tuổi 32 3.1.2 Tỷ lệ % mắc bệnh AML theo giới 34 3.1.3 Tỷ lệ % mắc bệnh AML theo phân loại FAB 35 3.1.4 So sánh hiệu điều trị lâm sàng nhóm có đột biến khơng có đột biến FLT3-ITD 36 3.2 Phân tích có mặt đột biến gen FLT3 37 3.2.1 Tách chiết DNA tổng số 37 3.2.2 Nhân đoạn gen mã hóa FLT3 PCR 38 3.2.3 Nhân dòng FLT3 vào vector 40 3.2.4 Xác định trình tự gen FLT3 mang gen đột biến 42 3.2.5 Phân tích kết đột biến gen FLT3 - ITD với đột biến nhiễm sắc thể 43 3.3 Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân có đột biến gen FLT3 44 3.3.1 Đặc điểm tế bào bệnh nhân có đột biến gen FLT3-ITD 44 3.3.2 Đặc điểm lâm sàng liên quan đến tình trạng xuất huyết bệnh nhân AML 45 3.3.3 Đặc điểm lâm sàng liên quan đến tình trạng thiếu máu bệnh nhân AML 46 KẾT LUẬN 47 KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại AML 2001 2008 WHO Bảng 1.2 Ý nghĩa tiên lượng đột biến FLT3 bệnh nhân trưởng thành 17 Bảng 1.3 Nhóm tiên lượng theo NCCN 2013 18 Bảng 2.1 Thành phần phản ứng PCR 28 Bảng 3.1 So sánh tỷ lệ mắc bệnh AML theo tuổi tác giả 32 Bảng 3.2 Tỷ lệ % mắc bệnh AML theo phân loại FAB 35 Bảng 3.3 Tỷ lệ xuất đột biến gen FLT3-ITD với đột biến nhiễm sắc thể 43 Bảng 3.4 Đặc điểm tế bào bệnh nhân có đột biến gen FLT3-ITD 44 Bảng 3.5 So sánh tình trạng thiếu máu BN hai nhóm 46 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh Lơ xê mi cấp thể M2 Hình 1.2 Hình ảnh Lơ xê mi cấp thể M3 Hình 1.3 Hình ảnh Lơ xê mi cấp thể M4 Hình 1.4 Hình ảnh Lơ xê mi cấp thể M5 Hình 1.5 Hình ảnh nhiễm sắc thể bị đoạn thêm đoạn 12 Hình 1.6 Vị trí gene FLT3 nhiễm sắc thể số 13 16 Hình 1.7 Sơ đồ cấu trúc hoạt động FLT3 16 Hình 3.1 Phân bố bệnh AML theo giới 34 Hình 3.2 So sánh kết điều trị nhóm có đột biến khơng đột biến 36 Hình 3.3 Hình ảnh số mẫu bệnh nhân AML tách DNA tổng số 38 Hình 3.4 Sàng lọc mẫu bệnh nhân AML PCR 39 Hình 3.5 Hình ảnh tinh băng đột biến FLT3 40 Hình 3.6 Điện di khuẩn lạc sau nhân dòng FLT3 41 Hình 3.7 Kết giải trình tự mẫu 146.5 có đột biến 45 bp 42 Hình 3.8 Tình trạng xuất huyết nhóm có đột biến khơng có đột biến 45 ĐẶT VẤN ĐỀ Lơ xê mi cấp dòng tủy (AML-Acute Myelogenic Leukemia) bệnh lý đơn dịng ác tính tổ chức sinh máu, bệnh đặc trưng tăng sinh tế bào non (blast) bất thường, chủ yếu tủy xương máu ngoại vi có tế bào non ác tính Những tế bào lấn át tế bào bình thường ức chế trình trưởng thành phát triển dịng tế bào bình thường tủy xương [2,14,21] Theo nghiên cứu giới, 80% đột biến gen tìm thấy bệnh nhân mắc AML xảy gen nucleophosmin (NPM1), Fms-like tyrosine kinase (FLT3) CCAAT- enhancer binding protein alpha (CEBPA) [29,30,32,40] Khoảng 30% tổng số bệnh nhân mắc AML với kiểu hình nhiễm sắc thể bình thường bị đột biến gen FLT3, hậu enzyme tyrosine kinase luôn trạng thái hoạt động mà không cần dimer hóa, dẫn đến rối loạn q trình phát triển biệt hóa tế bào máu Nhiều nhóm nghiên cứu FLT3 phát hai kiểu đột biến thường gặp gen lặp đoạn nội phân tử (ITD - internal tandem duplication) đột biến điểm gây thay acid amin aspartic vị trí 835 thuộc vùng tyrosine kinase [38,42,49,55] Tỷ lệ mắc bệnh LXM cấp Mỹ năm 2012 khoảng 3-5 trường hợp 100.000 dân, chiếm khoảng 3% tổng số bệnh ung thư Ở Việt Nam, theo nghiên cứu Bạch Quốc Khánh cộng năm 2012 lơ xê mi cấp chiếm tỷ lệ 41,5% bệnh máu Bệnh gặp lứa tuổi, hai giới Tuy nhiên bệnh có xu hướng gặp nhiều trẻ em người già [7] Nhóm AML thường gặp người lớn đó, nhóm LXM cấp dịng lympho chiếm 75-80% LXM cấp trẻ em Trước việc chẩn đoán AML chủ yếu dựa vào hình thái học tế bào, hóa học tế bào kết hợp với triệu chứng lâm sàng bệnh nhân việc phân loại AML cịn gặp nhiều khó khăn bệnh nhân có nhiễm sắc thể bình thường khơng phát tổn thương gen để có định hướng điều trị Tuy vậy, chưa có nghiên cứu sâu phân tích dạng đột biến cụ thể gây nên bệnh AML Chính việc áp dụng phương pháp phân tích DNA để xác định phát loại đột biến bệnh nhân AML cần thiết có ý nghĩa giá trị thực tiễn thiết thực chẩn đoán bệnh Đề tài: ˝Nghiên cứu đột biến gen FLT3 số bệnh nhân lơ xê mi cấp dòng tủy” đặt nhằm mục tiêu: Xác định tỷ lệ đột biến FLT3-ITD bệnh nhân bị bệnh lơ xê mi cấp dòng tủy Bƣớc đầu xác định đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng bệnh nhân có đột biến Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung AML Lơ xê mi cấp dòng tủy (AML) loại ung thư máu ác tính tiến triển nhanh Nguyên nhân phát sinh bệnh thay đổi bất thường (đột biến) dẫn đến làm rối loạn trình sản sinh bạch cầu, loại tế bào chịu trách nhiệm bảo vệ thể thông qua chế miễn dịch, tạo bạch cầu bất thường với tốc độ nhanh chóng Bệnh nhân AML, khơng chẩn đốn, điều trị kịp thời phát sớm tử vong [14,19] 1.1.1 Lịch sử phát AML Năm 1827, bác sỹ Velpeau người Pháp mô tả người bán hoa 63 tuổi mang bệnh đặc trưng tiến triển sốt, suy nhược, sỏi thận, gan to, lách to Velpeau ghi nhận máu bệnh nhân giống “như cháo”, ông tiên đoán tượng số lượng bạch cầu nhiều máu bệnh nhân Năm 1845, Bennett mô tả loạt bệnh nhân tử vong có triệu chứng lách to, máu thay đổi màu sắc tăng độ quánh Ông sử dụng thuật ngữ „leucocythemia‟ đặc điểm bệnh nhân có dày đặc bạch cầu máu ngoại vi Năm 1856, thuật ngữ "bệnh bạch cầu" đặt Rudolf Virchow, nhà bệnh lý học tiếng người Đức, ông người tiên phong việc sử dụng kính hiển vi quang học để đọc cơng thức máu bệnh nhân, Virchow người mô tả bất thường tế bào máu trắng bệnh nhân có hội chứng lâm sàng mơ tả Velpeau Bennett Virchow khơng tìm nguyên nhân việc sản sinh nhiều tế bào bạch cầu, ông sử dụng thuật ngữ mô tả "bệnh bạch cầu" (tiếng Hy Lạp: "máu trắng") để tình trạng Năm 1877, Paul Ehricl tìm phương pháp nhuộm tiêu đưa phương pháp vào việc mô tả khác thường bạch cầu bình thường bất thường bệnh nhân 35 Gilliland D G., Griffin J D (2002), “The roles of FLT3 in hematopoiesis and leukemia”, Blood 100 (5), pp.1532-1542 36 Kiyoi H., Naoe T., Nakano Y., Yokota S., Minami S., Miyawaki S., Asou N., Kuriyama K., Jinnai I., Shimazaki C., Akiyama H., Saito K., Oh H., Motoji T., Omoto E., Saito H., Ohno R., Ueda R., (1999), “Prognostic implication of FLT3 and N-RAS gen mutations in acute myeloid leukemia”, Blood 93 (9), pp.3074-3080 37 Kottaridis P.D., Gale R.E., Frew M.E., Harrison G, Langabeer S.E., Belton A.A., Walker H., Wheatley K., Bowen D.T., Burnett A.K., Goldstone A.H., Linch D.C., (2001), “The presence of a FLT3 internal tandem duplication in patients with acute myeloid leukemia (AML) adds important prognostic information to cytogenetic risk group and response to the first cycle of chemotherapy: analysis of 854 patients from the United Kingdom Medical Research Council AML 10 and 12 trials”, Blood 98 (6), pp.1752-1759 38 Malek S N., (2011), “Update on the molecular biology of myelogenous leukemia: clinical implications”, American Society of Clinical Oncology, pp.231-236 39 Moore J.O., Stephen L., George., Richard K., Dodge, Philip C., Amrein, Bayard L., Powell, Jonathan E., Kolitz, Maria R., Baer, Frederick R., Davey, Clara D., Bloomfield, Richard A., Larson, and Charles A., Schiffer et al (2005), “Sequential multiagent chemotherapy is not superior to high – dose cytarabine alone as postremission intensification therapy for acute myeloid leukemia in adults under 60 years of ages: Cancer and leukemia group B study 9222”, Blood 105, pp 3420-3427 40 Lin L I., Chen C.Y., Lin D.T., Tsay W., Tang J l., Yeh Y C., Shen H L., Su F H., Yao M., Huang S.Y., and Tien H F., (2005), “Characterization of CEBPA mutations in acute myeloid leukemia: most patients with CEBPA mutations have biallelic mutations and show a distinct immunophenotype of the leukemic cells”, Clicnical Cancer Research 11(4), pp.1372-1379 41 Nakao M., Yokota S., Iwai T., Kaneko H., Horiike S., Kashima K., Sonoda Y., Fujimoto T., Misawa S., (1996), “Internal tadem duplication of FLT3 gene found in acute myeloid leukemia”, Leukemia 10 (12), pp.1911-8 53 42 Noguera N.I., Amatuna E., Zangrilli D., Navogna S., Divona M., Buccisano F., Amaduri S., (2005), “Simultaneous detection of NPM1 and FLT3-ITD mutationsby capillary electrophoresis in acute myeloid leukemia”, Leukemia 19 (8), pp.1479-1482 43 Rosen D B., Minden M D., Steven M., Kornblau S M., Aileen Cohen, Urte Gayko, Santosh Putta, John Woronicz, Erik Evensen, Wendy J., Fantl, Alessandra Cesano.(2010), “Functional characterization of FLT3 receptor signaling deregulation in acute myeloid leukemia by single cell network profiling (SCNP)”, PLoS ONE 5(10):13543.doi:10.1371/journal.pone.0013543 44 Response Criterial for Acute Myeloid Leukemia”, National Comprehensive Cancer Network Guidelines Version 2.2011, AML –D 45 Rombouts W.J., Blokland I., Lowenberg B., Ploemacher R.E., (2000) “Biological characteristics and prognosis of adult acute myeloid leukemia with internal tandem duplications in the Flt3 gene”, Leukemia 14, pp 675-683 46 Rosemary E.G., Claire Green, Christopher Allen, Adam J., Mead, Alan K., Burnett, Robert K., Hills., (2008), “The impact of FLT3 internal tandem duplication mutant level, number, size, and interaction with NPM1 mutation in a larger cohort of young adult patients acute myeloid leukemia”, Blood 111, pp.2776-2784 47 Scholl S., Theuer C., Scheble V., Kunert C., Heller A., Mügge L O., Fricke H J., Höffken K., Wedding U (2008), “Clinical impact of nucleophosmin mutations and FLT3 internal tandem duplications in patients older than 60 yr with acute myeloid leukaemia”, European Journal of Haematology 80 (3), pp.208-15 48 Shinichiro Takahashi (2011), “Downstream molecular pathways of FLT3 in the pathogenesis of acute leukamia: biology and therapeutic implications”, Journal of Hematology and Oncology , 4:13 doi:10.1186/1756-8722-4-13 49 Shen Y., Zhu YM., Fan X., Shi JY., Wang QR., Yan XJ., Gu ZH., Wang YY., Chen B., Jiang CL., Yan H., Chen FF., Chen HM., Chen Z., Jin J., Chen SJ., 54 (2011), “Gene mutation patterns and their prognostic impact in a cohort of 1185 patients with acute myeloid leukemia”, Blood 118 (17), pp 5593-5603 50 Sheikhha M H., Awan A., Tobal K., Liu Yin J A (2003) “Prognostic significance of FLT3-ITD and D835 mutations in AML patients,” Hematology Journal (1) pp 41–46 51 Soheil Meshinchi, Derek L., Stirewalt, Todd A., Alonzo, Titus J., Boggon, Robert B Gerbing, Jennifer L (2008), “Structural and numerical variation of FLT3/ITD in pediatric AML”, Blood 111(10), pp.4930-4933 52 Stirewalt D.L., Kopecky K.J., Meshinchi S., Appelbaum F.R., Slovak M.L., Wilman C.L., Radich J.P., (2001), “FLT3, RAS, and TP53 mutations in elderly patients with acute myeloid leukemia”, Blood 2001 (97), pp.3589-3595 53 Thiede C., Steudel C., Mohr B., (2001),“Analysis of FLT3-activating mutations in 713 patients with acute myelogenous leukemia (AML): high prevalence in FAB-subtype M5 and identification of subgroups with poor prognosis”, Blood 89(11), pp.717a [Abstract] 54 Thiede C., Steudel C., Mohr B., Schaich M., Schäkel U., Platzbecker U., Wermke M., Bornhäuser M., Ritter M., Neubauer A., Ehninger G., Illmer T., (2002), “Analysis of FLT3-activating mutations in 979 patients with acute myelogenous leukemia: association with FAB subtypes and identification of subgroups with poor prognosis”, Blood 99 (12), pp:4326-35 55 Vadirman J W., Harris, N L., and Brunning R D., (2002), „„The World Health Organization (WHO) classification of the myeloid neoplasms‟‟, Blood 100 (7), pp.2292-2301 56 Vadirman J W., Thiele J., Arber D.A., Brunning R D., Borowitz M J., Porwit A., Harris N L., Le Beau M M., Hellström-Lindberg E., Tefferi A., Bloomfield C D., (2009), “The 2008 revision of the World Health Organization (WHO) classification of myeloid neoplasms and acute leukemia: rationale and important changes”, Blood 114 (5), pp 937-951 55 57 Yamamoto Y., Kiyoi H., Nakano Y., Suzuki R., Kodera Y., Miyawaki S., Asou N., Kuriyama K., Yagasaki F., Shimazaki C., Akiyama H., Saito K., Nishimura M., Motoji T., Shinagawa K., Takeshita A., Saito H., Ueda R., Ohno R., Naoe T (2001), “Activating mutation of D835 within the activation loop of FLT3 in human hematologic malignancies”, Blood 97 (8), pp 2434-2439 58 Wang T F., (2010), “The changing paradigm of acute myeloid leukemia with normal cytogentics”, Hematology/Oncology Fellow, October 22 2010 (Power Point presentation) 59 Whitman S.P., Archer K.J., Feng L, Feng L., Baldus C., Becknell B., Carlson B.D., Carroll A.J., Mrózek K., Vardiman J.W., George S.L., Kolitz J.E., Larson R.A., Bloomfield C.D., Caligiuri M.A., (2001), “Absence of the wild-type allele predicts poor prognosis in adult de novo acute myeloid leukemia with normal cytogenetics and the internal tandem duplication of FLT3: a cancer and leukemia group B study”, Cancer Research 61, pp.7233-7239 60 http://www.llscanada.org/#/diseaseinformation/managingyourcancer/newlydiagnosed 61 http://www.llsamerican.org/#/diseaseinformation/managingyourcancer/newlydiagnosed 56 PHỤ LỤC I KẾT QUẢ ĐỊNH LƢỢNG DNA CỦA CÁC MẪU MÁU BỆNH NHÂN AML Mẫu ng/µl 124 30,77 125 53,70 126 110,87 127 53,73 128 61,60 129 78,00 130 72,57 131 71,43 132 57,63 133 42,53 134 33,63 135 48,67 136 42,27 137 56,53 138 55,87 139 59,47 140 58,93 141 43,93 142 49,93 143 42,30 144 44,53 145 55,07 146 89,57 147 54,03 148 48,17 149 57,40 150 113,70 Mẫu ng/µl 151 50,33 152 52,97 153 51,97 154 80,77 155 50,70 156 52,40 157 73,60 158 62,97 159 144,67 160 139,90 161 141,37 162 55,93 163 60,40 164 58,50 165 69,60 166 65,37 167 63,00 168 59,63 169 65,03 170 89,70 171 65,90 172 93,80 173 79,17 174 26,11 175 52,51 176 43,98 177 58,46 178 34,41 179 52,65 180 35,72 Mẫu ng/µl 181 62,28 182 39,40 183 69,23 184 36,80 185 16,74 186 28,87 187 155,91 188 55,82 189 38,20 190 47,97 191 53,94 192 61,31 193 55,84 194 36,32 195 31,71 196 52,59 197 97,67 198 79,73 199 39,20 200 52,34 201 136,57 202 48,90 203 39,20 204 57,57 205 73,34 206 49,73 207 63,82 208 69,64 PHỤ LỤC II DANH SÁCH BỆNH NHÂN AML TẠI VIỆN HUYẾT HỌC- TRUYỀN MÁU TW STT Mã BN Họ Tên Tuổi Nam Nữ FAB Hình thái nhiễm sắc thể 12010248 Trần Thị Nh 45 12015691 Nguyễn Trung K 33 X M2 45x,-y,t(8;21) 12015441 Nguyễn Quý C 52 X M2 46xy 8002049 Trần Văn H 28 X M4 46xy 12011370 Phạm Thị Minh Ng 21 X M2 46xx 12012747 Phạm Thị H 43 X M2 46xx 12015080 Nguyễn Thị Ph 40 X M4 46xx 12012474 Vũ Thị Th 58 X M2 46xx 12002178 Trần Thị B 64 X M4 46xx 10 12016401 Đỗ Văn M 68 11 12016606 Vi Thị L 41 X M6c 46xx 12 12015636 Nguyễn Thị Thu H 37 X M4 46xx 13 1208266 Nguyễn Văn Đ 60 14 12013895 Bùi Thị H 43 15 12010686 Đoàn Cảnh T 71 X M5b 46xy 16 11004777 Nguyễn Duy L 63 X M1 46xy 17 12016008 Phan Văn V 55 X M5b 46xy,16q+ 18 10005738 Bàn Tồn Ch 25 X M6c 46xy 19 12009595 Đỗ Thị H 49 X M5b 46xx 20 11009464 Ngô Thị D 37 X M2 21 12013469 Chu Mạnh Tr 73 X M4 47xy,+10,+11,+20,-21 22 11044209 Đỗ Viết D 38 X M3 46xy 23 12001786 Lê Thị L 44 X X M4 46xx M3 46xy X M3 46xy X X M2 46xx 46xx nhiều dòng tb thiểu bội M3 46xx STT Mã BN Họ Tên Tuổi Nam Nữ FAB Hình thái nhiễm sắc thể 24 12013005 Trần Thị Th 20 25 11001648 Phùng Thế M 20 26 12013931 Lê Thị H 53 27 12013931 Vũ Công H 68 28 10000645 Nguyễn Thị Th 47 29 11083519 Trần Văn H 24 X M2 46xy 30 12010720 Lê Quang Đ 23 X M5a 31 7010375 Nguyễn Văn Tr 52 X M2 46xy, Ph1+) 32 12001401 Vương Ngọc Kh 37 X M4 46xy,t(1;3) 33 12008275 Nguyễn Thị Nh 37 34 12010169 Nguyễn Trung H 25 X M3 46xy 35 12015151 Trần Thành Tr 25 X M2 46xy 36 12014835 Nguyễn Thanh H 62 X M3 46xy[14]/47,xy,+12[6] 37 10006475 Nguyễn Thị M 56 38 12013932 Vũ Ngọc Tr 61 X M2 46xy 39 11045795 Nguyễn Văn L 24 X M1 46xy 40 12006457 Đoàn Văn H 62 X M4 48xy,+5,+mar,10q-,-46xy 41 12016912 Khiếu Đình Th 57 X M2 46xy 42 12016901 Nguyễn Thị H 38 X M3 46xx 43 12017370 Đặng Thị Gi 37 X M3 46xx 44 12016975 Lê Đức Th 63 45 12009631 Nguyễn Thị Oanh L 43 X M3 46xx 46 12009602 Phạm Thị Nh 24 X M2 46xx 47 12015821 Lê Xuân C 58 48 11038583 Lê Thị Thanh L 41 X M4 46xx 49 11007238 Đỗ Thị O 25 X M2 46xx 50 12005859 Trần Thị Th 63 X M2 46xx 51 12007352 Lê Thị C 49 X M4 46xx 52 12009612 Lê Thị L 30 X M4 X X M2 46xx[6]/46xx,t(8;21)del9q M4 46xy X X M4 46xx M5b 46xy X X X X M2 46xx 46xy[12]/47xy,+22[8]46xy M2 46xx M4 46xx M5b 46xy X M5b 46xy p210+, đa tổn thương NST,t(9;22) STT Mã BN Họ Tên Tuổi Nam Nữ FAB Hình thái nhiễm sắc thể 53 12017284 Trần Thị N 60 X M4 46xx 54 12016586 Giáp Thị O 28 X M2 55 12007529 Nguyễn Khoa L 37 X M4 46xy 56 12014549 Nguyễn Trọng T 28 X M4 46xy,+10 57 12014516 Nguyễn Ngọc D 33 X M5b 46xx 58 12016937 Phạm Thị Ph 59 X M5a 59 12014221 Lâm Thị D 58 X M4 46xx 60 12015192 27 X M5 46xx 61 13000248 Ngô Văn Đ 32 62 13018129 Trần Thanh Th 56 63 13000075 Đỗ Văn Th 31 X M3 46xy 64 12015076 Trần Đình L 22 X M4 46xy 65 12017058 Nguyễn Viết Hữu Th 19 X M5a 46xy 66 11015807 Nguyễn Trường Q 31 X M4 46xy,+18 67 12011005 Trần Thị Th 20 68 12011343 Nguyễn Hải N 27 69 12015975 Đỗ Thị M 18 X M5 70 11000061 Lương Thị Nh 30 X M7 46xx, 71 12014462 Nguyễn Thị K 58 X M2 46xx 72 12017096 Hoàng Thanh N 31 73 13001367 74 Nguyễn Thị Ngọc Ng Đặng Thị Phương Ng X 46xx[5]/ 46xx,t(8;21)[15] 46xx, đứt gãy NST nhiều M4 46xy,+mar,-17 X X X M2 46xx, Ph1+ M2 46xx M5b 46xy 48xx,+5,+21[15]/46xx, +5,-16[5] M3 46 xx đa tổn thương X 28 X M4 46xx 13000999 Đào Thị Linh Ph 18 X M6 47XX 75 13008433 Nguyễn Văn H 61 X 46,XX[4]/45,XX,-3,M4 4,+mar;15q+[6]/443,xy,3,-17,-20,5q-,15q+[10] 76 13006975 Triệu Văn M 58 X M2 46xy STT Mã BN Họ Tên Tuổi Nam Nữ FAB Hình thái nhiễm sắc thể 77 13006897 Nguyễn Quang H 17 X M1 46xy 78 12017851 Đoàn Văn S 58 X M5 46xy 79 13009056 Hoàng Văn Q 32 X M2 80 12013970 Vũ Thị B 35 X M2 46XX 81 13003967 Nguyễn Thị Thanh D 33 X M3 46,XX[15]/45,XX,-9 82 13004143 Đào Trọng Th 19 X M3 47XY,i(17q),+17 83 12017017 Nguyễn Văn Đ 22 X M2 84 13002668 Nguyễn Đình B 25 X M3 46xy 85 13006570 Phạm Công C 75 X M5a 46xy 86 13001429 Phạm Thị H 27 X M3 46xx 87 12005481 Đinh Thị Th 54 X M2 47xx,+8 88 13008434 Thái Thị Ng 56 X M3 46xx 89 13008352 Nguyễn Thị Th 58 X M2 46xx 90 13005726 Đặng Thanh H 56 X M1 46xy 91 13008336 Nguyễn Mạnh Th 55 92 11038599 Nguyễn Thị Hoài Ph 31 X M3 93 13009534 Nguyễn Thị D 54 X M3 46xx 94 13001488 Nguyễn Văn H 46 X M2 46xy 95 11005378 Chu Thị Tr 23 X M2 46xx Ph1+ 96 12001241 Nguyễn T Kim A 21 X M4 46xx 97 13001273 Nguyễn Hồng Q 40 X M2 46xy 98 13003054 Nguyễn Đình Th 39 X M4 46xy 99 13006047 Vũ Thanh Tr 76 X M2 46XX[14]/47,XY,+8[6] 100 1300579 Nguyễn Thị H 33 X M3 46xx X 46xy[9]/4, Xu,-21.8q-[11] 45XY,-,del(8q)[5]/45,XY, -21,4q+,del(8q),i(17q)[15] M1 46xy 46XX[16]/ 46,XX,t(15;17)[4] 101 13003632 Hàn Văn B 58 X M4 46xy 102 12012898 Vũ Công H 68 X M4 46xy 103 13002721 Đinh Thị M 59 X M4 46xx 104 13003757 Trần Thị Bích Th 33 X M2 46xx STT Mã BN Họ Tên Tuổi Nam Nữ FAB Hình thái nhiễm sắc thể 105 12095153 Trần Thành Tr 25 X M2 46xy 106 12007308 Lê Công Q 30 X M6 46xy 31 X M3 108 12017846 Trịnh Tiến Đ 27 X M2 46xy 109 13001836 Đào Xuân T 27 X M2 46xy 110 12018009 Trần Đình Th 59 X M2 46xy 111 13000082 Cung Minh T 57 X M2 46xx 112 12010962 Trinh Văn T 69 X M6c 46xy 113 13005351 Đinh Văn H 26 X M4 46xy 114 10008284 Phan Công T 29 X M2 46xy, Ph1+100% 115 11005897 Nguyễn Thị Nh 76 X M2 46xx 116 13006122 Trương Thị Mỹ A 35 X M3 46xx 117 13003290 Phạm Ngọc G 66 118 13009645 Trịnh Thị Tr 19 X M2 46xx 119 13005950 Trần L 61 X M2 46xy[6]/47,xy,+7[14] 45 X M3 46xx 107 120 8003611 Nguyễn Viết B 1107000 Nguyễn Thị Ch X 46xy[10]/47,xy,+10[2]/47, xy+10,t(15;17)[8] M5b 46xy 121 13010402 Lương Văn M 56 122 13002738 Đặng Thị Kim O 20 123 13009858 Lê Bá Đ 23 124 13006393 Trần Thị V 50 X M2 46xx 125 12009612 Lê Thị L 30 X M4 46xx 126 13008572 Mai Thị B 65 X M4 46xx 127 13018311 Nguyễn Văn Ph 35 X M3 46xy 128 13002640 Giáp Văn T 19 X M3 46xy 129 13003608 Nguyễn Thị K 82 130 11000508 Nguyễn Đăng S 59 X M2 46xy 131 13000784 Vũ Hà Kh 29 X M2 46xy 132 13006168 Trần Quang Kh 45 X M5b 46xy 133 13002403 Nguyễn Thị H 47 X M5a 46xy X X M6c 47xx+8 M5a 46xy X X M1 46xx M6c 46xx STT Mã BN Họ Tên Tuổi Nam Nữ FAB Hình thái nhiễm sắc thể 134 13010544 Nguyễn Thị X 57 135 13010487 Nguyễn Văn Ng 51 136 12005171 Nguyễn Phương A 18 137 13004130 Nguyễn Thế A 24 X X M2 46xy X X M5a 46xx 46xx[6]/45,xx,-10,M4 21,+mar,8q-[5],xx,-10,21,+mar, 5q- [19] M4 46xy Trƣởng Phòng Kế hoạch Tổng hợp ThS Nguyễn Hữu Chiến PHỤ LỤC III KÍCH THƢỚC ĐỘT BIẾN FLT3-ITD CỦA BỆNH NHÂN AML Mẫu Kích thƣớc băng (bp) Kích thƣớc đột biến (bp) 20 356 26 53t 388 58 53d 423 93 54 379 49 57 374 44 60t 403 73 60d 376 46 62 370 40 71 356 26 88t 384 54 88d 361 31 102 352 22 112 372 42 146 375 45