Nuôi thu sinh khối tảo Nannochloropsis oculata và sử dụng các loại thức ăn khác nhau để nuôi luân trùng Brachionus plicatlis làm thức ăn cho ấu trùng cá biển

Để đáp ứng nhu cầu về thức ăn cho các đối tượng nuôi thuỷ sản phù hợp với giai đoạn phát triển kinh tế theo phương hướng công nghiệp hoá và hiện đại hoá, ngoài việc cải tạo môi trường nư

M Ở Đ ÀU

Để đáp ứng nhu cầu về thức ăn cho các đối tượng nuôi thuỷ sản phù hợp với giaiđoạn phát triển kinh tế theo phương hướng công nghiệp hoá và hiện đại hoá, ngoàiviệc cải tạo môi trường nước, bón phân, gây nuôi thức ăn tự nhiên, việc chế biếnthức ăn tổng hợp, nuôi thức ăn sống để cung cấp cho cá và cảc thuỷ sản khác là mộtnhu cầu rất cần thiết hiện nay.

Thức ăn tươi sống là loại thức ăn thích hợp ở giai đoạn ấu trùng của nhiều đốitượng nuôi và ít gây ô nhiễm môi trường nuôi Vì vậy việc nghiên cứu sử dụng thứcăn tươi sống trong sinh sản nhân tạo sẽ góp phần nâng cao hiệu quả của quá trìnhsản xuất.

Vi tảo biển được coi là thức ăn tốt nhất cho các đối tượng nuôi, ngoaì thành phầndinh dưỡng là các vitamin thiết yếu, tảo biển còn chứa một hàm lượng đáng kể cácacid béo không no HUFA n – 3, và những acid béo này có thể dễ dàng trở thànhnguồn dinh dưỡng cho ấu trùng cá biển thông qua luân trùng là loại thức ăn sốngtrung gian Trong số các loài tảo biển hiện đang được áp dụng rộng rãi, tảo

Nannochloropsis oculata có chất lượng khá tốt và được sử dụng nuôi luân trùng ởnhiều nước trên thế giới.

Nuôi luân trùng là một khâu không thể thiếu của nhiều trại sản xuất giống nhântạo các đối tượng hải sản Đặc biệt ở giai đoạn lấy dinh dưỡng ngoài đầu tiên của ấutrùng các đối tượng nuôi hải sản như: cá, giáp xác, và động vật thân mếm Luântrùng là loại thức ăn tốt nhât cho nhiều loại ấu trùng vì chúng có ưu điêm đặc biệt:giá trị dinh dưỡng cao, kích thước phù hợp,tốc độ bơi chậm, khả năng nuôi sinhkhối cao… Ngoài ra, luân trùng dễ thích nghi với môi trường, có khả năng chịuđựng đối với sự biến động lớn của độ mặn.

Ở Việt Nam trong những năm gần đây, sự thành công của các quy trình sản xuất

giống cua xanh Scylla serrata, cá chẽm Lates calcarifer, cá mú Epinephelus sp đã

đặt ra những yêu cầu cấp bách đối với việc sản xuất thức ăn sống, đặc biệt tại các cơsở sản xuất giống đại trà, nhằm cung cấp số lượng con giống lớn cho nhu cầu nuôithương phẩm.

Xuất phát từ yều cầu thực tế trên, được sự đồng ý của bộ môn Hải Sản – Khoanuôi trồng thuỷ sản - trường Đại Học Nha Trang, chúng tôi tiến hành thực hiện đềtài:

“Nuôi thu sinh khối tảo Nannochloropsis oculata và sử dụng các loại thức ănkhác nhau để nuôi luân trùng Brachionus plicatlis làm thức ăn cho ấu trùng cá

Mục đích và ý nghĩa của đè tài:

- Bước đầu làm quen với phương pháp ngiên cứu khoa học

- Khả năng sinh khôi của tảo N oculata

- Loại thức ăn tốt nhất cho luân trùng Br Plicatilis

Nội dung nghiên cứu:

- Kỹ thuật nuôi thu sinh khối tảo N oculata

- Xác định mật độ tảo

- Sử dụng tảo N oculata nuôi luân trùng

- Thử nghiệm một số sản phẩm mới để nuôi luân trùng

- Xác định, so sánh mật độ nuôi luân trùng nuôi.

Mặc dù rất cố gắng nhưng do mới làm quen với phương pháp nghiên cứu khoahọc, vốn kiến thức còn hạn chế và thời gian có hạn nên báo cáo không tránh khỏinhiều thiếu sót Kính mong sự thông cảm và đóng góp của quý thầy cô và các bạnsinh viên để luận văn được hoàn thiện hơn

Từ năm 1956, nhiều đặc diểm sinh thái học, biến động quần đàn, sinh học sinhsản, dinh dưởng cá thể đã được thực hiện trong phòng thí nghiệm và ngoài thực địa.Sau 25 năm nghiên cứu (1956-1981), luân trùng đã đựơc sử dụng khá phổ biến trênthế giới và đã được ứng dụng thành công, làm thức ăn cho hơn 60 loài cá biển và 18loài giáp xác (Dhert, 1997 trích bởi Như Văn Cẩn, 1999).

Trên thế giới có nhiều phương pháp nuôi luân trùng khác nhau Tuy nhiên cómột số phương pháp phố biến sau:

- Nuôi theo phương pháp thu hoạch toàn bộ.- Nuôi theo phương pháp thu hoạch bán liên tục.- Nuôi bằng hệ thống tuần hoàn.

+ Nuôi theo phương pháp thu hoạch toàn bộ.

Đây là hình thức nuôi sinh khối được áp dụng sớm nhất trên thế giới Luân trùngđược cấy vào môi trường có tảo đang phát triển ở mật độ cao (khoảng 10-20x106 tb/ml).( Một điều chắc chắn rằng là các vi tảo biển là thức ăn tốt nhất cho luân trùngvà có thể cho năng suất rất cao nếu có sẵn tảo với khối lượng đủ kèm theo việc quảnlý thích hợp) Khi luân trùng sử dụng hết lượng tảo thì thu hoạch toàn bộ và dùngmột phần làm giống cho các đợt nuôi khác.

+ Nuôi theo phương pháp thu hoạch bán liên tục.

Luân trùng được thả với mật độ thấp trong các bể tảo nhưng khi tảo được sửdụng hết, luân trùng được tiếp tục cho ăn bằng men bánh mì hay nguồn tảo từ bênngoài Khi mật độ luân trùng tương đối cao, thay vì thu hoạch toàn bộ theo phươngpháp trên, người ta chỉ thu hoạch một phần thể tích sau đó bổ sung lượng nước mớivào Thể tích thu hoạch hàng ngày khoảng 10-30% thể tích nuôi tuỳ theo mật độ vàtốc độ tăng trưởng của quần đàn Sau một vài lần thu hoạch, mật độ luân trùng cóthể bị giảm dần do sự tích tụ chất thải và thức ăn thừa bị phân huỷ, khi đó ta thuhoạch làm thức ăn cho ấu trùng hay cấy sang bể mới.

+ Nuôi bằng hệ thống tuàn hoàn.

Nuôi luân trùng với mật độ cao thường dẫn đến sự ô nhiễm do phân huỷ thức ănthừa và tích tụ của chất thải Năm 1976, Hirata lần đầu tiên đã mô tả một phươngpháp đơn giản cải thiện chất lượng nước bằng cách cho chảy qua một kênh rải sỏi.Năm 1979, ông cải tiến bằng một hệ thống làm lưu thông nước 20 lần / ngày Cácchất bẩn được định kỳ thu vào bể có chứa các loại vi khuẩn nhằm phân huỷ thànhcác chất vô cơ và chất khoáng Những chất khoáng này sau đó được dùng để nuôitảo và dùng tảo nuôi luân trùng Với hệ thống bể nuôi 500 lít theo phương pháp nàycần có thêm một bể tạo dòng chảy 150 lít Luân trùng được thả với mật độ ban đầuthấp và thu hoạch khi đạt đến mật độ 100-150 cá thể/mL và có thể tiếp tục tăng lênđến mật độ 500 cá thể/mL Ở mật độ này lượng luân trùng hàng ngày có thể đạt tới80.5x106 cá thể ít nhất là 20 ngày (Hirata, 1979 trích bởi Cái Ngọc Bảo Anh, 1999).

1.1.2 Ở Việt Nam.

Tại Việt Nam các vấn đề nghiên cứu về luân trùng đã phổ biến nhiều.

Nguyễn Quyền và ctv (1976-1980) đã nghiên cứu về một số đặc điểm sinh họcluân trùng như mùa vụ xuất hiện trong tự nhiên, ảnh hưởng của nhiệt độ, độ mặn.thức ăn và đã thử áp dụng hệ thống bể nuôi tuần hoàn trong nuôi sinh khối luântrùng

Nguyễn Thị Nga (1998) đã nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của luân trùng,ảnh hưởng của các yếu tố môi trường lên sinh truởng và phát triển của luân trùnglàm cơ sở cho nuôi sinh khối và bảo quản chúng.

Năm 1999 trong khuôn khổ dự án hợp tác nghiên cứu sản xuất giống cá chẽm

Lates calcarifer do tổ chức NUFU tài trợ, Cái Ngọc Bảo Anh đã nghiên cứu về ảnh

hưởng của các loại thức ăn khác nhau đến nuôi sinh khối và chất lượng luân trùng

Brachionus plicatilis dòng nhỏ nuôi trong bể kích thước lớn Như Văn Cần nghiêncứu về khả năng thích nghi và đánh giá chất lượng luân trùng Brachionus plicatilis

dòng lớn, nuôi sinh khối tại Nha Trang bằng một số loại thức ăn khác nhau.

1.2 Đặc điểm sinh học cua luân trùng.1.2.1.Vị trí phân loại.

Luân trùng có kích thước cơ thể nhỏ dao động từ 100-360 m, cơ thể có dạnghình trứng dài và hơi dẹp Bờ bụng trước của vỏ có 4 gai và có dạng u lồi, giữa cókhe hình chữ V Bờ lưng trước có 6 gai hình tam giác và đỉnh nhọn Cơ quan đặctrưng của luân trùng là mề nghiền, có tác dụng trong việc nghiền các hạt được ăn.

1.2.3 Phân bố và dinh dưỡng của luân trùng

Luân trùng phân bố rộng nhiều nơi trên thế giới, ở nước ta phân bố ở ao, đầm…

với mật độ cao Brachionus plicatilis là bọn động vật ăn lọc nên thức ăn chủ yếu là

vi tảo, vi khuẩn, mùn xác hữu cơ, vật thể lơ lửng trong nước.

1.2.4 Sinh trưởng và phát triển

Luân trùng sinh trưởng và phát triển phụ thuộc vào nhiều yếu tố: độ mặn, nhiệtđộ, mật độ nuôi…

Bằng phương pháp nuôi nhân tạo xác định được một số chỉ tiêu sinh trưỏng sau:-Thời gian phát triển phôi: thường kéo dài tử 11-21h.

-Thời gian thành thục: tính từ lúc còn non đến lúc trưởng thành sinh sản: kéo dàitừ 22-38h

1.2.5 Về sinh sản.

Vòng đời của Brachionus plicatilis có thể khép lại bằng hai phương thúc sinh

Sinh sản đơn tính và hữu tính.

Trong giai đoạn sinh sản đơn tính của con cái, các con cái vô phối đơn tính sảnsinh ra các trứng đơn tính (thể lưỡng bội 2n), các nhiễm sắc thể phát triển và nởthành các con cái vô phối đơn tính.

Trong những điều kiện môi trường đặc thù, con cái chuyển sang sinh sản hữutính phức tạp hơn và trở thành con cái vô phối đơn tính và lưỡng tính Mặc dầu cảhai con này không thể phân biệt được về hình thái, nhưng các con cái vô phối lưỡng

tính sản sinh ra các trứng đơn bội( các nhiễm sắc thể n) Các ấu trùng nở từ cáctrứng lưỡng tính không thụ tinh này phát triển thành các con đực đơn bội.

Những con đực này có kích thước khoảng 1/4 kích thước con cái, cũng không cóống tiêu hoá và bàng quang nhưng lại có một tinh hoàn đơn chứa đầy tinh trùng.Các trứng lưỡng tính có kích thước nhỏ hơn nhiều sẽ nở thành con đực; trong khicác trứng lưỡng tính thụ tinh thì lớn hơn và có một lớp bên ngoài và hơi có dạnghạt.

Các trứng này là những trứng nghỉ và chúng chỉ phát triển và nở thành các concái vô phối đơn tính sau khi tiếp xúc với các điều kiện môi trường đặc thù Điều nàycó thể là do kết quả của những thay đổi về điều kiện môi trường, cuối cùng đã tạora những thay đổi về nhiệt độ, độ mặn hoặc các điều kiện thức ăn thay đổi Cầnnhấn mạnh rằng mật độ luân trùng của quần thể cũng đóng một vai trò quan trọngtrong việc quyết định phương thức sinh sản Mặc dầu chưa hoàn toàn hiểu hết cơchế, nhưng nói chung người ta tin rằng việc sản xuất các trứng nghỉ là một chiếnlược của quần thể để sống sót qua các điều kiên môi trường không thuận lợi nhưhạn hán hoặc rét.

1.2.6.Giá trị dinh dưỡng và vai trò làm thức ăn của luân trùng.

Giá trị dinh dưỡng của các “vật mồi” được quyết định bởi khả năng thoả mãncủa nhu cầu về dinh dưỡng cho sự sinh trưởng và phát triển của các “đối tượngđích” Không phải ngẫu nhiên mà hiện nay luân trùng được nuôi rộng rãi để làmthức ăn cho hầu hết các loài cá biển Mỗi dối tượng cá biến cần các loại thức ănkhác nhau, nhưng có thể khẳng định rằng “Luân trùng là thức ăn sống không thểthiếu cho giai đoạn bắt đầu ăn của ấu trùng cá biển” (Như Văn Cẩn, 1999).

Giá trị của luân trùng trong công nghệ sản xuất giống cá biển được thể hiện ởcác mặt sau:

-Kích thước luân trùng phù hợp với kích cỡ miệng của ấu trùng cá biển mới nở -Tốc độ bơi chậm, khả năng phân bố đều trong nước, màu sắc phù hợp nên luântrùng có tác dụng kích thích tập tính bắt mồi của ấu trùng.

-Luân trùng dễ nuôi do chịu được sự biến động lớn của môi trường.

-Tốc độ sinh sản nhanh, vòng đời ngắn, khả năng nuôi với mật độ cao có thể chosinh khối lớn, đáp ứng cho nhu cầu sản xuất.

Và đặc biệt quan trọng là giá trị dinh dưỡng của luân trùng đáp ứng nhu cầu dinhdưỡng cho các đối tượng nuôi:

Luân trùng là bọn giàu dinh dưỡng, dễ tiêu hoá và hấp thụ Trong thành phầnaxit béo không no có chứa EPA, DHA,hai loại này được coi là axit béo thiêt yếu cótác động đến tỷ lệ sống và sự phát triển của cá biển (Sargent, 1989; Olsen và ctv,1993; Kanazawa, 1993; Dhert và Sorgeloos, 1995 trích bởi Như Văn Cẩn, 1999).Mặc dầu, khả năng tổng hợp HUFA n-3 của luân trùng rất kém, nhưng bù lại luântrùng lại dễ hấp thu và tích luỹ các loại axit này Điều này rất có ý nghĩa khi ta ápdụng các biện pháp làm giàu luân trùng trước khi cho ấu trùng cá biển ăn, nhằmnăng cao tỷ lệ sống, sức sinh trưởng của các đối tượng nuôi.

Theo thống kê luân trùng sử dụng làm thức ăn cho 60 loài cá biển, 16 loài giápxác.

Ví dụ: sử dụng làm thức ăn cho cá chẽm giai đoạn từ 1 – 15 ngày tuổi sử dụng làm thức ăn cho cá mú giai đoạn từ 1 – 30 ngày tuổi

sử dụng làm thức ăn cho cá măng,cá bớp giai đoạn từ 5 – 20 ngày tuổi

1.2.7 Ảnh hưởng của một số yếu tố tới sự biến động của quần thể luân trùng.

- Ảnh hưởng của các yếu tố vô sinh.

Trong các yếu tố vô sinh , yếu tố nhiệt độ và độ mặn là quan trọng nhất  Nhiệt độ:

Nhiệt độ không chỉ ảnh hưởng tới sự phát triển của quần thể , tỷ lệ trứng, tốc độtiêu thụ thức ăn, sự hình thành và tỷ lệ nở của trứng nghỉ, kích thước, thời điểm xuấthiện luân trùng trong tự nhiên mà còn tác động đến thành phần sinh hoá của luântrùng.

Theo Olsen và ctv (1993) khi nhiệt độ thấp luân trùng tiêu thụ thức ăn chậm, tốcđộ phát triển quần đàn thấp nhưng lại duy trì được hàm lượng lipit và carbohydratetrong thời gian dài (Như Văn Cẩn, 1999) Ngược lại, nhiệt độ cao tiêu thụ thức ănnhanh, tốc độ tăng sinh khối nhanh (do tăng hoạt động sinh sản) nhưng nuôi luân

trùng với nhiệt độ cao đi kèm với chi phí nhiều hơn cho thức ăn và thành phần sinhhoá cũng biến đổi rất nhanh, đặc biệt khi biên động về thức ăn.

Sự thích ứng nhiệt độ cũng phụ thuộc vào từng dòng, dòng nhỏ có nhiệt độ cựcthuận nằm trong khoảng 28-350C, trong khi đó dòng lớn là 18-250C (Fukusho, 1989trích bởi Cái Ngọc Bảo Anh).

Bảng 1.1 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt động sinh sản của Brachionusplicatlis (Theo Ruttner-Kolisko, 1972)

Nhiệt đô (0C) 15 20 25Thời gian để phát triển phôi (ngày) 1,3 1,3 0,6Thởi gian đẻ các con cái non đẻ lần đầu (ngày) 3,0 1,9 1,3Khoảng thời gian giữa hai lần đẻ (giờ) 7,0 5,3 4,0Tuổi thọ (ngày) 15 10 7Số trứng do 1 con cái đẻ trong cuộc đời của nó 23 23 20 Độ mặn:

Độ mặn thích hợp nuôi luân trùng được xác định nằm trong khoảng 4 – 35 ppt(Lubzens, 1987), tốt nhất là 25 ppt ( Spektorova, 1998 trích Như Văn Cẩn, 1999).Mặc dù, luân trùng có thể tồn tại ở độ mặn 1 -97 ppt, nhưng nó chỉ phát triển tốt ởđộ mặn tối ưu, sự biến đổi đột ngột về độ mặn có thể làm luân trùng ngừng hoạtđộng , gây chết hoặc làm giảm chất lượng luân trùng, điều này có ý nghĩa khi ta sửdụng luân trùng để làm thức ăn cho ấu trùng động vật biển trước khi cho ấu trùng ănta cần phải làm thuần đến độ mặn thích hợp.

Ngoài hai yếu tố chính là nhiệt độ và độ mặn thì các yếu tố như oxy hoà tan,NH3 … cũng có những ảnh hưởng theo các mức độ khác nhau Trong nuôi sinh khốivới mật độ cao cần quan tâm tới việc bổ sung ôxy, nhưng cũng không nên sục khíquá mạnh bởi có thể làm tổn thương tới luân trùng Luân trùng có thể tồn tại trongnước với hàm lượng ôxy thấp tới 2 mg/L Trong nuôi sinh khối luân trùng, mức pHtrên 6,6; hàm lượng NH3 dưới 1 mg/L được coi là an toàn.

- Ảnh hưởng của các yếu tố hữu sinh.Vi khuẩn.

Để nuôi luân trùng được ổn định, thì sự ảnh hưởng của vi khuẩn lên sinh khốiluân trùng cần phải được xem xét một cách kỹ lưỡng cả về số lượng cũng như thànhphần các vi khuẩn trong hệ thống nuôi.

Psedomonas và Acinetobacter là những vi khuẩn cơ hội phổ biến, chúng có thể

là nguồn thức ăn bổ sung quang trọng cho luân trùng Ví dụ một vài loài

Psedomonas tổng hợp vitamin B12, mà vitamin này có thể là yếu tố hạn chế trong

các điều kiện nuôi (Yu và ctv, 1998, trích bởi Lavens và Sorgeloos, 1996).

Mặc dù hầu hết các vi khuẩn đều không gây bệnh cho các luân trùng nhưng cầntránh để chúng sinh sôi nảy nở vì nếu chúng tích tụ lại và truyền qua chuỗi thức ăncó thể gây ra những ảnh hưởng có hại đến các sinh vật ăn mồi sống.

Để nuôi luân trùng được ổn định, cần xem xét hệ vi khuẩn cũng như điều kiệnsinh lý của các luân trùng Ví dụ, người ta chứng minh rằng điều kiện thức ăn của

luân trùng Brachionus plicatilis có thể được đo bằng hoạt động sinh lý và phản ứngcủa nó đối với dòng vi khuẩn gây bệnh được chọn lựa (Vibrio anguillarum TR27):dòng vi khuẩn V.anguillarum được xử lý ở nông độ 106-107 CFU/mL (đơn vị hìnhthành tập đoàn) đã ảnh hưởng xấu đến các luân trùng nuôi bằng khẩu phần thức ăntối ưu không bị ảnh hưởng bởi dòng vi khuẩn này

Trùng tiêm mao.

Trong sản xuất, sự có mặt của số lượng ít trùng tiêm mao thì không phải là mộtvấn đề gì quá nghiêm trọng, nhưng với số lượng lớn có thể dẫn đến việc giảm độtngột mật độ và khả năng thu sinh khối luân trùng.

Các trùng tiêm mao Halotricha và Hypotricha như Uronema sp và Euplotes sp

là những loài không mong muốn trong nuôi thâm canh vì chúng cạnh tranh thức ănvới các luân trùng (Lavens và Sorgeloos, 1996).

Sự suất hiện những trùng tiêm mao này nói chung là do các điều kiện ở mức tốiưu dẫn đến kết quả làm cho luân trùng hoạt động kém và làm tăng cơ hội cạnh tranhthức ăn Các trùng tiêm mao sản sinh ra các chất chuyển hoá làm tăng hàm lượng

NO2-N trong nước và làm giảm độ pH Tuy nhiên chúng có tác dụng tích cực trongviệc loại bỏ vi khuẩn và các chất mùn bã ra khỏi bể nuôi Việc cho thêm một nồngđộ thấp 20 mg/L foocmalin vào bể nuôi cấy tảo, 24 giờ trước khi cấy luân trùng cóthể làm giảm đáng kể sự nhiễm bẩn các động vật đơn bào Sàng lọc và làm sạch cácluân trùng bằng các lưới lọc thực vật phù du (<50m) để giảm số lượng trùng tiêmmao hoặc các vật gây bẩn có kích thước nhỏ là cách phòng ngừa có thể thực hiện dễdàng khi tiến hành việc nuôi cấy ban đầu.

Theo kết quả nghiên cứu của Như Văn Cẩn (1999), mật độ nhiễm trùng tiêmmao trong các bể nuôi bằng tảo tươi thấp hơn rất nhiều khi nuôi bằng nấm men.

Virut và nấm.

Virus Rotier Birnavirus (RBV) và nấm thuộc nhóm Lagenidiaceae được quan

tâm nhiều và được xem như một trong những tác nhân nguy hiểm gây ra sự biếnđộng lớn mật độ và hiện tượng chết đột ngột của quần thể luân trùng.

Theo Võ Khả Tâm ( 1999), luân trùng nuôi sinh khối bằng tảo N oculata mật độ12x106 tb/mL cho sinh khối luân trùng cao và hạn chế sự phát triển của nấm.

1.2.8 Các loại thức ăn sử dụng trong nuôi sinh khối luân trùng.

 Nuôi sinh khối luân trùng bằng vi tảo.

Năm 1999, trong nghiên cứu của mình Như Văn Cẩn đã chỉ ra rằng: Luân trùngđược nuôi bằng tảo có sức sống cao hơn, khả năng chịu được sự biến đổi độ mặn tốthơn so với nuôi bằng men bánh mì.

Tảo biển được coi là thức ăn tốt nhất nuôi luân trùng vì có giá trị dinh dưỡngcao, giàu vitamin, phân tán tốt trong nước và đặc biệt không làm ô nhiễm nước.Tuynhiên trong thực tế các trại sản xuất khó có khả năng cung cấp đủ tảo cho nuôi luântrùng.Bởi vì, luân trùng có sức tiêu thụ thức ăn khá lớn, một con cái có thể tiêu thụmột lượng tảo tương đương 5-10 lần thể tích cơ thể chúng (Banabe, 1991 trích bởiNhư Văn Cần, 1999) Trong khi đó, việc sản xuất tảo với số lượng lớn lại đòi hỏiphải có sự đầu tư lớn cơ sở vật chất và nhiều nhân công.

Chi phí cao liên quan đến sản xuất tảo, những rủi ro do bị nhiễm bẩn và nhừngbiến đổi theo thời gian trong giá trị thức ăn của tảo vẫn còn là vấn đề tồn tại với bất

kỳ trại sản xuất giống cá biển nào Để hạn chế vấn đề này các nhà nghiên cứu cốgắng tìm cách thay thế tảo bằng các thức ăn nhân tạo làm thức ăn bổ sung hoặc thaythế hoàn toàn tảo.

Nuôi sinh khối luân trùng bằng men bánh mì

Năm 1967, Hirata và Mori đã góp phần tạo ra một bước tiến quan trọng trongcông nghệ nuôi thu sinh khối luân trùng bằng việc phát hiện ra loài nấm men

Saccharomyces cerevisiae để thay thế tảo làm thức ăn nuôi luân trùng(Như Văn

Cẩn, 1999) Việc sử dụng nắm men mang tính hiệu quả kinh tế cao, đỡ tốn kémnhân công và mang tính chủ động cao trong sản xuất.

Tuy nhiên, việc chỉ sử dụng nấm men bánh mì làm thức ăn cũng có những vấnđề cần phải được xem xét một cách thận trọng Những thử nghiệm đầu tiên để thaythế hoàn toàn thức ăn tự nhiên của luân trùng bằng men bánh mì được đặc trưng bởisự thành công thất thường và thất bại đột ngột (Hiramaya, 1987 trích bởi Lavens &Sorgeloos, 1996) Nguyên nhân ở đây có thể dược giải thích do sự thiếu hụt vitaminB12, cystein và một số acid béo không no HUFA n – 3 trong thành phần của menbánh mì, mà đây là nhũng chát rất cần thiết cho sự phát triển của luân trùng, cũngnhư ấu trùng các sinh vật ăn mồi sống.

 Nuôi sinh khối luân trùng bằng thức ăn tổng hợp (Culture selco).

Thức ăn dạng này được chế biến để thay thế hoàn toàn cho các vi tảo sống vàđồng thời đảm bảo sự hợp nhất ở mức độ cao các axit béo thiêt yếu (EFA) vàvitamin ở luân trùng.Thành phần hoá sinh của thức ăn nhân tạo Culture selco gồmcó 45% protêin, 30% hydratcacbon, 15% lipit (33% thức ăn này là các axit beokhông no HUFA n – 3 ) và 7% tro Các đặc điểm vật lý thứa ăn này là tối ưu đối vớisự hấp thụ của luân trùng Tuy nhiên, trong sản xuất khó có trại sản xuất nào có thểsử dụng loại thức ăn này để nuôi luân trùng Bởi vì, giá thành của loại thức ăn nàyrất cao, nên thường thì chỉ có thể sử dụng trong việc “lam giàu” luân trùng trước khiđưa vào các bể ương ấu trùng.

 Kết hợp các loại thức ăn để nuôi sinh khối luân trùng.

Mỗi loại thức ăn riêng biệt dùng để nuôi luân trùng đều có những nhược điểmnhất định Vì vậy, sự kết hợp giữa các loại thức ăn có thể là một giải pháp hữu hiệutrong việc nuôi sinh khối luân trùng ở các trại sản xuất.

Nhiều công thức phối hợp đã được đưa ra và cũng ít nhiều cho thấy được hiệuquả Spektorrora (1981) thí nghiệm phối hợp tảo và men bánh mì nuôi luân trùngtheo 3 tỷ lệ 1:2; 1:1; và 2:1 cho ăn theo 3 khẩu phần: 5; 50 và 100 g /mL Kếtluận rút ra là luân trùng phát triển tốt nhất khi nuôi bằng tảo kết hợp với nắm mentheo tỷ lệ tảo : men = 1:2 và khẩu phần tốt nhất là 100 g /mL ( Như Văn Cẩn,1999).

Năm 1999, kết quả nghiên cứu của Cái Ngọc Bảo Anh cho thấy nấm men bổ

sung 10% dầu mực là một loại thức ăn có thể sử dụng nuôi sinh khối luân trùng B.plicatilis dòng nhỏ.

1.3 Tình hình nghiên cứu và ứng dụng vi tảo trong nước và trên thế giới

1.3.1 Đặc điểm sinh học tảo Nannochloropsis oculata.

Giống Nanochloropsis Hibberd, 1981

Loài N Oculata Hibberd 1981

B Đặc điểm sinh học

- Đặc điểm hình thái cấu tạo.

Tảo N oculata có kích thước nhỏ, tế bào có dạng hình cầu và hình trứng, đường

kính dao động trong khoảng 2 – 4 m Đây là tảo đơn bào không có khả năng diđộng (Phạm Thị Lam Hồng, 1999).

-Cấu tạo hiển vi của tế bào.

Năm 1986, Murayama đã nghiên cứu cấu trúc hiển vi của tế bào tảo N Oculata

dưới kính hiển vi điện tử cho thấy tế bào có một nhân Thể sắc tố quang hợp chỉ có

một thể sắc tố hình trứng Thể sắc tố được bao bọc bởi hai lớp màng, lớp màngngoài dính liền với màng nhân Trong thể sắc tố có nhiều bản sắc tố, mỗi bản gồm 3phiến sắc tố xếp song song, không có đai nối giữa các sắc tố Sắc tố quang hợp duy

nhất tìm thấy ở tảo N Oculata là Chlorophyl a, không thấy sắc tố quang hợp

chlorophyl b và c Đây có thể coi là một đặc trưng sinh hoá chủ yếu để phân loại tảo

Nannochloropsis nói riêng và ngành Eustigmataphyta nói chung Các carotenoid

bao gồm carotene 11%, violaxathin 51%, vaucherixathin 26% và các carotenoidkhác chiếm 12% (Maruyama, 1986 trích bởi Phạm Thị Lam Hồng, 1999).

-Hình thức sinh sản: N oculata có hai hình thức sinh sản là sinh sản sinh dưỡng

bằng cách phân đôi và sinh sản bằng tự bào tử.

1.3.2 Giá trị dinh dưỡng của tảo.

Vi tảo là mắt xích thức ăn đầu tiên của chuỗi thức ăn ngoài tự nhiên Chúng làthức ăn không thể thay thế cho giai đoạn ấu trùng và trong suốt giai đoạn trưởngthành của động vật thân mềm Đối với ấu trùng giáp xác và ấu trùng một số loài cá,tảo cũng là thức ăn bắt buộc ở giai đoạn sớm Tảo biển với giá trị dinh dưỡng cao vàthoả mãn yêu cầu về kích thuớc nên có thể nâng cao tỷ lệ sống của ấu trùng, quyếtđịnh thành công trong việc sản xuất giống nhiều loài động vật biển có giá trị kinh tế.Vi tảo biển có hàm lượng dinh dưỡng cao, hàm lượng protein từ 6 – 34% khốilượng khô, hàm lượng lipit từ 5 – 23%, hàm lượng carbohydrate từ 5 – 12% khốilượng khô (Brown và ctv, 1997 trích bởi Phạm Thị Lam Hồng, 1999).

Vi tảo biển là nguồn cung cấp acid béo không no cho các động vật biển Acidbéo không no có vai trò quan trọng đối với ấu trùng động vật thân mềm, cá biển vàcác loại động vật phù du Các acid béo có giá trị dinh dưỡng nhất là EPA 20:5n-3(Eicosapentaenonic acid), và DHA 22:66n-3 (Docosahexaenoic acid).

Ngoài ra, các vi tảo biển còn rất giàu vitamin Mười loại vitamin đã tìm thấy ở vitảo, trong đó hàm lượng vitamin C và vitamin B12 cao nhất, tiếp theo là cácVitamin A, D, E, K Ngoài vai trò cung cấp thức ăn cho luân trùng và ấu trùng cá,tảo còn tác dụng làm ổn định môi trường như cung cấp oxy hoà tan và hấp thụ NH3trong bể ương ấu trùng Tuy nhiên, giá trị dinh dưỡng của những loài tảo khác nhau

rõ rệt giữa các loài, giữa các dòng trong cùng một loài và đặc biệt phụ thuộc vào

điều kiện môi trường như độ mặn, ánh sáng, thời điểm thu hoạch

1.3.3 Ảnh hưởng của một số yếu tố tới sự biến động quần thể vi tảo.-Sinh trưởng của tảoTrong các điều kiện thuận lợi của môi trường về dinh dưỡng, ánh sáng, độ mặnvà nhiệt độ, các loài vi tảo sinh sản theo kiểu phân cắt tế bào làm số lượng tế bàotăng lên một cách nhanh chóng.Sự sinh trưởng của vi tảo được đặc trưng bởi 5 pha (Lavens & Sorgeloos, 1996):+ Pha gia tốc dương (I): ở pha này tảo bắt đầu làm quen với môi trường nuôi,hấp thụ dinh dưỡng và bắt đầu phân chia tế bào nhưng số lượng tế bào tăng chậm.+ Pha logarit (II): số lượng tế bào ở pha này tăng theo cấp số nhân Tảo ở giaiđoạn này hấp thụ dinh dưỡng mạnh.+ Pha gia tốc âm (III): ở pha này môi trường dinh dưõng có chiều hướng giảmmạnh cùng với mật độ tế bào tảo cao làm tốc độ sinh sản giảm, tuy vậy số lượng tếbào vẫm còn tăng.+Pha cân bằng (IV): tảo đạt mật độ cực đại và số lượng ổn định.+Pha tàn lụi (V): tảo sau khi đạt mật độ cực đại, khả năng sinh sản giảm dần vàsố lượng tảo giảm một cách rõ rệt.Tốc độ tăng trưởng của các loài tảo khác nhau thì khác nhau, ngoài ra nó cònchịu sự chi phối lớn của các điều kiện môi trường

Số lương tế bào III

II

I

- Ánh sáng

Thời gian

VIV

Giống như bao loài thực vật khác, vi tảo cùng phải quang hợp, tức là chúng hấpthụ cacbon vô cơ để chuyển hoá thành các chất hữu cơ Trong khi đó, ánh sángchính là nguồn năng lượng cho quá trình quang hợp Vì vậy, ảnh hưởng của ánhsáng cần phải được xem xét ở các khía cạnh như: cường độ ánh sáng, phổ ánh sáng,và thời gian chiếu sáng Mặc dù, ánh sáng ban ngày đủ cung cấp cho tảo quang hợp.Nhưng cường độ ánh sáng ban ngày lại phụ thuộc rất lớn vào điều kiện thời tiết, khíhậu địa phương, những thay đổi đột ngột về cường độ ánh sáng, thời gan chiếu sáng(do thời tiết thay đổi) có thể làm ảnh hưởng đến quá trình sinh trưởng của tảo, thậmchí làm cho tảo tàn lụi hàng loạt.Chính vì vậy, những nghiên cứu về ánh sáng nhântạo cho việc nuôi tảo cũng được nghiên cứu nhiều Theo Guillard (1975) tảo chỉ cóthể chịu được ánh sáng mặt trời trực tiếp khi mật độ tảo nuôi đạt được mật độ khácao (Phạm Thị Lam Hồng, 1999) Với cường độ ánh sáng quá mạnh có thể ức chếquá trình quang hợp (Lavens & Sorgeloos, 1996) Cường độ mạnh và thời gianchiếu sáng lâu có thể làm tăng nhiệt độ bể nuôi Như vây, ánh sáng còn kết hợp vớinhiệt độ ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của tảo.

Tảo N oculata là loài có khả năng thích nghi với sự biến động nhiệt độ rộng, phát

triển tốt nhất trong khoảng nhiệt đô từ 10-300C.- Độ mặn

Mỗi loài tảo khác nhau có khả năng thích nghi với một khoảng dao động độ mặnkhác nhau Hầu hết các loại tảo dạng monas sinh trưởng trong khoảng độ mặn daođộng 12-40 ppt, nhưng phát triển tốt nhất ở độ mặn 20-24 ppt.

N oculata là một loài rộng muối, thích ứng được trong khoảng độ mặn 7-35 ppt.Theo kết quả nghiên cứu của Phạm Thị Lam Hồng (1999) tảo N oculata phát triển

tốt nhất ở độ mặn 30-35 ppt nhưng có thể phát triển ở độ mặn 10-35 ppt Tuy nhiên,

theo Vũ Dũng(1998) Tảo N oculata phát triển tốt ở độ măn 18-26 ppt (Đặng Đình

Kiêm, 2002) Mặc dù có khả năng thích nghi với sự thay đổi độ mặn một cách độtngột sẽ làm thay đổi nhanh chóng áp suất thẩm thấu của tế bào, thậm chí sẽ bị chếthàng loạt.

Sự biến đổi độ mặn chỉ ảnh hưởng nhẹ đến hàm lượng protein, hydratcacbon,chlorophyl a nhưng đối với lipit trong khoảng độ mặn từ 10 – 15 ppt, độ măn tănghàm lượng lipit tăng, độ mặn thay đổi làm thành phần acid béo thay đổi.

- pH

pH của môi trường quá cao hoặc quá thấp đều làm chậm tốc độ tăng trưởng củatảo Sự biến đổi của nhiệt độ, ánh sáng có tác động đến pH thông qua quá trìnhquang hợp của tảo Mức pH tốt nhất cho sự phát triển của tảo là từ 8,2- 8,7 Sự biếnđộng pH trong môi trường nuôi tảo phụ thuộc vào sự cân bằng sau:

Dinh dưỡng là yếu tố vô cùng quan trọng ảnh hưởng mạnh tới sự sinh trưởng vàphát riển của tảo Môi trường dinh dưỡng ảnh hưởng cả trên phương diện số lượngvà chất lượng Mỗi loài tảo khác nhau có nhu cầu dinh duỡng về thành phần và sốlượng từng chất là khác nhau Nhu cầu về đạm giảm dần từ tảo Lục, tảo Lam và tảoSilic có nhu cầu về đạm là thấp nhất, Silic rất cần thiết chi sự phát triển của tảo Silicvì nó tham gia vào cấu tạo màng tế bào.

Muối nitơ rất cần thiết cho quá trình sinh trưởng và phát triển của tảo Bởi vìnitơ là thành phần cơ bản tạo nên các loại prôtêin, trong đó có protêin cấu trúc vàprotêin chức năng Ngoài ra, nitơ còn tham gia vào cấu tạo của nhiều loại vitaminB1, B2, B6, BP là thành phần quan trọng của hệ men oxy hóa khử và nhiều menquan trọng khác.

Photpho được coi là chìa khoá của quá trình trao đổi chất Hàm lượng photphokhông cần thiết phải cao, xong nếu thiếu nó thì tảo không phát triển được Bởi vìphotpho có tác dụng lên hệ keo ở dạng các ion, photpho ở dạng liên kết với các kimloại tạo nên hệ đệm đảm bảo cho pH của tế bào luôn xê dịch trong một phạm vi nhấtđịnh (6-8) là điều kiện tốt cho các hệ men hoạt động Photpho tham gia vào cấu trúccó vai trò quan trọng trong những khâu chuyển hoá trung gian và có ý nghĩa thenchốt trong trao đổi năng lượng

Bên cạnh những nguyên tố đa lượng việc bổ sung những nguyên tố vi lượngcũng rất cần thiết Các nguyên tố vi lượng gồm một số các muối kim loại với nồngđộ thấp như: CuSO4, CoCl2, ZnSO4, FeCl3… Vai trò của các nguyên tố vi lượng nàyhầu như đều có tác dụng đến quá trình trao đổi chất của tảo Trong đó, sắt là nguyêntố vi lượng được bổ sung nhiều nhất so với các muối kim loại khác trong môitrường nuôi Tuy sắt không phải là chất tham gia vào cấu tạo của diệp lục nhưng nólà tác nhân bổ trợ hoặc là thành phần tham gia vào cấu trúc của các hệ men và chủyếu là các men oxy hoá khử, tham gia tích cực vào dây chuyền sinh tổng hợp củacác chất quan trọng Sắt đóng vai trò quan trọng vào quá trình vận chuyển điện tửquang phân ly nước và quá trình photphoryl hoá quang hợp Do vậy nhu cầu sắt chosự sinh trưởng và phát triển của tảo là rất cần thiết nhưng chỉ ở hàm lượng thấp Khihàm lượng sắt quá cao có thể gây độc cho tảo.

Ngoài ra vitamin cũng được sử dụng khá phổ biến để bổ sung vào môi trườngnuôi tảo, dù chỉ với một lượng rất nhỏ nhưng có thể thúc đẩy sự gia tăng sinh khốicủa tảo Vitamin B12 và B1 là hai vitamin rất cần cho tảo, sau đó là biotin

N oculata phát triển rất nhanh trong môi trường Walne là môi trường được bổ

sung thêm vitamin B1 (0,1 mg/L) và B12 (0,005 mg/L).

1.3.4 Tình hình nghiên cứu và ứng dụng vi tảo trong nước và trên thế giới

- Trong nước.

Tại Việt Nam, những nghiên cứu về tảo dã được thực hiện từ rất lâu Nhưngnhững nghiên cứu trước đây chủ yếu về phân loại, điều tra thành phần trong cácthuỷ vực nội địa, những nghiên cứu về tảo biển còn rất hạn chế ở thời kỳ trước

những năm 80 của thế kỷ trước, và những hiểu biết của chúng ta về tảo thường gắnliền với những báo cáo của một số ít tác giả.

Trương Ngọc An và ctv (1970 – 1971) đã phát hiện 115 loài thực vật nổi trênsông Ninh Cơ ở Nam Hà.

Dương Đức Tiến (1982) đã công bố 1389 loài tảo ở các thuỷ vật nội địa ViệtNam.

Những nghiên cứu ứng dụng tảo trong sản xuất chỉ thực sự phát triển kể từ giữathập kỷ 80 của thế kỷ 20, với thành công trong công trình của Lê Viện Trí (1980 –

1986) về ứng dụng nuôi tảo Skeletonema costatum làm thức ăn trong các trại sản

xuất tôm giống ở Hạ Long.

Trong những năm gần đây, những thành công của công nghệ sinh sản nhân tạogiống tôm sú, điệp quạt và đặc biệt việc nghiên cứu cho sinh sản nhiều loài cá biểnđã góp phần thúc đẩy khoa học nghiên cứu ứng dụng tiến thêm một bước mới vớinhững nghiên cứu mang tính thực tiễn hơn.

Năm 1995, Hoàng Thi Bích Mai đã nghiên cứu ảnh hưởng của độ mặn, nhiệt độánh sáng, hàm lượng muối dinh dưỡng lên sinh trưởng, phát triển và đưa ra quy

trình nuôi hai loài tảo Skeletonema costatum và Chaetoceros sp, làm thức ăn cho ấu

N oculata và C muelleri trong điều kiện phòng thí nghiệm, thành công của nghiên

cứu đã góp thêm những hiểu biết quan trọng về hai loài tảo và ứng dụng nuôi bánliên tục để cung cấp tảo cho việc sản xuất động vật phù du, trong quy trình ương cácloại ấu trùng động vật biển.

Năm 1999, Lục Minh Diệp đã có những công bố quan trọng khi nghiên cứu ảnhhưởng của tỷ lệ phân bón, tỷ lệ thu hoạch lên sự phát triển của hỗn hợp tảo tự nhiên

và thử nghiệm nuôi tảo N oculata Những kết quả từ báo cáo này đã giúp cho chúngta hiểu biết đầy đủ hơn về vi tảo và khả năng thay đổi thành phần loài tảo ưu thế củatảo tự nhiên theo tỷ lệ pha loãng và tỷ lệ phân bón

Hồng Thị Kiều Nga (2002), ảnh hưởng chế độ bón phân đến sinh trưởng của

quần thể tảo N oculata và I galbana ngoài trời ; Hoàng Thị Ngọc (2003), ảnh

hưởng của hàm lượng phân bón và sự bổ sung CO2 đến sinh trưởng của các quần

thể tảo ; Mai Thi Thuỳ Linh (2004), nuôi thu sinh khối hai loài tảo N oculata vàI.galbana ở quy mô túi nylon 50 lít và 2 m3 Ý nghĩa của những báo cáo này làkhông thể phủ nhận nhưng chúng lại được tiến hành tại cùng một địa điểm trongđiều kiện của một trại thực nghiệm, vì vậy mà tính thực tiễn là không cao.

Nhìn chung, hiện nay nước ta đã có nhiều cơ quan nghiên cứu, phân lập, nhângiống, lưu giữ và nuôi sinh khối tảo và quy trình sản xuất các loài tảo cũng tươngđối hoàn chỉnh Tuy vậy, những nghiên cứu ứng dụng tại các cơ sở sản xuất còn rấthạn chế, cần phải được tiến hành nhiều hơn nữa.

- Trên thế giới.

Khoảng 1/3 sinh khối thực vật trên thế giới là sinh khối tảo Trong tổng sốkhoảng 25.000 loài vi tảo hiên nay có khoảng 50 loài được nghiên cứu tỉ mỉ về mặtsinh hoá, sinh lý và sinh thái học (Đặng Đình Kim, 2002) Hiện nay, có trên 40 loàitảo khác nhau được phân lập ở các nên trên thế giới, đang được nuôi để làm cácchủng tảo thuần khiết trong các hệ thống thâm canh (Lavens & SorgelooS, 1996).

Việc nghiên cứu phân lập và nuôi tảo thuần khiết sạch vi khuẩn đã đượcBeijerkin tiến hành năm 1980 (Phạm Thị Lam Hồng, 1999).

Năm 1993, Liao và ctv đã sử dụng thành công tảo Skeletonema costatum làmthức ăn cho ấu trùng tôm sú P monodon.

Trong những năm qua, cùng với sự phát triển của công nghệ sản xuất giốngnhiều đối tượng hải sản, các nghiên cứu về sản xuất các loài tảo khác nhau cũngđược tiến hành theo nhiều quy mô và đa dạng hoá đối tượng.

Ở Nhật bản, nuôi N oculata làm thức ăn cho trùng bánh xe rất phổ biến. Ở Úc

các loài tảo đơn bào như Tetraselmis sp, Palova lutheri… được nuôi phổ biến làm

thức ăn cho động vật thân mềm.

Chương 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU2.1 Đối tượng, thời gian và phương pháp nghiên cứu.

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu:

Luân trùng loài Brachionus plicatilis Muller, 1786Tảo Nannochloropsis oculata Hibbred, 1981

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu :

Trại thực nghiêm nuôi trồng thuỷ sản, trường đại học Nha Trang, Nha Trang,Khánh Hoà.

2.2.3 Thời gian nghiên cứu.

Tư ngày 02/03/2009 đến ngày 13/06/2009.

2.2 Phương pháp nghiên cứu.

2.2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu.

Hình 2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu nuôi Brachionus plicatilis

Nôi dungnghiên cứu

Sử dụng các loại thức ăn khác nhau để nuôi luân trùng

Brachionus plicatilis

Các loại thức ănTảo Nannochoropsis

oculata + Men bánhmì

Men bánh mi +

protein selco Men bánh mì

Xác định, so sánh mật độ, tỷ lệ trứng, tốc độ tăng trưởng ngàycủa luân trùng

Kết luận và đề xuát ý kiến

Nội dung nghiên cứu

Hình 2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu tảo N oculata

2.2.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm nuôi sinh khối tảo N oculata và xác định các chỉ số kỹ thuật

-Tảo Nannochloropsis oculata: có kích thước từ 2-5µm, rất nhiều HUPA và giàu

acid béo họ (n-3), thích hợp vùng nhiệt đới, dễ nuôi đại trà, có màu xanh nõn chuốihơi ánh vàng Tảo giống được lấy từ trường Đại Học Nha trang

-Môi trường dinh dưỡng ( môi trường f2 (Guilliard, 1975)) :Dung dịch 1 : KNO3 : 89,6 mg/L

KH2PO4 : 5,6 mg/LNa2SiO3.9H20 : 30 mg/LDung dịch 2 : Na2EDTA : 4,36 mg/L FeCl3.6H2O: 3,15 mg/L

CuSO4.5H2O: 0,01 mg/L ZNSO4.H2O: 0,022 mg/L

CoCl2.6H2O: 0.01 mg/LMnCl2.4H2O: 0,18 mg/L

Nuôi thu sinh khối tảo N oculata

Xác định khả năng sinh khối tảo N oculata

Kết luận và đề xuất ý kiến

Na2MoO4.6H2O: 0,006 mg/LVitamin: Thiamin (B1): 0,1 mg/L

Biotin (B6): 0,0005 mg/LRiboflavin (B12): 0,0005 mg/L

Thao tác tiến hành: Buộc túi → cấp nước biển được xử lý Cholorine và lọcsạch (S‰: 28 - 31‰) → cấp tảo (350.104 tế bào/ml) → sục khí và bón phân → thuhoạch.

Mỗi túi cho 50 mL dung dịch 1 + 50 mL dung dịch 2 + 50 mL vitamin Bốtrí sục khí mạnh để tránh kết tủa.

-Bố trí thí nghiệm nuôi tảo.

Tảo N Oculata được nuôi với mật độ ban đầu là 350.104 tb/mL Thí nghiệmđược lặp lại 2 lần theo không gian và thời gian.Tảo N oculata được nuôi trong điềukiện độ măn 31 ppt, sục khí 24/24 và nuôi trong túi nylon 50L.

Sơ đồ bố trí thí nghiệm:

-Phương pháp xác định các chỉ số kỹ thuật.+Phương pháp xác định mật độ tảo.

Tảo N oculata giốngTúi nylon 50L

Biến động mậtđộ

Biến động nhiệtđộ

Biến độngpHĐánh giá khả năng thu sinh khối tảo N oculata