Báo cáo thực tập công nghệ sinh học dược

BÀI CHỌN LỌC GIỐNG VI SINH VẬT I TÓM TẮT LÝ THUYẾT – Chọn lọc giống vi sinh vật phương pháp phân lập phát chủng vi sinh vật có đặc tính mong muốn từ mẫu vi sinh vật hỗn hợp, sau cải tạo chủng ni cấy bảo quản chúng mơi trường thích hợp Công việc bao gồm bước: phân lập từ tự nhiên, gây đột biến, phát dòng vi sinh vật có đặc tính mong muốn, bảo quản giống – Để phát dịng vi sinh vật có đặc tính mong muốn, dựa vào:  Chất chuyển hoá tạo ra: tạo kháng sinh, tiết sắc tố, …  Enzyme ngoại bào tác động lên chất môi trường: amylase – tinh bột, protease – gelatin, …  Sự thay đổi đặc tính sinh trưởng vi sinh vật  Sự thay đổi hình thái vi sinh vật – Bảo quản giống có nhiều cách: giữ giống thạch, giữ giống lớp dầu khoáng, giữ giống cát, đông lạnh, đông khô Việc lựa chọn cách bảo quản vi sinh vật thường dựa vào kinh nghiệm – Trong thực hành này, ta tiến hành:  Phân lập phát vi sinh vật mẫu đất có khả tiết amylase ngoại bào Môi trường phân lập: thạch tinh bột Thuốc thử: Lugol (dung dịch iod) Vi sinh vật có sinh amylase tạo vòng sáng quanh chỗ mọc (tinh bột bị phân giải thành glucose, nên không tạo màu với iod thuốc thử)  Phân lập phát vi sinh vật mẫu đất có khả tiết protease ngoại bào Môi trường phân lập: thạch gelatin Thuốc thử: TCA (acid trichloroacetic) Vi sinh vật có sinh protease tạo vòng sáng quanh chỗ mọc (gelatin bị phân giải nên không tạo tủa với TCA)  Phát vi sinh vật sinh kháng sinh dựa vào khả ức chế tăng trưởng với vi sinh vật khác Có phương pháp: vạch thẳng vng góc khuếch tán Chủng thử nghiệm sử dụng: S aureus, E coli II KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Phân lập phát vi sinh vật có khả tiết amylase ngoại bào Bảng Kết phân lập phát vi sinh vật có khả tiết amylase Đường kính khóm (mm) Đường kính vịng phân giải (mm) Tỷ lệ Chủng Khóm trắng đục, bìa gợn 13 14 1,07 Chủng Khóm trắng, nhỏ, có tâm 10 1,25 Nhận xét Chủng vi sinh vật mẫu đất sau phân lập môi trường thạch tinh bột ủ o 37 C 24 có khả tiết amylase ngoại bào Phân lập phát vi sinh vật có khả tiết protease ngoại bào Bảng Kết phân lập phát vi sinh vật có khả tiết protease Đường kính khóm (mm) Đường kính vịng phân giải (mm) Tỷ lệ Chủng Khóm trắng đục, bìa gợn 11 1,38 Chủng Khóm trắng, có tâm 1,5 Nhận xét o Chủng vi sinh vật mẫu đất sau phân lập môi trường thạch gelatin ủ 37 C 24 có khả tiết protease ngoại bào Phân lập phát vi sinh vật chủng có khả tiết kháng sinh a Phương pháp vạch thẳng vng góc Bảng Kết phương pháp vạch thẳng vuông góc Đĩa Khoảng cách từ chủng kiểm tra đến chủng thử nghiệm Kết S aureus + E coli – S aureus + E coli – B3 B4 11 mm mm Nhận xét Chủng cần kiểm tra có khả ức chế phát triển S aureus, không ức chế phát triển E coli b Phương pháp khuếch tán Bảng Kết phương pháp khuếch tán Đĩa B1 B2 B3 B4 S aureus – – 16 mm – E coli – – – – Nhận xét Chủng vi khuẩn thử nghiệm lỗ B3 có khả sinh kháng sinh ức chế phát triển S aureus BÀI ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CÓ LỢI CỦA VI KHUẨN PROBIOTIC I TÓM TẮT LÝ THUYẾT – Probiotic vi sinh vật sống đưa vào thể với số lượng đầy đủ có lợi cho sức khoẻ vật chủ – Một số tiêu chuẩn lựa chọn vi sinh vật làm probiotic bao gồm:  Tính an tồn: khơng gây bệnh, gây độc, …  Tính đề kháng kháng sinh: có mang gene đề kháng hay khơng, có có khả lây nhiễm sang vi sinh vật khác không  Chức năng: có chức cân hệ vi khuẩn đường ruột, chống tiêu chảy, …  Các yêu cầu cơng nghệ: sản xuất qui mơ lớn, tính ổn định bảo quản, …  Khả sống sót đến đường tiêu hoá: chịu dịch vị, muối mật – Ở thực hành này, ta khảo sát tỉ lệ sống sót vi sinh vật probiotic (tế bào sinh dưỡng bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis PY79) dịch vị nhân tạo (ở pH 1, 3) dịch mật nhân tạo (ở nồng độ muối mật 0,3%, 0,5%) II KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Đánh giá khả chịu dịch vị nhân tạo Tế bào sinh dưỡng pH Thời gian (phút) Đối chứng pH pH 120.104 60 300.104 100.104 90 20.104 0 Bào tử pH Thời gian (phút) Đối chứng pH pH 100.104 60 99.104 40.104 85.104 90 75.104 20.104 60.104 Nhận xét – Tại giá trị pH thời gian, số lượng bào tử sống sót nhiều số lượng tế bào sinh dưỡng tương ứng – Thời gian tiếp xúc với dịch vị nhân tạo lâu, số lượng tế bào sinh dưỡng bào tử giảm Trong đó, số lượng tế bào sinh dưỡng giảm nhanh, bào tử giảm – Tế bào sinh dưỡng khơng mọc pH mọc pH Bào tử pH mọc nhỏ pH Giải thích – Bào tử vi khuẩn có cấu trúc vỏ dày, chịu điều kiện khắc nghiệt mơi trường Vì bào tử mọc nhiều hơn, giảm so với tế bào sinh dưỡng Đánh giá khả chịu muối mật Tế bào sinh dưỡng Nồng độ muối mật (%) Thời gian (giờ) Đối chứng 0,3 0,5 124.104 60.104 0 51.104 0 Bào tử Nồng độ muối mật (%) Thời gian (giờ) Đối chứng 0,3 0,5 126.104 114,5.104 57,5.104 47,5.104 95.104 68.104 61,5.104 Nhận xét – Thời gian tiếp xúc với dịch mật lâu, số lượng số bào tử tăng, tế bào sinh dưỡng khơng cịn – Theo thời gian, số bào tử giảm không đáng kể – Số bào tử nồng độ muối mật 0,3% mọc nhiều so với nồng độ muối mật 0,5% Giải thích – Bào tử vi khuẩn chịu dịch mật Vì bào tử mọc nhiều hơn, giảm không đáng kể tăng thời gian tiếp xúc nồng độ muối mật – Tế bào sinh dưỡng không mọc dịch mật, sai sót q trình pha lỗng cấy lên đĩa thạch BÀI TINH CHẾ ENZYME AMYLASE BẰNG ALGINATE I TÓM TẮT LÝ THUYẾT – Amylase enzyme thuỷ phân tinh bột, có động vật, thực vật vi sinh vật – Amylase ứng dụng rộng rãi nông nghiệp, công nghiệp, thực phẩm, y dược … Trong ngành dược, amylase sử dụng để sản xuất glucose làm dịch tiêm truyền, chuyển hoá tinh bột thành dextrin, tinh bột tan làm tá dược số thuốc – Tinh chế amylase khâu quan trọng sản xuất Có nhiều phương pháp tinh chế Trong này, việc tinh chế amylase thực gel alginate – Phương pháp tinh chế thực chất phương pháp cố định enzyme, theo chế hấp phụ Amylase “nhầm tưởng” alginate chất nên bám lên bề mặt hạt gel, từ lọc lấy amylase dễ dàng – Xác định hoạt độ amylase thực theo phương pháp Heinkel Hoạt độ amylase tính lượng tinh bột bị phân giải dựa mức giảm cường độ màu hỗn hợp phản ứng với thuốc thử Iod o Đơn vị hoạt độ lượng enzyme có khả phân giải mg tinh bột sau 15 phút 30 C II KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Xác định hàm lượng protein Cơng thức tính tốn A280 = V x n x OD280 Trong đó, A280: tổng lượng protein (mg) V: thể tích thu (ml) n: độ pha loãng (lần) OD280: mật độ quang mẫu đo bước sóng 280 nm Bảng Hàm lượng protein Thể tích thu Độ pha lỗng OD280 A280 Dịch thô 10 20 0,837 167,4 Enzyme sau tinh chế 25 0,664 16,6 Xây dựng đường chuẩn xác định hoạt tính amylase Cơng thức tính tốn U/ml số mg tinh bột ml amylase phân giải 15 phút Trong này, ta sử dụng 0,1 ml amylase, nên: U/ml = Lượng tinh bột (mg) x 10 Bảng Tương quan lượng tinh bột giá trị ΔOD560 Ống Tinh bột (mg) 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 ΔOD560 0,145 0,369 0,549 0,756 0,943 U/ml 10 Vẽ đường chuẩn ∆OD560 y = 0.9611x - 0.0202 R² = 0.998 0.900 0.750 0.600 0.450 0.300 0.150 0.000 0.2 0.4 0.6 0.8 Lượng tinh bột phân giải (mg) Đường chuẩn xác định hoạt tính amylase Thơng số qui trình tinh chế Cơng thức tính tốn  OD = OD chuẩn – OD thử  Lượng tinh bột (mg) phân giải tính theo đường chuẩn y = 0,9611x – 0,0202 Bảng Kết đo enzyme thô sau tinh chế Enzyme thô Enzyme sau tinh chế OD chuẩn 0,973 0,926 OD thử 0,651 0,338 OD 0,322 0,588 Lượng tinh bột phân giải (mg) 0,356 0,633 U/ml 3,561 6,328 Cơng thức tính tốn  Tổng hoạt tính = A x V x n Trong đó, A: hoạt tính enzyme ml dung dịch (U/ml) V: thể tích thu (ml) n: độ pha lỗng (lần)  Hoạt tính chun biệt =  Hiệu suất =  Tổng hoạt tính Tổng protein A280 Tổng hoạt tính U enzyme thơ Tổng hoạt tính U enzyme sau tinh chế Mức tinh chế = Hoạt tính chun biệt enzyme thơ Hoạt tính chuyên biệt enzyme sau tinh chế Bảng Các thơng số qui trình tinh chế enzyme Thơng số Dịch thơ Enzyme sau tinh chế Thể tích 10 25 Độ pha loãng 400 20 Tổng protein A280 167,4 16,6 Tổng hoạt tính U 14242 3164 Hoạt tính chuyên biệt 85,08 190,60 Hiệu suất 22,22% Mức tinh chế 2,24 lần Nhận xét – Sau trình tinh chế, hoạt tính chuyên biệt amylase tăng lên – Hiệu suất tinh chế cịn thấp, lượng amylase bị thất q trình tinh chế Có thể thao tác chưa xác, cẩn thận bước thơi enzyme (amylase thơi chưa hết), lọc lấy dịch (amylase cịn sót tủa gel), … trình đo quang Ngoài cần khảo sát thời gian tối ưu trình ủ – Để đánh giá hiệu q trình tinh chế, dựa vào mức tinh chế amylase Theo lý thuyết, mức tinh chế đạt yêu cầu (tốt 4) Mức tinh chế 2,24 lần, đạt yêu cầu cịn thấp Có thể q trình tinh chế chưa cẩn thận làm giảm hoạt tính amylase Câu hỏi Sơ đồ tinh chế amylase alginate: Nghiền khoai lang với đệm phosphate : Lọc 10 ml Dịch thô Na-alginate 2% (đệm CH3COONa 2M pH 4,8) tỉ lệ 1:3 ủ 1h Phức Enzyme–Alginate–Na 20 ml CaCl2 0,7M Tủa Enzyme–Alginate–Ca Glucose 2% để lạnh 12h Lọc lấy dịch Tủa Enzyme–Alginate–Ca Dịch enzyme tinh 10 BÀI CỐ ĐỊNH CGTase LÊN ALGINATE I TÓM TẮT LÝ THUYẾT – Cyclodextrin glucanotranferase (CGTase, EC 2.4.1.19) enzyme chuyển hoá tinh bột chất tương tự thành cyclodextrin có mức polymer hố 6, đơn vị glucose (tương ứng α–CD, β–CD γ–CD) – Việc cố định giúp tái sử dụng CGTase đắt tiền, đồng thời tăng cường tính ổn định hoạt tính enzyme – Dựa vào chất liên kết chất mang enzyme, cố định enzyme bao gồm phương pháp:  Vật lý: hấp phụ, liên kết ion, tương tác kỵ nước, …  Liên kết cộng hoá trị: dựa vào lực enzyme chất mang để tạo phức hợp enzyme – chất mang có liên kết cộng hố trị  Bắt giữ enzyme gel: dựa vào hút giữ enzyme vào mạng lưới mà chất sản phẩm qua được, không cho enzyme khuếch tán vào môi trường  Tạo vi nang: enzyme giữ bao vi thể có màng bán thấm dày 200 A (như cellulose, polysaccharid) o – Trong thực hành này, enzyme cố định phương pháp hấp phụ bắt giữ Nguyên tắc cho enzyme lẫn vào mạng lưới gel Ca–alginate, enzyme bám bề mặt (hấp phụ) nằm (bắt giữ) hạt gel Đệm Tris–HCl pH = để tạo môi trường ổn định cho enzyme hoạt động tối ưu Tránh dùng đệm phosphate gel alginate không bền Bảng Các điểm khác biệt phương pháp hấp phụ bắt giữ enzyme Hấp phụ Bắt giữ Tạo gel Ca–alginate trước, sau Gel Ca–alginate tạo lúc cho enzyme vào hấp phụ bắt giữ enzyme Thời gian ủ lâu (45 phút) Thời gian ủ nhanh (10 phút) 11 II KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Kết xác định hàm lượng protein chế phẩm CGTase protein cố định a Xây dựng đường chuẩn định lượng protein Bảng Tương quan nồng độ BSA ΔOD595 Ống nghiệm Nồng độ BSA (μg/ml) 10 20 30 40 50 ΔOD595 0,190 0,312 0,455 0,568 0,681 Vẽ đường chuẩn ∆OD595 0.750 y = 0.0134x + 0.0332 R² = 0.9917 0.600 0.450 0.300 0.150 0.000 10 20 30 40 50 60 Nồng độ BSA (μg/ml) Đường chuẩn xác định nồng độ protein b Tính hàm lượng protein chế phẩm CGTase Cơng thức tính tốn  Nồng độ protein mẫu đo tính theo đường chuẩn y = 0,0134x – 0,0332  Hàm lượng protein ml chế phẩm CGTase tính theo cơng thức: mban đầu = Cxnx2 1000 12 Trong đó, mban đầu: hàm lượng protein ml chế phẩm CGTase (mg) C: nồng độ protein mẫu đo (μg/ml) n: độ pha loãng (lần) Bảng Kết đo protein chế phẩm CGTase Phương pháp Hấp phụ Bắt giữ ΔOD595 nm 0,405 0,220 Nồng độ protein mẫu đo (μg/ml) 27,746 13,940 20 20 1,110 0,558 Độ pha loãng (lần) Hàm lượng protein (mg) c Tính hàm lượng protein cố định Cơng thức tính tốn  Hàm lượng protein khơng cố định tính theo công thức: CxV mkhông cố định = 1000 Trong đó, mcố định: hàm lượng protein cố định (mg) C: nồng độ protein mẫu đo (μg/ml) V: thể tích dịch gộp (ml)  Hàm lượng protein không cố định tính theo cơng thức: mcố định = mban đầu – mkhông cố định  Hiệu suất cố định (%) = mcố định mban đầu x 100 Bảng Kết hàm lượng protein cố định Phương pháp Hấp phụ Bắt giữ ΔOD595 0,165 0,080 Nồng độ protein mẫu đo (μg/ml) 9,836 3,493 40 45 Hàm lượng protein không cố định (mg) 0,393 0,157 Hàm lượng protein cố định (mg) 0,717 0,401 64,60% 71,86% Thể tích dịch gộp (dịch lọc + dịch rửa) (ml) Hiệu suất cố định 13 Nhận xét Hiệu suất cố định phương pháp bắt giữ cao so với phương pháp hấp phụ Có thể giải thích rằng, phương pháp bắt giữ phương pháp cố định không thuận nghịch, CGTase bị nhốt hạt gel khơng Cịn phương pháp hấp phụ phương pháp cố định thuận nghịch, CGTase bám lên bề mặt hạt gel Kết xác định hoạt tính enzyme chế phẩm hoạt tính enzyme cố định a Xây dựng đường chuẩn cyclodextrin Bảng Tương quan nồng độ cyclodextrin ΔOD550 Số thứ tự Nồng độ CD (mg/ml) 10 20 30 40 50 1,940 1,719 1,514 1,338 1,215 1,054 0,221 0,426 0,602 0,725 0,886 OD550 ΔOD550 Vẽ đường chuẩn ∆OD550 y = 0.0874x + 0.0397 R² = 0.9901 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 Nồng độ CD (mg/ml) Đường chuẩn xác định hoạt tính CGTase 14 10 b Xác định hoạt tính CGTase Cơng thức tính tốn  Hoạt tính CGTase ml tính theo cơng thức: A= Trong đó, CD x 10 x n Mxt A: hoạt tính CGTase ml dung dịch (U/ml) CD: nồng độ cyclodextrin tạo ra, tính theo đường chuẩn (μg/ml) n = 40: độ pha loãng (lần) M = 1135: khối lượng phân tử cyclodextrin t = 15 phút: thời gian phản ứng 10: tỷ lệ enzyme phản ứng (có 0,1 ml enzyme tham gia phản ứng)  Tổng hoạt tính CGTase ban đầu = A x Giá trị số ml CGTase ban đầu dùng  Hoạt tính riêng CGTase ban đầu (U/mg) = Tổng hoạt tính CGTase ban đầu Hàm lượng protein ban đầu Bảng Kết đo hoạt tính enzyme ban đầu Phương pháp cố định Hấp phụ Bắt giữ 1,073 0,695 Hoạt tính CGTase ml (U/ml) 277,772 264,237 Tổng hoạt tính (U) 555,544 528,474 Hoạt tính riêng CGTase (U/mg protein) 500,489 947,084 ΔOD550 c Xác định hoạt tính enzyme sau cố định Cơng thức tính tốn  Hoạt tính CGTase sau cố định ml tính theo công thức: A= CD x 10 x n Mxtxm 15 Trong đó, A: hoạt tính CGTase cố định ml dung dịch (U/ml) CD: nồng độ cyclodextrin tạo ra, tính theo đường chuẩn (μg/ml) n = 1: độ pha loãng (lần) M = 1135: khối lượng phân tử cyclodextrin t = 15 phút: thời gian phản ứng m = 0,6 g: khối lượng 20 hạt gel sử dụng Tổng lượng enzyme cố định gel 10 g  Tổng hoạt tính CGTase sau cố định = A x V Trong đó, A: hoạt tính CGTase ml dung dịch (U/ml) V: thể tích dịch gộp (ml)  Hoạt tính riêng CGTase sau cố định (U/mg) =  Tỉ lệ hoạt tính (%) = Tổng hoạt tính CGTase sau cố định Hàm lượng protein cố định Hoạt tính riêng CGTase ban đầu Hoạt tính riêng CGTase sau cố định x 100 Bảng Kết đo hoạt tính enzyme sau cố định Hấp phụ Bắt giữ 0,566 0,593 Tổng hoạt tính (U) 141,480 223,107 Hoạt tính riêng (U/mg) 197,322 556,377 Tỉ lệ hoạt tính (%) 39,43% 58,75% ΔOD550 Nhận xét Hoạt tính enzyme cố định giảm nhiều so với enzyme tự ban đầu Vì cố định enzyme nhiều làm ảnh hưởng đến cấu trúc enzyme cản trở không gian tiếp xúc chất – enzyme, dẫn đến hoạt tính enzyme sau cố định thường giảm 16 Câu hỏi Nhỏ từ từ 15 ml alginate 2% vào 30 ml CaCl2 Hạt gel Ca–Alginate 20 ml đệm Tris–HCl pH8 + Hạt gel Thêm ml CGTase Cố định 45 phút Lọc Enzym cố đinh Dịch lọc Rửa lần với đệm Tris–HCl Gộp dịch Xác định hàm lượng enzyme không cố định Sơ đồ cố định CGTase phương pháp hấp phụ 17 ml enzyme + 15 ml dung dịch alginate 2% Phức hợp Enzyme–Alginate Nhỏ giọt từ từ 30ml CaCl2 0,2M Phức hợp Enzyme–Alginate–Ca Hạt gel Rửa lần với đệm Tris–HCl Dịch rửa Dịch lọc Gộp dịch Xác định hàm lượng enzyme không cố định Sơ đồ cố định CGTase phương pháp bắt giữ 18 BÀI 10 TINH CHẾ LYSOZYME BẰNG SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION I TÓM TẮT LÝ THUYẾT – Sắc ký trao đổi ion phương pháp sử dụng phổ biến để tinh chế protein Đây phương pháp tách chất tan dựa vào lực hút tĩnh điện trái dấu phân tử chất tan với nhóm mang điện tích nhựa trao đổi ion – Nhựa trao đổi ion chia làm loại: nhựa cationit nhựa anionit Nhóm mang điện tích nhựa mạnh hay yếu tuỳ thuộc vào mức biến động ion hoá theo pH, độ mạnh liên kết Nhựa trao đổi mạnh có khả hoạt động dải pH rộng hơn, bị ảnh hưởng pH môi trường – Tinh chế protein sắc ký trao đổi ion dựa sở điểm đẳng điện pI Nó giá trị pH mà protein có tổng điện tích Như vậy:  Khi pH > pI, protein tích điện âm  Khi pH < pI, protein tích điện dương Protein tích điện (–) Protein tích điện (+) 14 pI – Lysozyme có pI = 10, protein khác lòng trắng trứng có pI ≤ Do đó, ta sử dụng nhựa cationit pH = lysozyme tích điện dương bị giữ lại cột sắc ký, protein khác tích điện âm khỏi cột Sau lysozyme thơi cách nâng pH lên 10, tăng nồng độ ion dung dịch để cạnh tranh đẩy lysozyme II KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Đường chuẩn sử dụng đường chuẩn Bradford 5: y = 0,0134x + 0,0032 (R = 0,9917) Mẫu thử protein Cơng thức tính tốn Lượng protein (μg) = Nồng độ protein mẫu đo (μg/ml) x Độ pha loãng x Thể tích (ml) 19 Bảng kết sắc ký trao đổi ion Mẫu A B C D1 D2 D3 D4 0,236 0,116 0,091 0,114 0,082 0,053 0,065 20 20 1 1 15,13 6,18 4,31 6,03 3,64 1,48 2,37 Thể tích (ml) 0,5 3,84 1 1 Lượng protein (μg) 304,48 61,80 16,55 6,03 3,64 1,48 2,37 OD595 Độ pha loãng Nồng độ protein mẫu đo (μg/ml) Tổng lượng protein mẫu gộp D = 6,03 + 3,64 + 1,48 + 2,37 = 13,52 (µg) Tổng lượng protein mẫu B, C D = 61,80 + 16,55 + 13,52 = 91,87 (µg) Hiệu suất (%) = Mẫu gộp D Mẫu A x 100 = 13,52 304,48 x 100 ≈ 4,44% Nhận xét – Hiệu suất tinh chế lysozyme 4,44%, thấp – Theo lý thuyết, A = B + C + D Thực tế A > B + C + D – Dịch B vả C chứa nhiều protein tạp Mẫu tinh chế (dịch D) chứa protein đích Giải thích – Thực tế lysozyme lòng trắng trứng chiếm tỉ lệ nhỏ – Hiệu suất thấp do:  Thao tác tinh chế chưa cẩn thận, làm tung nhựa trao đổi  Thao tác bơm, hút dịch vào eppendoff chưa xác, ảnh hưởng đến kết đo quang  Chưa hoạt hoá tối đa khả trao đổi ion cột sắc ký  Các thể tích đo ước lượng nên kết nồng độ protein xác 20 Câu hỏi Ly tâm lấy dịch 1ml lòng trắng trứng nạp lên cột Hứng thu dịch B Tốc độ 0,5–1 ml/phút Rửa cột với đệm chạy, tốc độ 1–2 ml/phút, đến khơng cịn protein Hứng dịch chảy C Thôi lysosym đệm thôi, tốc độ ml/phút Thu dịch theo ml Kiểm tra đến hết protein Định lượng đo quang Tái cân cột thể tích đệm chạy Sơ đồ tinh chế lysozyme sắc ký trao đổi ion 21 MỤC LỤC Bài Chọn lọc giống vi sinh vật Trang Bài Đánh giá số đặc điểm có lợi vi khuẩn probiotic Trang Bài Tinh chế enzyme amylase alginate Trang Bài Cố định CGTase lên alginate Trang 11 Bài 10 Tinh chế lysozyme sắc ký trao đổi ion Trang 19 22 ... enzyme thuỷ phân tinh bột, có động vật, thực vật vi sinh vật – Amylase ứng dụng rộng rãi nông nghiệp, công nghiệp, thực phẩm, y dược … Trong ngành dược, amylase sử dụng để sản xuất glucose làm dịch... tế bào sinh dưỡng tương ứng – Thời gian tiếp xúc với dịch vị nhân tạo lâu, số lượng tế bào sinh dưỡng bào tử giảm Trong đó, số lượng tế bào sinh dưỡng giảm nhanh, bào tử giảm – Tế bào sinh dưỡng...  Các yêu cầu công nghệ: sản xuất qui mơ lớn, tính ổn định bảo quản, …  Khả sống sót đến đường tiêu hoá: chịu dịch vị, muối mật – Ở thực hành này, ta khảo sát tỉ lệ sống sót vi sinh vật probiotic