Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học phân tử của virus gây bệnh thiếu máu truyền nhiễm ở gà (chicken infectious anemia virus CIAV) lưu hành tại miền bắc việt nam (tt)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐÀO ĐOAN TRANG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC PHÂN TỬ CỦA VIRUS GÂY BỆNH THIẾU MÁU TRUYỀN NHIỄM Ở GÀ (CHICKEN INFECTIOUS ANEMIA VIRUS- CIAV) LƯU HÀNH TẠI MIỀN BẮC VIỆT NAM Chuyên ngành : Dịch tễ học thú y Mã số : 9.64.01.08 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÀ NỘI - 2020 Cơng trình hồn thành tại: HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM Người hướng dẫn: PGS.TS HUỲNH THỊ MỸ LỆ TS NGUYỄN VĂN GIÁP Phản biện 1: Phản biện 2: nghiệp Việt Nam Phản biện 3: PGS.TS Trương Văn Dung - Hội Thúy PGS.TS Nguyễn Hữu Nam - Học viện Nông TS Phan Quang Minh - Cục Thúy Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Học viện Họp tại: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi giờ, ngày tháng năm 2020 Có thể tìm hiểu luận án thư viện: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Trung tâm Thông tin - Thư viện Lương Định Của, Học viện Nông nghiệp Việt Nam PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Chăn nuôi phận quan trọng nông nghiệp Việt Nam Bên cạnh nhiều hội thuận lợi, ngành chăn nuôi gia cầm phải đối mặt với khơng thách thức khó khăn; đó, dịch bệnh xem trở ngại lớn, gây nhiều thiệt hại cho ngành chăn nuôi Hiện nay, bệnh gia cầm quan tâm nghiên cứu nước ta tình trạng suy giảm miễn dịch, với vai trò lớn thuộc virus tác động trực tiếp tới hệ miễn dịch vật nuôi Từ CIAV (chicken infectious anemia virus) phát đến nay, có nhiều cơng trình nghiên cứu CIAV bệnh virus gây phạm vi toàn cầu với kết thu từ nhiều khía cạnh: đặc tính sinh học, chế sinh bệnh, chế gây ức chế miễn dịch virus; đặc điểm dịch tễ học, triệu chứng, bệnh tích bệnh biện pháp can thiệp Đáng ý chế gây ức chế miễn dịch virus khả công vào quan miễn dịch, làm cạn kiệt tế bào lympho tuyến ức, túi Fabricius vàtế bào tạo máu tiền thân (hemocytoblast) tủy xương (Adair, 2000; Dhama & cs., 2008) Đến nay, vacxin phòng CIA sử dụng phổ biến giới, đặc biệt nước có ngành chăn ni gàphát triển Tuy nhiên, thông tin CIA hiểu biết CIAV Việt Nam có phần hạn chế Tính đến thời điểm tại, cơng bố có mặt kháng thể kháng CIAV huyết gà vào năm 2013 (Trinh & cs., 2015b) kết phân loại phát sinh gen chủng CIAV miền Bắc Việt Nam (Van Dong & cs., 2019) hai nghiên cứu CIAV với mẫu bệnh phẩm lấy Việt Nam thực nước ngồi Vì vậy, chúng tơi nhận thấy nghiên cứu đặc điểm sinh học phân tử chủng CIAV lưu hành số tỉnh thuộc miền Bắc Việt Nam cần thiết, sở khoa học việc sử dụng vacxin có thị trường để phòng CIA Kết thu tảng cho nghiên cứu CIAV Việt Nam, góp phần tiến tới kiểm sốt hạn chế ảnh hưởng bệnh virus CIAV gây ngành chăn nuôi gà Việt Nam, giai đoạn tương lai 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU * Mục tiêu tổng quát: trả lời câu hỏi có hay khơng có lưu hành gây bệnh CIAV đàn gà nuôi Việt Nam nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học phân tử virus làm sở để đề xuất biện pháp phòng bệnh hiệu giúp nâng cao suất, chất lượng đàn gà * Mục tiêu cụ thể: - Xác định có lưu hành CIAV CIA đàn gà nuôi số tỉnh miền Bắc Việt Nam nhằm đề xuất việc sử dụng vacxin phòng bệnh; - Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ học phân tử chủng CIAV lưu hành miền Bắc Việt Nam để giúp lựa chọn loại vacxin phù hợp 1.3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU Các trạng trại, gia trại nuôi gà số tỉnh miền Bắc giai đoạn 2016-2019 Các tỉnh/ thành phố gồm Hòa Bì nh, Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Hà Nội, Bắc Ninh, Hải Dương, Hà Nam, Nam Định, Hải Phòng Quảng Ninh; 1.4 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA ĐỀ TÀI - Đây nghiên cứu Việt Nam đãxác định có lưu hành CIAV đàn gà địa bàn 10 tỉnh/thành phố miền Bắc Việt Nam: Hịa Bình, Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Hà Nội, Bắc Ninh, Hải Dương, Hà Nam, Nam Định, Hải Phòng Quảng Ninh; - Kết nghiên cứu giải mã trình tự gen hồn chỉnh 52 trình tự gen ORF1 chủng CIAV lưu hành thực địa; cho thấy virus thuộc nhóm di truyền G2 G3; có độc lực khơng nguồn gốc với chủng vacxin sử dụng 1.5 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI - Nghiên cứu khẳng định lưu hành CIAV có mặt CIA đàn gà ni số tỉnh phía Bắc Việt Nam Biểu lâm sàng, biến đổi bệnh lý gà tự nhiên khẳng định kết PCR mẫu bệnh phẩm kết gây bệnh thực nghiệm chủng CIAV lưu hành nhấn mạnh cần thiết phải xem xét đến vai trò ảnh hưởng CIAV CIA ngành chăn nuôi gà - Nghiên cứu phân tích số đặc điểm dịch tễ học phân tử chủng CIAV lưu hành đàn gà nuôi 10 tỉnh/thành phố thuộc miền Bắc Việt Nam: chủng thuộc nhóm di truyền G2, G3; chủng có độc lực khơng nhánh với chủng virus vacxin Từ thực tế trên, việc sử dụng vacxin trở nên cần thiết để bảo vệ đàn gà bệnh CIAV gây - Kết nguồn tài liệu tham khảo phục vụ cho nghiên cứu bệnh (CIA) virus gây bệnh thiếu máu truyền nhiễm (CIAV); cho công tác giảng dạy chuyên ngành Thú y Chăn nuôi- Thúy Việt Nam PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 GIỚI THIỆU VỀ CIAV VÀ BỆNH DO CIAV GÂY RA 2.1.1 Giới thiệu CIAV Virus gây bệnh thiếu máu truyền nhiễm gà (chicken infectious anemia virus- CIAV) lần phát từ đàn gà thương phẩm bị bệnh Nhật Bản (Yuasa & cs., 1979) với tên ban đầu làCAA (chicken anemia agent- yếu tố gây thiếu máu gà) xếp giống Gyrovirus vào họ Anelloviridae (Rosario & cs., 2017) CIAV virus có cấu trúc nhân ADN đơn, dạng vịng khơng có vỏ bọc, đường kính trung bình từ 19,1 nm- 26,5 nm (Gelderblom & cs., 1989) Trong số protein virus, VP1 protein cấu trúc biết đến có vai trị tạo thành capsid, phát hạt virus có độ tinh khiết cao (Todd & cs., 1990) Nó đóng vai trò quan trọng việc tạo kháng thể trung hòa gà bị nhiễm bệnh VP2 protein khơng cấu trúc, hoạt động protein làm khung (scaffold) trình lắp ráp virion (Noteborn & cs., 1998) VP2 cịn có hoạt tính phosphatase (dual-specificity phosphatase) nhận biết đặc hiệu đồng thời phân tử tyrosine, serine threonine vị trí cắt (Peters & cs., 2002) VP3 protein không cấu trúc apoptin gây chế chết chương trình hóa (apoptosis) cho tế bào tiền thân vùng tủy tuyến ức tế bào hemocytoblasts tủy xương (Noteborn & cs., 1994) 2.1.2 Bệnh thiếu máu truyền nhiễm gà Bệnh thiếu máu truyền nhiễm gà (CIA) đặc trưng tình trạng (i) thiếu máu không tái tạo (aplastic anemia) phá hủy tế bào tạo máu (hematopoietic stem cell) tủy xương (ii) thối hóa mơ lympho (lymphoid depletion) (Mcnulty, 1991) Do tình trạng tình trạng ức chế miễn dịch (immunosuppression), gà mắc bệnh thiếu máu truyền nhiễm dễ mắc bệnh kế phát, giảm đáp ứng với loại vacxin phòng bệnh (Hagood & cs., 2000) Triệu chứng lâm sàng bệnh thiếu máu truyền nhiễm phụ thuộc vào nhiều yếu tố như: lứa tuổi, tình trạng miễn dịch; liều lượng đường xâm nhập virus Khi bệnh xảy thể cấp tính, thời gian ủ bệnh từ 1- 14 ngày Ngồi triệu chứng khơng điển hình (ủ rũ, xù lơng, giảm ăn), gà bệnh có biểu thiếu máu mào yếm nhợt nhạt (Yuasa & cs., 1979; Adair, 2000) Tỷ lệ chết thường từ 5- 10% (trong 2- tuần sau nhiễm) lên tới 60% trường hợp kế phát bệnh khác (Bulow, 1991; Dhama, 2002; Dhama & cs., 2002; Dhama & cs., 2004; Balamurugan & Kataria, 2006) Nếu sống sót qua giai đoạn này, gà dần hồi phục sau 4- tuần nhiễm bệnh Bệnh tích đại thể: teo quan lympho nói chung, đặc biệt tuyến ức biểu tủy xương nhạt màu xem bệnh tích đại thể đặc trưng nhất, hình 2.8 (Yuasa & cs., 1979; Mcnulty, 1991; Pope, 1991; Smyth & cs., 1993; Dhama & cs., 2002) Ngoài ra, số biến đổi khác xuất huyết tụ máu tổ chức liên kết da, gan sưng, nhạt màu vàng nhạt (Dhama, 2002) 2.2 ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC PHÂN TỬ CỦA CIAV 2.2.1 Mối quan hệ di truyền chủng CIAV Bộ gen CIAV có tính bảo thủ tương đối cao (Schat, 2009) nên khác biệt chủng virus thấp Gen mã hóa protein VP1 có vùng mang nhiều biến đổi (amino acid 139- 151) (Renshaw & cs., 1996) Do đó, từ trước đến nay, trình tự gen mã hóa capsid protein CIAV thường dùng để nghiên cứu mối liên hệ di truyền chủng virus (Islam & cs., 2002; Ducatez & cs., 2006; Eltahir & cs., 2011; OlszewskaTomczyk & cs., 2016; Ou & cs., 2018) Từ 2002 có 30 cơng bố kết nghiên cứu mối liên hệ di truyền chủng CIAV Tuy nhiên, phân tích với số lượng trình tự gen khác nhau, tiêu chí phân loại không thống dẫn tới đồng thời tồn nhiều phân loại nhóm di truyền CIAV (Ducatez & cs., 2006), (Islam & cs., 2002) Nhìn chung, cách phân loại CIAV thành genogroup (I, II, III) nhiều nhà khoa học giới sử dụng (Ducatez & cs., 2006; Olszewska-Tomczyk & cs., 2016; Ou & cs., 2018) Các kết nghiên cứu giới cho thấy: có khác biệt trình tự gen CIAV phân lập từ vùng địa lý khác (Ducatez & cs., 2006; Ducatez & cs., 2008; Hailemariam & cs., 2008) Mức tương đồng trình tự nucleotide chủng phân lập nước có khác nhau, thường mức tương đồng cao, ví dụ 93% (CIAV phân lập Alabama, Mỹ) (Van Santen & cs., 2001) 94,7% - 99,8% (CIAV phân lập Ba Lan) (Olszewska-Tomczyk & cs., 2016) Nhì n chung, sai khác di truyền chuỗi nucleotide CIAV thường 5% khoảng cách lớn tìm thấy chủng CIAV giới (Ducatez & cs., 2006; Eltahir & cs., 2011; Zhang & cs., 2013) 2.2.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam Có tài liệu CIAV CIA Việt Nam Công bố Việt Nam báo cáo có mặt kháng thể kháng CIAV huyết gà lấy mẫu năm 2013 (Trinh & cs., 2015b) Nghiên cứu giải trình tự gen kết thu được: trình tự gen CIAV thu từ gà Việt Nam địa bàn lấy mẫu thuộc nhóm di truyền G2 vàG3 Trong đó, trình tự gen thuộc nhóm G3 có nguồn gốc tỉnh (Hà Nam, Hà Nội Bắc Ninh) trình tự thuộc nhóm G2 tìm thấy tỉnh Vĩnh Phúc Kết gợi ý lưu hành phổ biến nhóm di truyền G3 số đàn gà miền Bắc Việt Nam Nghiên cứu thứ hai công bố gần CIAV dựa kết phân tích mẫu bệnh phẩm thu thập miền Bắc Việt Nam cấp độ phân tử chứng minh lưu hành phổ biến CIAV, đặc biệt giai đoạn gànhỏ (61,43% gà giai đoạn 23 tuần tuổi 44,83% gà giai đoạn 4-11 tuần tuổi) dương tính với CIAV kiểm tra kỹ thuật real-time PCR (Van Dong & cs., 2019) Hai nghiên cứu thực phần lớn nước thơng tin tính khả gây bệnh CIAV đánh giá hiệu sử dụng vacxin phịng bệnh chăn ni gà chưa làm rõ Vì vậy, nghiên cứu chúng tơi thực hai cơng trình kể nhằm cung cấp thơng tin cách đầy đủ tồn diện CIAV đàn gà ni Việt Nam, góp phần cơng tác phịng chống bệnh hiệu PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU - Mẫu gà nghi mắc bệnh thu thập 64 trang trại chăn nuôi gà thuộc 10 tỉnh/thành phố miền Bắc: Hịa Bình, Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Hà Nội, Bắc Ninh, Hải Dương, Hà Nam, Nam Định, Hải Phòng Quảng Ninh; - Nghiên cứu thực môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 3.2 THỜI GIAN NGHIÊN CỨU Đề tài nghiên cứu triển khai từ tháng 11/2016 đến tháng 9/2019 3.3 ĐỐI TƯỢNG/ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu (i) Đặc điểm dịch tễ học phân tử CIAV lưu hành miền Bắc, (ii) Bệnh CIAV gây gà tự nhiên điều kiện thí nghiệm 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu + Gà nghi ngờ mắc bệnh thiếu máu truyền nhiễm đàn gà chưa tiêm vacxin phòng bệnh thiếu máu truyền nhiễm, thu thập 10 tỉnh/ thành phố thuộc phạm vi nghiên cứu; + Mẫu bệnh phẩm: gộp phủ tạng gà ốm (tuyến Harder, tuyến ức, túi Fabricius, tủy xương, hạch lympho manh tràng; tim, gan, lách, thận); + Huyễn dịch virus dùng gây nhiễm (do môn VSV - TN, khoa Thú y, HVNNVN cung cấp): CIAV phân lập từ gà mắc bệnh tự nhiên môi trường tế bào MSB1, theo phương pháp công bố trước (Yuasa, 1983) Huyễn dịch bệnh phẩm 10% dùng phân lập virus mẫu gộp phủ tạng (gan, lách, thận, tuyến ức, tủy xương túi Fabricius) bất hoạt virus có vỏ bọc (nếu có) chloroform (tỷ lệ 1ml huyễn dịch 50ml chloroform) nhiệt độ phòng 10 phút Huyễn dịch virus phân lập khẳng định CIAV phản ứng PCR (van Santen & cs, 2001) với cặp mồi đặc hiệu CIAV phân lập kiểm tra âm tính với virus Newcastle, cúm gia cầm, Gumboro, IB, ILT (kết khơng trình bày); + Gà thí nghiệm để gây nhiễm: trứng gà có phơi lấy từ đàn gàâm tính CIAV, chưa tiêm vacxin phòng bệnh thiếu máu truyền nhiễm Trứng ấp nở phịng thí nghiệm môn VSV – TN, khoa TY, HVNNVN, gà ngày tuổi kiểm tra âm tính CIAV phản ứng semi-nested PCR; + Hóa chất dùng để thực chẩn đốn, giải trình tự gen + Mồi đặc hiệu (bảng 3.1) dùng phát giải trình tự gen VP1/ genome CIAV tham khảo theo nghiên cứu trước (Van Santen & cs., 2001; Li & cs., 2016) + Các trình tự gen: (i) 58 trình tự tạo nghiên cứu (mã số MH536104- MH536106 vàMF611928- MF611982) và(ii) trình tự gen CIAV công bố GenBank (phụ lục 1) Có 984 trình tự gen, 30 quốc gia (châu Á, châu Âu, châu Mỹ, châu Phi châu Úc) thu thập từ năm 1974 - 2018 dùng nghiên cứu Bảng 3.1 Trình tự mồi đặc hiệu dùng nghiên cứu Tên mồi CAVVP3F CAV1 CAV2 F1 R1 F2 R2 F3 R3 Trình tự (5’-3’) TTAAGATGGACGCTCTCCAAGAAGATACT GACTGTAAGATGGCAAGACGAGCTC GGCTGAAGGATCCCTCATTC GCATTCCGAGTGGTTACTATTCC CGTCTTGCCATCTTACAGTCTTAT CGAGTACAGGGTAAGCGAGCTAAA TGCTATTCATGCAGCGGACTT ACGAGCAACAGTACCCTGCTAT CTGTACATGCTCCACTCGTT Mục đích Phát CIAV Giải trình tự gen 3.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 3.4.1 Nghiên cứu lưu hành virus bệnh thiếu máu truyền nhiễm gànuôi số tỉnh/thành phố miền Bắc Việt Nam - Xác định tỷ lệ dương tính CIAV đàn gà nuôi 10 tỉnh/thành phố thuộc miền Bắc Việt Nam: Hịa Bình, Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Hà Nội, Bắc Ninh, Hải Dương, Hà Nam, Nam Định, Hải Phòng Quảng Ninh; - Nghiên cứu triệu chứng bệnh tích điển hình bệnh thiếu máu truyền nhiễm gà mắc tự nhiên; - Tìm hiểu đặc điểm lưu hành CIAV theo: vị trí địa lý, lứa tuổi, mục đích sản xuất (hướng thịt, hướng trứng), quy mơ chăn nuôi, phương thức chăn nuôi; - Chứng minh chủng CIAV lưu hành virus có độc lực thơng qua gây bệnh thực nghiệm cho gà 3.4.2 Nghiên cứu số đặc điểm đặc điểm dịch tễ học phân tử CIAV - Đặc điểm di truyền chủng CIAV lưu hành đàn gà nuôi 10 tỉnh/ thành phố thuộc miền Bắc Việt Nam; - Đặc điểm di truyền gen mã hóa capsid protein CIAV đàn gà nuôi 10 tỉnh/ thành phố; - Nghiên cứu nguồn gốc phát sinh chủng loại CIAV lưu hành miền Bắc; - Nghiên cứu đặc điểm phát tán theo không gian thời gian CIAV lưu hành miền Bắc 3.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.5.1 Phương pháp lựa chọn sở chăn nuôi để thu mẫu Với mục đích khẳng định có lưu hành virus gây bệnh Thiếu máu truyền nhiễm gà, tiến hành lấy mẫu ngẫu nhiên 64 trại gàvới quy mô chăn nuôi (< 500 con, 500- 1000 và> 1000 con), mục đích chăn ni khác nhau, phân bố vùng chăn nuôi gà tập trung thuộc 10 tỉnh miền bắc Việt Nam, chưa sử dụng vacxin phòng bệnh thiếu máu truyền nhiễm để tiến hành nghiên cứu Để thu thập thông tin cần thiết, sử dụng phương pháp nghiên cứu hồi cứu nghiên cứu cắt ngang Khi mẫu bệnh phẩm kiểm tra cho kết dương tính với CIAV kết luận: đàn trại gà có lưu hành CIAV 3.5.2 Phương pháp theo dõi triệu chứng lâm sàng vàbệnh tích đặc trưng - Bước 1: điều tra thông tin đàn giống nuôi trang trại: nguồn gốc giống; chương trình vacxin sử dụng cho đàn bố mẹ đàn gà nuôi; tình hình đàn gà thời gian ni Bước 2: quan sát tình trạng đàn gà biểu lâm sàng gà ốm; vàbước 3: mổ khám gà nghi mắc 3.5.3 Phương pháp mổ khám vàlấy mẫu Theo “Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia bệnh động vật- yêu cầu chung lấy mẫu bệnh phẩm, bảo quản vận chuyển” (QCVN 01- 83: 2011/BNNPTNT) Bệnh phẩm gồm tuyến Harder, tuyến ức, tủy xương, lách, túi Fabricius, v.v tách riêng khỏi thể để quan sát chụp ảnh; sau bảo quản lạnh chuyển phịng thí nghiệm để thực nghiên cứu 3.5.4 Phương pháp tách chiết ADN ADN tổng số tách chiết từ huyễn dịch bệnh phẩm 10% huyết theo quy trình mô tả trước (Yang & cs., 2003) 3.5.5 Phương pháp PCR phát CIAV Nghiên cứu sử dụng kít PCR thương mại với thành phần phản ứng (trừ sợi khuôn, mồi đặc hiệu) trộn sẵn Nghiên cứu lưu hành CIAV, phản ứng PCR phát CIAV thực cặp mồi CAVVP3F/ CAV2 (Van Santen & cs., 2001) với chu trình nhiệt sau: tiền biến tính 94oC phút; 40 chu kỳ nhiệt bao gồm biến tính 94oC/ 20 giây, bắt mồi 58,5oC/ 30 giây, kéo dài 72oC/ 60 giây; giữ nhiệt độ 25oC dừng Đối với thí nghiệm chứng minh độc lực virus, CIAV phát phản ứng semi-nested PCR, sử dụng mồi CAVVP3F/CAV1/CAV2 Chu trình nhiệt: tiền biến tính 94oC phút; 40 chu kỳ nhiệt bao gồm biến tính 94oC/ 20 giây, bắt mồi 57oC/ 30 giây, kéo dài 72oC/ 60 giây; giữ nhiệt độ 25oC dừng Phân tích sản phẩm PCR điện di thạch agarose 2% có bổ sung thuốc nhuộm ADN 1x (RedSafe Nucleic Acid Staining Solution, iNtRON) Vạch sản phẩm PCR quan sát bước sóng ánh sáng 514nm 3.5.6 Phương pháp chứng minh độc lực CIAV 3.5.6.1 Bố tríthínghiệm gây nhiễm CIAV Tổng số có 20 gà ngày tuổi âm tính CIAV, chia thành nhóm Nhóm thí nghiệm: 10 gà, tiêm ml huyễn dịch CIAV (104,0 TCID50/ml) vào xoang phúc mạc, ngày sau tiêm nhắc lại lần Nhóm đối chứng: 10 gà tiêm ml dung dịch PBS 1x vào xoang phúc mạc (Liều gây nhiễm chọn dựa vào (i) liều nhiễm từ 104,0 TCID50/ml x 104,5 TCID50/ml số nghiên cứu công bố (Kaffashi & cs., 2006; Wani & cs., 2015; Tongkamsai & cs., 2019) (ii) kết gây nhiễm thử thực số lần trước chúng tơi) 3.5.6.2 Theo dõi khả tăng trọng gàsau nhiễm CIAV Khối lượng gà theo dõi phương pháp cân với tần suất lần/ tuần từ tuần đến tuần 8, so sánh nhóm đối chứng nhóm thí nghiệm Do sở chăn nuôi 14 trang trại kể khơng sử dụng vacxin phịng bệnh CIAV gây nên 50,81% mẫu gà ốm dương tính CIAV nhiễm tự nhiên Dựa vào kết thăm dò bước đầu nêu trên, nghiên cứu triển khai lấy mẫu phạm vi rộng (đợt 2) phát CIAV trang trại khác thuộc 10 tỉnh/thành phố miền Bắc Việt Nam, kết thể bảng 4.2: Đây kết có có ý nghĩa khoa học thực tiễn giúp cho người làm công tác chăn nuôi, thú y có quan tâm cần thiết đến vai trị gây bệnh CIAV, từ xây dựng chiến lược phòng chống bệnh truyền nhiễm cho đàn gà cách có hiệu Bảng 4.2 Kết PCR phát CIAV mẫu bệnh phẩm thu từ 10 tỉnh/thành phố miền Bắc Việt Nam Số mẫu Số mẫu Tỷ lệ (%) TT Địa điểm kiểm tra dương tính dương tính Hịa Bì nh 16 25 Vĩnh Phúc 14 14 100 Phú Thọ 11 27,3 Hà Nội 10 50 Bắc Ninh 15 10 66,7 Hải Dương 7 100 HàNam 10 10 100 Nam Định 19 21,1 Hải Phòng 8 100 10 Quảng Ninh 9 100 Tổng hợp 119 74 62,2 4.1.2 Triệu chứng lâm sàng bệnh tích gà nhiễm CIAV tự nhiên Nhì n chung, triệu chứng phổ biến thu từ thực tế (với đàn khẳng định dương tính CIAV) : mào tích nhợt nhạt, xuất huyết da vùng cánh, v.v Đàn gà nhiễm CIAV cịn có biểu triệu chứng khơng điển hình như: ủ rũ, giảm ăn, rụng lông, nhợt nhạt cịi cọc Bệnh tích: tuyến ức tủy xương hai tổ chức chịu tác động virus Có thể quan sát rõ mức độ teo tuyến ức khác nhau: gần hoàn toàn thùy thùy teo to- nhỏ không Đối với tủy xương, kết kiểm tra bệnh tích thấy phần lớn trường hợp tủy xương có màu vàng Tuy nhiên, mức độ biến đổi bệnh tích tủy xương khác cá thể Ngoài tuyến ức tủy xương, nghiên cứu làm rõ biến đổi bệnh tí ch đại thể túi Fabricius 11 4.1.3 Đặc điểm lưu hành CIAV 4.1.3.1 Sự lưu hành CIAV theo địa điểm nghiên cứu Theo yếu tố không gian- vùng địa lý, ban đầu nghiên cứu tập trung tìm hiểu phân bố virus phạm vi nhỏ Hà Nội vùng phụ cận, sau mở rộng 10 tỉnh thuộc miền Bắc Việt Nam Tỷ lệ phát CIAV cao số tỉnh thuộc miền Bắc Việt Nam tương xứng với vài công bố nước (74/119 mẫu, chiếm tỷ lệ trung bình 62,2%) 4.1.3.2 Sự lưu hành CIAV theo số tiêu chăn nuôi gia cầm Để làm rõ đặc điểm dịch tễ học bệnh thiếu máu truyền nhiễm CIAV gây gia cầm, nghiên cứu sâu phân tích lưu hành theo số yếu tố chăn nuôi gia cầm Kết minh họa hình 4.1 Loại gà (A), phương thức chăn nuôi (B), quy mô chăn nuôi (C) nhóm tuổi (D) Tỷ lệ CIAV dương tính (tính phần trăm, dấu ●) khoảng tin cậy 95% Giá trị xác suất p góc bên trái phía bảng với mức ý nghĩa 0,05 nhỏ khác đáng kể có tính thống kê phân loại nhóm Hì nh 4.1 Kết phát CIAV theo số tiêu chăn nuôi Về đặc điểm lưu hành CIAV theo mục đích chăn ni (loại gà): CIAV phát gà hướng thịt hướng trứng với tỷ lệ dương tí nh 69,8% và57,9% khác biệt ý nghĩa thống kê(p = 0,201) 12 Về đặc điểm lưu hành CIAV theo phương thức chăn nuôi: tỷ lệ dương tính với CIAV hình thức ni thả cao rõ rệt so với hình thức ni nhốt (80,5% 52,6%) (p 1000 con) 64,3%; 58,3% 63% (p = 0,804) Điều có nghĩa gà ni quy mơ nhiễm CIAV vàkhông theo xu hướng cụ thể Về lưu hành CIAV theo lứa tuổi: kết cho thấy tỷ lệ dương tính với CIAV nhóm tuổi gà 60,9%; 64,7% 60% Sự lưu hành CIAV miền Bắc Việt Nam khơng có xu hướng cụ thể nhóm tuổi 4.1.4 Kết chứng minh độc lực CIAV lưu hành gàtại miền Bắc 4.1.4.1 Kết gây nhiễm thực nghiệm CIAV Kết phát CIAV máu gà tuần sau gây nhiễm cho thấy: phương pháp semi-nested PCR, nghiên cứu khơng phát CIAV máu gà nhóm gây nhiễm tuần đầu Hiện tượng virus huyết bắt đầu xuất tuần thứ sau gây nhiễm (tỷ lệ 20%) tăng dần tuần thứ (100%) Virus huyết trì tới tuần thứ (thời điểm dừng thí nghiệm) Ở nhóm đối chứng (khơng gây nhiễm virus), tồn thời gian thí nghiệm (tuần 1- tuần 8) không phát virus máu, kể 01 gà chết tuần thứ 4.1.4.2 Một số tiêu lâm sàng gànhiễm CIAV Triệu chứng lâm sàng gà thời điểm tuần tuổi (2 tuần sau bắt đầu có tượng virus huyết, thời điểm 100% gà gây nhiễm dương tính với virus huyết) Tuy nhiên, suốt q trình theo dõi, khơng quan sát triệu chứng thiếu máu gà nhiễm virus thực nghiệm 4.1.4.3 Khả tăng trọng gàsau gây nhiễm CIAV Từ thời điểm 1- tuần sau gây nhiễm (9-30 ngày tuổi), gà thuộc nhóm thí nghiệm đối chứng có chênh lệch khối lượng khác biệt thời điểm ý nghĩa thống kê Từ tuần thứ sau gây nhiễm (thời điểm có từ > 70% đến 100% gà dương tính virus huyết), nhóm nhiễm virus có khối lượng thấp rõ rệt so với nhóm đối chứng 4.1.4.4 Biến động tỷ khối huyết cầu gàgây nhiễm CIAV Từ tuần sau gây nhiễm trở đi, kết kiểm định khác biệt tỷ 13 khối huyết cầu nhóm gà cho giá trị p < 0,05, chứng tỏ kết bắt đầu sai khác có ý nghĩa thống kê Trong đó, thấy rõ nhóm gà nhiễm CIAV có tỷ khối huyết cầu thấp rõ rệt so với nhóm gà đối chứng 4.1.4.5 Bệnh tí ch đại thể gà gây nhiễm CIAV Tại thời điểm tượng thiếu máu khác biệt rõ rệt nhóm thí nghiệm đối chứng (ngày 56 sau nhiễm virus, hình 4.2), tồn gà nhóm mổ khám để nghiên cứu biến đổi bệnh tích đại thể Hình 4.2 Bệnh tích đại thể tuyến ức vàtủy xương Hình 4.2 cho biết thùy tuyến ức nhóm gà đối chứng có kích thước tương đối đồng (hình 4.2E, 4.2F), kích thước thùy nhóm thí nghiệm có teo phần (hình 4.11B) teo gần hồn tồn (hình 4.2A) Tủy xương nhóm thí nghiệm nhạt màu (hình 4.2D) có màu vàng rõ (hình 4.2C) Ngược lại, tủy xương nhóm gà đối chứng ln có màu đỏ nâu (hình 4.2G, 4.2H) Như vậy, gà gây nhiễm chủng CIAV thực địa nghiên cứu có biến đổi bệnh tích điển hình bệnh thiếu máu truyền nhiễm, giống mô tả nhiều nghiên cứu giới (Yuasa & cs., 1979; Yuasa & cs., 1980) 4.2 ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC PHÂN TỬ CỦA CIAV TẠI MIỀN BẮC 4.2.1 Đặc điểm di truyền CIAV lưu hành miền Bắc Để tìm hiểu đặc điểm cấu trúc gen CIAV lưu hành miền Bắc, gen chủng virus giải mã thành cơng (mã số MH53610414 MH536106) có kích thước 2298 nucleotide Kích thước gen CIAV thu nghiên cứu tương đương với đa số chủng CIAV giới (161/ 176 chủng công bố GenBank dài 2298 nucleotide) Kết phân tích cấu trúc gen trình bày phần Ghi chú:  ÷ trình tự nucleotide lặp (direct repeat); ATF: trình tự bám yếu tố khởi động phiên mã; CCAAT: trình tự tăng cường tính bám yếu tố khởi đầu phiên mã; Sp1: trình tự giàu GC bám protein Sp1; TFIID: trình tự bám yếu tố khởi động phiên mã II D Hình 4.3 Cấu trúc vùng khởi đầu phiên mãcủa CIAV miền Bắc Hình 4.3 trình bày cấu trúc đầu 5’ khơng mã hóa protein CIAV So với chủng tham chiếu, 3/3 chủng CIAV Việt Nam có vùng trình tự lặp lại (ký hiệu 1, 2, 4, 5, hình 4.3) giống với chủng virus có độc lực (Cux-1, mã số M81223) Vùng 5’ cịn chứa trình tự bám cho yếu tố khởi động q trình phiên mã, ví dụ ATF, CCAAT, Sp1 TFIID (hình 4.3) Như vậy, chủng virus miền Bắc mang cấu trúc gen 15 đặc trưng vùng 5’ CIAV (Noteborn & cs., 1991) So sánh với chủng CIAV clone 10 chứng minh có độc lực thấp (mã số U66304) (Meehan & cs., 1997), 3/3 chủng CIAV nghiên cứu chủng Cux-1 độc lực cao khơng có đột biến thêm 21 nucleotide (đánh dấu màu xám, hình 4.3) nằm trình tự lặp số số Tiếp tục so sánh vùng gen mã hóa protein CIAV, xác định gen 3/3 chủng CIAV nghiên cứu có cấu trúc vùng gen mã hóa protein giống với chủng tham chiếu M81223 (hình 4.4) Ghi chú: giátrị (%) biểu thị mức tương đồng nucleotide gen chủng CIAV miền Bắc với chủng virus tham chiếu M81223 Chiều mũi tên biểu thị hướng trình dịch mã Hình 4.4 Cấu trúc vùng mãhóa protein CIAV miền Bắc Có thể thấy vùng mã hóa protein chủng CIAV gồm gen chiều, lồng nhau, theo thứ tự ORF2- ORF3- ORF1 (hì nh 4.4) Về mức tương đồng, gen ORF2 tương đồng 100%, gen ORF3 tương đồng 98,3% - 99,2% gen ORF1 tương đồng từ 98,9% - 99,1% so với chủng CIAV tham chiếu Ở mức độ gen, chủng thực địa Việt Nam đồng thời thể vùng biến đổi gen VP1 Gen mã hóa protein VP1 chứa vùng (dấu *, hình 4.5A - 4.5C) có tương tự gen 95% (đường nét đứt) so sánh với chuỗi nhóm gen Một vùng thêm vào có tương đồng gen thấp (dấu ★, hình 4.5A) quan sát vùng khơng mã hóa chủng Việt Nam so sánh với nhóm di truyền G1 16  G1 vs 33.5 B 0.98 0.96 0.94 0.92 0.9 0.88 0.86 0.84 0.82 0.8 * VP2 VP1 * VP3 101 201 301 401 501 601 701 801 901 1001 1101 1201 1301 1401 1501 1601 1701 1801 1901 2001 2101 2201 MứcGenetic tươngsimilarity đồng gen 0.98 0.96 0.94 0.92 0.9 0.88 0.86 0.84 0.82 0.8 G1 vs 33.3 VP2 G3 vs 33.3 G2 vs 33.5 * VP2 VP1 * VP3 G3 vs 33.5 * * VP1 VP3 101 201 301 401 501 601 701 801 901 1001 1101 1201 1301 1401 1501 1601 1701 1801 1901 2001 2101 2201 MứcGenetic tươngsimilarity đồng gen 0.98 0.96 0.94 0.92 0.9 0.88 0.86 0.84 0.82 0.8 G3 vs 3.1 G2 vs 33.3 Center position Vị trí trung tâm positiontâm Vị tríCenter trung C G2 vs 3.1 101 201 301 401 501 601 701 801 901 1001 1101 1201 1301 1401 1501 1601 1701 1801 1901 2001 2101 2201 G1 vs 3.1 A Vị tríCenter trung positiontâm Ghi chú: gen CIAV so sánh với chủng virus tham chiếu thuộc genogroup (A), (B) và3 (C) Dấu * ★ đánh dấu vùng có mức tương đồng < 95% (đường nét đứt) Hình 4.5 Đặc điểm biến đổi gen CIAV lưu hành miền Bắc 4.2.2 Đặc điểm di truyền gen mãhóa capsid protein 4.2.2.1 Biến đổi di truyền cấp độ nucleotide Đối với CIAV, biến đổi trình tự nucleotide thường dao động phạm vi 5% tập trung vùng gen mã hóa cho protein VP1 (Ducatez & cs., 2006; Eltahir & cs., 2011; Zhang & cs., 2013) Từ đó, nghiên cứu tiếp tục phân tích đặc điểm di truyền gen mã hóa capsid protein (hình 4.6) 17 Vx_Cux-1_M55918 Vx_P4_AJ890284 Vx_3711_EF683159 VP7 HN1 VP8 BN1 C1 VP9 C5 VP10 C8 C10 C12 C13 C16 VP7 HN1 VP8 BN1 C1 VP9 VP10 C5 C8 C10 C12 C13 C16 VP7 HN1 VP8 BN1 C1 VP9 VP10 C5 C8 C10 C12 C13 C16 Vùng gen biến đổi Vùng gen nhiều biến đổi chủng CIAV so sánh với chủng virus vacxin Chủng P4 Cux-1 có vacxin tương ứng Nobilis CAV P4 AviPro Thymovac Chủng 3711 xác định chủng virus vacxin qua thông tin truy cập ngân hàng gen (EF683159) Vị trí có trình tự khác so với chủng vacxin tham chiếu biểu thị màu tương ứng với nucleotide sai khác Hình 4.6 Kết so sánh trình tự phân đoạn gen ORF1 Kết cho thấy: chủng CIAV đại điện sai khác 27 vị trí nucleotide so với chủng tham chiếu Cux-1; chúng có mức tương đồng gen cao trình tự nucleotide (dao động từ 96,7% đến 99,8%); có 561/582 vị trí (chiếm 93,39%) khơng có đột biến nucleotide 21/582 vị trí (chiếm 3,61%) đột biến (đa hình nucleotide, polymorphic) Trong số 21 đột biến điểm, vùng biến đổi gen VP1 (Renshaw & cs., 1996) chiếm vị trí Tính chung chiều dài phân đoạn gen ORF1 so sánh (582 18 nucleotide), chủng CIAV sai khác từ 4,64% đến 6,70% so với chủng virus vacxin Nhận xét tương tự rút đặc điểm đột biến khoảng nucleotide 1-200 201- 582 so sánh chủng CIAV Việt Nam năm 2013 (BN1, HN1, VP7-VP10) với chủng virus vacxin (hình 4.6) 4.2.2.2 Biến đổi di truyền cấp độ amino acid Phân tích trình tự amino acid suy diễn (vị trí đến 194 protein VP1) chủng CIAV đại diện cho biết tương đồng cao (giống 188/194 vị trí) khác vị trí amino acid VP1 Kết phân tích trình tự amino acid chủng CIAV thuộc nghiên cứu cho phép khẳng định: chủng (C5, C12, C13 C16) mang trình tự amino acid 75V97M139K144E đặc trưng nhóm nhóm 3; chủng cịn lại (C1, C8 C10) mang trình tự amino acid 75I/T97L139Q144Q đặc trưng nhóm Như vậy, dự đốn có hai nhóm di truyền CIAV lưu hành gà địa điểm lấy mẫu 4.2.2.3 Biến đổi amino acid vị tríliên quan tới độc lực Kết cho thấy: rõ ràng khơng có chủng CIAV Việt Nam có biến đổi liên quan đến kiểu hình chủng CIAV có độc lực thấp: 75I- 89T- 125L- 141L- 144E (Todd & cs., 2002) Bên cạnh đó, có chủng (MH536105 MH536106) có vị trí amino acid 394 (glutamin- Q) quy định tính độc lực CIAV tìm thấy chủng đại diện thuộc nghiên cứu 4.2.3 Nguồn gốc phát sinh chủng loại CIAV lưu hành miền Bắc 4.2.3.1 Nguồn gốc phát sinh chủng loại dựa vào trình tự amino acid đặc trưng Sự khác biệt chủng CIAV đại diện nghiên cứu với chủng virus vacxin chủng CIAV Việt Nam (công bố năm 2013) làm rõ Giống số nghiên cứu công bố (Snoeck & cs., 2012; Olszewska-Tomczyk & cs., 2016) phát sinh chủng loại dựa vào phần trình tự gen ORF1cho biết CIAV chia thành nhóm di truyền Trên sở đó, 100% chủng virus lưu hành Việt Nam thuộc nhóm G2 G3 Đáng ý, 7/7 chủng CIAV nghiên cứu không nằm nhánh với chủng virus vacxin (chủng P4, Cux-1 và3711) Thêm vào đó, kết so sánh trình tự amino acid với chủng virus vacxin (P4) cho biết: (i) chủng CIAV thực địa nghiên cứu (chủng C5, C12, C13 C16) có vị trí sai khác và(ii) chủng (C1, C8 C10) có vị trí sai khác 19 Vị trí amino acid 14 22 75 92 97 125 139 144 152 94,2% A H V G M L K E V A H V G M L K E V A H V G M L K E V A H V G M L K E V A H V G M L K E V A H V G M L K E V A H V G M L K E V A H V G M L K E V A H V D M I K E M S H V G M I K D V A N I G L I Q Q V A N I G L I Q Q V A N I G L I Q Q V A Q I G L I Q Q V A Q I G L I Q Q V A H V G M I K E V 3a 3b Ghi chú: Dựa vào chủng tham chiếu biết nhóm di truyền, CIAV chia thành nhóm 1, nhóm vànhóm (phân nhóm 3a, 3b) Giá trị bootstrap nút node phát sinh chủng loại hiển thị cho phân nhánh Bảng đính kèm liệt kê vị trí có thay đổi amino acid mã hóa, vị trí amino acid đặc trưng nhóm di truyền đánh dấu màu xám Những vị trí amino acid có sai khác chủng CIAV nghiên cứu với chủng virus vacxin P4 đóng khung Hình 4.7 Cây phát sinh loài CIAV dựa vào gen ORF1 Như vậy, kết trình bày cho thấy: (i) có hai nhóm di truyền CIAV lưu hành gà nuôi Hà Nội vùng phụ cận dựa vào gen ORF1 (nhóm di truyền G2 vàG3 với phân nhóm phụ G3a, G3b); (ii) chủng virus khác với chủng virus vacxin phòng bệnh thiếu máu truyền nhiễm có thị trường Việt Nam (CAV P4AJ890284) Kết phù hợp với công bố nghiên cứu (Craig & cs., 2009) khẳng định chủng CIAV lưu hành Argentina có chung trình tự amino acid vị trí 22, 75, 97, 139, 144 414 khác so với chủng virus vacxin (Cux-1, Del-Ros) sử dụng vị trí 75, 97, 139, 144 Theo chủng CIAV lưu hành xếp vào nhóm di truyền G1, khác với chủng virus vacxin thuộc nhóm di truyền G2 Các kết thu làm rõ thêm lưu hành phổ biến đa nhóm di truyền CIAV miền Bắc Việt Nam 4.2.3.2 Nguồn gốc phát sinh chủng loại dựa vào trình tự nucleotide Nguồn gốc phát sinh chủng loại CIAV lưu hành miền Bắc dựa 20 vào trình tự nucleotide phân tích nhiều cấp độ Cây phát sinh lồi CIAV xây dựng từ gen hoàn chỉnh (n = 162), gen VP1 hoàn chỉnh (n = 395) phần gen VP1 Kết quả: khơng có chủng CIAV Việt Nam (được thu thập năm 2013, 2016 2017) nằm nhóm với chủng virus vacxin Tất chủng CIAV phân lập Việt Nam thuộc genogroup G2 G3 Ghi chú: chủng phân chia thành nhóm riêng biệt từ G1 đến G3 Các chủng CIAV phân lập Việt Nam biểu thị màu tím đánh dấu mũi tên theo năm phân lập: 2013 (mũi tên trống), 2016 (đầu mũi tên), 2017 (mũi tên đầy) Hình 4.8 Cây phát sinh lồi CIAV dựa gen VP1 hoàn chỉnh 4.2.4 Đặc điểm phát tán theo không gian thời gian CIAV lưu hành miền Bắc Để nghiên cứu cách đầy đủ xác nguồn gốc phát sinh, q trình phát tán theo không gian thời gian CIAV lưu hành miền Bắc, nghiên cứu phân tích sở liệu gồm 984 trình tự gen (hình 4.9) 21 Hình 4.9 Kết xác định đặc điểm phân nhánh CIAV Kết phân tích cho biết có genogroup G2 G3 lưu hành miền Bắc Việt Nam Trên sở đó, nghiên cứu phân tích phát tán virus theo khơng gian thời gian cho genogroup 4.2.4.1 Đặc điểm phát tán theo không gian vàthời gian genogroup G2 CIAV thuộc genogroup G2 lưu hành miền Bắc thuộc nhánh, ký hiệu G2.1 G2.2 Kết phân tích sở liệu gồm 344 trình tự ORF1 genogroup G2 dự đốn CIAV thuộc nhóm phát sinh từ khoảng năm 1971, khoảng tin cậy 95% khoảng 1963 - 1976 Chủng virus tổ tiên genogroup dự đốn có nguồn gốc từ Nhật Bản Ở nhánh phát sinh chủng loại, dự đốn có phát tán CIAV qua số nước, ví dụ: Nhật Bản -> Braxin, Braxin -> Argentina, v.v 22 4.2.4.2 Đặc điểm phát tán theo không gian vàthời gian genogroup G3 Kết phân tích sở liệu gồm 601 trình tự ORF1 genogroup G3 dự đốn CIAV thuộc nhóm phát sinh từ khoảng năm 1941, khoảng tin cậy 95% khoảng 1921 - 1960 Giống genogroup G2, chủng virus tổ tiên genogroup G3 dự đốn có nguồn gốc từ Nhật Bản Ở nhánh phát sinh chủng loại, dự đốn có phát tán CIAV qua số nước: Nhật Bản -> Braxin, Nhật Bản -> Mỹ, v.v CIAV lưu hành miền Bắc Việt Nam thuộc genogroup G3 chiếm số lượng nhiều (62/73 trình tự gen ORF1) Đáng ý, kết cho thấy chúng có nguồn gốc khơng (thuộc nhiều nhánh khác phát sinh chủng loại, nhánh G3.1- G3.3) Về nguồn gốc, CIAV miền Bắc thuộc genogroup G3 dự đoán bắt nguồn từ chủng virus lưu hành số quốc gia như: Trung Quốc (nhánh G3.3), Đài Loan (nhánh G3.2); vàBa Lan (nhánh G3.1) Dựa vào đặc điểm phân nhánh này, kết phân tích cho biết có nhiều đợt xâm nhập genogroup G3 vào Việt Nam CIAV thuộc nhánh G3.1, G3.2 vàG3.4 sau xâm nhập, có khả tạo thành nhánh di truyền riêng biệt tiếp tục lây lan địa phương khác Một nguyên nhân nguồn gốc chủng CIAV Việt Nam công tác nhập nội giống từ Mỹ, Trung Quốc, Thái Lan từ năm 1990 (Duc Nv, 2008) Bên cạnh đó, hoạt động trao đổi thương mại động vật sống với Trung Quốc diễn thường xuyên góp phần làm xuất vụ dịch cúm gia cầm gà, điều kiện thuận lợi để phát tán chủng CIAV Việt Nam (Desvaux & cs., 2016) PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 1) Về lưu hành virus bệnh thiếu máu truyền nhiễm - Đã xác định CIAV lưu hành rộng rãi đàn gà nuôi 10 tỉnh/thành phố miền Bắc Việt Nam với tỷ lệ nhiễm trung bình theo cá thể trang trại 62,2% 73,4%; - Gà lứa tuổi, mục đích chăn ni, quy mơ phương thức chăn nuôi nhiễm CIAV với tỷ lệ khác nhau; nhiên thấy sai khác rõ rệt tỷ lệ nhiễm yếu tố phương thức chăn nuôi (nuôi thả tự có tỷ lệ nhiễm 80,5% cao so với nuôi nhốt 52,6%); - Bệnh thiếu máu truyền nhiễm xuất đàn gà nuôi miền Bắc, với biến đổi bệnh tích đại thể điển hình gà mắc tự nhiên teo quan lympho tủy xương nhạt màu; - CIAV lưu hành miền Bắc có độc lực; gây bệnh thực nghiệm 23 gây biến đổi bệnh lý điển hình bệnh thiếu máu truyền nhiễm: (i) tỷ khối huyết cầu trung bình nhỏ 27% thấp rõ rệt so với nhóm đối chứng; (ii) tủy xương nhạt màu (77,8%), teo tuyến ức (33,3%), teo túi Fabricius (55,6%) 2) Về đặc điểm dịch tễ học phân tử CIAV miền Bắc - Trình tự ba chủng virus đại diện miền Bắc cho thấy chúng mang đầy đủ cấu trúc gen điển hình CIAV, bao gồm đầu 5’ khơng mã hóa protein, theo sau gen mã hóa protein chiều, lồng nhau, theo thứ tự ORF2- ORF3- ORF1; - 100% số chủng CIAV miền Bắc có trình tự amino acid đặc trưng nhóm di truyền G3 75V97M139K144E/K/N vàG2 là75I/T97L139Q144Q; khơng có chủng CIAV có biến đổi liên quan đến kiểu hình virus có độc lực thấp (75I- 89T- 125L- 141L- 144E); - Các chủng CIAV lưu hành miền Bắc thuộc hai nhóm di truyền genogroup G2 G3; 100% số chủng không nằm nhánh với chủng virus vacxin; - CIAV lưu hành miền Bắc Việt Nam có nguồn gốc đa dạng, genogroup G2 có nguồn gốc từ chủng virus lưu hành Argentina Mỹ; genogroup G3 có nguồn gốc từ chủng virus lưu hành Trung Quốc, Đài Loan Ba Lan Sau xâm nhập vào đàn gà nuôi tỉnh miền Bắc Việt Nam, chủng CIAV có khả tạo thành nhánh di truyền riêng biệt tiếp tục lây lan địa phương khác 5.2 ĐỀ NGHỊ 1) Do lưu hành phổ biến CIAV có mặt CIA đàn gà ni miền Bắc Việt Nam nên để phịng bệnh có hiệu cần sử dụng vacxin phòng bệnh thiếu máu truyền nhiễm, đặc biệt đàn gà giống Tuy nhiên, chủng lưu hành không nằm nhánh với chủng virus vacxin cấp phép lưu hành Việt Nam nên việc lựa nghiên cứu lựa chọn loại vacxin phù hợp cần thiết; 2) Do nghiên cứu giới hạn lấy mẫu 10 tỉnh/thành phố miền Bắc, thấy phát tán phức tạp virus nên cần tiếp tục mở rộng phạm vi nghiên cứu để có kết luận tồn diện lưu hành đặc điểm dịch tễ học phân tử CIAV đàn gà ni Việt Nam 3) Trên giới có nhiều nghiên cứu cho thấy ảnh hưởng CIAV đến hệ miễn dịch gà, nghiên cứu chứng minh độc lực CIAV dựa vào biến đổi bệnh lý số tiêu; cần tiếp cần tiếp tục nghiên cứu chứng minh khả gây ức chế miễn dịch (immunosuppression) chủng CIAV lưu hành Việt Nam 24 DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Đào Đoan Trang, Cao Thị Bích Phượng, Vũ Thị Ngọc, Nguyễn Văn Giáp & Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2018) Nghiên cứu lưu hành virus gây bệnh thiếu máu truyền nhiễm (chicken infectious anemia virusCIAV) Hà Nội vùng phụ cận Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, 16 (1): 36 - 45 Đào Đoan Trang, Nguyễn Văn Giáp, Lê Thị Trinh, Trương Hà Thái, Lại Thị Lan Hương, Cao Thị Bích Phượng & Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2019) Nghiên cứu số tiêu lâm sàng, phi lâm sàng biến đổi bệnh lý đại thể gà nhiễm virus gây bệnh thiếu máu truyền nhiễm (chicken infectious anemia virus- CIAV) điều kiện thí nghiệm Tạp chí khoa học Nơng nghiệp Việt Nam, 17 (7): 546 - 557 Le Thi My Huynh, Giap Van Nguyen, Luc Duc Do, Trang Doan Dao, Truong Van Le, Ngoc Thi Vu & Phuong Thi Bich Cao (2019) Chicken infectious anemia virus infections in chickens in Northen Vietnam: epidemiological features and genetic characterization of the causative agent Avian Pathology, 49 (1): - 14 ... gây bệnh thực nghiệm cho gà 3.4.2 Nghiên cứu số đặc điểm đặc điểm dịch tễ học phân tử CIAV - Đặc điểm di truyền chủng CIAV lưu hành đàn gà nuôi 10 tỉnh/ thành phố thuộc miền Bắc Việt Nam; - Đặc. .. 4.2 ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC PHÂN TỬ CỦA CIAV TẠI MIỀN BẮC 4.2.1 Đặc điểm di truyền CIAV lưu hành miền Bắc Để tìm hiểu đặc điểm cấu trúc gen CIAV lưu hành miền Bắc, gen chủng virus giải mã thành... NGHIÊN CỨU 3.4.1 Nghiên cứu lưu hành virus bệnh thiếu máu truyền nhiễm gànuôi số tỉnh/thành phố miền Bắc Việt Nam - Xác định tỷ lệ dương tính CIAV đàn gà ni 10 tỉnh/thành phố thuộc miền Bắc Việt