Khóa luận tốt nghiệp: Nghiên cứu xây dựng quy trình tách chiết polysaccharide từ quả thể trồng nấm cordyceps militaris

VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC ============ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE TỪ QUẢ THẾ NẤM CORDYCEPS MILITARIS Người hướng dẫn : ThS VŨ DUY NHÀN Sinh viên thực : HOÀNG THỊ NHÀN Lớp : 13.01 – K20 Hà Nội - 2017 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC ====== ====== KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE TỪ QUẢ THỂ NẤM CORDYCEPS MILITARIS Người hướng dẫn : ThS VŨ DUY NHÀN Sinh viên thực : HOÀNG THỊ NHÀN Lớp : 13.01- K20 Hà Nội - 2017 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội LỜI CẢM ƠN Lời tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới Th.S Vũ Duy Nhàn, người trực tiếp hướng dẫn, động viên giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu thực tập để thực đề tài “ “Nghiên cứu tách chiết polysaccharide từ thể nấm Codyceps militaris” Tôi xin cảm ơn ban lãnh đạo Viện Hóa học-Vật liệu/Viện Khoa học Công nghệ quân anh chị Phịng Hóa sinh, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực tập làm đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Viện Đại học Mở Hà Nội, thầy cô tạo điều kiện suốt trình học tập trường thực hiên luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Hồng Thị Nhàn Hồng Thị Nhàn Lớp: 1301-CNSH Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội MỤC LỤC Danh mục chữ viết tắt Danh mục hình Danh mục bảng MỞ ĐẦU PHẦN 1: TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nấm Codyceps militaris 1.1.1 Đặc điểm nấm Codyceps militaris 1.1.2 Thành phần hóa học Codyceps militaris 1.1.2.1.Adenosine 1.1.2.2 Cordycepin 1.1.2.3 Sterols 1.1.2.4 Nucleotides 1.1.2.5 Protein amino acid 1.2.6 Acid béo 1.1.2.7 Polysaccharide 1.1.2.8 Acid cordyceptic 10 1.1.2.9.Ergosterol 11 1.1.3 Các ứng dụng từ thể nấm Codyceps militaris 11 1.1.3.1 Tăng cường khả miễn dịch 11 1.1.3.2 Điều trị bệnh ung thư 11 1.1.3.3 Giải độc thận 12 1.1.3.4 Điều trị bệnh phổi 12 1.1.3.5 Điều trị bệnh tim mạch 12 1.1.3.6 Tăng sức bền 13 1.1.3.7 Làm giảm LDL-Cholesterol máu 13 1.2 Giới thiệu Polysaccharide từ thể nấm Cordyceps militaris 13 1.2.1 Đặc điểm Polysaccharide từ thể nấm Cordyceps militaris 13 Hoàng Thị Nhàn Lớp: 1301-CNSH Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội 1.2.2 Hiện trạng tách chiết tinh Polysaccharide từ thể nấm Cordyceps militaris 14 1.2.3 Tác dụng dược lý polysaccharide 17 1.3 Tình hình nghiên cứu tách chiết Polysaccharide từ thể nấm Cordycep militaris 18 1.3.1 Tình hình nghiên cứu Polysaccharide giới 18 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nuôi trồng Cordyceps militaris Việt Nam 20 PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Nguyên liệu thiết bị nghiên cứu 23 2.1.1 Nguyên liệu 23 2.1.2 Thiết bị hóa chất 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Phương pháp tách chiết Polisaccharide từ Quả thể nấm Cordyceps militaris 25 2.2.2 Xác định hàm lượng Polysaccharide theo phương pháp phenol-sunfuric Milchel.DuBois, K.A.Gilles cs, 1956 25 2.2.3 Thu nhận Polysaccharide phương pháp kết tủa 28 2.2.4 Phân tích nhóm chức Polysaccharide IR 28 PHẦN 3: KẾT QUẢ 30 3.1 Nghiên cứu lựa chọn phương pháp tách chiết 30 3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng tỉ lệ mẫu/ dung môi dùng để tách chiết 31 3.3 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố đến hiệu suất tách chiết 32 3.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chiết 32 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ chiết 34 3.4 Xây dựng quy trình tách chiết 35 3.5 Kết đo phổ 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 Hồng Thị Nhàn Lớp: 1301-CNSH Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nội dung CP Cordyceps Polysaccharide C.Militaris Nhộng trùng hạ thảo C sinensis Đông trùng hạ thảo Sp Species- Một loài Spp Species plural- Nhiều loài P1 Polysaccharide thu từ dịch sau chiết với nước P2 Polysaccharide thu từ phần bã bổ sung NaOH 4% P3 Polysaccharide thu sau kết tủa Hồng Thị Nhàn Lớp: 1301-CNSH Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cordyceps militaris Hình 1.2: Cấu trúc hóa học Adenosine Hình 1.3: Cấu trúc hóa học Cordycepin Hình 1.4: Công thức cấu tạo polysaccharide 10 Hình 2.1: Cordyceps militaris ni cấy Viện Khoa học công nghệ quân - BQP 23 Hình 2.2: Mẫu dùng để tách chiết 23 Hình 2.3: Sơ đồ quy trình tách chiết tinh Cordyceps polysaccharide 25 Hình 2.4: Mẫu đo đường chuẩn 27 Hình 2.5: Đồ thị đường chuẩn glucose( ߤ݃/݈݉) 27 Hình 2.6: Máy ép thủy lực Specac 29 Hình 2.7: Máy đo phổ Spectrum two 29 Hình 3.1: Ảnh hưởng phương pháp chiết tới hàm lượng polysaccharide dịch chiết 30 Hình 3.2: Ảnh hưởng phương pháp chiết tới khối lượng Polysaccharide thu 30 Hình 3.3: Ảnh hưởng tỉ lệ mẫu/dung mơi dung dịch chiết 31 Hình 3.4: Ảnh hưởng tỉ lệ mẫu/dung môi lên khối lượng polysaccharide thu 32 Hình 3.5: Ảnh hường thời gian chiết lên hàm lượng polysaccharide thu .33 Hình 3.6: Ảnh hưởng thời gian chiết khối lượng polysaccharide thu 33 Hình 3.7: Ảnh hưởng nhiệt độ chiết tới hàm lượng polysaccharide thu 34 Hình 3.8: Ảnh hưởng nhiệt độ chiết tới khối lượng polysaccharide thu 34 Hình 3.9: Sơ đồ quy trình tách chiết Polysaccharide 36 Hoàng Thị Nhàn Lớp: 1301-CNSH Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội Hình 3.10: Phổ hồng ngoại IR mẫu CM-hs-CPS2 chuẩn theo kết nghiên cứu Fengyao Wu [19] 40 Hình 3.11: Kết đo phổ hồng ngoại IR mẫu P1 41 Hình 3.12: Kết đo phổ hồng ngoại IR mẫu P2 42 Hình 3.13: Kết đo phổ hồng ngoại IR mẫu P3 42 Hoàng Thị Nhàn Lớp: 1301-CNSH Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại học Mở Hà Nội DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Phân loại khoa học Bảng 1.2: Thành phần acid béo Cordyceps militaris Bảng 1.3: Hàm lượng số loại đường có Polysaccharide thể sợi nấm Cordyceps militaris 14 Bảng 1.4: Hiện trạng kỹ thuật tách chiết Polysaccharides 14 Bảng 1.5: Hiện trạng kỹ thuật tinh Polysccharide 16 Bảng 1.6: Khả kháng khối u số polysaccharide thu nhận từ số loại nấm 18 Bảng 2.1: Thiết bị dùng thí nghiệm 24 Bảng 2.2: Xây dựng phương trình đường chuẩn Glucose 26 Bảng 3.2: So sánh phổ IR mẫu 42 Hoàng Thị Nhàn Lớp: 1301-CNSH MỞ ĐẦU Chi nấm Cordyceps biết đến cách 2000 năm trước cơng ngun, với 350 lồi tồn giới Trong có lồi Cordyceps sinensis thường ký sinh sinh trưởng lên ấu trùng lồi trùng thuộc chi Hepialus Thường gặp ấu trùng loài Hepialus armoricanus Sản phẩm thể nấm xác ấu trùng dân gian Trung Quốc từ xưa gọi Đông Trùng Hạ Thảo, loại dược liệu quý bậc y học cổ truyền Trung quốc.Bên cạnh Cordyceps sinensis cịn có lồi nấm Cordyceps militaris có đặc điểm tương tự Lồi nấm Cordyceps militaris phân bố chủ yếu vùng núi cao thuộc dẫy núi Hymalaya có độ cao 4000m so với mực nước biển vùng Tây Tạng (Trung Quốc), số vùng thuộc Nepan Butan[5] Trong chi Cordyceps có lồi khác Cordyceps militaris (L ex Fr.)Link có thành phần tính chất dược liệu tương tự với Cordyceps sinensis Loài nấm dược liệu với nhiều tên thông dụng khác số quốc gia như: Đông trùng hạ thảo, Trùng thảo, Bắc Trùng thảo (Trung Quốc), Tong ch’ung ch’o (Hàn Quốc), Tochukaso (Nhật Bản), Yarchakunbu (Tây Tạng) Shonkor Kumar Das cộng sự, 2010 [5] Lồi Nấm Cordyceps militaris có hàm lượng hoạt chất có hoạt tính sinh học thể cordycepin, ergosterol, mannitol, cordyepolysaccharide nhiều thành phần khác tương đương, chí cịn cao lồi Cordyceps sinensis[5] Nhiều nghiên cứu báo cáo rằng, sinh khối lồi nấm có số chức dược lý: bảo vệ gan, tăng cường chức thận, chống ung thư bạch cầu, chống hình thành khối u hạn chế di căn, cải thiện khả tiết insuline người tiểu đường, tăng cường khả [5,7] Các nghiên cứu gần thể Cordyceps militaris thể ấu trùng bị chúng kí sinh có chứa chất có hoạt tính sinh học quan trọng, có phổ tác dụng dược lý rộng polysaccharides, cordycepin, ergosterol[8] Cordyceps polysaccharides (CP) nhóm hoạt chất giàu quan trọng Hoàng Thị Nhàn Lớp: 1301 - CNSH 0.551 0.4923 Hàm lượng (ߤ݃/݈݉) 0.4556 0.3254 30 phút 45 phút 60 phút 90 phút Thời gian (phút) Hình 3.5: Ảnh hường thời gian chiết lên hàm lượng polysaccharide thu Polisaccharride 69.07612 70 Khối (ߤg) Khoi lượng luong (ug/ml) 60 50 47.5698 50.15648 38.2456 40 30 20 10 30 phut 30 phút phut 60 phut phut 60 phút 9090phút 4545phút Thoi gian( phut) Thời gian (phút) Hình 3.6: Ảnh hưởng thời gian chiết khối lượng polysaccharide thu Nhận xét: Khi tăng thời gian từ 30 phút lên đến 60 phút, hàm lượng tăng dần, tăng lên 90 phút hàm lượng lại giảm dần, thời gian chiết lâu lẫn nhiều tạp chất ảnh hưởng đến trình phân tích làm giảm hàm lượng Polysaccharide Đối với khối lượng, tăng thời gian chiết từ 30 phút lên đến 60 phút, khối lượng polysaccharide tăng từ 47.5698ߤ݃ lên đến 69.07612ߤ݃ tăng thời gian lên 90 phút khối lượng lại giảm xuống cịn 38.2456ߤ݃, thời gian chiết dài ảnh hưởng tới số ml chiết Do vậy, lựa chọn thời gian 60 phút để tách chiết polysaccharide 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ chiết Nhiệt độ chiết yếu tố ảnh hưởng lớn tới trình tách chiết Vì chúng tơi tiến hành khảo sát chiết mẫu với thông số chiết cố định: phương pháp siêu âm, thời gian 60 phút, dung môi chiết : H2O, số lần chiết: Thông số khảo sát : 50℃, 60℃, 80℃, 100℃ Hàm lượng(ߤ݃/݈݉) 0.4721 0.4223 Nhiệt độ (0C) Hình 3.7: Ảnh hưởng nhiệt độ chiết tới hàm lượng polysaccharide thu Polisaccharride 72.0654 70 Khối lượng(ug/ml) (ߤg) Khoi luong 60 64.5897 55.475 54.154 50 40 30 20 10 50 C 60 C 80 C 100 C Nhiet Nhiệt độ( (C) C) Hình 3.8: Ảnh hưởng nhiệt độ chiết tới khối lượng polysaccharide thu Nhận xét: Khi nhiệt độ dung mơi trích ly cao hàm lượng Polysaccharide cao Hàm lượng 50℃ 0.4223 ߤ݃/݈݉ 100℃ hàm lượng tăng 0.5671 ߤ݃/݈݉ Khi nhiệt độ tăng phân tử dung môi chuyển động hỗn độn giúp trình di chuyển phần tử dung mơi xâm nhập, xáo trộn vào sâu bên phần bột thể nấm Cordyceps militaris Đối với khối lượng, tăng nhiệt độ từ 50℃ lên 80℃ khối lượng lại tăng từ 55.475 ߤ݃ lên 64.5897 ߤ݃ Tuy nhiên 100℃ khối lượng lại giảm xuống cịn 54.145 ߤ݃ Vì nhiệt độ cao, dịch chiết thấp dẫn tới khối lượng giảm 3.4 Xây dựng quy trình tách chiết Sau khảo sát yếu tố ảnh hưởng tới q trình chiết, chúng tơi thống đưa quy trình tách chiết Polysaccharide thu Polysaccharide sau: Hoàng Thị Nhàn 35 Lớp: 1301 - CNSH Bột thể Siêu âm Bã Dịch Lọc Cô dịch, Ly tâm Dịch Bã Làm khô+ NaOH 4% Dịch Bã NaOH Dịch Cồn 960C, ủ qua đêm, ly tâm +NaOH 4% Ly tâm 5000v/p (10p) Dịch Cặn P1 Dịch Bã Trung hòa CH3COOH Dịch Cặn Ethanol 960C,để tủ lạnh qua đêm Dịch P3 Hình 3.9: Sơ đồ quy trình tách chiết Polysaccharide Hoàng Thị Nhàn 36 Lớp: 1301 - CNSH MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE Mẫu + 100ml H2O Dịch sau lọc Lọc Bổ sung 80ml cồn, để qua đêm, li tâm Ủ với 50ml NaOH 55℃ Dịch+ 10ml CH3COOH Ly tâm 5000v/p 10phút Ly tâm dịch Bổ sung Vdịch : Vcồn =1:4 Cặn sau ly tâm Cân 5g bột thể nấm Codyceps militaris khô Đem ngâm chiết với 100ml nước nóng 100℃ 1h Lọc lấy phần dịch, phần bã tiếp tục bổ sung 100ml nước cất chiết lần 1h Lọc tách riêng phần dịch phần bã • Đối với phần dịch: Gộp phần dịch lần chiết vào làm giảm thể tích xuống cịn 20ml 100℃, ly tâm thu dịch Bổ sung 80ml ethanol 96℃ ủ qua đêm tủ lạnh Ly tâm 5000vòng/phút 10phút thu cặn (P1) • Đối với phần bã Bã đem sấy khô, bổ sung 50ml NaOH 4% vào ủ 1h 55℃ Lọc tách phần dịch bã nấm tiếp tục bổ sung 50ml NaOH 4% vào, ủ 1h 55 ℃ Gộp phần dịch bã lần chiết đem ly tâm 5000vòng/phút loại bỏ cặn Phần dịch đem trung hòa 10ml Axit acetic, để tủ lạnh qua đêm Tiếp tục ly tâm thu phần dịch kết tủa Phần dịch bổ sung lần thể tích Ethanol 96℃ để lắng qua đêm Ly tâm thu kết tủa làm khô (P3) Bảng 3.1: Kết sau tách chiết Polysaccharide từ Cordyceps militaris Mẫu Dịch chiết với nước nóng (P1) Dịch chiết với NaOH (P2) Tủa(P3) Cặn (g) Hàm lượng P (ߤg/ml) Thể tích dịch (ml) Khối % lượng Polysaccharide (ߤg) 0.714 0.279 164 15.152 0.303 1.898 0.0952 80 7.6 0.152 0.157 0.088 320 28.16 0.563 Nhận xét: Theo kết bảng trên, phân đoạn tách chiết chưa hàm lượng Polysaccharide.Ở phân đoạn P1 hàm lượng polysaccharide cao Hoàng Thị Nhàn 39 Lớp: 1301 - CNSH 0.279 ߤg/ml, hàm lượng thấp P3 0.088 ߤg/ml Kết cho thấy tổng hàm lượng Polysaccharide thu phân đoạn giảm dần Hiệu suất thu P1, P2, P3 tương ứng thể nấm Cordyceps militaris 0.303%, 0.152%, 0.563% Kết tách chiết polysaccharide từ giá thể có hàm lượng polysacchardide 0,78% Như vậy, tách chiết polysaccharide từ thể đạt giá trị hàm lượng cao giá thể, nhiên phần thể tách chiết tốn Theo kết nghiên cứu Guanghao(2007) [17] thu 0.1641g polysaccharide tách chiết từ 20g Cordyceps militaris với hiệu suất đạt 0.82% Chúng kết luận với phương pháp chiết này, hàm lượng polysaccharide thu tương đối tốt 3.4 Kết đo phổ Theo nghiên cứu Fengyao Wu đặc điểm cấu trúc hoặt động chống oxy hóa polysaccharide từ C militaris (16/9/2011) chiết polysaccharide có tên CM-hs-CPS2 [19] Hình 3.10: Phổ hồng ngoại IR mẫu CM-hs-CPS2 chuẩn theo kết nghiên cứu Fengyao Wu [19] Phổ hồng ngoại IR CM-hs-CPS2 cho thấy đỉnh hấp lớn 3396 cmିଵ , cho kéo dài nhóm OH liên kết hydro phân tử Tại đỉnh 2.929ܿ݉ିଵ cho nhóm C-H saccharide, đỉnh nằm dải sóng từ 1.400 cmିଵ -1200 cmିଵ thể nhóm C-H mạch nhánh Tại dải sóng 1.651 1.541cmିଵ thể liên kết nhóm C = O nhóm N-H mạch nhánh, cho thấy diện nhóm acetamido Hai dải hấp thị gần 1.240 850 cmିଵ kéo dài thể liên kết nhóm S = O C-O-S, tương ứng, tồn nhóm -O-SO3 Nhóm có đỉnh hấp thụ thấp mạnh từ 1200 đến 950 cmିଵ quy cho liên kết ether (C-O-C) hydroxyl có mặt vịng pyranose Và đỉnh cao 761 cmିଵ đối xứng pyranose thể monosaccharide CM-hs-CPS2 pyranose.Sự diện liên kết α െ glycosidic chứng minh dải uốn cong C-H 848 cmିଵ Và đỉnh hấp thụ 931cmିଵ 761 cmିଵ ngụ ý tồn α െ D െ Glucopyranose[19] Kết phân tích phổ hồng ngoại IR mẫu P1, P2, P3 sau tách chiết sau: 100 98 96 94 532.11cm-1 %T 92 90 88 1077.72cm-1 2942.4cm-1 1402.95cm-1 86 84 82 80 79 4000 1634.42cm-1 3391.77cm-1 3500 3000 2500 2000 1500 1000 cm-1 Hình 3.11: Kết đo phổ hồng ngoại IR mẫu P1 500 450 100 98 96 94 629.14cm-1 1075.22cm-1 92 1165.4cm-1 889.11cm-1 %T 90 88 1644.92cm-1 86 1565.3cm-1 2930cm-1 84 82 1393.99cm-1 3413.56cm-1 80 79 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500450 cm-1 Hình 3.12: Kết đo phổ hồng ngoại IR mẫu P2 100 99 98 97 %T 96 576.02cm-1 95 814.5cm-1 657.87cm-1 2934.2cm-1 891.81cm-1 94 708.76cm-1 93 1412.94cm-1 92 91 1646.03cm-1 1565.3cm-1 1027cm-1 1153.4cm-1 3417.84cm-1 1078.86cm-1 90 90 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1047cm-1 1000 500450 cm-1 Hình 3.13: Kết đo phổ hồng ngoại IR mẫu P3 Bảng 3.2: So sánh phổ IR mẫu Nhóm chức Mẫu chuẩn ሺcmିଵ ሻ O-H C-H N-H C=O C-O-S S=O 3396 2929 1541 1651 850 1240 Mẫu đo IR P1 ሺcmିଵ ሻ 3391 2942 1402 1634 860 1220 Mẫu đo IR P2 ሺcmିଵ ሻ 3413 2930 1565 1644 889 1232 Mẫu đo IR P3 ሺcmିଵ ሻ 3417 2934 1565 1646 814 1165 Kết luận: Từ kết đo phổ IR mẫu P1, P2, P3, vùng hồng ngoại xa, có nhóm đặc trưng vòng pyranose liên kết liên kết α − glycosidic, loại polysaccharide có tính axit sulfate chứa nhóm acetamido Và đỉnh hấp thụ 1000cmିଵ ngụ ý tồn α − D − Glucopyranoseሺ α − D − Glcpሻ Hoàng Thị Nhàn 43 Lớp: 1301 - CNSH KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Bước đầu xác lập quy trình tách chiết polysaccharide từ thể nấm Cordyceps militaris Kết thu phân đoạn tách chiết polysaccharide ký hiệu P1, P2, P3 với hiệu suất tách chiết hàm lượng tương ứng 0.303%, 0.152%, 0.563% Sử dụng phương pháp phân tích phổ hồng ngoại IR để xác định có mặt số nhóm chức mẫu P1, P2, P3 Kết cho thấy nhóm chức –O-H, C-H, N-H, C=O, C-O-S, S=O đêỳ xuất tất mẫu P1, P2, P3 Kiến nghị Các kết nghiên cứu bước đầu nghiên cứu sơ hiệu suất tách chiết polysaccharide từ Cordyceps militaris Tuy nhiên cần phải có nghiên cứu tiếp theo: Tiếp tục tinh polysaccharide thô thu nhằm tăng hiệu chất từ ứng dụng vào sản xuất thực phẩm chứng có chứa polysaccharide Tiếp tục nghiên cứu đánh giá hoạt tính tính học kháng khuẩn, kháng khối u tế bào gan, chống oxy hóa mẫu P1, P2, P3 Hoàng Thị Nhàn 44 Lớp: 1301 - CNSH TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng việt Ts Nguyễn Minh Chơn, Ths Phan Thị Bích Trâm, Ths Nguyễn Thị Thu Thủy Giáo trình thực tập sinh hóa(2005), nhà xuất giáo dục Trần Thị Hồng Hà, Lê Hữu Cường,Trần Thị Như Hằng, Lưu Văn Chính, Lê Mai Hương Phân lập cách polysaccharide từ nấm hầu thủ lên men dịch thể đánh giá hoạt tính sinh học kháng u chúng Tạp chí khoa học cơng nghệ 50(3), 2012, 327-334 Trần Thị Hồng Hà, Lưu Văn Chính, Lê Hữu Cường, Trần Thị Như Hằng, Đỗ Hữu Nghị, Trương Ngọc Hùng, Nguyễn Thị Nga, Lê Mai Hương Đánh giá hoạt tính sinh học polysaccharide hợp chất cần tách chiết từ nấm hương (Lentinus edodes) Tạp chí sinh học, 35(4), 2013: 445-453 Nguyễn Thị Lương (2014) Nghiên cứu điều kiện lên men nấm Cordyceps để nâng cao khả sinh tổng hợp cordyceps acid, polysaccharide Khóa luận tốt nghiệp, Viện Đại học Mở Hà Nội Tài liệu Tiếng anh Shonkor Kumar Das, Mina Masuda, Akihiko Sakurai, Mikio Sakakibara Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: Current state and prospects Fitoterapia 81(2010) 961-968 Ying J, Mao X, Ma Q, Wen H Icons of medicinal mushroom from China Beijing: Science Press Beijing; 1987 p 151–5 (in Chinese) E.J Buenz, B.A Bauer, T.W Osmundson, T.J Motley, The traditional Chinese medicine Cordyceps sinensis and its ef-fects on apoptotic homeostasis, J Ethnopharmacol 96 (2005) 19–29 Shi Zhong, Huijuan Pan, Leifa Fan, Guoying Lv, Yongzhi Wu, Binod Parmeswaran, Ashok Pandey and Carlos Ricardo Soccol Advances in Research of Polysaccharides in Cordyceps Species.Food Technol Biotechnol 47 (3) 304–312 (2009) Hoàng Thị Nhàn 45 Lớp: 1301 - CNSH D Wang, M Xu, H.T Zhu, K.K Chen, Y.J Zhang, C.R Yang, Biotransformation of gentiopicroside by asexual my-celia of Cordyceps sinensis, Bioorg Med Chem Lett 17 (2007), 3195–3197 10 T.H Hsu, L.H Shiao, C Hsieh, D.M Chang, A compari-son of the chemical composition and bioactive ingredients of the Chinese medicinal mushroom DongChongXiaCao, its counterfeit and mimic, and fermented mycelium of Cor-dyceps sinensis, Food Chem 78 (2002) 463–469 11 S.J Huang, S.Y Tsai, Y.L Lee, J.L Mau, Nonvolatile components of fruiting bodies and mycelia of militaris, Food Sci Technol 39 (2006) 577– 583 12 L Wen, Y.L Tang, Q.F Yin, M Xia, Y.L Yang, Assays on nutrient and effective ingredients in different parts of Cordyceps militaris, China J Chin Mater Med 30 (2006) 659–661 (in Chinese) 13 X.Z Zhang, The artificial culture and its nutritive composition for Cordyceps militaris (L Fr) Link, Edible Fungi China, 22 (2003) 19–21 (in Chinese) 14 Z.M Che, Y Wang, L.L Zhou, Studies of the optimal technical conditions of polysaccharide isolation from Cordyceps militaris, Food Res Develop 25 (2004) 78–79 (in Chinese) 15 Y Shi, W.M Wu, S.T Liao, X.M Liu, N.X Zou, Study of the extraction of Cordyceps militaris polysaccharide with the use of microwave, Guangdong Agric Sci 11 (2006) 41–42 (in Chinese) 16 Jeong Seok Kwon, Jong Seok Lee, Won Cheol Shin, Keun Eok Lee, and Eock Kee Hong Optimization of Culture Conditions and Medium Components for the Production of Mycelial Biomass and Exo- polysaccharides with Cordyceps militaris in Liquid Culture.Biotechnology and Bioprocess Engineering 2009, 14: 756-762 Hoàng Thị Nhàn 46 Lớp: 1301 - CNSH 17 Hui Yan, Dongjie Zhu, Dabao Xu, Jie Wu and Xuyun Bian A study on Cordyceps militaris polysaccharide purification, compostion and activity analysis African Journal of Biotechnology Vol (22), pp 4004-4009 18 Chen Xiao li, Wu guang hong, Gu qing xia, Huang zhuo lie Optimization of extraction process of polysaccharides from Fruiting body of Cordyceps militaris L Link by Orthogonal Test Medical Plant 2010, 1(7): 92-94 19 Fengyao Wu, Hui Yan, Xiaoning Ma, Junqing Jia, Guozheng Zhang, Xijie Guo and Zhongzheng Gui Stuctural characterization and antioxidant activity of purified polysaccharide from cultured Cordyceps militaris African Journal of Microbiology Research Vol 5(18), pp 2743-2751, 16 September, 2011 20 L Liu, J.Y An, F.X Jin, Method of protein removal from Cordyceps polysaccharide, J Dalian Inst Light Ind 21 (2002) 33–37 (in Chinese) Hoàng Thị Nhàn 47 Lớp: 1301 - CNSH ... Xác lập 01 quy trình tách chiết Polysaccharide từ thể nấm Codyceps militaris - Đánh giá số nhóm chức polysaccharide tách chiết Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu quy trình tách chiết polysaccharide: ... Tình hình nghiên cứu tách chiết Polysaccharide từ thể nấm Cordycep militaris 1.3.1 Tình hình nghiên cứu Polysaccharide giới Một số nghiên cứu thực tách chiết tinh polysaccharide từ nấm giới như:... pháp tách chiết Polisaccharide từ Quả thể nấm Cordyceps militaris Để tách chiết Polysaccharide từ Cordyceps militaris tiến hành theo sơ đồ sau: Quả thể C .militaris Nghiền Bột C .militaris Chiết