NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA KÍCH DỤC TỐ ĐẾN KHẢ NĂNG SINH SẢN CỦA CẦY VÒI HƯƠNG TRONG ĐIỀU KIỆN NUÔI NHỐT. LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Nguyễn Thị Thu Hiền NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA KÍCH DỤC TỐ ĐẾN KHẢ NĂNG SINH SẢN CỦA CẦY VÒI HƯƠNG (Paradoxurus hermaphroditus Pallas, 1777) TRONG ĐIỀU KIỆN NI NHỐT Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Mã số: 42 02 01 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2019 Cơng trình hồn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học 1: PGS TS Nguyễn Thanh Bình Người hướng dẫn khoa học 2: PGS TS Nguyễn Thị Phương Thảo Phản biện 1: … Phản biện 2: … Phản biện 3: … Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Học viện, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … ….’, ngày …… tháng …… năm 2019 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Thư viện Quốc gia Việt Nam 1 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Cầy vòi hương (Paradoxurus hermaphroditus Pallas, 1777) thuộc họ Cầy (Viverridae), ăn thịt (Carnivora) Loài thú phân bố Nam Trung Quốc, Ấn Độ, Lào, Malaysia, Myanmar, Indonesia, Philippines, Thái Lan, Campuchia [1]; Nepal, Singapore [2], Sri Lanca, Việt Nam phân bố rải rác số nơi khác giới [3] Đây loài thú ăn tạp, thức ăn chủ yếu loại quả, có vai trị quan trọng phát tán hạt giống rừng [4, 5, 6] Ở Việt Nam, cầy vòi hương phân bố rộng tồn quốc [7] Cầy vịi hương lồi thú q nhóm IIB, ưu tiên bảo vệ thực thi công ước buôn bán quốc tế động, thực vật hoang dã nguy cấp Việc săn bắt sử dụng cầy vịi hương với nhiều mục đích khác lấy thịt, da, lông, hương liệu; sử dụng sản xuất “cà phê chồn”; mặt khác, sinh cảnh bị phân mảnh làm cạn kiệt loài tự nhiên [2, 8] Bảo tồn, lưu giữ nguồn gen giải pháp khẩn cấp, thường xuyên lâu dài [9] Để bảo tồn bền vững nguồn gen giống vật nuôi, việc khai thác phát triển nguồn gen giải pháp hữu hiệu [10] Hiện nay, Việt Nam gây ni cầy vịi hương nhằm phát triển kinh tế góp phần giữ gìn đa dạng sinh học [11] Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu tồn diện có hệ thống đặc điểm sinh học cầy vòi hương điều kiện nuôi, làm sở khoa học cho q trình hố, hồn thiện quy trình kĩ thuật nhân ni hiệu quả, góp phần bảo tồn bền vững lồi Trong cơng tác quản lí giống, việc tăng suất sinh sản chúng cần ý Sự kết hợp PMSG HCG với liều lượng hợp lí gây nỗn, kích thích sinh sản hiệu nhiều đối tượng: chuột [12, 13], lợn [14], bị [15] Ở Việt Nam, có cơng trình nghiên cứu ảnh hưởng hormone sinh dục đến khả sinh sản bò, lợn [16, 17, 18, 19] Kết nghiên cứu bước đầu tác động PMSG HCG thú hoang dã cho thấy tăng hiệu sinh sản điều kiện nuôi nhốt [20, 21] Do đó, việc nghiên cứu ảnh hưởng kích dục tố lên khả sinh sản cầy vịi hương điều kiện ni nhốt có sở cần thiết; nhằm cải thiện thành tích sinh sản, nâng cao hiệu chăn nuôi để vừa khai thác, vừa bảo tồn ngoại vi (ex-situ consevation) loài động vật hoang dã quý Từ lí cấp thiết trên, đề tài “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học ảnh hưởng kích dục tố đến khả sinh sản cầy vòi hương (Paradoxurus hermaphroditus Pallas, 1777) điều kiện nuôi nhốt” thực Mục tiêu nghiên cứu luận án - Xác định đặc điểm sinh học số tiêu sinh lí-sinh hóa máu, nước tiểu cầy vịi hương điều kiện ni nhốt - Xác định thay đổi hormone sinh dục cầy vịi hương đánh giá tác động kích dục tố lên khả sinh sản cầy vòi hương điều kiện nuôi nhốt nhằm bảo tồn đàn theo hướng phát triển số lượng Nội dung nghiên cứu luận án - Nghiên cứu số đặc điểm sinh học (ngoại hình, dinh dưỡng, tập tính, sinh trưởng, sinh sản) cầy vòi hương điều kiện nuôi nhốt - Nghiên cứu số tiêu sinh lí – sinh hóa máu, nước tiểu cầy vịi hương điều kiện nuôi nhốt - Nghiên cứu thay đổi hormone sinh dục của cầy vòi hương điều kiện nuôi nhốt - Nghiên cứu hiệu tác động kích thích tố sinh dục (PMSG, HCG) đến sinh sản cầy vòi hương CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Sơ lược cầy vòi hương Phần trình bày tổng quan đặc điểm phân loại, ngoại hình, tập tính, sinh sản, phân bố lồi tự nhiên tình hình nhân ni cầy vịi hương 1.2 Tình hình nghiên cứu cầy vịi hương Phần trình bày nghiên cứu cầy vòi hương giới Việt nam Các nghiên cứu chủ yếu tập trung vào tập tính, đặc điểm sinh lí, sinh hóa máu lồi tự nhiên, tính đa dạng di truyền phát sinh loài 1.3 Tổng quan PMSG HCG Trình bày tổng quan nghiên cứu cấu trúc, chức năng, ứng dụng nghiên cứu việc sử dụng PMSG HCG chăn ni 1.4 Tổng quan estrogen progesterone Trình bày tổng quan cấu trúc, chức estrogen progesterone; phương pháp ly trích xác định chúng qua phân CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 2.1.1 Địa điểm - Trung tâm Ứng dụng Công nghệ sinh học (CNSH) xã Xuân Đường, huyện Cẩm Mỹ, tỉnh Đồng Nai - Trang trại Động vật hoang dã Thanh Long, quận Thủ Đức, thành phố Hồ Chí Minh - Trung tâm nghiên cứu thực nghiệm Đại học Thủ Dầu Một - Trung tâm Công nghệ Sinh học Chăn nuôi-Phân viện chăn nuôi Nam Bộ 2.1.2 Thời gian - Từ tháng năm 2016 đến tháng 04 năm 2019 2.2 Chuồng trại, thức ăn, nước uống 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học cầy vịi hương điều kiện ni nhốt 2.3.1.1 Vật liệu Nghiên cứu sinh trưởng: Chọn 64 cá thể (32 đực, 32 cái) theo dõi tiêu tăng trưởng liên tục từ đến 24 tháng tuổi Nghiên cứu sinh sản: Tiến hành theo dõi 32 cầy vòi hương cái, 34 cầy vòi hương đực trước độ tuổi thành thục sinh dục; 42 cầy vòi hương trưởng thành sinh dục, giai đoạn sinh sản 2.3.1.2 Chỉ tiêu khảo sát - Đặc điểm ngoại hình, số tập tính thích nghi cầy vịi hương điều kiện ni nhốt: hoạt động, đặc điểm dinh dưỡng - Một số tiêu sinh trưởng cầy vịi hương điều kiện ni nhốt: khối lượng, dài thân, dài đi, vịng ngực - Một số tiêu sinh sản cầy vòi hương đực điều kiện nuôi nhốt 2.3.1.3 Phương pháp xác định khối lượng kích thước chiều đo Đo kích thước: chiều dài thân, đầu (HB), chiều dài (T), vịng ngực (C) cân khối lượng thể (W) theo Đặng Huy Huỳnh cs (2010) 2.3.1.4 Phương pháp nghiên cứu tốc độ sinh trưởng Sinh trưởng tuyệt đối (A): A= V2– V1/t2 – t1 Sinh trưởng tương đối (R%): R (%) = (V2– V1) x 100 / (V1 + V2) Trong đó:V1, V2 giá trị khối lượng (kích thước) khảo sát thời điểm t1, t2 2.3.1.5 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh sản - Phương pháp thực nghiệm: theo dõi trực tiếp gắn camera theo dõi vào chuồng nuôi Các thông số thu nhận ghi chép cho cá thể thí nghiệm - Phương pháp điều tra, vấn: Thực điều tra, vấn trực tiếp người chăn nuôi số đặc điểm sinh sản cầy vòi hương 2.3.2 Nghiên cứu số tiêu sinh lí – sinh hóa máu, nước tiểu cầy vịi hương điều kiện ni nhốt 2.3.2.1 Vật liệu Vật liệu nghiên cứu gồm 186 mẫu máu, 248 mẫu nước tiểu thu từ 62 cá thể cầy vòi hương (30 đực, 32 cái) Cầy không bị bệnh, không mang thai 2.3.2.2 Chỉ tiêu khảo sát Khảo sát 18 tiêu sinh lý máu, 14 tiêu sinh hoá máu, nước tiểu Tất tiêu theo dõi tình trạng sức khỏe bình thường, theo độ tuổi theo giới tính 2.3.2.3 Phương pháp thu mẫu phân tích máu -Thu mẫu: Mẫu máu lấy qua tĩnh mạch gốc đuôi xilanh 3ml (kim tiêm cỡ 25Gx1) -Phân tích số sinh lí máu: Phân tích máy Mindray BC 2800 Vet -Phân tích tiêu sinh hố máu: Các thơng số sinh hóa máu đo máy phân tích hóa học (Abaxis Vetscan 2, Union City, CA, USA) 2.3.2.4 Phương pháp thu mẫu phân tích nước tiểu - Phương pháp thu mẫu: Mẫu nước tiểu thu từ mặt sàn thép không gỉ chuồng đặc dụng xilanh, vào 18-20 giờ, lần/tuần tháng (cho cá thể) - Xét nghiệm tiêu sinh hố: phân tích máy phân tích tự động (Teco TC-101, Teco diagnostics, USA) - Phân tích Na+, K+ Cl-: đo từ dung dịch thu sau ly tâm mẫu nước tiểu 3000 vòng/phút 10 phút (Roto x 32®Hettich) thực máy đo chọn lọc ion (model Roche 9180, Roche Diagnostics, Thụy Sĩ) 2.3.3 Nghiên cứu thay đổi hàm lượng hormone sinh dục cầy vòi hương điều kiện nuôi nhốt 2.3.3.1 Vật liệu Mẫu phân thu thập từ 12 cá thể cầy vòi hương trưởng thành, ngày lần 16 tháng 2.3.3.2 Chỉ tiêu khảo sát Sự thay đổi số nội tiết sinh dục: estradiol (E2), progesterone (P4) cầy vòi hương trưởng thành trường hợp: không mang thai, mang thai mang thai giả 2.3.3.3 Phương pháp thu mẫu chiết xuất phân Các mẫu phân thu thập vào khoảng 18-20 giờ, ngày lần 16 tháng Mẫu phân tươi (5g) thu thập túi nhựa (kích thước 200 x 140 x 0.04 mm; Uni Pack Mark Series-G, Seisan Nippon Co., Tokyo, Japan) bảo quản -200C phân tích Sau rã đông, 0,2 g cân đặt vào bình thủy tinh chứa ml methanol 90% Sau lắc 30 phút (trên máy lắc HS 260 -IKA, Đức), mẫu ly tâm 1.700 vòng 20 phút (trên máy EAB 20, Đức) Sau ly tâm, khoảng ml dung dịch chiết vào lọ eppendorf 1,5 ml đông lạnh -200C sử dụng Phần lại cho vào lọ thủy tinh sấy khô để xác định trọng lượng khô phân [110] 2.3.3.4 Xét nghiệm hormone Lượng P4 E2 phân xác định với hệ thống xử lý ELISA Dynex DS2 hoàn toàn tự động (Dynex, USA) Bộ KIT ELISA Progesterone (DRG International, Inc., Đức) Estradiol (DRG International, Inc., Đức) 2.3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng kích thích tố sinh dục (PMSG, HCG) đến khả sinh sản cầy vòi hương 2.3.4.1 Vật liệu Tổng số 54 cầy vòi hương trưởng thành, sau khảo sát phân thành nhóm: - Nhóm 1: Cầy tơ chậm lên giống lần đầu (sau 24 tháng tuổi chưa thấy biểu động dục); n=14 - Nhóm 2: Cầy chậm động dục lại (sau sinh 12 tháng chưa thấy biểu động dục lại); n=15 - Nhóm 3: Cầy sinh sản hiệu thấp (1 lứa/năm; số lứa ít, từ 1-2 con/lứa); n=25 2.3.4.2 Chỉ tiêu khảo sát - Sự thay đổi số nội tiết sinh dục: estradiol (E2), progesterone (P4) sau tiêm PMSG HCG (từ ngày trước tiêm (ngày -2) đến ngày tiêm (ngày 0) ngày sau điều trị - Thời gian xuất động dục thời gian kéo dài động dục cầy vòi hương sau tiêm PMSG HCG - Tỉ lệ cầy vòi hương động dục (số động dục/tổng số điều trị) - Tỉ lệ cầy vòi hương mang thai (số mang thai/ tổng số điều trị) - Số cầy vịi hương sơ sinh trung bình ổ - Khối lượng trung bình sơ sinh - Tỉ lệ cầy vòi hương sống ổ sau 24 sau tháng (số sống/ tổng số sinh ra) 2.3.4.3 Loại hormone sinh sản sử dụng Hỗn hợp PMSG/HCG (tỉ lệ 2:1): tên thương mại Gestavet (Vương quốc Anh) Mỗi lọ chứa 400 IU PMSG /200 IU HCG khô lạnh lọ chứa 5ml dung môi cho dung dịch tiêm 2.3.4.4 Các công thức tiêm hormone sinh sản Lô đối chứng (ĐC): IU PMSG + IU HCG (Khơng tiêm) Lơ thí nghiệm (CT1): 20 IU PMSG + 10 IU HCG Lơ thí nghiệm (CT2): 30 IU PMSG + 15 IU HCG Lơ thí nghiệm 3(CT3): 40 IU PMSG + 20 IU HCG Thí nghiệm thực tất công thức cầy nhóm Mỗi lơ thí nghiệm có từ cầy trở lên 2.4.4.5 Bố trí thí nghiệm Bảng Sơ đồ bố trí thí nghiệm tiêm kích dục tố Lơ thí nghiệm ĐC CT1 CT2 CT3 Nhóm (n=14) 4 Nhóm (n=15) 4 Nhóm (n=25) 7 2.3.4.6 Quy trình tiêm Con chích bắp (IM) vào lúc sáng, khơng tính đến chu kỳ động dục Sau tiêm 24 giờ, cầy ghép đôi theo dõi 2.3.4.7 Phương pháp xác định thay đổi hormone Quy trình thu mẫu, chiết xuất phân, xét nghiệm hormone thực tương tự 2.3.3.3 2.3.3.4 2.3.4.8 Phương pháp xác định động dục - Phương pháp quan sát (mắt thường, camera) - Phương pháp lâm sàng: theo dõi mang thai sinh cầy vòi hương 2.4 Xử lí số liệu Các tham số thống kê: giá trị trung bình cộng (X̅ ), độ lệch chuẩn (SD); hệ số biến thiên CV (%); kiểm định t-test; phân tích ANOVA nhân tố với mức ý nghĩa α=0,05; xử lí phần mềm MS-Excel 2013 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm sinh học 3.1.1 Đặc điểm hình thái, dinh dưỡng số tập tính cầy vịi hương điều kiện ni Về hình thái, cầy vịi hương điều kiện ni có đặc điểm đặc trưng lồi điều kiện tự nhiên Bộ lông màu xám mốc mốc, mút lông phớt đen; dọc sống lưng, sườn có đốm màu nâu đen thường tạo thành ba sọc chạy dọc sống lưng từ vai đến gốc vai đến gốc tai Đi có vệt khơng rõ màu đen phần gốc đi, phần mút thường có màu đen, nhiên số cá thể màu trắng; phần mũi, má, tai, phần đùi bốn vó chân có màu đen; bụng xám Khi cầy non, sọc đốm nâu màu đen chưa rõ ràng, lông thô Càng lớn dần lông mượt đốm màu nâu đen rõ ràng Mặt có 2-3 đốm sáng trán cạnh mắt Về đặc điểm dinh dưỡng, cầy vịi hương lồi ăn tạp Kết khảo sát cho thấy, cầy ăn nhiều loại trái Loại trái ưa thích cầy chuối Trong chăn ni, tùy theo mùa vụ thay đổi nguồn thức ăn khác Về nguồn thức ăn động vật, cầy đặc biệt thích ăn loại thịt, cá, trứng Theo Đặng Huy Huỳnh cs., (2010); Duckworth (2016), cầy vòi hương động vật ăn tạp, hầu hết thức ăn mà người ăn chúng ăn [7, 111] Về tập tính hoạt động, cầy chủ yếu hoạt động ban đêm, ngày ngủ Các hoạt động tiết chủ yếu thực vào đầu pha hoạt động chiều tối Cầy có tập tính bảo vệ lãnh thổ cao Khi thả ghép khác vào chung ô chuồng, chúng cắn Cầy chịu ghép đơi có biểu động dục 11 Bảng Tốc độ tăng trưởng vòng ngực cầy vòi hương điều kiện nuôi Tháng tuổi Đực (n=25) (1) Rw% 4.34 3.54 0.74 9.95 0.75 0.93 0.92 0.90 2.75 3.17 3.08 2.97 1.27 0.70 0.17 0.15 0.86 0.85 2.82 2.77 0.07 0.04 0.45 Sx Cv% 21.21 23.43 0.92 0.83 12 15 18 21 27.25 29.36 29.87 30.32 30.54 30.66 24 X̅ Cái (n=25) (2) A (cm/co n/tháng X̅ (cm) X̅ (cm) A (cm/co n/thán Rw% 3.89 3.15 0.58 7.97 0.38 0.87 >0,05 >0,05 0.70 0.70 0.74 0.66 2.72 2.53 2.62 2.30 1.06 0.63 0.20 0.15 13.21 7.08 2.15 1.55 1.50 1.72 1.63 1.64 0.82 0.78 2.83 2.68 0.08 0.06 0.39 0.87 0.65 4.78 1.61 1.54