Đang tải... (xem toàn văn)
việc định lượng cồn trong máu có vai trò quan trọng trong việc xác định nguyên nhân ngộ độc rượu để có hướng xử trí kịp thời cũng như nguyên nhân gây tử vong. Trên thế giới, việc xác định đồng thời methanol và ethanol và các alcol khác đã được thực hiện bằng phương pháp sắc ký khí 28, 30. Tuy nhiên, ở Việt Nam, các phương pháp đang sử dụng chủ yếu để xác định riêng methanol hoặc ethanol mà chưa có nghiên cứu nào xác định đồng thời methanol và ethanol trong máu trong khi GC– headspace là phương pháp có độ nhạy, độ đặc hiệu cao và cho kết quả nhanh chóng.
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ MINH THÚY MSV: 1201607 XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI METHANOL VÀ ETHANOL TRONG MÁU BẰNG GC – HEADSPACE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI =====*o0o*o0o*o0o*===== TRẦN THỊ MINH THÚY MSV: 1201607 XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI METHANOL VÀ ETHANOL TRONG MÁU BẰNG GC – HEADSPACE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Phạm Lê Minh ThS Phạm Quốc Chinh Nơi thực hiện: Khoa Hóa pháp - Viện Pháp y Quốc gia HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian làm khóa luận tốt nghiệp, với giúp đỡ tận tình thầy giáo, em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn tới ThS Phạm Lê Minh tạo điều kiện cho em tham gia làm khóa luận Viện Pháp y Quốc gia tận tình hướng dẫn cho em gặp khó khăn q trình làm khóa luận Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lòng biết ơn tới ThS Phạm Quốc Chinh, cán khoa Hóa pháp – Viện Pháp y Quốc gia, người trực tiếp hướng dẫn, bảo nhiệt tình cho em suốt thời gian làm nghiên cứu viện Em xin cảm ơn tới Ban Giám đốc Viện Pháp y Quốc gia Khoa Hóa pháp tạo điều kiện để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp thời gian ngắn Em xin chân thành cảm ơn tới cô chú, anh chị Khoa Hóa pháp thời gian qua ln nhiệt tình bảo cho em thao tác tiến hành thí nghiệm thao tác sử dụng thiết bị, máy móc Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân bên em, chia sẻ, động viên giúp đỡ học tập sống Do thời gian làm đề tài có hạn nên khơng thể tránh thiếu sót nên em mong nhận ý kiến đóng góp thầy giáo bạn sinh viên Hà Nội, ngày 12 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Trần Thị Minh Thúy MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT I DANH MỤC CÁC BẢNG I DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ III ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Thực trạng sử dụng rượu Việt Nam 1.2 Ethanol 1.2.1 Nguồn gốc ethanol 1.2.2 Tính chất vật lý .4 1.2.3 Chuyển hóa ethanol .5 1.2.4 Độc tính ethanol Các phương pháp xác định ethanol máu 1.2.5 1.2.5.1 Định tính phương pháp hóa học 1.2.5.2 Định lượng 1.3 Tổng quan methanol 1.3.1 Nguồn gốc methanol 1.3.2 Tính chất lý học methanol .9 1.3.3 Chuyển hóa methanol 1.3.4 Độc tính methanol 10 1.3.5 Các phương pháp xác định methanol 11 1.3.5.1 Định tính methanol .11 1.3.5.2 Định lượng methanol 11 1.4 Tổng quan sắc ký khí .11 1.4.1 Khái niệm 11 1.4.2 Hệ thống GC 12 1.5 Một số kỹ thuật xử lý mẫu đặc biệt dùng sắc ký khí 14 1.5.1 Lấy mẫu khí 15 1.5.2 Nhiệt phân .15 1.5.3 Giải hấp phụ 15 1.5.4 Phân tích khơng gian (headspace analysis) 15 1.6 Xác định đồng thời methanol ethanol GC- headspace 17 1.6.1 Phương pháp định tính 17 1.6.2 Phương pháp định lượng 17 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 2.1 Nguyên liệu trang thiết bị 18 2.1.1 Nguyên liệu .18 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 18 2.1.3 Đối tượng nghiên cứu .18 2.2 Nội dung nghiên cứu .19 2.2.1 Xây dựng phương pháp xác định đồng thời methanol ethanol máu .19 2.2.2 Thẩm định phương pháp định lượng methanol ethanol máu 19 2.2.3 Ứng dụng phân tích methanol ethanol máu 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Chuẩn bị mẫu 19 2.3.2 Định tính định lượng đồng thời ethanol methanol mẫu máu 20 2.4 Áp dụng quy trình để phân tích mẫu thực tế 26 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 26 Chương 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ .27 3.1 Xây dựng phương pháp định lượng ethanol methanol máu GC-headspace 27 3.1.1 Quy trình xác định đồng thời ethanol methanol máu 27 3.1.2 Lựa chọn nội chuẩn…………………………………………………………37 3.1.3 Khảo sát phổ ethanol, methanol, 2-propanol 29 3.2 Thầm định phương pháp 30 3.2.1 Tính phù hợp hệ thống 30 3.2.2 Tính chọn lọc 31 3.3 Đánh giá phương pháp .33 3.3.1 Khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính 33 3.3.2 Độ độ xác 35 3.3.3 Khảo sát giới hạn phát giới hạn định lượng 37 3.4 Áp dụng quy trình phân tích số mẫu máu thực tế 38 BÀN LUẬN 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 PHỤ LỤC 46 i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Acetyl CoA Acetyl coenzym A ADH Enzym alcohol dehydrogenase ALDH Enzym aldehyd dehydrogenase ADH Enzym alcohol dehydrogenase CYP2E1 Cytochrome 2E1 D Độ hấp thụ EtOH Ethanol EDTA Acid ethylenediamin tetraacetic GC Sắc ký khí (Gas Chromatograph) GC- headspace Sắc ký khí sử dụng phương pháp lấy mẫu không gian IS Chất nội chuẩn K Hệ số phân bố β Tỷ lệ pha LOD Giới hạn phát ( Limit of Detector) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of Quantitation) MeOH Methanol NAD+ Coenzym nicotinamid adenin dinucleotid RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) SPME Vi chiết pha rắn (Solid Phase Micro Extraction) WHO World Health Organization v/v Thể tích/thể tích ii DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng STT Trang Bảng 3.1 Kết khảo sát độ lặp lại methanol ethanol 31 Bảng 3.2 Diện tích pic methanol, ethanol 2-propanol 34 Bảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính methanol 34 ethanol máu Bảng 3.4 Kết diện tích pic methanol, ethanol 2-propanol 36 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ độ xác methanol 36 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ độ xác ethanol 37 Bảng 3.7 Kết định lượng số mẫu cụ thể 40 iii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Tên hình STT Trang Hình 2.1 Hệ thống GC- Headspace 19 Hình 3.1 Sắc ký đồ tert butanol 28 Hình 3.2 Sắc ký đồ 2-propanol 28 Hình 3.3 Sắc ký đồ methanol 29 Hình 3.4 Sắc ký đồ ethanol 29 Hình 3.5 Sắc ký đồ chất methanol, ethanol, 2-propanol 30 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu máu trắng 32 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu máu chứa methanol, ethanol 2- 32 propanol Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính tín hiệu đáp ứng với nồng độ mẫu nhiễm máu methanol ethanol 35 ĐẶT VẤN ĐỀ Sử dụng rượu bia trở thành phổ biến quốc gia toàn giới, nhiên, lạm dụng rượu bia lại nguyên nhân chủ yếu dẫn đến tệ nạn xã hội kiểm soát hành vi, tai nạn giao thông, tử vong ngộ độc bệnh không lây nhiễm Những hậu sử dụng rượu bia ảnh hưởng nghiêm trọng tới phát triển kinh tế trật tự xã hội Theo số liệu tổ chức y tế giới – WHO, tiêu thụ rượu bia giới ước tính năm 2015 đạt 6,3 lít cồn nguyên chất người (từ 15 tuổi trở lên) [26] Trong năm 2012, sử dụng rượu bia làm 3,3 triệu người chết chiếm 5,9% tổng số ca tử vong toàn giới [34] Tại Việt Nam, theo Cục Y tế Dự phòng (Bộ Y tế), nghiên cứu cho thấy Việt Nam nước sử dụng rượu bia mức báo động đứng thứ khu vực, đứng thứ 10 châu Á thứ 29 giới với 77,3% nam giới 11% nữ giới sử dụng rượu bia Theo thống kê tính đến tháng 1/2016, Việt Nam tiêu thụ khoảng 3,4 triệu lít bia 10 triệu lít rượu [10] Đặc biệt, tình trạng làm giả rượu (trộn cồn công nghiệp) nguyên nhân gây tình trạng ngộ độc methanol rượu ngày báo động gây tử vong khơng xử lý kịp thời Trong số trường hợp đó, nhiều mẫu máu gửi xuống khoa Hóa PhápViện Pháp y Quốc gia để giám định nồng độ cồn máu Vì vậy, việc định lượng cồn máu có vai trị quan trọng việc xác định ngun nhân ngộ độc rượu để có hướng xử trí kịp thời nguyên nhân gây tử vong Trên giới, việc xác định đồng thời methanol ethanol alcol khác thực phương pháp sắc ký khí [28], [30] Tuy nhiên, Việt Nam, phương pháp sử dụng chủ yếu để xác định riêng methanol ethanol mà chưa có nghiên cứu xác định đồng thời methanol ethanol máu GC- headspace phương pháp có độ nhạy, độ đặc hiệu cao cho kết nhanh chóng Để hoạt động cấp cứu bệnh nhân nghi ngờ ngộ độc rượu hiệu nhanh chóng hơn, chúng tơi tiến hành thực nghiên cứu ‘‘Xây dựng quy 35 Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính tín hiệu đáp ứng với nồng độ methanol ethanol Nhận xét: Kết thẩm định cho thấy khoảng nồng độ khảo sát từ 0,02% tới 0,6% (v/v) có tương quan tuyến tính nồng độ methanol ethanol máu với tỉ lệ diện tích pic methanol/2-propanol, ethanol/2-propanol với hệ số tương quan xấp xỉ 3.3.2 Độ độ xác Độ độ xác xác định mẫu máu thêm chuẩn có nồng độ methanol ethanol 0,05% (v/v); 0,2% (v/v) 0,4% (v/v) Mỗi nồng độ tiến hành thực nghiệm lần Xác định nồng độ methanol ethanol mẫu máu phương pháp đường chuẩn tính độ thu hồi tỉ lệ phần trăm lượng mẫu xác định so với lượng thêm vào Kết khảo sát trình bày bảng 3.4, 3.5 3.6 36 Bảng 3.4 Kết diện tích pic methanol, ethanol 2-propanol Nồng độ methanol ethanol mẫu máu trắng (%) Lần 0,05 0,2 2propanol 0,4 Methanol Ethanol Methanol Ethanol Methanol Ethanol 22,8 50,6 88,2 214,0 184,0 436,0 100,2 22,7 49,6 86,5 199,0 175,0 417,0 100,0 21,5 49,7 87,5 203,3 175,5 416,0 100,4 22,0 49,0 90,0 216,4 180,4 426,0 100,2 21,8 49,6 85,8 202,3 175,0 419,0 100,4 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ độ xác methanol Lần Nồng độ methanol mẫu máu trắng 0,05% 0,2% 0,4% 0,051 0,20 0,420 0,052 0,192 0,397 0,048 0,198 0,398 0,047 0,210 0,410 0,049 0,190 0,396 Trung bình (%) 0,0494 0,1980 0,4040 Tỉ lệ thu hồi (%) 98,80 99,00 101,00 RSD (%) 3,75 3,56 2,32 37 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ độ xác ethanol Nồng độ ethanol mẫu máu trắng Lần 0,05% 0,2% 0,4% 0,052 0,21 0,425 0,051 0,190 0,397 0,048 0,199 0,395 0,047 0,212 0,415 0,048 0,198 0,398 Trung bình (%) 0,0492 0,2018 0,406 Tỉ lệ thu hồi (%) 98,40 100,90 101,50 RSD (%) 3,94 4,04 2,93 Nhận xét: Độ lệch chuẩn tương đối nồng độ ethanol methanol nhỏ 5,0% Như vậy, phương pháp có độ xác tốt Độ thu hồi trung bình methanol khoảng 98,80%- 101,00%, ethanol khoảng 98,40- 110,50% Kết luận: Các kết đáp ứng yêu cầu độ độ xác phương pháp phân tích đồng thời methanol ethanol máu 3.3.3 Khảo sát giới hạn phát giới hạn định lượng Chuẩn bị dãy mẫu máu trắng nhiễm chứa methanol ethanol với nồng độ giảm dần, xử lý mẫu, chạy sắc ký theo chương trình xây dựng, đo tỷ số diện tích chiều cao pic nhiễu đường Tại nồng độ cho tín hiệu thỏa mãn giới hạn phát Kết thực nghiệm cho thấy: nồng độ methanol ethanol 0,0015% (v/v), sắc ký đồ cho tín hiệu methanol S/N=2,8 tín hiệu ethanol S/N=2,7 Vậy giới hạn phát methanol ethanol 0,0015% (v/v), giới hạn định lượng methanol ethanol 3,3 x 0,0015= 0,005% (v/v) Kết cho thấy độ nhạy phân tích cao, đáp ứng yêu cầu phân tích đồng thời methanol ethanol máu 38 3.4 Áp dụng quy trình phân tích số mẫu máu thực tế Sau khảo sát thu kết phân tích đồng thời methanol ethanol mẫu máu trắng thêm chuẩn (methanol ethanol) khả quan, dựa quy trình xây dựng để tiến hành áp dụng vào số mẫu thực Các mẫu gửi để xét nghiệm khoa Hóa Pháp- Viện Pháp y Quốc gia Bảng 3.7: Kết giám định số mẫu máu thực S Họ tên T Tuổi Nồng độ methanol Nồng độ ethanol % % Địa T mg/100ml mg/100m l CAM 70 Lai Châu 0,434 343,04 (-) (-) CÔX 56 Lai Châu 0,087 68,57 (-) (-) MGG 19 Lai Châu (-) (-) (-) (-) PAS 27 Lai Châu 0,456 360,61 (-) (-) CAH 69 Lai Châu 0,307 242,73 (-) (-) (-) (-) 0,404 318,90 Nguyễn V Trần V T LươngV L 27 Quảng Ninh 31 Hà Nội 0,110 87,04 0,216 171,15 40 Hà Nam (-) (-) 0,411 326,32 Trên thực nghiệm mẫu máu nghi ngộ độc rượu gửi khoa Hóa pháp – Viện Pháp y Quốc gia, có mẫu dương tính với methanol, mẫu dương tính với ethanol, mẫu dương tính với ethanol methanol, mẫu âm tính với methanol ethanol 39 BÀN LUẬN Về quy trình định lượng thẩm định Phương pháp GC- headspace phương pháp sử dụng phổ biến phân tích chất dễ bay Phương pháp có độ nhạy độ xác cao Quy trình định lượng chủ yếu tham khảo theo tài liệu Khoa Hóa pháp- Viện Pháp y Quốc gia Theo tài liệu “Quy trình xác định đồng thời ethanol methanol máu” Khoa Hóa pháp- Viện Pháp y Quốc gia, sử dụng tert butanol làm nội chuẩn cho pic sắc ký doãng chân, thời gian lưu dài 8,851 làm q trình phân tích kéo dài Chất nội chuẩn 2-propanol lựa chọn có thời gian lưu tách biệt hồn tồn so với chất phân tích, thời gian lưu 5,095 phút, vậy, cho kết nhanh so với lựa chọn tert butanol Như vậy, kết phân tích cho thấy lựa chọn chuẩn nội 2propanol cho kết khả quan Về thẩm định quy trình cho thấy rằng, quy trình có tính phù hợp hệ thống, tính chọn lọc, độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ độ xác đạt yêu cầu Giới hạn phát ethanol methanol 0,0015%, giới hạn định lượng 0,0045% Vì vậy, quy trình thích hợp để định tính định lượng đồng thời methanol ethanol máu Về phân tích mẫu máu thực tế Mẫu máu loại mẫu hay sử dụng cho hầu hết xét nghiệm Mặt khác, bệnh nhân nhập viện ngộ độc tai nạn rượu bia việc lấy mẫu máu đơn giản so với mẫu không xâm lấn khác (nước tiểu) Trong nghiên cứu cho thấy có tương quan mức độ ngộ độc nồng độ methanol ethanol máu, vậy, lựa chọn mẫu máu lựa chọn để tiến hành phân tích đề tài Trên thực nghiệm tiến hành xác định đồng thời methanol ethanol mẫu, kết cho thấy có mẫu dương tính với methanol, mẫu dương tính với ethanol, mẫu dương tính với methanol ethanol, mẫu âm tính với methanol ethanol Đặc biệt, mẫu máu dương tính với methanol âm tính 40 với ethanol có nồng độ methanol máu mức cao, có nguy tử vong không cấp cứu kịp thời Do vậy, trường hợp bệnh nhân khẳng định nguyên nhân ngộ độc uống rượu giả pha chế hồn tồn từ cồn cơng nghiệp Vì vậy, kiểm soát nguồn gốc rượu để phát trường hợp làm giả rượu giảm thiểu nguy ngộ độc rượu methanol 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau hoàn thành đề tài này, thực mục tiêu đề với kết cụ thể sau: 1.1 Xây dựng hoàn chỉnh phương pháp xác định đồng thời methanol ethanol máu Quy trình sau: Xử lý mẫu -Pha dung dịch methanol ethanol 3% -Pha dung dịch chứa hỗn hợp methanol ethanol có nồng độ 2% (v/v) làm chuẩn gốc Từ pha lỗng để có nồng độ 0,2% (v/v) 0,02% (v/v) -Thêm 20 µl, 50 µl dung dịch chuẩn chứa methanol ethanol 0,2% vào mẫu máu không nhiễm để vừa đủ 200 µl máu nhiễm có nồng độ 0,02% 0,05% (v/v) -Thêm 10 µl, 20 µl, 40 µl, 50 µl dung dịch chuẩn chứa methanol ethanol 2% (v/v) vào mẫu máu khơng nhiễm để vừa đủ 200 µl máu nhiễm với nồng độ 0,1%; 0,2%; 0,4% 0,5% (v/v) - Thêm 40 µl dung dịch hỗn hợp chứa methanol ethanol 3% (v/v) vào mẫu máu không nhiễm để vừa đủ 200 µl máu nhiễm với nồng độ 0,6% (v/v) Các mẫu chuẩn bị có nồng độ 0,02%; 0,05%; 0,1%; 0,2%; 0,5%; 0,6% thêm 200 µl dung dịch NaCl bão hịa 100 µl nội chuẩn 0,1% (v/v) (2propanol) - Dung dịch chuẩn chứa hỗn hợp methanol ethanol 0,02% (v/v) pha loãng máu khơng nhiễm vừa đủ 200 µl máu nhiễm để có nồng độ phù hợp Sau thêm 200 µl dung dịch NaCl bão hòa vào mẫu nhiễm vừa tạo tiến hành chạy sắc ký để xác định giới hạn phát Sắc ký khí – headspace Điều kiện sắc ký + Cột HPB ALC 7,5 m × 0.320 mm x 20 µm 42 + Khí mang Nitơ, tốc độ dòng ml/phút + Nhiệt độ đầu cột: 2500C + Detector FID nhiệt độ 2700C + Chương trình nhiệt độ: Bắt đầu 1200C giữ phút, tăng nhiệt 50C/phút đến 1300C giữ phút - Điều kiện Headspace: + Nhiệt độ nung: 600C, lắc nhẹ + Thời gian nung 17 phút + Thời gian tiêm mẫu phút 1.2 Thẩm định quy trình áp dụng mẫu thực Đã thẩm định phương pháp đề với phù hợp hệ thống, độ đúng, độ xác, độ tuyến tính phù hợp với u cầu, phương pháp có độ nhạy tốt với LOD 0,0015%, LOQ 0,005% Đã áp dụng để phân tích mẫu pháp y có mẫu dương tính với methanol, mẫu dương tính với ethanol, mẫu âm tính với ethanol methanol, mẫu dương tính với ethanol methanol Kiến nghị -Áp dụng phương pháp xây dựng để xác định methanol ethanol máu giám định pháp y -Một số mẫu máu gửi viện Pháp y có pic 4,0 phút sắc ký đồ Trong phạm vi đề tài này, không tiến hành xác định hai chất này, cần có nghiên cứu để xác định chất 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Khoa học Công nghệ (2013), TCVN 7043:2013 Tiêu chuẩn Quốc gia rượu trắng, Hà Nội, pp Bộ Y tế ( 2013), Quy trình giám định nồng độ cồn máu, Hà Nội, tr.274-275; 287-288 Bộ Y tế (2015), Hướng dẫn chẩn đốn xử trí Ngộ độc, Hà Nội, tr 171176 Bộ Y tế (2010), "Thông tư ban hành Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia sản phẩm đồ uống có cồn" Bộ y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV Khoa Hóa học (2013), Phương pháp SPME ứng dụng (Solid Phase Micro Extraction), Trường Đại học Bách khoa TPHCM Mai Văn Hiên (2017), Chuyển hóa rượu thể, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Khánh (04/10/2016), "Gần 40% số vụ tai nạn giao thông liên quan đến rượu bia", Báo VTV PGS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu (2015), Độc chất học, Nhà xuất Y học, Trường đại học Dược Hà Nội, tr.77-84 10 Thùy Linh (26/09/2016), "Việt Nam đứng hàng đầu khu vực giới sử dụng rượu bia", Báo Lao động, tr.106-107 11 Trần Tử An (2011), Kiểm nghiệm dược phẩm, Bộ y tế, Nhà xuất Y học, 12 Trương Minh Vũ (2014), Nghiên cứu xác định nồng độ cồn máu phương pháp sắc ký khí so sánh với phương pháp phân tích sinh hóa, Luận văn thạc sĩ hóa học, Trường Đại học Vinh 13 Viện kiểm nghiệm vệ sinh an toàn thực phẩm quốc gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 16-59 44 14 Trần Tử An (2007), Hóa phân tích tập 2- Phân tích dụng cụ, Trường đại học Dược Hà Nội, Nhà xuất Y học, tr.146-160 Tiếng Anh 15 Asean guidelines (2004), "The conduct of bioavailability and bioequivalence studies" 16 B Kolb, L.S Ettre (2006), Static Headspace Gas Chromatography, Theory and Practice, Wiley–VCH, Hoboken, New Jersey 17 Cederbaum Arthur I (2012), "ALCOHOL METABOLISM", Clinics in liver disease, 16(4), pp 667-685 18 Fernandez Elizabeth (2017), "Pediatric Ethanol Toxicity", Medscape 19 Flanagan R.J et al (1995), Basic analytical toxicology, Wordl health organization 20 Fred Feyerherm et al (2014), "Quantitation and Confirmation of blood ethanol content using a new GC/FID/MS blood alcohol analyzer", Agilent Technologies 21 Gang Tian Xiao-Qing Zhang, Ming-Song Zhu, Zhong Zhang, Zheng-Hu Shi & Min Ding,, Quantification of ethanol in plasma by electrochemical detection with an unmodified screen printed carbon electrode 2016: Scientific Reports 22 H Rachelle Wallage and James H Watterson "Formic acid and methanol concentrations in death investigations ", Journal of Analytical Toxicology, 32 23 Health US Department of, Services Human (2001), "Guidance for industry, bioanalytical method validation", http://www fda gov/cvm 24 Kalyani Korabathina (2017), "Methanol Toxicity", Medscape 25 Kruse JA (1992), "Methanol poisoning", Intensive care medicine, 18(7), pp 391-397 26 Organization World Health, Global NCD target reduce the harmful use of alcohol 2015 45 27 Organization World Health (1997), "Methanol health and safety guide" 28 Pontes H et al (2014), "GC Determination of Acetone, Acetaldehyde, Ethanol and Methanol in Biological Matrices and Cell Culture", Journal of Chromatographic Science, 47 29 Restek A (2000), "Technical Guide for Static Headspace Analysis Using GC", Restek Corp, pp 11-12 30 Seda Kaya et al (2011), "Simultaneous Headspace-GC–FID Analysis for Methanol and Ethanol in Blood, Saliva and Urine: Validation of Method and Comparison of Specimens", LCGC Europe 31 Skrzydlewska E (2003), Toxicological and metabolic consequences of methanol poisoning 32 U.S Department of Health and Human Services (2001), Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation 33 Vukovic J, Modun D, et al (2015), "Comparison of Breath and Blood Alcohol Concentrations in a Controlled Drinking Study", Pubmed 34 World Health Organization, Global Health Observatory (GHO) data 46 PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ XÁC ĐỊNH LOD VÀ SẮC KÝ ĐỒ CỦA MỘT SỐ MẪU CỤ THỂ Phụ lục Sắc ký đồ mẫu máu tự tạo chứa đồng thời methanol ethanol nồng độ 0,0015% 47 Phụ lục Sắc ký đồ mẫu máu Chang A M Phụ lục Sắc ký đồ mẫu máu L V L 48 Phụ lục Sắc ký đồ mẫu máu M G G Phụ lục Sắc ký đồ mẫu máu C A H 49 Phụ lục 6: Sắc ký đồ T V T ... nghiên cứu ‘? ?Xây dựng quy trình xác định đồng thời methanol ethanol máu GC – Headspace? ??’ nhằm mục đích: - Xây dựng quy trình định lượng đồng thời methanol ethanol máu sắc kí khí - Áp dụng vào phân... ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI =====*o0o*o0o*o0o*===== TRẦN THỊ MINH THÚY MSV: 1201607 XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI METHANOL VÀ ETHANOL TRONG MÁU BẰNG GC – HEADSPACE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ... 2.2.1 Xây dựng phương pháp xác định đồng thời methanol ethanol máu .19 2.2.2 Thẩm định phương pháp định lượng methanol ethanol máu 19 2.2.3 Ứng dụng phân tích methanol ethanol máu