NGHIÊN CỨU CẤU TRÚC CỦA ULVAN CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ RONG LỤC ULVA LACTUCA VÀ ULVA RETICULATA

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Quách Thị Minh Thu NGHIÊN CỨU CẤU TRÚC CỦA ULVAN CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ RONG LỤC ULVA LACTUCA VÀ ULVA RETICULATA LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC Hà Nội - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Quách Thị Minh Thu NGHIÊN CỨU CẤU TRÚC CỦA ULVAN CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ RONG LỤC ULVA LACTUCA VÀ ULVA RETICULATA Chuyên ngành: Hóa lý thuyết Hóa lý Mã sỗ: 62.44.01.19 LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Thành Thị Thu Thủy PGS.TS Trần Thị Thanh Vân Hà Nội - 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu khoa học riêng tơi hướng dẫn PGS.TS Thành Thị Thu Thủy PGS.TS Trần Thị Thanh Vân Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận án Quách Thị Minh Thu ii LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới tập thể cán hướng dẫn khoa học PGS.TS Thành Thị Thu Thủy - Viện Hóa học PGS.TS Trần Thị Thanh Vân – Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Hai PGS người Thầy chia sẻ kinh nghiệm, hướng dẫn cách tiếp cận với lĩnh vực khoa học chuyên sâu mà theo đuổi, vấn đề khác sống suốt thời gian thực luận án Đặc biệt, xin cảm ơn Trung tâm Các phương pháp phổ ứng dụng - Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa Học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện tốt thời gian trang thiết bị nghiên cứu để tơi hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Yuguchi Yoshiaki– Trường Đại học Điện -Truyền thông Osaka giúp thực phép đo SAXS tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành công việc thời gian thực tập Nhật Bản Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Viện Hóa học, anh chị phụ trách Đào tạo sau Đại học - Viện Hóa học Học viện Khoa học Công nghệ tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành học phần luận án thủ tục cần thiết Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè người thân ln giúp đỡ, động viên tơi q trình học tập nghiên cứu TÁC GIẢ LUẬN ÁN Quách Thị Minh Thu iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC BẢNG x MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Rong biển sulfate polysaccharide từ rong biển 1.1.1 Phân loài rong biển 1.1.2 Thành phần dinh dưỡng ứng dụng rong biển 1.1.3 Sulfate polysaccharide từ rong biển 1.1.3.1 Sulfate polysaccharide từ rong nâu 1.1.3.2 Sulfate polysaccharide từ rong đỏ 1.1.3.3 Sulfate polysaccharide từ rong lục 1.1.4 Rong lục chi Ulva ulvan 12 1.1.4.1 Rong lục chi Ulva 12 1.1.4.2 Thành phần cấu trúc hóa học ulvan 12 1.1.4.3 Các tính chất hóa lý ulvan 16 1.1.4.4 Hoạt tính sinh học ứng dụng ulvan 18 1.2 Các phương pháp nghiên cứu cấu trúc polysaccharide 22 1.2.1 Phương pháp sắc ký thẩm thấu gel GPC 22 1.2.2 Phương pháp phổ hồng ngoại IR 22 1.2.3 Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR 23 1.2.4 Phương pháp phổ khối lượng MS 27 1.2.5 Phương pháp tán xạ tia X góc nhỏ SAXS 28 1.3 Tình hình nghiên cứu giới nước liên quan đến nội dung nghiên cứu luận án 30 iv 1.3.1 Tình hình nghiên cứu nước 30 1.3.2 Tình hình nghiên cứu giới 32 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 38 2.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 38 2.1.2 Phân tích thành phần hóa học rong 39 2.1.3 Chiết tách tinh chế ulvan 42 2.1.4 Đánh giá hoạt tính sinh học 44 2.2 Xác định cấu trúc ulvan 47 2.2.1 Phân tích thành phần hóa học ulvan 47 2.2.2 Phương pháp sắc ký thẩm thấu gel (GPC) 48 2.2.3 Phương pháp phổ hồng ngoại (IR) 48 2.2.4 Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 48 2.2.5 Phương pháp phổ khối lượng (MS) 49 2.2.6 Phương pháp tán xạ tia X góc nhỏ (SAXS) 49 2.2.7 Phương pháp hiển vi điện tử quét (SEM) 49 2.3 Sulfate hóa acetyl hóa mẫu ulvan tự nhiên 49 2.3.1 Sulfate hóa 49 2.3.2 Acetyl hóa 50 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 52 3.1 Lựa chọn mẫu nghiên cứu 52 3.1.1 Kết xác định thành phần hóa học ulvan 52 3.1.2 Kết khảo sát hoạt tính sinh học ulvan 53 3.2 Xác định cấu trúc ulvan 58 3.2.1 Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva reticulata (UR-H) 58 3.2.2 Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata (UR-N) 67 3.2.3 Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva lactuca (UL-N) 82 3.2.4 Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva lactuca (UL-H) 92 3.3 Khảo sát ảnh hưởng sulfate hóa acetyl hóa đến hoạt tính sinh học ulvan 101 v 3.3.1 Ảnh hưởng sulfate hóa 101 3.3.2 Ảnh hưởng acetyl hóa 106 KẾT LUẬN CHUNG 108 KIẾN NGHỊ 110 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 111 TÀI LIỆU THAM KHẢO 113 PHỤ LỤC 131 vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu C- NMR 13 H- NMR AOAC COSY CS% DA DPPH DS ESI -MS Gal GlcA GPC HeLa Hep-G2 HMBC HSQC IC50 IdoA IR MALDI-MS Man MCF-7 MIC Mn Mw NOESY OD Rha SAXS SEM Tiếng Anh Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy Association of Official Analytical Chemist Correlation spectroscopy Cell survival % Degree of Acetyl 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl Degree of Sulfation Electron spray ionization mass spectrometry Galactose Glucuronic acid Gel Permeation Chromatography Henrietta lacks Human hepatocellular carcinoma Heteronuclear mutiple bond connectivity Heteronuclear single-quantum coherence Inhibitory concentration at 50% Iduronic acid Infrared spectroscopy Matrix assisted laser desorption ionization mass spectrometry Mannose Michigan cancer foundation-7 minimum inhibitory concentration Number average molecular mass Weight average molecular mass Nuclear Overhauser effect Spectroscopy Optical density Rhamnose Small Angle X-ray scattering Scanning Electron Microscope Diễn giải Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H Hiệp hội hóa học phân tích Phổ tương tác chiều đồng hạt nhân 1H-1H % tế bào sống sót Mức độ acetyl hóa 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl Mức độ sulfate hóa Phổ khối lượng ion hóa phun mù điện Galactose Glucuronic acid Sắc ký thẩm thấu gel Dòng tế bào ung thư cổ tử cung Dòng tế bào ung thư gan người Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử nghiệm Iduronic acid Phổ hồng ngoại Phổ khối lượng ion hóa khử hấp thụ laze Mannose Dòng tế bào ung thư vú người Nồng độ ức chế tối thiểu Khối lượng phân tử trung bình số Khối lượng phân tử trung bình khối Phổ tương tác khơng gian đồng hạt nhân 1H1 H Mật độ quang học Rhamnose Tán xạ tia X góc nhỏ Hiển vi điện tử quét vii SP UL-H UL-K UL-N UR-Ac UR-H UR-K UR-N UR-S UroA Xyl Sulfate polysaccharide Uronic acid Xylose Sulfate polysaccharide Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva lactuca Ulvan chiết kiềm từ rong lục Ulva lactuca Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva lactuca Ulvan acetyl hóa từ UR-N Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva reticulata Ulvan chiết kiềm từ rong lục Ulva reticulata Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata Ulvan sulfate hóa từ UR-N Uronic acid Xylose viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh số lồi rong nâu Hình 1.2 Hình ảnh số lồi rong đỏ Hình 1.3 Hình ảnh số lồi rong lục Hình 1.4 Biểu đồ biểu thị phân bố loài rong lục có sulfate polysaccharide [38] 11 Hình 1.5 Cấu trúc chuỗi mạch ulvan [38] 14 Hình 1.6 Cơ chế tạo hydrogel ulvan qua Ca2+: a) borate ester phần b) carboxylate phần c) sulfate [1, 51] 17 Hình 1.7 (a) Phổ 1H-NMR hỗn hợp liên kết (13)(14)-β-D-glucan; (b) Phổ 13 C-NMR hỗn hợp liên kết (13)(14)-β-D-glucan 24 Hình 1.8 Độ dịch chuyển hóa học nhóm phân tử polysaccharide 26 Hình 1.9 Cơ chế phân mảnh carbohydrate [111] 28 Hình 1.10 Sơ đồ nguyên lý máy đo SAXS 29 Hình 1.11 Cấu trúc hóa học ulvan từ rong lục Ulva pertusa 35 Hình 2.1 Hình ảnh mẫu rong nghiên cứu 38 Hình 2.2 Quy trình chiết tách tinh chế ulvan từ rong lục 43 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc phần trăm tế bào sống sót 56 vào nồng độ ulvan UL-N 56 Hình 3.2 Phổ IR UR-H 59 Hình 3.3 Phổ 1H-NMR UR-H 60 Hình 3.4 Phổ 13C-NMR UR-H 61 Hình 3.5 Phổ COSY UR-H 62 Hình 3.6 Phổ HSQC UR-H 62 Hình 3.7 Phổ HMBC UR-H 63 Hình 3.8 Phổ ESI-MS UR-H 65 Hình 3.9 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh [RhaSO3]- m/z 243 66 Hình 3.10 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh [RhaSO3]- m/z 419 67 Hình 3.11 Phổ IR UR-N 68 Hình 3.12 Phổ 1H-NMR UR-N 69 Hình 3.13 Phổ 13C-NMR UR-N 70 Hình 3.14 Phổ COSY UR-N 71 Hình 3.15 Phổ HSQC UR-N 72 117 38 Lingchong Wang, Xiangyu Wang, Hao Wu and Rui Liu (2014) Overview on Biological Activities and Molecular Characteristics of Sulfated Polysaccharides from Marine Green Algae in Recent Years Mar Drugs., 12, 4984-5020 39 Tabarsa, M.; Lee, S.J.; You, S.; (2012) Structural analysis of immunostimulating sulfated polysaccharides from Ulva pertusa Carbohydr Res., 361, 141–147 40 Quemener, B.; Lahaye, M.; Bobin Dubigeon, C (1997) Sugar determination in ulvans by a chemical-enzymatic method coupled to high performance anion exchange chromatography J Appl Phycol., 9, 179-188 41 Chattopadhyay, K.; Mandal, P.; Lerouge, P.; Driouich, A.; Ghosal, P.; Ray, B.; (2007) Sulphated polysaccharides from Indian samples of Enteromorpha compressa (Ulvales, Chlorophyta): Isolation and structural features Food Chem., 104, 928–935 42 Ray, B (2006) Polysaccharides from Enteromorpha compressa: Isolation, purification and structural features Carbohydr Polym., 66, 408–416 43 Lahaye M.; Jegou J.; and Buleon A (1994) Chemical characteristics of insoluble glucans from the cell-wall of the marine green alga Ulva lactuca (L) Thuret Carbohydr Res., 262, 115-125 44 Ray, B.; Lahaye, M (1995) Cell-wall polysaccharides from the marine green alga Ulva rigida (Ulvales, Chlorophyta): Extraction and chemical composition Carbohydr Res., 274, 251–261 45 Paradossi, G.; Cavalieri, F.; Pissoferrato, L.; Liquori, A.M.A (1999) Physicochemical study on the polysaccharide ulvan from hot water extraction of the macroalga Ulva Int J Biol Macromol., 25, 309–315 46 Paradossi, G.; Cavalieri, F.; Chiessi, E.A (2002) Conformational study on the algal polysaccharide ulvan Macromolecules, 35, 6404–6411 47 Robic, A.; Gaillard, C.; Sassi, J.F.; Lerat, Y.; Lahaye, M (2009) Ultrastructure of ulvan: A polysaccharide from green seaweeds Biopolymers, 91, 652–664 118 48 Dobrynin A.V (2008) Theory and simulations of charged polymers: From solution properties to polymeric nanomaterials Current Opinion in Colloid & Interface Science, 13, 376–388 49 Robic A.; Sassi J.-F.; Lahaye M (2008) Impact of stabilization treatments of the green seaweed Ulva rotundata (Chlorophyta) on the extraction yield, the physico-chemical and rheological properties of ulvan Carbohydrate Polymers, 74, 344–352 50 Sun, H.H.; Mao, W.J.; Fang, F.; Li, H.Y (2007) Polysaccharides from marine green seaweed Ulva species and their characteristics Agro Food Ind Hi-Tech., 18, 28–29 51 Haug, A., Nilsson, N H., Romming, C., Schaumburg, K., Vialle, J & Anthonsen, T (1976) The influence of borate and calcium on the gel formation of a sulfated polysaccharide from Ulva lactuca Acta Chem Scand B., 30, 562–566 52 Wijesekara, I.; Pangestuti, R.; Kim, S.K (2011) Biological activities and potential health benefits of sulfated polysaccharides derived from marine algae Carbohydr Polym., 84, 14–21 53 Qi, H.M.; Zhang, Q.B.; Zhao, T.T.; Hu, R.G.; Zhang, K.; Li, Z (2006) In vitro antioxidant activity of acetylated and benzoylated derivatives of polysaccharide extracted from Ulva pertusa (Chlorophyta) Bioorg Med Chem Lett., 16, 2441–2445 54 Godard, M.; Decorde, K.; Ventura, E.; Soteras, G.; Baccou, J.C.; Cristol, J.P.; Rouanet, J.M (2009) Polysaccharides from the green alga Ulva rigida improve the antioxidant status and prevent fatty streak lesions in the high cholesterol fed hamster, an animal model of nutritionally-induced atherosclerosis Food Chem., 115, 176–180 55 Zhang, H.J.; Mao, W.J.; Fang, F.; Li, H.Y.; Sun, H.H.; Chen, Y.; Qi, X.H (2008) Chemical characteristics and anticoagulant activities of a sulfated polysaccharide and its fragments from Monostroma latissimum Carbohydrate Polymers, 71, 428–434 56 Kaeffer B.; Benard C.; Lahaye M.; Blottiere H M and Cherbut C (1999) Biological Properties of Ulvan, a New Source of Green Seaweed Sulfated 119 Polysaccharides, on Cultured Normal and Cancerous Colonic Epithelial Cells Planta Med., 65, 527-531 57 Leiro, J.M.; Castro, R.; Arranz, J.A.; Lamas, J (2007) Immunomodulating activities of acidic sulphated polysaccharides obtained from the seaweed Ulva rigida C Agardh Int Immunopharmacol., 7, 879–888 58 Pengzhan, Y.; Ning, L.; Xiguang, L.; Gefei, Z.; Quanbin, Z.; Pengcheng, L (2003) Antihyperlipidemic effects of different molecular weight sulfated polysaccharides from Ulva pertusa (Chlorophyta) Pharmacol Res Offic J Ital Pharmacol Soc., 48, 543–549 59 Yu, P.Z.; Zhang, Q.B.; Li, N.; Xu, Z.H.; Wang, Y.M.; Li, Z.E (2003) Polysaccharides from Ulva pertusa (Chlorophyta) and preliminary studies on their antihyperlipidemia activity J Appl Phycol., 15, 21–27 60 Yu, P.Z.; Li, N.; Liu, X.G.; Zhou, G.F.; Zhang, Q.B.; Li, P.C (2003) Antihyperlipidemic effects of different molecular weight sulfated polysaccharides from Ulva pertusa (Chlorophyta) Pharmacol.Res., 48, 543– 549 61 Song, H.; Zhang, Q.; Zhang, Z.; Wang, J (2010) In vitro antioxidant activity of polysaccharides extracted from Bryopsis plumosa Carbohydrate Polymers, 80, 1057–1061 62 Zhang, Z.; Wang, F.; Wang, X.; Liu, X.; Hou, Y.; Zhang, Q (2010) Extraction of the polysaccharides from five algae and their potential antioxidant activity in vitro Carbohydrate Polymers, 82, 118–121 63 Qi, H.M.; Zhang, Q.B.; Zhao, T.T.; Chen, R.; Zhang, H.; Niu, X.Z.; Li, Z (2005) Antioxidant activity of different sulfate content derivatives of polysaccharide extracted from Ulva pertusa (Chlorophyta) in vitro Int J Biol Macromol., 37, 195–199 64 Qi, H.M.; Zhang, Q.B.; Zhao, T.T.; Hu, R.G.; Zhang, K.; Li, Z (2006) In vitro antioxidant activity of acetylated and benzoylated derivatives of polysaccharide extracted from Ulva pertusa (Chlorophyta) Bioorg Med Chem Lett., 16, 2441–2445 120 65 Qi, H.M.; Zhao, T.T.; Zhang, Q.B.; Li, Z.; Zhao, Z.Q.; Xing, R (2005) Antioxidant activity of different molecular weight sulfated polysaccharides from Ulva pertusa Kjellm (Chlorophyta) J Appl.Phycol., 17, 527–534 66 Shao, P.; Chen, M.; Pei, Y.; Sun, P (2013) In intro antioxidant activities of different sulfated polysaccharides from chlorophytan seaweeds Ulva fasciata Int J Biol Macromol., 59, 295–300 67 Shonima Govindan M, JiJi Thomas and G Muraleedhara Kurup (2012) In vitro antioxidant and antitumor activity of Polysaccharide isolated from Ulva fasciata Int J Pharm Bio Sci July., 3(3), 238 – 246 68 Mezghani, S.; Bourguiba, I.; Hfaiedh, I.; Amri, M (2013) Antioxidant potential of Ulva rigida extracts: protection of heLa cells against H2O2 cytotoxicity Biol Bull., 225, 1–7 69 Matsubara, K.; Matsuura, Y.; Bacic, A.; Liao, M.L.; Hori, K.; Miyazawa, K (2001) Anticoagulant properties of a sulfated galactan preparation from a marine green alga, Codium cylindricum Int J.Biol Macromol., 28, 395–399 70 Shanmugam, M.; Mody, K.H.; Siddhanta, A.K (2001) Blood anticoagulant sulphated polysaccharides of the marine green algae Codium dwarkense (Boergs.) and C tomentosum (Huds.) Stackh Indian J Exp Biol., 39, 365– 370 71 Robic, A.; Rondeau-Mouro, C.; Sassi, J.F.; Lerat, Y.; Lahaye, M (2009) Structure and interactions of ulvan in the cell wall of the marine green algae Ulva rotundata (Ulvales, Chlorophyceae) Carbohydr Polym., 77, 206–216 72 Gurgel Rodrigues, J.A.; Lino de Queiroz, I.N.; Gomes Quindere, A.L.; Vairo, B.C.; Souza Mourao, P.A.; Barros Benevides, N.M (2011) An antithrombindependent sulfated polysaccharide isolated from the green alga Caulerpa cupressoides has in vivo anti- and prothrombotic effects Cienc Rural., 41, 634–639 73 Qi, X.; Mao, W.; Chen, Y.; Chen, Y.; Zhao, C.; Li, N.; Wang, C (2013) Chemical characteristics and anticoagulant activities of two sulfated polysaccharides from Enteromorpha linza (Chlorophyta) J Ocean Univ China., 12, 175–182 121 74 Qi, X.; Mao, W.; Gao, Y.; Chen, Y.; Chen, Y.; Zhao, C.; Li, N.; Wang, C.; Yan, M.; Lin, C.; et al (2012) Chemical characteristic of an anticoagulantactive sulfated polysaccharide from Enteromorpha clathrata Carbohydrate Polymers, 90, 1804–1810 75 Gurgel Rodrigues, J.A.; Oliveira Vanderlei, E.D.S.; Bessa, E.F.; Magalhaes, F.D.A.; Monteiro de Paula, R.C.; Lima, V.; Barros Benevides, N.M (2011) Anticoagulant activity of a sulfated polysaccharide isolated from the green seaweed Caulerpa cupressoides Braz Arch Biol Technol., 54, 691–700 76 Mao, W.J.; Fang, F.; Li, H.Y.; Qi, X.H.; Sun, H.H.; Chen, Y.; Guo, S.D (2008) Heparinoid-active two sulfated polysaccharides isolated from marine green algae Monostroma nitidum Carbohydrate Polymers, 74, 834–839 77 Maeda, R.; Ida, T.; Inara, H.; Sakamoto, T (2012) Immunostimulatory activity of polysaccharides isolated from Caulerpa lentillifera on macrophage cells Biosci Biotechnol Biochem., 76, 501–505 78 Shao, P.; Chen, X.; Sun, P (2013) In vitro antioxidant and antitumor activities of different sulfated polysaccharides isolated from three algae Int J Biol Macromol., 62, 155–161 79 Ahmed, O.M and Ahmed, R.R (2014) Anti-proliferative and apoptotic efficacies of ulvan polysaccharides against different types of carcinoma cells In Vitro and In Vivo Cancer Science & Therapy, 6(6), 202-208 80 Gurgel Rodrigues, J.A.; Oliveira Vanderlei, E.D.S.; Silva, L.M.; de Araujo, I.W.; de Queiroz, I.N.; de Paula, G.A.; Abreu, T.M.; Ribeiro, N.A.; Bezerra, M.M.; Chaves, H.V.; et al (2012) Antinociceptive and anti-inflammatory activities of a sulfated polysaccharide isolated from the green seaweed Caulerpa cupressoides Pharmacol Rep., 64, 282–292 81 Kim, J.K.; Cho, M.L.; Karnjanapratum, S.; Shin, I.S.; You, S.G (2011) In vitro and in vivo immunomodulatory activity of sulfated polysaccharides from Enteromorpha prolifera Int J Biol.Macromol., 49, 1051–1058 82 Hassan, S.; Abd El-Twab, S.; Hetta, M.; Mahmoud, B (2011) Improvement of lipid profile and antioxidant of hypercholesterolemic albino rats by polysaccharides extracted from the green alga Ulva lactuca Linnaeus Saudi J Biologic Sci., 18, 333–340 122 83 Qi, H.; Huang, L.; Liu, X.; Liu, D.; Zhang, Q.; Liu, S (2012) Antihyperlipidemic polysaccharide activity extracted of high from sulfate Ulva content pertusa derivative of (Chlorophyta) Carbohydr.Polym., 87, 1637–1640 84 Qi, H.; Liu, X.; Zhang, J.; Duan, Y.; Wang, X.; Zhang, Q (2012) Synthesis and antihyperlipidemic activity of acetylated derivative of ulvan from Ulva pertusa Int J Biol Macromol., 50, 270–272 85 Sathivel, A.; Raghavendran, H.R.B.; Srinivasan, P.; Devaki, T (2008) Antiperoxidative and anti-hyperlipidemic nature of Ulva lactuca crude polysaccharide on D-Galactosamine induced hepatitis in rats Food Chem Toxicol., 46, 3262–3267 86 Komatsu, T.; Kido, N.; Sugiyama, T.; Yokochi, T (2013) Antiviral activity of acidic polysaccharides from Coccomyxa gloeobotrydiformi, a green alga, against an in vitro human influenza A virus infection Immunopharmacol Immunotoxicol, 35, 1–7 87 Lee, J.B.; Hayashi, K.; Hayashi, T.; Sankawa, U.; Maeda, M (1999) Antiviral activities against HSV-1, HCMV, and HIV-1 of rhamnan sulfate from Monostroma latissimum Planta Med., 65, 439–441 88 Lee, J.B.; Hayashi, K.; Maeda, M.; Hayashi, T (2004) Antiherpetic activities of sulfated polysaccharides from green algae Planta Med., 70, 813–817 89 Lee, J.B.; Koizumi, S.; Hayashi, K.; Hayashi, T (2010) Structure of rhamnan sulfate from the green alga Monostroma nitidum and its anti-herpetic effect Carbohydrate Polymers, 81, 572–577 90 Ghosh, P.; Adhikari, U.; Ghosal, P.K.; Pujol, C.A.; Carlucci, M.J.; Damonte, E.B.; Ray, B (2004) In vitro anti-herpetic activity of sulfated polysaccharide fractions from Caulerpa racemosa Phytochemistry, 65, 3151–3157 91 Pujol, C.A.; Ray, S.; Ray, B.; Damonte, E.B (2012) Antiviral activity against dengue virus of diverse classes of algal sulfated polysaccharides Int J Biol Macromol., 51, 412–416 92 Margret, R.J.; Kumaresan, S.; Ravikumar, S (2009) A preliminary study on the anti-inflammatory activity of methanol extract of Ulva lactuca in rat J Environ Biol., 30, 899–902 123 93 Pires, C.L.; Rodrigues, S.D.; Bristot, D.; Gaeta, H.H.; Toyama, D.d.O.; Lobo Farias, W.R.; Toyama, M.H (2013) Sulfated polysaccharide extracted of the green algae Caulerpa racemosa increase the enzymatic activity and paw edema induced by sPLA2 from Crotalus durissus terrificus venom Rev Bra Farm Braz J Pharm., 23, 635–643 94 Pusey P N (1974) In Photon Correlation and Light Beating Spectroscopy, (H Z Cummings and E R Pike, eds.) Plenum Press, New York, 387-428 95 Robic A.D.; Bertrand J.F.; Sassi Y.; Lerat M.; Lahaye J (2009) Determination of the chemical composition of ulvan, a cell wall polysaccharide from Ulva spp (Ulvales, Chlorophyta) by FT-IR and chemometrics J Appl Phycol., 21, 451-456 96 Masakuni Tako, Makie Tamanaha, Yoshiyuki Tamashiro, Shuntoku Uechi (2015) Structure of Ulvan Isolated from the Edible Green Seaweed, Ulva pertusa Advances in Bioscience and Biotechnology, 6, 645-655 97 Lahaye Marc, Brunel Magali, Bonnin Estelle (1997) Fine chemical structure analysis of oligosaccharides produced by an ulvan-lyase degradation of the water-soluble cell-wall polysaccharides from Ulva sp (Ulvales, Chlorophyta) Carbohydrate Research, 304, 325-333 98 Nguyễn Duy Nhứt (2008) Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học polysacharide từ số loài rong nâu tỉnh Khánh Hịa Luận án tiến sĩ Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 99 Bùi Minh Lý, Thành Thị Thu Thủy, Trần Thị Thanh Vân, Bilan M.I Usov A.I (2012) Nghiên cứu cấu trúc Fucoidan tách chiết từ tảo nâu Sargassum Polycystumn Tạp chí hóa học, 50(4A), 215 – 218 100 Hồ Đức Cường (2014) Nghiên cứu cấu trúc khảo sát hoạt tính sinh học fucoidan alginate từ hai loài rong nâu Sargassum henslowianum Sargassum swartzii Việt Nam Luận án Tiến sĩ Hóa học – Trường Đại học Bách khoa Hà Nội 101 Nguyễn Đình Triệu (2001) Các phương pháp phân tích Vật lý Hóa lý Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật 102 Steve W Cui (2005) Food Carbohydrate: Chemistry, Physical Properties and Applications, CRC Press 124 103 Edwin D Becker (1969) High Resolution NMR Theory and Chemical Applications Academic press, INC 104 Sanders J.K.M.; Constable E.C.; Hunter B.K and Pearce C.M (1995) Modern NMR spectroscopy Oxford University Press, 78-79 105 Lahaye M and Ray B (1996) Cell-wall polysaccharides from the marine green alga Ulva rigida (Ulvales, Chlorophyta) - NMR analysis of ulvan oligosaccharides Carbohydrate Research, 283, 161-173 106 Lahaye M.; Inizan F.; Vigouroux J (1998) NMR analysis of the chemical structure of ulvan and of ulvan-boron complex formation Carbohydrate Polymers, 36, 239-249 107 Lahaye Marc (1998) NMR spectroscopic characterisation of oligosaccharides from two Ulva rigida ulvan samples (Ulvales, Chlorophyta) degraded by a lyase Carbohydrate Research, 314, 1–12 108 Dell, A.; Reason, A J.; Khoo, K.; Panico, M.; McDowell, R A.; and Morris, H.R (1994) Mass spectrometry of carbohydrate-containing biopolymers Methods in Enzymology, 230, 108–132 109 Tissot B.; Salpin J.-Y.; Martinez M.; Gaigeot M.P and Daniel R (2006) Differentiation of the fucoidan sulfated L-fucose isomers constituents by CEESIMS and molecular modeling Carbohydrate Research, 341(5), 598– 609 110 Nanditha Billa, Dylan Hubin-Barrows, Tylor Lahren, Lawrence P Burkhard, (2014) Evaluation of micro-colorimetric lipid determination method with samples prepared using sonication and accelerated solvent extraction methods Talanta, 119, 620–622 111 Domon, B.; & Costello, C E (1988) A systematic nomenclature for carbohydrate fragmentations in FAB-MS/MS spectra of glycoconjugates Glycoconjugate Journal, 5(4), 397–409 112 Yoshi aki Yuguchi, Bui Minh Ly, Bui Van Nguyen, Tran Thi Thanh Van and Thanh Thi Thu Thuy (2016) Study on Branched Structure Physiological Activity Relationship of Fucoidan Chemistry Letter, 45(7), 840–842 113 Thanh T.T.T.; Tran T.T.V.; Yuguchi Y.; Bui M.L and Nguyen T.T (2013) Structure of Fucoidan from Brown Seaweed Turbinaria ornata as Studied by 125 Electrospray Ionization Mass Spectrometry (ESIMS) and Small Angle X-ray Scattering (SAXS) Techniques Mar Drugs., 11, 2431-2443 114 Ngô Đăng Nghĩa (1999) Nghiên cứu tối ưu hóa quy trình cơng nghệ sản xuất alginate từ rong mơ Việt Nam ứng dụng vào số lĩnh vực sản xuất Luận án tiến sĩ - Đại học Thủy Sản Nha Trang 115 Nguyễn Kim Đức (1991) Biến động hàm lượng acid alginic chất lượng natri alginate loài rong mơ (Sargassum) vùng biển Ḥn Chồng-Nha Trang Tuyển tập Nghiên cứu biển, Viện Nghiên cứu biển, VII, 208-216 116 Nguyễn Duy Nhứt, Bùi Minh Lý, Nguyễn Mạnh Cường, Trần Văn Sung (2007) Phân lập đặc điểm fucoidan từ loài rong mơ Miền Trung Tạp chí Hóa học, 45(3), 339-345 117 Thành Thị Thu Thủy, Trần Thị Thanh Thủy, Trần Thị Thanh Vân, Nguyễn Tiến Tài, Đặng Vũ Lương, Chu Đình Kính (2011) Isolation and structure of alginate extracted from brown seaweed Sargassum swartzii collected at Nha Trang Hội nghị khoa học công nghệ biển toàn quốc lần thứ 5, 142-143 118 Phạm Đức Thịnh (2015) Nghiên cứu phân tích thành phần, cấu trúc hóa học fucoidan có hoạt tính sinh học từ số loài rong nâu Vịnh Nha Trang Luận án Tiến sĩ Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 119 Yoshiaki Yuguchi, Van Thi Thanh Tran, Ly Minh Bui, Shizuka Takebe, Shiho Suzuki, Nobukazu Nakajima, Shinichi Kitamura, Thuy Thi Thu Thanh (2016) Primary structure, conformation in aqueous solution, and intestinal immunomodulating activity of fucoidan from two brown seaweed species Sargassum crassifolium and Padina australis Carbohydrate Polymers, 147, 69–78 120 Thanh T.T.T.; Bui M.L.; Tran T.T.V.; Ngo V.Q.; Ho C.T.; Yue Z.; Carole S.D.; Bilan M.I.; Usov A.I (2015) Anti-HIV activity of fucoidans from three brown seaweed species Carbohydrate Polymers, 115, 122–128 121 Trần Vĩnh Thiện (2009) Điều chế khảo sát cấu trúc tính chất alginate oligosaccharide tách từ rong biển khu vực Bắc Hải Vân ứng dụng chúng Luận án Tiến sĩ Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 126 122 Đặng Ngọc Thanh (chủ biên) nhiều tác giả (2003) Biển Đông Sinh vật sinh thái Biển, Tập IV Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội 123 Dang Diem Hong, Hoang Minh Hien, Pham Ngoc Son (2007) Use of Vietnamese seaweed for functional food, medicine and biofertilizer Journal Applied Phycology, 19(6), 817-826 124 Dang Diem Hong, Hoang Minh Hien, Hoang Thi Lan Anh (2011) Studies on the Analgesic and Anti-inflammatory Activities of Sargassum swartzii (Turner) C Agardh (Phaeophyta) and Ulva reticulata Forsskal (Chlorophyta) in Experiment Animal Models African Journal of Biotechnology, 10(12), 23082313 125 Brading, J E.; Georg-Plant, M.T; Hardy, D (1954) The polysaccharide from the alga Ulva lactuca Purification, hydrolysis, and methylation of the polysaccharide J Chem Soc., 319-324 126 Percival, E.; Wold, J K (1963) The acid polysaccharide from the green seaweed Ulva lactuca Part II The site of the ester sulphate J Chem Soc., 5459-5468 127 Costa C.; Alves A.; Pinto P.R.; Sousa R.A.; Silva E.A.; Reis, R.L.; Rodrigues A.E (2012) Characterization of ulvan extracts to assess the effect of different steps in the extraction procedure Carbohydrate Polymers, 88, 537–546 128 Wenjun Mao, Xiaoxue Zang, Yi Li, Huijuan Zhang (2006) Sulfated polysaccharides from marine green algae Ulva conglobata and their anticoagulant activity Journal of Applied Phycology, 18(1), 9-14 129 Dalia F Abd Elmegeed, Doa A Gharee, Muhammed Elsayed and Muhammad El-Saadani (2014) Phytochemical constituents and bioscreening activities of green algae (Ulva lactuca) International Journal of Agricultural Policy and Research, 2(11), 373-378 130 Quanbin Zhang, Zhongshan Zhang, FengWang, Xiaomei Wanga, Xiaolei Liud, Yun Houb, (2010) Extraction of the polysaccharides from ve algae and their potential antioxidant activity in vitro Carbohydrate Polymers, 82, 118–121 131 Hela Yaich, Haikel Garna, Souhail Besbes, Jean-Paul Barthélemy, Michel Paquot, Christophe Blecker, Hamadi Attia (2014) Impact of extraction 127 procedures on the chemical, rheological and textural properties of ulvan from Ulva lactuca of Tunisia coast Food Hydrocolloids, 40, 53-63 132 Mao, W.; Zang, X.; Li, Y.; Zhang, H (2006) Sulfated polysaccharides from marine green algae Ulva conglobata and their anticoagulant activity J Appl Phycol., 18, 9–14 133 Qi, H.; Liu, X.; Ma, J.; Zhang, Q.; Li, Z (2010) In intro antioxidant activity of acetylated derivatives of polysaccharide extracted from Ulva pertusa (Cholorophta) J Med Plants Res., 4, 2445–2451 134 Qi, H.; Liu, X.; Wang, K.; Liu, D.; Huang, L.; Liu, S.; Zhang, Q (2013) Subchronic toxicity study of ulvan from Ulva pertusa (Chlorophyta) in Wistar rats Food Chem Toxicol., 62, 573–578 135 You, S.G.; Tabarsa, M.; Han, J.H.; Kim, C.Y (2012) Molecular characteristics and immunomodulatory activities of water-soluble sulfated polysaccharides from Ulva pertusa Journal of Medicinal Food, 15(2), 135– 144 136 Hanaa H.; Baky A.El.; Baz K.F.El and Batory G S.El (2009) Potential biological properties of sulfated polysaccharides extracted from macroalgae Ulva lactuca L Academic Journal of Cancer Research, 2(1), 1-11 137 AOAC International (1996) Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists 16th edition, Gaithersburg, USA 138 Blig, EB.; Dyer, W.J (1959) A rapid method of total lipid extraction and purification Can J Biochem., 37, 911-917 139 Michel Dubois, Gilles K.A, Hamilton J.K, Rebers P.A, and Fred Smith, (1956) Colorimetric Method for Determination of Sugars and Related Substances Anal Chem., 28, 350-356 140 Fujiwara-Arasaki T.; Mino N.; Kuroda M (1984) The protein value in human nutrition of edible marine algae in Japan Hydrobiologia, 116-117(1), 513516 141 Tang Yu-Qing, Kaiser Mahmood, Ruqyia Shehzadi, Muhammad Furqan Ashraf (2016) Ulva Lactuca and Its Polysaccharides: Food and Biomedical Aspects Journal of Biology, Agriculture and Healthcare, 6(1), 140-151 128 142 Monks A.; Scudiero D.; Skehan P.; Shoemake R.; Paull K.; Vistica D.; Hose C.; Langley J.; Cronise P.; Campbell H.; Mayo J.; Boyd M (1991) Feasibility of a high-flux anticancer drug screen using a diverse panel of cultured human tumor cell lines Journal of National Cancer Institute, 83(11), 757-766 143 Anderson, L.O.; Barrowcliffe, T.W.; Holmer, E.; Johnson, E.A.; and Sims, G.E.C (1976) Anticoagulant properties of heparin fractionated by affinity chromatography on matrix-bound antithrombin-3 and by gel-filtration Thromb Res., 9, 575–580 144 Vanden B.D.A and Vlietinck A.J (1991) Methods in plant Biochemistry: Screening Methods for Antibacterial and Antiviral Agents from Higher Plants Academic Press, London., 6, 47-69 145 Prieto, P.; Pineda, M.; Anguilar, M (1999) Spectrophotometric quantitation of antioxidant capacity through the formation of a Phosphomolybdenum Complex: Specific application to the determination of Vitamin E Anal Biochem., 269, 337-341 146 Zhu, Q.Y.; Hackman, R.M.; Ensunsa, J.L.; Holt, R.R.; Keen, C.L (2002) Antioxidative activities of oolong tea J Agric Food Chem., 50, 6929–6934 147 Phạm Thành Hổ (2006) Di truyền học, NXB Giáo dục 148 Dodgson K.S (1961) Determination of inorganic sulphate in studies on the enzymic and non-enzymic hydrolysis of carbohydrate and other sulphate esters Biochem J., 78, 312-319 149 Bitter, T.; Muir H.M (1962) A Modified Uronic Acid Carbazole Reaction Anal Biochem., 4, 330-334 150 Bilan, M.I.; Vinogradova, E.V.; Shashkov, A.S.; Usov, A.I (2007) Structure of a highly pyruvylated galactan sulfate from the pacific green alga Codium yezoense (Bryopsidales, Chlorophyta) Carbohydrate Research, 342, 586–596 151 Thanh Thi Thu Thuy (2002) Structure of sulfated polysaccharide in aquarius solution Doctoral Thesis 152 Lihong Fan, Lan Jiang, Yongmei Xu, Yue Zhou, Yuan Shen, Weiguo Xie, Zhongheng Long, Jinping Zhou (2011) Synthesis and anticoagulant activity of sodium alginate sulfates Carbohydrate Polymers, 83(4), 1797–1803 129 153 Xiao-xiao Liu, Zhen-jiang Wan, Lin Shi, Xiao-xia Lu (2011) Preparation and antiherpetic activities of chemically modified polysaccharides from Polygonatum cyrtonema Hua Carbohydrate Polymers, 83, 737–742 154 Zhang Zhongshan, Wang Xiaomei, Yu Shuchi, Yin Li, Zhao Mingxing, Han Zhiping (2011) Synthesized oversulfated and acetylated derivatives of polysaccharide extractedfrom Enteromorpha linza and their potential antioxidant activity International Journal of Biological Macromolecules, 49, 1012– 1015 155 Luis A Bello-Pérez, Edith Agama-Acevedo, Paul B Zamudio-Flores, Guadalupe Mendez-Montealvo, Sandra L Rodriguez-Ambriz (2010) Effect of low and high acetylation degree in the morphological, physicochemical and structural characteristics of barley starch Food Science and Technology, 43, 1434-1440 156 Ciancia, M.; Alberghina, J.; Ximena Arata, P.; Benavides, H.; Leliaert, F.; Verbruggen, H.; Manuel Estevez, J (2012) Characterization of cell wall polysaccharides of the coencocytic green seaweed Byropsis plumose (Bropsidaceae, Chlorophyta) from the Argentine cost J Phycol., 48, 326–335 157 Ciancia, M; Quintana, I; Vizcarguenaga, M.I.; Kasulin, L.; de Dios, A.; Estevez, J.M.; Cerezo, A.S (2007) Polysaccharides from the green seaweeds Codium fragile and C vermilara with controversial effects on hemostasis Int J Biol Macromol., 41, 641–649 158 Yaich H, Garna H, Besbes S, Barthélemy J P, Paquot M, Blecker C, Attia H (2014) Impact of extraction procedures on the chemical, rheological and textural properties of ulvan from Ulva lactuca of Tunisia coast Food Hydrocolloids, 40, 53-63 159 Wang, X.; Zhang, Z.; Yao, Z.; Zhao, M.; Qi, H (2013) Sulfation, anticoagulant and antioxidant activities of polysaccharide from green algae Enteromorpha linza Int J Biol Macromol., 58, 225–230 160 Camila F B., Jorge A G., Paulo A S M., Hugo V (2007) Conformation of sulfated galactan and sulfated fucan in aqueous solutions Implications to their anticoagulant activities Journal of Molecular Graphics and Modelling, 6, 391-399 130 161 Melo F.R, Pereira M.S, Foguel D, Mour P.A (2004) Antithrombin-mediated anticoagulant activity of sulfated polysaccharides different mechanisms for heparin and sulfated galactans J Biol Chem., 279, 20824–20835 162 Santos Pereira Costa, M.S.; Costa, L.S.; Cordeiro, S.L.; Almeida-Lima, J.; Dantas-Santos, N.; Magalhaes, K.D.; Sabry, D.A.; Lopes Albuquerque, I.R.; Pereira, M.R.; et al (2012) Evaluating the possible anticoagulant and antioxidant effects of sulfated polysaccharides from the tropical green alga Caulerpa cupressoides var flabellata J Appl Phycol., 24, 1159–1167 163 Mao, W.; Li, H.; Li, Y.; Zhang, H.; Qi, X.; Sun, H.; Chen, Y.; Guo, S (2009) Chemical characteristic and anticoagulant activity of the sulfated polysaccharide isolated from Monostroma latissimum (Chlorophyta) Int J Biol Macromol., 44, 70–74 164 Debye, P (1915) Scattering from non-crystalline substances Annalen der Physik, 46, 809-823 131 PHỤ LỤC Phụ lục Sắc ký đồ GC-FID phân tích thành phần đường UR-N Phụ lục Sắc ký đồ GC-FID phân tích thành phần đường UL-H Phụ lục Sắc ký đồ GC-FID phân tích thành phần đường UL-N Phụ lục Sắc ký đồ GC-FID phân tích thành phần đường UL-K Phụ lục Phổ 1H-NMR UR-H Phụ lục Phổ 13C-NMR UR-H Phụ lục Phổ COSY-NMR UR-H Phụ lục Phổ HMBC-NMR UR-H Phụ lục Phổ HSQC-NMR UR-H Phụ lục 10 Phổ ESI-MS UR-H Phụ lục 11 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh [RhaSO3]- với m/z 243 UR-H Phụ lục 12 Phổ COSY-NMR UR-N Phụ lục 13 Phổ HSQC-NMR UR-H Phụ lục 14 Phổ HMBC-NMR UR-N Phụ lục 15 Phổ ESI-MS UR-N Phụ lục 16 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh [RhaSO3]- với m/z 243 UR-N Phụ lục 17 Phổ 1H-NMR UL-N Phụ lục 18 Phổ 13C-NMR UL-N Phụ lục 19 Phổ COSY-NMR UL-N Phụ lục 20 Phổ HSQC-NMR UL-N Phụ lục 21 Phổ HMBC-NMR UL-N Phụ lục 22 Phổ ESI-MS UL-N Phụ lục 23 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh [RhaSO3]- với m/z 243 UL-N Phụ lục 24 Sắc ký đồ GPC UL-H Phụ lục 25 Phổ COSY-NMR UL-H Phụ lục 26 Phổ HSQC-NMR UL-H Phụ lục 27 Phổ HMBC-NMR UL-H Phụ lục 28 Phổ 13C-NMR UR-S3 Phụ lục 29 Phổ COSY-NMR UR-S Phụ lục 30 Phổ 1H-NMR UR-Ac Phụ lục 31 Phổ 13C-NMR UR-Ac Phụ lục 32 Hình ảnh thể ức chế dòng tế bào ung thư a) HepG2, b) MCF7 c) Hela ulvan UL-N với nồng độ khác