Nâng cao hiệu quả sản xuất và chất lượng của chế phẩm nấm bạch cương Beauveria bassiana, trên cơ sở nghiên cứu môi trường và các yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển của nấm Beauveria bassiana trong điều kiện phòng thí nghiệm.
Khoa CNSH & MT Lời cảm ơn Trước hết xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS – TS Phạm Thị Thùy, người thầy tận tình bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực tập Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa CNSH trường ĐH Phương Đông Ban lãnh đạo Viện Bảo vệ thực vật tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành tốt q trình thực tập Tơi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè lớp đặc biệt bạn thực tập phịng nấm trùng thuộc Trung tâm đấu tranh sinh học – Viên Bảo vệ thực vật động viên giúp đỡ tơi q trình thực tập Một lần xin chân thành cảm ơn tất giúp đỡ quý báu nói Hà Nội, Ngày 15 tháng năm 2010 Sinh viên Lê Anh Tuấn Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 Khoa CNSH & MT PHẦN I MỞ ĐẦU Việt Nam nước nông nghiệp có khí hậu nhiệt đới nóng ẩm nên thuận tiện cho trồng phát triển Đồng thời với trồng phát triển sâu bệnh hại phát sinh, chúng gây hại đáng kể đến suất Theo thống kê Cục Bảo vệ thực vật, hàng năm loại dịch hại, bệnh hại, làm giảm 35 – 40 % tổng sản lượng, mặt khác làm giảm phẩm chất nơng sản Để bảo vệ trồng mức chi phí cho cơng tác bảo vệ thực vật, phịng trừ dịch hại khơng ngừng tăng lên phạm vi toàn quốc Để làm giảm thiệt hại sâu, bệnh hại gây ra, người nông dân sử dụng nhiều biện pháp phòng trừ canh tác thủ công, luân canh, chuyên canh, chọn tạo giống mới, dùng thuốc hóa học Trong biện pháp sử dụng thuốc hóa học xem phổ biến dễ áp dụng, có hiệu ngay, kịp thời hiệu cao mà giá thành lại rẻ Nhưng việc sử dụng thuốc trừ sâu hóa học gây nhiễm mơi trường trầm trọng, để lại dư chất hóa học nơng sản, giảm số lượng sinh vật có ích, làm cân sinh thái tự nhiên, làm tăng tính kháng thuốc sâu bệnh Do vậy, sử dụng thuốc hóa học biện pháp tình Hiện đời sống xã hội Việt Nam ngày phát triển, ý thức người nông dân nâng cao, họ hiểu tác hại thuốc hóa học muốn có loại thuốc diệt trừ sâu đạt hiệu cao mà không gây hậu xấu thuốc hóa học Điều địi hỏi nhà khoa học cần phải nghiên cứu để thay thuốc hóa học loại thuốc khác theo hướng công nghệ sinh học Qua nghiên cứu, nhà khoa học phát triển loại vi nấm, vi khuẩn, virut có khả ký sinh gây bệnh nhiều loại sâu hại trồng đạt hiệu cao Nhiều quan khoa học nước ta tiến hành nghiên cứu sản xuất chế phẩm nguồn gốc từ vi sinh vật ( vi khuẩn, vi rút vi nấm) Trong Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 Khoa CNSH & MT số chế phẩm vi nấm Viện Bảo vệ thực vật (BVTV) nghiên cứu từ năm 1990 kỷ XX, đến mang lại kết cao việc bảo vệ trồng Chế phẩm thuốc trừ sâu vi nấm có ưu điểm khơng độc hại với người vật nuôi, không gây ô nhiễm môi trường, không làm nguồn sinh vật có ích tự nhiên Nấm trùng chưa tạo tính kháng thuốc có khả lây nhiễm nhiều loại sâu khác nhau, ngồi nấm trùng khơng tiêu diệt trực tiếp sâu hại vào thời kỳ phá hoại mà cịn tích lũy đồng ruộng lan truyền cho hệ sâu Loài nấm nghiên cứu nước ta sâu rộng nấm bạch cương Beauveria bassiana, lựa chọn chủng giống mới, môi trường nuôi cấy thích hợp, phổ tác động rộng nhiều loại sâu hại trồng với hiệu lực kéo dài Để góp phần vào việc hoàn thành nâng cao suất ổn định chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana làm ngang tầm với giới, hướng tới thương mại hóa chế phẩm, chúng tơi giao thực đề tài: “ Nghiên cứu công nghệ sản xuất chế phẩm nấm bạch cương Beauveria bassiana để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng.” MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU */ Mục đích Nâng cao hiệu sản xuất chất lượng chế phẩm nấm bạch cương Beauveria bassiana, sở nghiên cứu môi trường yếu tố ảnh hưởng đến phát triển nấm Beauveria bassiana điều kiện phịng thí nghiệm Lª Anh Tn MSSV: 506301090 Khoa CNSH & MT */ Yêu cầu - Xác định tỷ lệ thành phần môi trường sản xuất thích hợp cho nấm Beauveria bassiana phát triển để đạt suất cao chất lượng tốt - Xác định số yếu tố ảnh hưởng tới suất chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana trình sản xuất - Đánh giá hiệu lực phòng trừ nấm Beauveria bassiana số loại sâu hại điều kiện phịng thí nghiệm Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 Khoa CNSH & MT PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU I Sơ lược lịch sử nghiên cứu nấm diệt côn trùng Theo tài liệu tác giả Phạm Thị Thùy năm 2004 [8]: Sau phát Balisneri (1709) nấm gây bệnh côn trùng lúc đời ngành khoa học nghiên cứu bệnh lý côn trùng Thế kỷ thứ XVIII có tác giả nghiên cứu ban đầu nấm côn trùng, họ khẳng định nấm trùng vi sinh vật gây bệnh chứng minh khả lan truyền bệnh từ ký chủ sang ký chủ khác Năm 1815, Agostino Bassi phát nấm trắng Muscardin gây bệnh tằm, thời gian Bassi chưa có đầy đủ kiến thức ngành nấm học để phân loại, tác giả phân biệt mô ký chủ với nấm ký sinh cách đưa phương pháp lan truyền điều kiện gây bệnh tác giả đưa biện pháp phịng trừ nấm trùng Như coi Agostino Bassi nhà bệnh lý học côn trùng Sau Bassi xuất ngày nhiều cơng trình nghiên cứu ứng dụng nấm trùng để phòng trừ loại sâu hại trồng đạt hiệu Những cơng trình Oduen (1837) phát nấm trắng Muscardin ký sinh côn trùng tằm, mà nấm trắng cịn dùng để phịng trừ loại trùng gây hại khác Năm 1878, Metschnhikov phát phân lập nấm xanh Entomophthora anisopliae sâu non cánh cứng hại lúa mì ( Anisophliae austrinia ), sau tác giả đổi tên Metarhizium anisopliae Sau thời gian đó, Metschnhikov tiến hành sản xuất bào tử nấm Metarhizium anisopliae dạng khiết trộn với chất bột phun đồng ruộng để phòng trừ sâu non trưởng thành bọ đầu dài hại củ cải đường (Bothinoderes punctiventris ), hiệu đạt 55 – 80 % sau 10 – 14 ngày thử nghiệm [8] Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 Khoa CNSH & MT Cũng thời gian Mỹ người ta sử dụng nấm trùng để phịng trừ sâu hại lúa mì Năm 1888, nhà bác học Snoi tiến hành loạt thí nghiệm với nấm Muscardin màu trắng có tên khoa học Beauveria globuliera để phịng trừ bọ xít hại lúa mì đạt hiệu cao Các nhà khoa học trường Đại học Tổng hợp Kanzac thành lập trạm tuyên truyền để phổ biến vai trò nấm Beauveria việc lây bệnh côn trùng, họ gửi 500 kiện nấm Beauveria đến trang trại để phòng trừ sâu hại củ cải đường Cuối kỷ XIX năm đầu kỷ XX, nhà bệnh lý học côn trùng giới cơng bố cơng trình thơng qua việc giám định miêu tả cụ thể chủng nấm có khả diệt trùng [8] II Những nghiên cứu nấm Beauveria bassiana 1/ Đặc điểm hình thái Theo PGS.TS Phạm Thị Thùy năm 2004 [8]: Vì nấm Beauveria bassiana có màu trắng nên người Trung Quốc người Việt Nam gọi nấm trắng hay nấm bạch cương Trên môi trường thạch đĩa thạch nghiêng, nấm bạch cương có sợi màu trắng đến màu crem có pha màu đỏ, da cam, đơi pha màu lục, tiết vào môi trường sắc tố màu vàng, màu đỏ nhạt màu xanh da trời Sợi nấm phân nhánh có vách ngăn, sợi nấm dài khoảng 3-5µm phát triển dày đặc môi trường, sau xuất chi chít cuống sinh bào tử Trên thể tằm côn trùng khác, sợi nấm mọc nhanh chẳng chốc phủ kín bề mặt thể, sợi nấm có dạng phấn trắng khơ biến thành màu vàng sữa Nấm Beauveria bassiana sinh bào tử trần đơn bào không màu, suốt không ngăn vách từ hình cầu ( đường kính 1-4 µm ) đến hình trứng ( kích thước 1,5-5,5 µm ) Tế bào sinh bảo tử trần đơn vòng xoắn, phát sinh từ sợi sinh dưỡng mọc thành đám, có cuống phình Tế bào sinh bào tử trần có hình zíc zắc mấu dạng nhỏ phát sinh kéo dài gốc ghép Phần gốc tế bào sinh bào tử trần hình cầu hình chai ( kích thước 2,5-3,5 Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 x 3,0-6,0 µm ), thời gian Khoa CNSH & MT nuôi cấy kéo dài, môi trường bào tử trần sinh mảnh kết chặt với 2/ Một số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Beauveria bassiana Điều kiện cần thiết cho trình hình thành bào tử hệ sợi nấm Beauveria bassiana nói riêng nấm trùng nói chung nhiệt độ, ẩm độ, độ pH môi trường, phương pháp nuôi cấy a Ảnh hưởng môi trường phương pháp nuôi cấy Môi trường nuôi cấy yếu tố quan trọng cho nấm sinh trưởng phát triển, môi trường không tốt, nấm mọc yếu khơng mọc Trong q trình nảy mầm để hình thành bào tử nấm Beauveria bassiana Metarhizium anisopliae cần nguồn Cacbon, Nito Sự phát triển nấm phụ thuộc vào chất ức chế khác Mơi trường thích hợp cho nấm phát triển mơi trường có chứa kitin làm nguồn cacbon, bổ sung thêm chất kitin glucoza trình nuôi cấy, nấm Beauveria bassiana thu số lượng bào tử cao, thành phần kitin mơi trường nuôi cấy cần thiết loại nấm, giúp cho phát triển hình thành bào tử dính (Conidiospore) bào tử trần (Blastoospore) Tuy nhiên nguồn thức ăn chứa Cacbon Nito có lợi cho sinh trưởng phát triển nảy mầm hình thành bào tử nấm Beauveria bassiana, ngồi nguồn nitơ vơ nấm Beauveria bassiana cịn sử dụng tốt nguồn hữu protein, pepton, axitamin có axit glutamic axit thích hợp cho nấm phát triển Các nguyên tố vi lượng C ++, Zn++ có tác dụng kích thích cho phát triển nấm Tùy loại nấm Metarhizium hay Beauveria mà nghiên cứu để lựa chọn môi trường thích hợp cho nấm phát triển tốt Về phương pháp nuôi cấy theo tác giả Rombach, Basto Cruz cộng sự, Hegedus cs, Miao cs, Jenkins Prior, Shimazu cs sử dụng Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 Khoa CNSH & MT phương pháp ni cấy chìm để sản xuất nấm trùng thu kết tốt, ni cấy chìm, người ta xác định khả sinh bào tử chồi lượng sinh khối sinh từ hai chủng nấm B.bassiana M.anisopliae cao [8] b Ảnh hưởng nhiệt độ ẩm độ Nhiệt độ ẩm độ yếu tố quan trọng định đến phát triển nấm Nhiệt độ thích hợp cho nấm phạm vi 25 – 30oC [5] c Ảnh hưởng ánh sáng Nấm Beauveria bassiana phát triển tốt điều kiện ánh sáng yếu, cần lượng ánh sáng nhỏ thời gian – đủ cho nấm côn trùng phát triển [5] d Ảnh hưởng độ thoáng khí ( hàm lượng oxi) Hầu hết loại nấm trùng thuộc loại khí, nấm phát triển chúng cần có hàm lượng oxi thích hợp dụng cụ nhân nuôi biên độ rộng khơng gian ni cấy, phù hợp nấm phát triển tốt [5] e Ảnh hưởng hàm lượng nước Nấm trùng địi hỏi hàm lượng nước thích hợp, q khơ q ướt nấm phát triển khơng tốt, tỷ lệ thích hợp 30 – 50% tùy theo điều kiện ẩm độ không khí mơi trường [5] g Ảnh hưởng độ pH Phạm vi nấm côn trùng sống độ pH từ 3,5 – 8,0, song nấm côn trùng ưa môi trường axit nấm phát triển thích hợp độ pH từ 5,5 – [5] Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 Khoa CNSH & MT III/ Độc tố, chế tác động triệu chứng sâu nhiễm nấm Beauveria bassiana 1/ Độc tố Theo PGS.TS Phạm Thị Thùy [8]: Năm 1696 R.L Hamill cộng xác định độc tố diệt côn trùng nấm bạch cương Beauveria bassiana đặt tên cho độc tố Beauvericin Năm 1971 Y.A Ovehinnokov cộng tổng hợp lại độc tố này, tác giả Jame cs xác định chất độc tố sinh q trình trao đổi chất vịng peptid có sắc tố màu vàng tenelin basianin, sắc tố hydroxylat progesteron phần nhỏ tách từ testosteron (C19H28O2) sinh Về mặt hóa học, độc tố Beauvericin có danh pháp xyclo (N-metyl L-phenylalanin-D-α-hydroxyizovaleryl) Đây loại depxipeptid vòng, có điểm sơi khoảng 93-94 oC Từ lít mơi trường nuôi cấy nấm Beauveria bassiana, nhà khoa học Trung Quốc trường Đại học Tổng hợp Nam Khai (Thiên Tân) tách 1,5g độc tố Beauvericin từ kg môi trường đặc tác giả tách 3,8 g Beauvericin 2/ Cơ chế tác động Trong tự nhiên, bào tử nấm Bb rơi vào thể côn trùng gặp điều kiện thuận lợi, sau 12-24h bào tử nấm nảy mầm Chúng hình thành sợi nấm đâm xuyên qua lớp vỏ kitin sau phát triển bên thể trùng hại Côn trùng hại phải huy động hết tế bào bạch huyết để chống lại nấm Bb tiết độc tố Beauvericin chất khác làm phá hủy tế bào bạch huyết Sợi nấm mọc nhiều bên thể làm cho thể cứng lại sau thời gian nấm mọc ngồi, lớp bào tử phủ lên trùng hại lớp bào tử gặp điều kiện gió đưa vào thể trùng khác thực chế tác động Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 Khoa CNSH & MT 3/ Triệu chứng sâu nhiễm bệnh Triệu chứng đặc trưng thay đổi di động côn trùng, di động tùy theo mức độ phát triển bệnh Khi bị bệnh mô bị phá hủy phần, lúc đầu côn trùng di động yếu sau ngừng hẳn nằm im chỗ chết Khi bị bệnh nấm, vận động côn trùng ngừng từ 2-3 ngày chí tuần trước nấm phát triển đầy thân côn trùng Chỉ côn trùng bị thương hay bị bệnh nấm, màu sắc toàn thân thay đổi xuất vết đen Khi sâu hại bị bệnh nấm Beauveria bassiana chỗ bào tử bám vào, nấm phát triển vào bên thân sâu tạo nên vệt đen khơng có hình thù định Cơn trùng chết nấm thường có màu hồng, vàng nhạt, trắng tồn thân cứng lại Khi bị bệnh nấm thân côn trùng bị ngắn lại khơ hệ thống tiêu hóa bị tổn thương thiếu thức ăn Vi sinh vật gây bệnh côn trùng thường tác động đến mô định, côn trùng bị nấm Beauveria bassiana ký sinh tuyến mỡ mơ khác bị hịa tan enzym lipaza proteaza nấm tiết ra, nhờ đặc điểm mà người ta xác định trùng bị bệnh động vật nguyên sinh nấm bậc thấp (Coelomycidium, Entomophyhora ) gây Hiện tượng chết gắn liền với tượng tiêu hủy mô đặc trưng bệnh nấm, trình tiến triển qua hai giai đoạn: - Hiện tượng chấn thương: Các mô tổn thương bị phá hoại nấm từ bên gây ra, trường hợp lympho máu đọng lại mô tái sinh tạo nên bề mặt phần thân côn trùng bị chấn thương - Hiện tượng nhiễm trùng máu: côn trùng bị bệnh nấm lympho máu chứa đầy sợi nấm IV/ Công nghệ sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana Hiện Viện Bảo vệ thực vật sản xuất chế phẩm nấm bạch cương Beauveria bassiana theo công đoạn sau: Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 10 Khoa CNSH & MT III/ THÍ NGHIỆM THỬ HIỆU LỰC CỦA NẤM BEAUVERIA BASSIANA TRỪ SÂU HẠI CÂY TRỒNG TRONG ĐIỀU KIỆN PHỊNG THÍ NGHIỆM Như phần phương pháp trình bày, để đánh giá chất lượng chế phẩm tạo tiến hành thử nghiệm số loại sâu hại trồng III.1/ Đánh giá hiệu lực trừ sâu róm thơng chế phẩm nấm Bb: Sâu róm thơng sâu nguy hiểm với thơng, chúng hút nhựa gây tượng cháy lá, nhựa dẫn đến chết Để khắc phục hậu bảo vệ rừng thông tiến hành thử hiệu lực diệt sâu tóm thơng chế phẩm nấm Beauveria bassiana Kết trình bày bảng 5: Bảng 5: Hiệu lực chế phẩm nấm Beauveria bassiana trừ sâu róm thơng thí nghiệm từ ( 24/2 – 8/3/2010 ) Công thức Nồng độ (x 108 bt/ml) 3,0 6,0 9,0 Tỷ lệ sâu chết (%) sau ngày thí 15,0 20,0 20,0 nghiệm 10 13 45,0 70,0 90,0 95,0 55,0 85,0 90,0 100,0 70,0 85,0 100,0 T H (oC) (%) 24,0 80,5 Qua bảng 5, chúng tơi nhận thấy thí nghiệm điều kiện nhiệt độ 24,0oC độ ẩm 80,5% thì: - Nồng độ thí nghiệm cao tỷ lệ sâu chết cao Trong cơng thức CT3 (9,0 x 108bt/ml) cho hiệu lực diệt sâu cao sau 10 ngày tỷ lệ sâu chết đạt 100% Sau CT2(6,0 x10 8bt/ml) với hiệu lực đạt 100% sau 13 ngày cuối CT1 (3,0 x108bt/ml) hiệu lưc đạt 95% sau 13 ngày - Từ kết cho thấy chế phẩm nấm Bb có hiệu cao với sâu róm thơng Hiệu lực diệt sâu cao nồng độ 9,0 x10 8bt/ml đạt 100% sau 10 Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 44 Khoa CNSH & MT ngày Nên nấm Bb có khả ứng dụng rộng rãi để phịng trừ sâu róm thơng ngồi tự nhiên Trong thí nghiêm phần lớn sâu róm thơng chết có mọc nấm trở lại 70% Quá trình thử hoạt lực nấm Bb với sâu róm thơng chúng tơi thu hình ảnh sâu róm thơng chết ( Hình ) Hình 5: Sâu róm thơng chết nấm Beauveria bassiana PTN III.2/ Đánh giá hiệu lực nấm Bb trừ sâu khoang Sâu khoang loại sâu đa thực, chúng phá hoại nặng loại rau lương thực Vì chúng tơi tiến hành thử hiệu lực nấm Bb sâu khoang Kết chúng tơi trình bày bảng 6: Bảng 6: Hiệu lực chế phẩm nấm Beauveria bassiana trừ sâu khoang thí nghiệm từ ngày 13/1 - 25/1/2010 Công Nồng độ thức (x 108 bt/ml) 2,0 Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 Tỷ lệ sâu chết (%) sau ngày thí 0,0 5,0 45 nghiệm 10 20,0 30,0 13 40,0 T H (oC) (%) 20,5 82,0 Khoa CNSH & MT 4,0 6,0 5,0 10,0 20,0 30,0 30,0 40,0 45,0 55,0 55,0 65,0 Qua bảng nhận thấy sau 13 ngày điều kiện nhiệt độ 20,5oC ẩm độ 82% chế phẩm có hiệu lực cao với sâu khoang: Nồng độ 6,0 x108bt/ml cho tỷ lệ sâu chết đạt 65.0% Nồng độ 4,0 x108bt/ml cho tỷ lệ sâu chết đạt 55.0 % Nồng độ 2,0 x108bt/ml hiệu lực thấp đạt 40,0 % Từ kết cho thấy chế phẩm nấm Bb có hiệu diệt sâu khoang Hiệu lực diệt sâu cao nồng độ x10 8bt/ml đạt 65 % sau 13 ngày thí nghiệm, kết ứng dụng để phịng trừ sâu khoang ngồi đồng ruộng Mẫu sâu chết để ẩm, tỷ lệ nấm Bb mọc lại sâu 20% Quá trình thử hoạt lực nấm Bb với sâu khoang thu hình ảnh sâu khoang chết: ( Hình ) Hình 7: Sâu khoang chêt nấm Beauveria bassiana Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 46 Khoa CNSH & MT III.3/ Đánh giá hiệu lực nấm Bb trừ sâu xanh bướm trắng Sâu xanh bướm trắng chủ yếu hại bắp cải su hào, chúng sinh sản nhanh, khả nang gây hại cao Nhằm hạn chế tác hại sâu rau Chúng tiến hành thử hiệu lực nấm Bb phòng trừ sâu xanh bướm trắng Kết đươc trình bày bảng 7: Bảng 7: Hiệu lực chế phẩm nấm Beauveria bassiana trừ sâu xanh bướm trắng thí nghiệm từ ngày 18/1 - 29/1/2010 Tỷ lệ sâu chết (%) sau ngày thí Cơng Nồng độ thức (x 108 bt/ml) 3,0 6,0 9,0 nghiệm 10 12 5,0 5,0 10,0 15,0 20,0 30,0 35,0 45,0 50,0 50,0 60,0 65,0 65,0 70.0 75,0 T H (oC) (%) 21,0 82,5 Qua bảng cho thấy: Trong lần thí nghiệm điều kiện nhiệt độ 21,0 oC, ẩm độ 82,5% nồng độ cao tỷ lệ sâu chết cao thời gian chết nhanh, sau 12 ngày hiệu lực đạt cao 75,0% nồng độ 9,0 x10 bt/ml Ở nồng độ 6,0 x10 bt/ml hiệu lực diệt sâu đạt 70,0%, nồng độ 3,0 x 10 bt/ml hiệu lực thấp 65,0% Tất cơng thức thí nghiệm theo dõi thấy triệu trứng bệnh chết sâu giống nhau, chủ yếu chết cứng giữ nguyên hình dạng Như nhiệt độ ẩm độ thích hợp hiệu diệt sâu xanh bướm trắng nấm Bb cao Vì cần ý nhiệt độ ẩm độ phịng trừ để đạt hiệu Lª Anh Tn MSSV: 506301090 47 Khoa CNSH & MT Quá trình thử hoạt lực nấm Bb với sâu xanh bướm trắng chúng tơi thu hình ảnh sâu xanh bướm trắng chết : ( Hinh ) Hình 8: Sâu xanh bướm trắng chết nấm Beauveria bassiana III.4/ Đánh giá hiệu lực trừ sâu tơ nấm Bb Sâu tơ loại sâu nguy hiểm loại rau họ thập tự có tính kháng thuốc cao với nhiều loại thuốc hóa học Chính chúng tơi thử nghiệm diệt sâu tơ nấm Bb Vì thuốc trừ sâu vi sinh không gây đôc cho môi trường, người khơng có tương kháng thuốc Kết chúng tơi trình bày bảng : Bảng 8: Hiệu lực chế phẩm nấm Beauveria bassiana trừ sâu tơ thí nghiệm từ ngày 20/1 - 1/2/2010 Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 48 Khoa CNSH & MT Công Nồng độ thức (x 108 bt/ml) 2,0 4,0 6,0 Tỷ lệ sâu chết (%) sau ngày thí 3,0 13,3 6,7 nghiệm 10 5,0 8,2 16,7 23,2 30,0 40,0 16,7 36,7 43,3 13 37,0 50,0 56,7 T H (oC) (%) 21,5 82,5 Qua bảng rút số nhận xét: Chế phẩm nấm Beauveria bassiana có hiệu diệt trừ với sâu tơ điều kiện nhiệt độ trung bình 21,5 oC ẩm độ 82,5% sau 13 ngày Nồng độ thấp 2,0 x10 8bt/ml cho hiệu diệt sâu 37,0% Nồng trung bình 4,00x10 bt/ml cho hiệu diệt sâu 50,0% Cao nồng độ 6,00x10 bt/ml cho hiệu diệt sâu 56,7% Mẫu sâu chết để ẩm, tỷ lệ nấm Bb mọc lại sâu 14% Quá trình thử hoạt lực nấm Bb với sâu tơ thu hình ảnh sâu tơ chết (Hinh 9): Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 49 Khoa CNSH & MT Hình 9: Sâu tơ chết nấm Beauveria bassiana Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 50 Khoa CNSH & MT PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận: Sau thời gian nghiên cứu Viện Bảo vệ thực vật từ kết đạt rút số kết luận: 1/ Nghiên cứu sản xuất nấm Beauveria bassiana điều kiện nhiệt độ 24,5oC ẩm độ 82,5% với thành phần môi trường : 1.1/ Tỷ lệ 80% cám gạo môi trường sản xuất cho suất chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana đạt cao 6,5 x109 bt/g 1.2/ Tỷ lệ 30% bột ngô môi trường sản xuất cho chất lượng chế phẩm nấm Bb đạt cao 6,5 x109 bt/g 1.3/ Tỷ lệ nước thích hợp môi trường sản xuất 1/3 cho chất lượng bào tử đạt cao 6,0 x109 bt/g 2/ Khi sấy thời gian thích hợp chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana đạt cao 6,0 x109 bt/g Hiệu lực chế phẩm nấm Beauveria bassiana phòng trừ số sâu hại trồng điều kiện phịng thí nghiệm: 3.1/ Với sâu róm thơng hại thơng: Hiệu lực nấm Bb đạt cao 100,0% nồng độ 9,0 x10 bt/ml sau 10 ngày phun, tỷ lệ sâu róm thông mọc lại nấm Bb 70% 3.2/ Với sâu khoang hại rau: Hiệu lực nấm Bb đạt cao 65,0 % nồng độ 6,0 x108 bt/ml sau 13 ngày phun, tỷ lệ sâu khoang mọc lại nấm Bb 20% 3.3/ Với sâu xanh bướm trắng hại rau: Hiệu lực nấm Bb đạt cao 75,0% nồng độ 9,0 x108 bt/ml sau 12 ngày phun, tỷ lệ sâu xanh bướm trắng mọc lại nấm Bb 20% 3.4 Với sâu tơ hại rau: Hiệu lực nấm Bb đạt cao 56,7 % nồng độ 6,0 x108 bt/ml sau 13 ngày phun, tỷ lệ sâu tơ mọc lại nấm Bb 14% Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 51 Khoa CNSH & MT Đề nghị Do thời gian thực đề tài có hạn nên đề nghị cần tiếp tục nghiên cứu số thí nghiệm đánh giá hiệu lực chế phẩm nhiều loại sâu hại thí nghiệm thêm yếu tố ảnh hưởng to, ẩm độ, vi sinh vật tạp nhiễm để nâng cao suất chất lượng việc phòng trừ loại sâu hại trồng Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 52 Khoa CNSH & MT TÀI LIỆU THAM KHẢO I/ Tài liệu tham khảo tiếng Việt 1/ Nguyễn Lân Dũng (1981) Sử dụng vi sinh vật để phòng trừ sâu hại trồng, NXB – Khoa học – Kỹ thuật 2/ Phạm Thị Nhất (1995) Sâu bệnh hại rau phương pháp phịng trừ NXB Nơng nghiệp 3/ Lê Thùy Qun Đề cương khóa luận tốt nghiệp ngành cơng nghệ sinh học (2006) 4/ Phạm Thị Thùy (1996) Khảo nghiệm chế phẩm nấm Beauveria bassiana Vuill Để phòng trừ sâu róm thơng lâm trường Hà Trung – Thanh Hóa Tạp chí Nơng nghiệp – Cơng nghiệp – Thực phẩm (trang 501 – 502) 5/ Phạm Thị Thùy (1996) Sản xuất sinh khối nấm Beauveria bassiana Vuill Tuyển tập công trình nghiên cứu biện pháp sinh học phịng trừ dịch hại trồng Nhà xuất Nông Nghiệp (trang 57- 65) 6/ Phạm Thị Thùy (1998) Kết ứng dụng chế phẩm nấm Beauveria bassian để phịng trừ sâu róm thông lâm trường Phù Bắc Yên – Sơn La Tạp chí Nơng nghiệp – Cơng nghiệp – Thực phẩm (trang 119-121) 7/ Phạm Thị Thùy (1999) Kết khảo nghiệm chế phẩm nấm Beauveria bassiana Vuill Metarhizium anisopliae để phòng trừ rầy nâu hại lúa từ năm 1991-1995 Tạp chí Nơng nghiệp – Cơng nghiệp – Thực phẩm (trang 31-33) 8/ Phạm Thị Thùy (2004) Công nghệ sinh học bảo vệ thực vật NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 53 Khoa CNSH & MT 9/ Phạm Thị Thùy, TS Trần Quang Tấn, Ths Hồng Thị Việt (2004) Nghiên cứu cơng nghệ sản xuất sử dụng thuốc trừ sâu sinh học (Bt, NPV.Sl, NPV.Ha, nấm Beauveria Metarhizium) hệ sản xuất rau an tồn Tuyển tập cơng trình nghiên cứu biện pháp sinh học phòng trừ dịch hại trồng, NXB – Nông nghiệp 10/ Phạm Thị Thùy (2009) Nghiên cứu phát triển công nghệ sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana Metarhizium anisopliea để phòng trừ sâu hại trồng nông lâm nghiệp Việt Nam Tạp chí nơng nghiệp phát triển nơng thơn, số 12 năm 2009 Trang 18-21 II/ Tài liệu tham khảo tiếng anh 11/ Aguda R.M.Saxena R.C.Litsinger and Roberts D.S.(1994) Inhibitory effect of insecticides on entomogenous fungi Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana Rice Res New 9(6) 16-17 12/ Feng M G Poprawski T J & Khachatourians G G (1994) Production, formulation and application of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana for insect control: Current status Biocontrol Sci Technol 4,3 - 43 13/ Phạm Thị Thùy (1994) Research on multipcation of Beauveria bassiana fungus and preliminary utilisation of Beauveria bassiana bioproduct for pets management in Stored product in Viet Nam Proceedings of 6th International Working Conference on Stored – product protection, 17-23 April 1994 Cenberra Australia, page 1123-1133 14/ Rombach M.C (1989) Production of Beauveria basssiana (Deuteromycotina Hyphomycetes) sympoduloconidia in submerged culture Entomophaga 34, 45 - 52 15/ Samsináková A Kálalová S Vlăek V & Kybal J (1981), Mass production of Beauveria bassiana for regulation of Leptinotarsa decemlineata population J Invertebr Pathol 38, 169 – 174 Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 54 Khoa CNSH & MT 16/ Watson D W Geden C J Long S J & Ruts D A (1995), Efficacy of Beauveria bassiana for controlling the house fly and stable fly (Diptera: Muscidae), Biol Control 5, 405 – 411 MỤC LỤC Trang PHẦN I: MỞ ĐẦU PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU I/ Sơ lược lịch sử nghiên cứu nấm diệt côn trùng II/ Những nghiên cứu nấm Beauveria bassiana II.1/ Đặc điểm hình thái II.2/ Một số yếu tố ảnh hưởng đên sinh trưởng phát triển nấm Beauveria bassiana a/ Ảnh hưởng môi trường phương pháp nuôi cấy b/ Ảnh hưởng nhiệt độ ẩm độ c/ Ảnh hưởng ánh sáng d/ Ảnh hưởng độ thống khí e/ Ảnh hưởng hàm lượng nước g/ Ảnh hưởng độ pH III/ Độc tố, chế tác động triệu chứng sâu nhiễm nấm Beauveria bassiana 1/ Độc tố 2/ Cơ chế tác động Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 55 Khoa CNSH & MT 3/ Triệu chứng sâu nhiễm nấm IV/ Công nghệ sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana 1/ Chọn chủng giống 2/ Môi trường nhân giống cấp 3/ Môi trường nhân giống cấp 4/ Công nghệ sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana phương pháp lên men xốp 5/ Tính ổn định chế phẩm nấm Beauveria bassiana V/ Khái niệm loại sâu dùng thí nghiệm V.1/ Sâu róm thơng ( Dendrolimus punctatus ) V.2/ Sâu khoang ( Spodoptera litura ) V.3/ Sâu xanh bướm trắng (Pieris rapae) V.4/ Sâu tơ (Plutella xylostella) VI/ Một số kết đạt phòng trừ sâu hại chế phẩm nấm Beauveria bassiana 1/ Trên thê giới 2/ Ở Việt Nam PHẦN III: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU I/ Thời gian địa điểm nghiên cứu II/ Vật liệu nghiên cứu 1/ Chủng vi sinh vật sử dụng 2/ Một số trùng sử dụng thí nghiệm 3/ Dụng cụ hóa chất dùng thí nghiệm Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 56 Khoa CNSH & MT III/ Nội dung phương pháp nghiên cứu 1/ Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ thành phần môi trường sản xuất đến chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana 1.1/ Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ cám gạo đến phát triển nấm Beauveria bassiana môi trường sản xuất 1.2/ Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ bột ngô đến phát triển nấm Beauveria bassiana môi trường sản xuất 1.2/ Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ nước (ml) môi trường sản xuất (gr) đến phát triển nấm Beauveria bassiana 1.3/ Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ ẩm độ thời gian nuôi cấy đến phát triển nấm Beauveria bassiana 1.4/ Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian sấy tới suất chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana 2/ Phương pháp pha loãng đếm số lượng bào tử buồng đếm hồng cầu cho thí nghiệm 2.1/ Phương pháp pha loãng 2.2/ Phương pháp đếm số lượng bào tử buồng đếm hồng cầu 3/ Đánh giá hiệu lực chế phẩm nấm Beauveria bassiana để phòng trừ loại sâu hại trồng PHẦN IV: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU I/ Tuyển chọn chủng nấm Beauveria bassiana II/ Nghiên cứu tỷ lệ thành phần môi trường sản xuất thích hợp cho nấm Beauveria bassiana (Bb) II.1/ Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ cám gạo môi trường sản xuất đến chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 57 Khoa CNSH & MT II.2/ Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ bột ngô môi trường sản xuất đến chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana II.3/ Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ nước với môi trường sản xuất đến chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana II.4/ Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian sấy đến chất lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana II.5/ Quy trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana III/ Thí nghiệm thử hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana trừ sâu hại trồng điều kiện phịng thí nghiệm III.1/ Đánh giá hiệu lực trừ sâu róm thơng chế phẩm nấm Beauveria bassiana III.2/ Đánh giá hiệu lực trừ sâu khoang chế phẩm nấm Beauveria bassiana III.3/ Đánh giá hiệu lực trừ sâu xanh bướm trắng chế phẩm nấm Beauveria bassiana III.4/ Đánh giá hiệu lực trừ sâu tơ chế phẩm nấm Beauveria bassiana PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Lª Anh TuÊn MSSV: 506301090 58 ... thực đề tài: “ Nghiên cứu công nghệ sản xuất chế phẩm nấm bạch cương Beauveria bassiana để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng. ” MỤC ĐÍCH VÀ U CẦU */ Mục đích Nâng cao hiệu sản xuất chất lượng chế phẩm. .. lượng chế phẩm nấm Beauveria bassiana cao độ ẩm phù hợp để bảo quản chế phẩm. ( Hình ) Hình 5: Chế phẩm nấm Beauveria bassiana II.5/ Quy trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana. .. côn trùng bị bệnh nấm lympho máu chứa đầy sợi nấm IV/ Công nghệ sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana Hiện Viện Bảo vệ thực vật sản xuất chế phẩm nấm bạch cương Beauveria bassiana theo cơng