THAM KHẢO BÁO CÁO THỰC TẬP BÀI Nhóm: Tên SV: PHIẾU PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH CÁC CYCLIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỚP MỎNG • Bản mỏng: Thủy tinh Nhôm, nhựa Cellulose silica gel G silica gel F254 Kieselguhr silica gel H silica gel F366 Khác • Hệ dung mơi: Acetonitril – Methanol – dung dịch acid oxalic 6,3% điều chỉnh pH đến 2,0 amoniac đậm đặc (20:20:60) • Kỹ thuật chạy sắc kí: Kỹ thuật chạy sắc kí chiều, dung mơi di chuyền từ đầu lên đầu mỏng, kéo theo chất cần phân tích (pha động) di chuyển mỏng (pha tĩnh), theo chế hấp phụ, dựa vào lực hấp phụ khác với silica gel, chất cần phân tích di chuyển chậm hay nhanh bắt của hạt silica gel • Kích thước sắc kí: 10cm x 6cm • Khoảng cách chạy: 7,0 cm • Rf (Oxatetracyclin) = 2,6 • Rf (Miocyclin HCl) = 3,4 7,0 7,0 = 0,37 ; Rf (Tetracyclin HCl) = = 0,49 ; Rf Mẫu thử = 2,4 7,0 2,3 7,0 = 0,33 = 0,34 Cách pha mẫu: Chất chuẩn: - Nguồn gốc: PTN Số lô: Dung dịch đối chiếu (vết số 1): 5mg oxytetracyclin chuẩn methanol pha lỗng thành 10mL với dung mơi - Dung dịch đối chiếu (vết số 2): 5mg tetracyclin HCl chuẩn methanol pha loãng thành 10mL với dung môi - Dung dịch đối chiếu (vết số 3): 5mg minocyclin HCl chuẩn methanol pha lỗng thành 10mL với dung mơi - Dung dịch đối chiếu (vết số 4): Hoà tan hỗn hợp 5mg oxytetracyclin chuẩn, 5mg tetracyclin HCl chuẩn mg minocyclin HCl chuẩn methanol phan loàn thành 10mL với dung môi Mẫu thử: - Viên nén chứa hoạt chất cyclin, cân 30mg chế phẩm hoà tan 25mL ethanol, khuấy kỹ Lọc, bay dung môi bếp cách thuỷ đến 10mL • Kết Mẫu thử Silica gel Merck pha đảo RP-18 Silica gel F254 Merck • Yêu cầu kết luận So sánh vệt sắc kí sử dụng 02 loại mỏng khác (silica gel F254 Merck silica gel Merck pha đảo RP-18) Loại mỏng phù hợp để sử dụng chạy sắc kí để phân tích cyclin theo u cầu Chế phẩm có chứa Tetracyclin HCl giá trị Rf Mẫu thử 0,34 ≈ Rf (Tetracyclin HCl) 0,33 Vệt sắc kí mỏng silica gel F254 Merck (thơng thường) có tách khơng rõ, kéo đuôi, mờ, không bắt vết oxytetracyclin, dung môi bị bắt giữ lực mạnh với pha tĩnh nên vạch cuối không thẳng hàng Vệt sắc kí mỏng silica gel Merck pha đảo RP-18 tách rõ, vết gọn, tách hoàn toàn, vạch dung môi chạy mỏng, vạch cuối thẳng hàng Sử dụng mỏng silica gel Merck pha đảo RP-18 để phân tích cyclin cho kết tách tốt • Giải thích: Bản mỏng silica gel F254 Merck (bản thường) có pha tĩnh phân cực, hệ dung mơi acetonitril chất phân cực mạnh aprotic (moment phân cực 3.92 D), methanol chất phân cực mạnh protic (moment phân cực 1.70 D) hệ dung môi phân cực mạnh Điều dẫn đến pha tĩnh bắt giữ mạnh hệ dung mơi, giải thích cho việc phần mỏng kéo vệt đen dung môi hấp phụ lên bề mặt silica gel, che chất phát huỳnh quang 254nm Ngược lại, Silica gel Merck pha đảo RP-18 gắn thêm mạch 18 carbon nên pha tĩnh không phân cực (pha đảo), nên hệ dung môi chạy tốt sắc ký, không bị bắt giữ silica gel, có cyclin có tính phân cực khác nhiều hấp phụ bề mặt silica gel vết tách tốt ... đảo RP-18) Loại mỏng phù hợp để sử dụng chạy sắc kí để phân tích cyclin theo yêu cầu Chế phẩm có chứa Tetracyclin HCl giá trị Rf Mẫu thử 0,34 ≈ Rf (Tetracyclin HCl) 0,33 Vệt sắc kí mỏng silica gel... thường) có tách khơng rõ, kéo đi, mờ, khơng bắt vết oxytetracyclin, dung môi bị bắt giữ lực mạnh với pha tĩnh nên vạch cuối không thẳng hàng Vệt sắc kí mỏng silica gel Merck pha đảo RP-18 tách rõ,... tách rõ, vết gọn, tách hồn tồn, vạch dung mơi chạy mỏng, vạch cuối thẳng hàng Sử dụng mỏng silica gel Merck pha đảo RP-18 để phân tích cyclin cho kết tách tốt • Giải thích: Bản mỏng silica gel