Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)

Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)Nghiên cứu cấu trúc của Ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca và Ulva reticulata (tt)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ Cơng trình hồn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học 1: PGS.TS Thành Thị Thu Thủy - Quách Thị Minh Thu 2: PGS.TS Trần Thị Thanh Vân Phản biện 1: … Phản biện 2: … Phản biện 3: … NGHIÊN CỨU CẤU TRÚC CỦA ULVAN CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ RONG LỤC ULVA LACTUCA VÀ ULVA RETICULATA Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Học viện, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … ’, ngày … tháng Chuyên ngành: Hóa lý thuyết Hóa lý … năm 2017 Mã sỗ: 62.44.01.19 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HĨA HỌC Có thể tìm hiểu luận án tại: Hà Nội – 2017 - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam MỞ ĐẦU nghiên cứu quan tâm điều chế dẫn xuất hợp chất Tính cấp thiết luận án thiên nhiên với mục đích nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố cấu trúc đến hoạt tính sinh học, từ tạo chất có hoạt tính Từ lâu người khai thác rong biển làm nguyên liệu cho sinh học cao mẫu tự nhiên nhiều ngành công nghiệp dệt may, mỹ phẩm Trên giới có Ở nước ta, polysaccharide chiết tách từ rong đỏ rong nâu khoảng 10 000 loài rong biển xác định chia làm 03 ngành carrageenan, alginate fucoidan nghiên cứu thu rong dựa sắc tố chúng rong lục (Chlorophyte), rong kết tốt chưa có cơng bố nâu (Pheophyte) rong đỏ (Rhodophyte) Nước ta có vùng biển polysaccharide từ lồi thuộc ngành rong lục nói chung ulvan từ nhiệt đới rộng với bờ biển dài 3000 km bao bọc hết phía đơng chi Ulva nói riêng nam đất nước, nguồn cung cấp loài rong biển phong phú đa dạng Với lý nêu trên, chọn đề tài nghiên cứu " Nghiên cứu cấu trúc ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca Rong lục biết đến nguồn nguyên liệu để tách chiết Ulva reticulata”, để nghiên cứu cấu trúc ulvan-một chất có hoạt tinh sinh học lipid, protein, peptide, polysaccharide có rong lục tìm hiểu ảnh hưởng biến polysaccharide, carotenoid, hợp chất phenolic, alkaloid Tại Việt Nam tính hóa học đến cấu trúc hoạt tính sinh học chúng nhằm góp nguồn lợi rong lục lớn lên tới 152 loài, chủ yếu thuộc chi phần hoàn thiện hướng nghiên cứu polysaccharide từ rong biển rong Ulva, Caulerpa, Chaetomorpha, Enteromorpha, chi mở rộng khả ứng dụng nguồn rong biển Việt Nam Ulva gồm 69 loài phổ biến Ulva reticulata Ulva lactuca Mục tiêu nghiên cứu luận án: Ulvan sulfate polysaccharide có rong lục thuộc chi Ulva -Xác định cấu trúc ulvan có hoạt tính sinh học chiết tách từ Enteromorpha Cũng giống sulfate polysaccharide có lồi rong lục Ulva reticulata Ulva lactuca phổ biến vùng biển nguồn gốc từ rong biển khác, ulvan có cấu trúc phức tạp, Nha Trang Việt Nam cấu tạo thành phần chủ yếu đường rhamnose, xylose, -Tìm hiểu ảnh hưởng biến tính hóa học đến cấu trúc hoạt acid glucuronic, iduronic nhóm sulfate Thành phần hóa học tính sinh học ulvan hoạt tính sinh học ulvan phụ thuộc lớn vào loài rong, thời điểm Các nội dung nghiên cứu luận án thu hái, vị trí địa lý nơi rong sinh trưởng điều kiện chiết tách Các - Thu thập loài rong lục thuộc chi Ulva Ulva reticulata Ulva ulvan từ rong lục có cấu trúc đa dạng làm cho việc nghiên cứu cấu trúc gặp nhiều khó khăn, cản trở phát triển sản phẩm thuốc chữa bệnh Do vậy, việc nghiên cứu cấu trúc polysaccharide đòi lactuca - Nghiên cứu thành phần hóa học khảo sát hoạt tính sinh học ulvan chiết tách từ lồi rong lục hỏi phải có kết hợp cách hợp lý nhiều phương pháp Mặt - Nghiên cứu cấu trúc ulvan có hoạt tính tốt khác, có nhiều nghiên cứu cho thấy có mối liên hệ chặt chẽ - Nghiên cứu ảnh hưởng biến tính hóa học (sulfate hóa cấu trúc hóa học, cấu trúc khơng gian cấu trúc bề mặt với hoạt tính sinh học polysaccharide, việc nghiên cứu cách tổng thể cấu trúc polysaccharide cần thiết Hiện nay, hướng acetyl hóa) đến cấu trúc hoạt tính sinh học ulvan 3 4 Cấu trúc luận án: Luận án gồm 130 trang: Đặt vấn đề trang, acid glucuronic (GlcA), acid iduronic (IdoA) nhóm sulfate để Chương 1-Tổng quan 35 trang, Chương 2-Thực nghiệm 14 trang, tạo thành mạch polymer sinh học với disaccharide acid 3- Chương 3-Kết thảo luận 56 trang, Kết luận kiến nghị sulfate ulvanobiuronic dạng A ((β-D-GlcA-(1→4)-α-L-Rha3S-(→1)) trang, Danh mục công trình cơng bố trang, Tài liệu tham acid 3-sulfate ulvanobiuronic dạng B ((α-L-IdoA-(1→4)-α-L- khảo 18 trang, có 17 bảng biểu 58 hình ảnh đồ thị Rha3S (→1)) Tổng quan phương pháp nghiên cứu cấu trúc CHƯƠNG TỔNG QUAN Trong phần tổng quan, luận án giới thiệu chung rong biển, phân loài rong biển Việt Nam giới, thành phần dinh polysaccharide bao gồm: Phương pháp sắc ký thẩm thấu gel GPC, phương pháp phổ IR, phương pháp phổ NMR, phương pháp phổ MS, phương pháp tán xạ tia X góc nhỏ (SAXS) dưỡng ứng dụng rong biển, sulfate polysaccharide từ rong CHƯƠNG THỰC NGHIỆM biển tổng hợp tính chất hóa lý, phương pháp chiết tách, 2.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu thành phần, cấu trúc hoạt tính sinh học ulvan từ rong lục chi 2.1.1 Thu thập định danh rong Ulva, sau: Rong biển hay tảo bẹ hay cỏ biển sống hai Các mẫu rong lục dùng để chiết ulvan thu hái vùng biển môi trường nước mặn nước lợ, chia thành ngành bao Nha Trang, tỉnh Khánh Ḥòa, tháng 4/2014 gồm lồi rong lục Ulva gồm: rong đỏ (Rhodophyta), rong nâu (Phaeophyta) rong lục reticulata Ulva lactuca, định danh TS Lê Như Hậu (Viện (Chlorophyta) Rong biển chứa hàm lượng đạm cao, nhiều nghiên cứu ứng dụng cơng nghệ Nha trang) Tiêu mẫu khống chất, yếu tố vi lượng bật iodine, rong nghiên cứu lưu trữ Viện Nghiên cứu Ứng dụng vitamin (A, E, C, B12 B1) chất xơ Thành phần hóa học cơng nghệ Nha Trang Viện Hóa học với kí hiệu UR-14 (Ulva rong biển bao gồm lipid, protein, peptide, polysaccharide, carotenoid, reticulata) UL-14 (Ulva lactuca) hợp chất phenolic, alkaloid Trong đó, polysaccharide thành phần rong biển, có giá trị mặt kinh tế nhà khoa học quan tâm nghiên cứu nhiều cho mục đích y học Ulvan sulfate polysaccharide tan nước phân lập chủ yếu từ chi rong lục Ulva Enteromorpha thuộc họ Ulvaceae, biết đến hợp chất có nguồn gốc từ tự nhiên với nhiều hoạt tính sinh học quý báu điều chỉnh hệ miễn dịch, kháng viêm, chống oxy hóa, chống đơng tụ kháng vi sinh vật kiểm định Thành phần hóa học hoạt tính sinh học ulvan phụ thuộc lớn vào lồi rong, thời điểm thu hái, vị trí địa lý điều kiện xử lý sau thu hái Cấu trúc ulvan từ rong lục đa dạng không đồng nhất, tạo nên thành phần đường chủ yếu rhamnose (Rha), xylose (Xyl), acid 2.1.2 Phân tích thành phần hóa học rong Xác định độ ẩm, hàm lượng tro, protein thô, béo thô carbohydrate rong: Theo phương pháp Hiệp hội phân tích Mỹ AOAC 2.1.3 Chiết tách tinh chế ulvan từ rong lục Sau nghiên cứu tham khảo quy trình điều kiện chiết tách ulvan từ rong lục mà tác giả công bố, chúng tơi khảo sát đưa quy trình để chiết tách ulvan từ loại rong lục thu thập sau: 2.1.3.1 Quy trình chiết ulvan dung môi nước: Ngâm chiết 20g bột rong 400ml dung dịch nước nhiệt độ 80º-90ºC 2h Lọc lấy dịch chiết Bã rong chiết tiếp lần điều kiện Gộp dịch chiết lần, ly tâm lấy dịch trong, đối vào để tủa ulvan (Vcồn:Vdịch = 4:1) Gạn lọc ly tâm lấy tủa, qui định chung thử hoạt tính sinh học như: chuẩn bị mẫu thử, mẫu đối chứng, ghi đọc tính tốn kết 2.1.4.1 Hoạt tính gây độc tế bào rửa tủa nhiều lần cồn 96º Sấy tủa 60°C thu ulvan thô Ký Xác định hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư hiệu UR-N, UL-N với hiệu suất chiết tách tương ứng 8,3 6,5 (% thử nghiệm bao gồm: HepG2 (ung thư gan), MCF7 (ung thư vú) w) HeLa (ung thư cổ tử cung) Phép thử thực theo 2.1.3.2 Quy trình chiết dung mơi acid: phương pháp Monks sau đó, quay thể tích 100ml, thêm tiếp cồn tuyệt Ngâm chiết 20 g bột rong 400ml dung dịch acid HCl 0,05- 2.1.4.2 Hoạt tính chống đơng tụ máu Xác định hoạt tính chống đơng tụ máu theo phương pháp 0,1N nhiệt độ 90ºC 2h Lọc lấy dịch chiết Bã rong chiết tiếp lần điều kiện Gộp dịch chiết lần, trung hòa Anderson CS pH=7 ly tâm lấy dịch trong, sau quay thể tích 2.1.4.3 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 100ml, thêm cồn tuyệt đối vào để tủa ulvan (Vcồn:Vdịch = 4:1) Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định tiến hành theo phương Gạn lọc ly tâm lấy tủa, rửa tủa nhiều lần cồn 96º Sấy tủa pháp khuyếch tán đĩa thạch Viện Nghiên cứu Ứng dụng Công 60°C thu ulvan thô Ký hiệu UR-H, UL-H với hiệu suất chiết nghệ Nha trang theo phương pháp Vanden CS tách tương ứng 7,2 6,4 (% w) 2.1.4.4 Hoạt tính chống oxy hóa 2.1.3.3 Quy trình chiết ulvan dung mơi kiềm: Ngâm chiết 20g bột rong 400ml dung dịch kiềm NaOH 0,1N nhiệt độ 60ºC, thời gian 2h Lọc lấy dịch chiết Bã rong chiết tiếp lần điều kiện Gộp dịch chiết lần, trung hòa pH=7 ly tâm lấy dịch trong, sau quay thể tích 100ml Thêm cồn tuyệt đối vào để tủa ulvan (Vcồn:Vdịch = 4:1) Gạn lọc ly tâm lấy tủa, rửa tủa nhiều lần cồn 96º Sấy tủa 60°C thu ulvan thô Ký hiệu UR-K, UL-K với hiệu suất chiết tách tương ứng 5,1 4,1 (% w) Tinh chế ulvan: mẫu ulvan thơ hòa tan nước cất tinh chế màng thẩm tách MWCO 10000 (Da) hãng Thermo Scientific – USA vòi nước chảy 72h, kết tủa ulvan cồn tuyệt đối, ly tâm lấy tủa, rửa tủa nhiều lần cồn 96º, sấy tủa 60°C đến trọng lượng khơng đổi thu ulvan có độ cao 2.1.4 Đánh giá hoạt tính sinh học Các phép thử hoạt tính sinh học tiến hành thử nghiệm ulvan tự nhiên dẫn xuất Các phép thử tuân theo - Xác định hoạt tính oxy hóa tổng số theo phương pháp Prieto CS - Xác định khả khử sắt theo phương pháp Zhu CS 2.2 Xác định cấu trúc ulvan 2.2.1 Phân tích thành phần hóa học ulvan - Xác định hàm lượng sulfate: Hàm lượng sulfate phân tử ulvan xác định theo phương pháp Dodgson CS - Xác định hàm lượng acid uronic: Xác định phương pháp Bitter CS - Xác định thành phần đường: Xác định theo phương pháp Billan CS 2.2.2 Phương pháp sắc ký thẩm thấu gel (GPC) Khối lượng phân tử trung bình ulvan xác định GPC, máy HPLC Agilent 1100 Pha động 0,1N NaNO3, tốc độ dòng 1ml/phút Đầu dò RID150 2.2.3 Phương pháp phổ hồng ngoại IR Phổ hồng ngoại mẫu ulvan đo máy FT-IR Affinity-1S SHIMADZU vùng số sóng 4000-400cm-1 7 Bảng 3.1 Kết thành phần hóa học ulvan 2.2.4 Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR Mẫu nghiên cứu hòa tan dung mơi D2O đo Ulvan phổ NMR nhiệt độ 70ºC với chế độ đo khử tín hiệu nước, máy Bruker AVANCE 500MHz Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, DSS (4,4-dimethyl-4-silapentane1-sulfonic acid) dùng làm chất chuẩn nội 2.2.5 Phương pháp phổ khối lượng MS Phổ ESI-MS ghi thiết bị khối phổ LTQ Orbitrap XLTM, UR-N UR-H UR-K UL-N UL-H UL-K 1:1 Khí phun mù N2 với áp suất khí 30psi với tốc độ phun khí 650 lít/giờ nhiệt độ 1800C 2.2.6 Phương pháp tán xạ tia X góc nhỏ SAXS Vi Khuẩn Phương pháp tán xạ tia X góc nhỏ (SAXS) thực Gram (-) E coli Pseudomonas aeruginosa Vibrio haveyi Bacillus cereus Gram (+) Streptococcus faecalis Enterobacter cloace Staphylococcus aureus 2.2.7 Phương pháp hiển vi điện tử quét SEM Ảnh SEM chụp hệ thiết bị Nova NaNoSEM 450 – FEI Khoa Vật lý - Trường ĐH KHTN – Đại học Quốc gia Hà Nội Acid uronic (% khối lượng) 22,5 19,3 19,8 21,5 18,7 18,2 2.3 Sulfate hóa acetyl hóa mẫu ulvan tự nhiên - Dẫn xuất sulfate hóa: tổng hợp theo phương pháp Lihong Fan Man 0,01 0,01 0,03 0,01 0,01 0,01 UR-H UR-N UR-K UL-H UL-N ++ - ++ + ++ - - ++ + - +++ + ++ UR-H Nồng độ độ (µg/ml) HepG HeLa MCF7 (µg/ml) 0,00 0,00 0,00 100 Nồng ++ - 100 Nồng HepG HeLa MCF7 tính theo trọng lượng rong khô Kết phù hợp với nghiên cứu cơng bố lồi rong lục khác UL-K Đối chứng - +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ 0,00 0,00 0,00 20 42,26 50,30 44,72 20 50,34 36,29 48,74 70,18 69,05 76,84 84,22 83,05 89,66 0,8 83,24 90,44 85,45 0,8 94,90 96,44 95,91 IC50 49,10± 1,56 47,75± 2,37 50,69± 1,86 IC50 (µg/ml) 31,31± 1,56 34,75 ±1,38 36,37± 1,73 (µg/ml) Ellipticine độ (µg/m l) HepG hàm lượng sulfate mẫu ulvan thu dao động khoảng 13-19%, hàm lượng uronic acid lớn nằm khoảng 18-23% Glu 0,06 0,21 0,14 0,06 0,06 0,07 % tế bào sống sót UR-N tích thể tích theo Luis.A Kết thành phần hóa học ulvan Bảng 3.1 cho thấy, Xyl 0,06 0,11 0,14 0,07 0,10 0,09 tính Bảng 3.3 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào mẫu ulvan CS Xác định hàm lượng acetyl ulvan phương pháp phân 3.1.1 Kết xác định thành phần hóa học ulvan Gal 0,03 0,1 0,1 0,03 0,01 0,04 Các mẫu ulvan chiết kiềm UL-K UR-K hoạt - Dẫn xuất acetyl hóa: tổng hợp theo phương pháp Xiao-xiao Liu 3.1 Lựa chọn mẫu nghiên cứu Rha 1 1 1 3.1.2.2 Hoạt tính gây độc tế bào CS Xác định hàm lượng sulfate phương pháp khối lượng CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Thành phần monosaccharide ( % mol) 3.1.2 Kết khảo sát hoạt tính sinh học ulvan 3.1.2.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Bảng 3.2 Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định mẫu ulvan Thermo SCIENTIFIC kiểu ion hóa âm với dung mơi MeOH : H2O = BL19B2, SPring-8, Hyogo, Nhật Bản SO3Na (% khối lượng) 17,6 14,3 13,2 18,9 15,1 14,2 M HeLa CF -7 10 1,33 3,31 5,9 29,14 21,87 28, 86 UL-H Nồng UL-N Nồng độ 10 3.2.1 Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva reticulata (UR-H) độ (µg/ml) 100 HepG HeLa 0,00 0,00 MCF7 (µg/ml) 0,00 100 Phổ IR UR-H có dải hấp thụ 848 cm 761 cm-1: liên kết HepG HeLa 0,00 0,00 MCF7 0,4 50,21 55,34 48,67 20 60,67 66,24 58,71 71,46 73,58 79,45 78,13 77,0 67,89 C-O-S nhóm sulfate vị trí axial equatorial, tương ứng; băng sóng hấp thụ 1624 cm 1: dao động nhóm COO -1 0,08 0,8 92,42 94,26 95,53 0,8 89,30 88,0 87,41 IC50 IC50 40,74± 2,21 44,25± 2,32 50,93± 1,67 IC50 29,67± 2,87 36,33 ±3,84 25,09± 1,36 (µg/m (µg/ml) 48,89 0,00 20 (µg/ml) 49,42 48, 58 81,59 77,13 76, 92 0,50 0,34 0,4 l) 3.1.2.3 Hoạt tính chống oxy hóa acid -1 uronic, 1078 cm : C-O-C liên kết glycoside, 2927 cm : dao động hóa trị liên kết C-H, dải phổ rộng 3315 cm-1: dao động nhóm OH có liên kết hydro Phân tích phổ 1H-NMR, vùng anomeric xuất tín hiệu δ5,30; δ4,65 δ5,20 ppm gán A, B C Tín hiệu δ1,17 ppm: proton C-6 ứng với nhóm CH3 rhamnose, tín hiệu Bảng 3.4 Kết thử hoạt tính chống oxy hóa mẫu ulvan δ3,4-4,3 ppm proton vòng pyranose Trên phổ 13 C-NMR, Hoạt tính khử sắt (mg Hoạt tính chống oxy hóa tổng tín hiệu δ94–102 ppm carbon anomer, carbon lại Fe2+/g ulvan) số (mg AcidAscobic/g ulvan) vòng vùng δ72–80 ppm Tín hiệu với δ17,0 ppm đặc trưng UL-N 2,51 3,75 cho nhóm C-CH3 tín hiệu điển hình cho nhóm carboxyl uronic UL-H 1,93 2,60 acid với δ167 ppm Bốn tín hiệu δ63,39; 63,32; 63,12; 63,06 ppm UL-K 0,01 1,12 nhóm CH2 (C-6) galactose và/hoặc glucose và/hoặc CH2 (C- UR-N 4,86 3,96 5) xylose UR-H 1,34 2,56 Các proton từ H-1 đến H-6 A xác định từ phổ COSY, UR-K 0,22 0,86 carbon từ C-1 đến C-6 gán dựa vào phổ HSQC TT Mẫu Kết luận: Các mẫu chọn cho mục đích nghiên cứu cấu trúc là: - Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata (kí hiệu: UR-N) - Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva reticulata (kí hiệu: UR-H) - Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva lactuca (kí hiệu: UL-N) - Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva lactuca (kí hiệu: UL-H) (Hình 3.6) Tín hiệu vùng trường thấp C-2 (δ79-80 ppm), C-3 (δ75-77 ppm) C-4 (δ74-76 ppm) liên kết glycoside rhamnose ulvan UR-H (12,3,4) và/hoặc nhóm sulfate vị trí C-2, C-3 C-4 Kết khẳng định lần thông qua mối tương quan H-1(A) C-2(A), C-3(A), C-4(A) phổ HMBC (Hình 3.7) 3.2 Xác định cấu trúc ulvan Đối với gốc B, proton anomer H-1 phổ 1H-NMR với δ4,65 Kết xác định khối lượng phân tử trung bình Mw phân bố ppm, giá trị cộng hưởng đặc trưng cho proton anomer H Phân khối lượng phân tử Mw/Mn rằng, giống sulfate tích phổ HSQC cho thấy: C-1(B) δ98,39 ppm δ98,52 ppm có liên polysaccharide tự nhiên khác, ulvan polymer có độ phân tán cao với hệ với H-1(B) δ4,65 ppm Dựa vào tín hiệu H-1(B), phổ COSY Mw/Mn có giá trị từ 2,19 đến 5,16 khối lượng phân tử Mw từ HSQC tín hiệu δ3,2 ppm δ3,8 ppm gán cho 8,1x10 g/mol đến 3,47x10 g/mol tùy theo điều kiện chiết tách H-2(B) C-3 (B) tương ứng Tín hiệu C-2 acid uronic bị đẩy 11 12 vùng trường thấp, chứng tỏ C-2 carbon tham gia liên kết glycoside Phổ ESI-MS UR-H, xuất - disaccharide dạng - [RhaUroASO3] biểu qua peak ion mảnh [M-H] m/z 419 Các (Bảng 3.8) monosaccharide monosulfate rhamnose [RhaSO3]- acid uronic [UroA] cho peak m/z 243 m/z 195 tương ứng, peak có số khối m/z 503 ion mảnh [Rha3SO3]- Peak có m/z 339 gán cho ion mảnh [RhaUroA]- , ion mảnh m/z 401 [RhaUroASO3H2O]- Hình 3.6 Phổ HSQC UR-H Hình 3.7 Phổ HMBC UR-H Bảng 3.8 Kết phân tích phổ 1H 13C-NMR UR-H Monosaccharide C-1/H-1 C-2/H-2 C-3/H-3 C-4/H-4 C-5/H-5 C-6/H-6 A →2)--L-Rha →4)--L-Rha B →2)--D-GlcA 102-103 /5,30 79-80 /3,63 75-77 / 3,95 74-76 /3,85 75-76 /3,65 17-18 /1,17 98,52; 98,39 /4,65 94,70; 94,51 /5,20 77,0 /3,20 74,0 /3,75 74,0 / 3,85 - 167 77,5 /3,60 76,0 /3,95 74,0 /3,85 - 167 C →2)--L-IdoA Hình 3.9 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh [RhaSO3]- m/z 243 Hình 3.9 phổ ESI-MS/MS ion mảnh ứng với m/z 243 Peak m/z 183 nhóm sulfate vị trí C-4 mảnh với m/z 139 nhóm sulfate vị trí C-2 α-L-Rha Một peak có cường độ yếu tại m/z 169 ulvan bị sulfate hóa phần vị trí số rhamnose Vậy, ulvan chiết acid (UR-H) có rhamnose bị Đối với gốc C, proton anomer H-1 phổ 1H-NMR δ5,2 ppm sulfate vị trí: chủ yếu C-2 C-4, phần nhỏ C-3 Điều điển hình cho H Kết hợp phổ 1D 2D, gán H-1(C) phù hợp với thông tin thu qua phân tích phổ IR δ5,2 ppm ứng với C-1(C) δ94,51 ppm δ94,70 ppm Tương tự NMR vậy, gán H-2(C) δ3,6 ppm, C-2(C) δ77 ppm Kết hợp với việc phân tích phổ NMR trên, chúng tơi đưa cấu Tín hiệu C-2 acid uronic bị đẩy vùng trường thấp chứng tỏ trúc mạch ulvan chiết tách dung mơi acid từ rong lục C-2 carbon tham gia liên kết glycoside, liên kết glycoside Ulva reticulata Việt Nam [→2)--D-GlcA-(1→2)--L-Rha-(1→] C phân tử ulvan kiểu liên kết (12) (Bảng 3.8) [→2)--L-IdoA-(1→4)--L-Rha-(1→], phân nhánh vị trí C-2 Như vậy, kết phân tích phổ NMR, kết luận acid uronic Rha bị sulfate hóa vị trí C-2, C-3 C-4 Đây phân tử ulvan chiết acid từ rong lục Ulva reticulata cấu thành ulvan có cấu trúc ulvan cơng bố chưa loại disaccharide tạo thành chuỗi sau: [→2)--D-GlcA- thấy xuất liên kết (1→2) mạch (1→2)--L-Rha-(1→] 3.2.2 Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata (UR-N) [→2)--L-IdoA-(1→4)--L-Rha-(1→], phân nhánh vị trí C-2 acid uronic Rha bị sulfate hóa vị trí C-2, C-3 C-4 (Bảng 3.8) Cấu trúc hóa học mẫu ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata nghiên cứu phương pháp phổ IR, 13 14 NMR, MS mẫu UR-H Phổ IR UR-N cho dải 1 0,4-0,5 nm, điều cho thấy UR-N có mạch nhánh tương đối dài, giống fucoidan chiết tách từ loài rong nâu Kết nghiên 783cm Phân tích thơng tin thu từ phổ NMR cho kết cứu cấu trúc không gian phù hợp với cấu trúc hóa học xác Bảng 3.9 định theo phương pháp phổ IR, NMR ESI-MS -1 13 ulvan có cấu trúc mạch nhánh C-1/H-1 C-2/H-2 C-3/H-3 C-4/H-4 C-5/H-5 C-6/H-6 A →4)α-L-Rha3S 1→ B →2,4)β-D-GlcA 1→ 100,51/ 4,82 103,83/ 4,63 69,71/ 4,20 74,58/ 3,35 78,91/ 4,59 74,83/ 3,64 78,86/ 3,79 79,48/ 3,65 68,89/ 4,13 76,70/ 3,82 17,60/ 1,30 177,60 - Phổ ESI-MS UR-N xuất peak mảnh [M-H] m/z 419 - disaccharide dạng [RhaUroASO3] Monosulfate rhamnose [RhaSO3]- acid uronic [UroA]- cho peak m/z 243 m/z 195 tương ứng Phổ ESI-MS/MS ion mảnh với m/z 243 có peak ion mảnh với cường độ mạnh m/z 169 có mặt nhóm sulfate vị trí C-3 Như vậy, UR-N có rhamnose bị sulfate C-3 Điều phù hợp với thơng tin thu qua phân tích phổ IR NMR Từ việc phân tích phổ IR, NMR MS, chúng tơi kết luận cấu trúc mạch ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata Việt Nam có dạng A3s [→4-β-D-GlcA-(1→4)-α-L-Rha3S(1→] bị phân nhánh vị trí carbon C-2 acid glucuronic với nhóm sulfate vị trí C-3 Rha Cấu trúc không gian phân tử UR-N kích thước cỡ nano nghiên cứu phương pháp tán xạ tia X góc nhỏ (SAXS) Các biểu đồ Kratky [Hình 3.22 bên trái] Guinier [Hình 3.22 bên 7x10 -3 -3 Ulva reticulata Forsskål 1% in water in 0.5 M NaCl aq Ulva reticulata Forsskål 1% in water, Rgc=1.35nm in 0.5 M NaCl aq, Rgc=1.37nm -4 ln(qI(q)) Bảng 3.9 Kết phân tích phổ H C-NMR UR-N Monosaccharide q I(q) hấp thụ điển hình ulvan như: 1595cm , 1028cm , 844cm -5 -6 -7 -8 0 q, nm -1 q Hình 3.22 Kết đo SAXS từ dung dịch UR 1% nước NaCl 0,5 M: biểu đồ Kratky biểu đồ Guinier mẫu UR-N Phương pháp SAXS cung cấp thông tin cấu trúc không gian phân tử mà giúp đưa thơng tin chi tiết cấu trúc hóa học độ dài mạch nhánh phân bố mạch nhánh mạch Để làm điều này, mơ hình phân tử UR-N xây dựng dựa cấu trúc hóa học xác định phương pháp phổ, sau đó, đường tán xạ tính tồn từ mơ hình phân tử so sánh (fitting) với đường tán xạ thực nghiệm nhận từ phép đo SAXS Kết cho thấy mơ hình cấu trúc phân tử xây dựng với n = m =4 (Hình 3.24) biểu đồ tán xạ Kratky thu từ thực nghiệm SAXS tính tốn dựa mơ hình cấu trúc phân tử có độ trùng (fitting) tốt (Hình 3.25) phải] dung dịch 1% ulvan UR-N nước NaCl 0,5M có dạng đặc trưng cho phân tử có cấu trúc khơng gian dạng hình que (rod-like) Qua biểu đồ Kratky, cho thơng tin có mặt nhóm sulfate phân tử ulvan Từ biểu đồ Guinier bán kính từ hồi chuyển UR-N xác định Rgc = 1,35-1,37 nm, polysaccharide mạch thẳng không phân nhánh carrageenan hay heparin giá trị Rgc khoảng Hình 3.24 Mơ hình cấu trúc phân tử UR-N xây dựng dựa cấu trúc hóa học 15 16 Bảng 3.10 Kết phân tích phổ 1H 13C-NMR UL-N Hình 3.25 Biểu đồ Kratky với đường tán xạ từ thực nghiệm từ Monosaccharide C-1/H-1 C-2/H-2 C-3/H-3 C-4/H-4 C-5/H-5 C-6/H-6 A →2)-α-D-Xyl-(1→ 100,27/ 5,36 77,92 3,65 73,82/ 3,95 71,87/ 3,82 61,20/ 3,80; 3,88 - B →2,4)-α-L-Rha-(1→ 89,65; 101,50/ 4,90 79,21/ 4,06 71,74/  3,71 76,88/  3,82 68,40/  4,0 17,12/ 1,31 C →4)-α-L-Rha3S-(1→ 100,40/ 4,82 69,46/ 4,23 78,68/ 4,61 78,68/ 3,80 68,65/ 4,13 17,35/ 1,31 D →4)-β-D-GlcA-(1→ 103,65/ 4,64 74,40/ 3,35 74,58/ 3,65 79,40/ 3,68 76,88/ 3,81 177,76 mơ hình cấu trúc phân tử Kết phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân bao gồm: 1H 3.2.3 Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva lactuca (UL-N) 13 Phân tích phổ IR UL-N, cung cấp thơng tin có -1 mặt nhóm sulfate 845 cm 789 cm , dao động 1599 cm - nhóm COO acid uronic phân tử ulvan, dải hấp thụ 1026 cm đặc trưng cho liên kết glycoside C-O-C C-NMR, COSY, HSQC, HMBC ulvan UL-N tóm tắt Bảng 4.10 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh với m/z 243 thấy có hai peak ứng với m/z 183 m/z 169 đặc trưng cho có mặt nhóm sulfate vị trí carbon C-4 C-3 α-L-Rha tương ứng [UroA]- [RhaSO 3] - - [XylUroA] [XylRhaSO ][RhaUroA]- Hình 3.30 Phổ HSQC UL-N [UroARhaSO 3] - [Rha 3SO 3] - Hình 3.32 Phổ ESI-MS ulvan UL-N Hình 3.33 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh [RhaSO3]- với m/z 243 Kết từ việc phân tích phổ IR, NMR MS khẳng định rằng, ulvan chiết nước từ rong lục Ulva lactuca có cấu trúc mạch chủ yếu disaccharide dạng [→4)-β-D-GlcA-(1→4)-α-LRha3S-(1→] phân nhánh vị trí carbon C-2 rhamnose Ngồi ra, phân tử ulvan có lượng nhỏ disaccharide dạng liên kết GlcA-(12)-Xyl, GlcA-(12)-Rha Như vậy, ulvan chiết nước từ rong lục Ulva lactuca Việt Nam mà chúng tơi nghiên cứu có cấu trúc hóa học giống với kết nghiên cứu trước mạch Hình 3.31 Phổ HMBC UL-N khác mạch nhánh đa dạng mạch phụ 17 18 3.2.4 Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva lactuca (UL-H) Phổ IR UL-H có dao động đặc trưng ulvan với tín hiệu 850 cm 786 cm-1 dao động liên kết C-O-S nhóm sulfate vị trí axial equatorial, tương ứng Dải hấp thụ 1014 cm đặc trưng cho liên kết C-O chứa O-H Tín hiệu dao động 1599 cm dao động nhóm COO acid uronic Từ kết phân tích phổ cộng hưởng từ NMR bao gồm: H 13C-NMR, COSY, HSQC, HMBC ulvan UL-N (Bảng 3.11), chúng tơi kết luận ulvan chiết acid từ rong lục Ulva lactuca có cấu trúc tạo thành từ disaccharide, tạo thành chuỗi [→4)-βD-GlcA-(1→4)-α-L-Rha3S-(1→] phân nhánh vị trí C-3 rhamnose So sánh với nghiên cứu trước ulvan từ rong lục Ulva lactuca cho thấy phương pháp chiết tách khác nhau, ulvan thu có thành phần mạch giống nhau, chúng khác mạch nhánh Hình 3.39 Phổ ESI-MS/MS ion mảnh [RhaSO3]- với m/z 243 Trên phổ ESI-MS ulvan xuất mảnh khối disaccharide [RhaUroASO3]- m/z 419 Các monosaccharide monosulfate rhamnose [RhaSO3]- acid uronic [UroA] cho peak m/z 243 m/z 195 tương ứng Phổ ESI-MS/MS disaccharide với m/z 243 đưa Hình 3.35, phổ, có peak ion mảnh với cường độ mạnh m/z 169 nhóm sulfate vị trí C-3 Rha Một paek có cường độ yếu tại m/z 139 ulvan bị sulfate hóa phần vị trí số rhamnose Như vậy, UL-H có rhamnose bị sulfate vị trí: chủ yếu vị trí carbon C-3 phần nhỏ vị trí carbon C-2 Điều phù hợp với thơng tin thu qua phân tích phổ IR NMR Vậy UL-H có cấu trúc chuỗi disaccharide chủ yếu dạng [→4)β-D- Hình 3.37 Phổ HSQC UL-H Hình 3.38 Phổ HMBC UL-H Bảng 3.11 Kết phân tích phổ 1H 13C-NMR UL-H GlcA-(1→4)α-L-Rha3S-(1→] phân nhánh vị trí C-3 rhamnose 3.3 Khảo sát ảnh hưởng sulfate hóa acetyl hóa đến hoạt tính sinh học ulvan Monosaccharide C-1/H-1 C-2/H-2 C-3/H-3 C-4/H-4 C-5/H-5 C-6/H-6 D 102,45/ 71,62/ 80,80/ 80,70/ 70,79/ ~19,56/ 4)-L-Rha3S 1 4,82 4,22 4,58 3,78 4,11 ~1,3 E 105,69/ 76,44/ 76,72/ 81,52/ 78,49/ hoạt tính chống đơng tụ máu Mặt khác, acetyl hóa làm 1)-D-GlcA 4 4,65 3,35 3,60 3,65 3,86 tăng hoạt tính chống oxi hóa kháng vi sinh vật kiểm định D’ ~103,6/ 71,62/ 81,34/ ~74,10/ ~73,2/ ~19,48/ chúng Nhằm mục đích tìm hiểu thay đổi cấu trúc hoạt 1)-L-Rha 3(4) 4,89 4,22 4,05 3,86 3,71 ~1,29 tính sinh học ulvan chúng bị sulfate hóa acetyl hóa Các nghiên cứu trước cho thấy nhóm sulfate yếu tố cấu trúc có ảnh hưởng lớn đến hoạt tính sinh học sulfate polysaccharide 19 20 điều chế dẫn xuất sulfate hóa acetyl hóa mẫu Đánh giá mối quan hệ cấu trúc-hoạt tính chống đơng tụ máu ulvan tự nhiên, cụ thể mẫu UR-N Chúng thử hoạt tính gây độc tế bào, chống oxy hóa, kháng vi sinh vật kiểm định chống đơng tụ máu mẫu UR-S giống 3.3.1 Ảnh hưởng sulfate hóa Phổ IR 13 C- HSQC - NMR sử dụng để kiểm tra thay đổi cấu trúc mẫu sulfate hóa UR-S Kết phân tích phổ mẫu UR-S cho thấy, phổ IR có -1 thử với mẫu UR-N Kết cho thấy khơng có thay đổi đáng kể hoạt tính gây độc tế bào, chống oxy hóa, kháng vi sinh vật kiểm định hoạt tính chống đơng tụ máu tăng lên đáng kể tăng cường độ hấp thụ tín hiệu ~850 cm đặc trưng cho nhóm Với mục đích tìm hiểu ảnh hưởng mức độ sulfate hóa đến sulfate vị trí axial, đồng thời có giảm cường độ hấp thụ tín hoạt tính chống đơng tụ máu, dẫn xuất UR-S với mức độ sulfate -1 hiệu ~3261-3370 cm đặc trưng cho dao động nhóm OH; Ở 13 hóa khác điều chế tiến hành đánh giá hoạt tính phổ C-NMR xuất tín hiệu δ77,2 ppm carbon C-2 chống đông tụ máu phần Thực nghiệm Kết rhamnose, chứng tỏ mẫu UR-S bị sulfate hóa vị trí C-2 thử hoạt tính chống đơng tụ máu UR-N UR-S với mức độ rhamnose; Phổ HSQC UR-S xuất số tín hiệu dịch sulfate hóa khác đưa Bảng 3.12, thuốc dùng chuyển phía trường thấp so với phổ HSQC UR-N (Hình làm chất đối chứng Aspirin 3.42), tín hiệu tương tác C-1/H-1 rhamnose bị tách ra; đồng thời Bảng 3.12 Kết thử hoạt tính chống đơng tụ máu UR-N UR-S có hai tín hiệu xuất hiện, thể tương tác C-2/H2 với δ80,0/3,38 ppm C-3/H3 δ76,5/3,67 ppm glucuronic acid, C-2 Tên mẫu UR-N UR-S1 UR-S2 UR-S3 UR-S4 UR-S5 rhamnose có cường độ tín hiệu tăng lên Vậy vị trí gồm DS (%) 17,60 21,25 25,68 30,42 33,21 35,96 carbon C-2 rhamnose carbon C-2, C-3 glucuronic acid Thời gian đông tụ máu (phút) 10 25 40 45 30 37 bị sulfate hóa phần Như vậy, kết phân tích phổ NMR phù hợp với kết phổ IR nghiên cứu trước Kết phân tích phổ khẳng định tăng mức độ sulfate hóa mẫu UR-S Aspirin Kết thử hoạt tính chống đơng tụ máu UR-N dẫn xuất sulfate hóa cho thấy, khả chống đơng tụ máu Dưới kính hiển vi điện tử quét (SEM), có khác rõ ràng mẫu ulvan sulfate tăng lên đáng kể so với ulvan tự nhiên, nhiên cấu trúc bề mặt mẫu UR-N UR-S Các phân tử UR-N tạo khơng thấy có phụ thuộc có quy luật khả chống thành khối có cấu trúc bề mặt phẳng UR-S dường tạo đông tụ máu vào hàm lượng sulfate Kết giải thích thành khối tinh thể nhỏ có hình dạng xác định rằng, có yếu tố khác liên quan đến khả chống đông tụ máu ulvan khối lượng phân tử, vị trí nhóm sulfate…Các nghiên cứu trước hoạt tính chống đơng tụ máu polysaccharide tăng lên sulfate hóa có tăng nhóm mang điện tích âm nhóm liên kết với nhóm mang điện tích dương chất ức chế đơng tụ máu làm tăng hoạt tính chống đơng tụ máu Hình 3.42 Phổ HSQC UR-N (a) UR-S (b) 48 21 22 3.3.2 Ảnh hưởng acetyl hóa KẾT LUẬN Sự thay đổi cấu trúc UR-N sau acetyl hóa kiểm tra phổ 1H-NMR 13C-NMR Qua thời gian nghiên cứu thu kết sau: Đã chiết tách mẫu ulvan từ loài rong lục Ulva lactuca Ulva reticulata thu thập vùng biển Nha Trang - Khánh Hòa quy trình chiết tách sử dụng dung môi acid, kiềm nước; Đã xác định thành phần hóa học đánh giá hoạt tính sinh học chúng Kết cho thấy thành phần hóa học hoạt tính sinh học ulvan khác phụ thuộc quy trình chiết tách, ulvan chiết nước có hàm lượng sulfate, acid uronic rhamnose cao cho hoạt tính sinh học tốt Bằng cách kết hợp phương pháp vật lý GPC, IR, NMR MS nghiên cứu thành công cấu trúc hóa học mẫu ulvan Hình 3.44 Phổ 1H-NMR a) 13C-NMR b) UR-Ac chiết tách được, cụ thể sau: - Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva reticulata Phổ 1H- NMR 13C-NMR UR-Ac đưa Hình 3.44, ta thấy phổ 1H-NMR UR-Ac xuất peak độ chuyển dịch hóa học δ2,007 ppm phổ 13C-NMR có peak δ22,5 ppm, thể có mặt nhóm acetyl O-CH3 Như vậy, phổ NMR, chúng tơi khẳng định mẫu UR-N bị acetyl hóa Nhóm sulfate vị trí carbon C-2, C-3 C-4 Rha Ảnh SEM thể khác rõ ràng cấu trúc bề Đây ulvan có cấu trúc mới, đa số ulvan có liên mặt mẫu UR-N UR-Ac Cấu trúc bề mặt phẳng kết 1→4 mạch chính, ulvan tồn liên kết 1→2 UR-N trở nên xốp với nhiều lỗ hốc rỗng lớn mạch Đánh giá mối quan hệ cấu trúc-hoạt tính chống oxy hóa: - Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata Chúng thử hoạt tính gây độc tế bào, chống oxy hóa, kháng vi sinh vật kiểm định chống đông tụ máu mẫu UR-Ac giống thử với mầu UR-N Kết cho thấy khơng có thay ðổi ðáng kể hoạt tính Điều lý giải bị acetyl hóa, ulvan gắn thêm nhóm acetyl nhóm khơng ưa nước, làm phân tử ulvan khó tan nước không thuận lợi cho phản ứng sinh hóa xảy Nhóm sulfate vị trí C-3 Rha - Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva lactuca 23 24 Nhóm sulfate vị trí carbon C-3 Rha - Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva lactuca KIẾN NGHỊ Cấu trúc hóa học ulvan nói riêng polysaccharide nói chung phức tạp, rõ ràng có mối liên hệ cấu trúc ulvan hoạt tính sinh học chúng, mối quan hệ chưa làm sáng tỏ Đây vấn đề nghiên cứu bản, hấp dẫn không Việt Nam mà giới nên cần tiếp tục nghiên cứu Nhóm sulfate vị trí carbon C-3 C-4 Rha thời gian tới Các kết nghiên cứu lần cho phép khẳng định phụ thuộc cấu trúc ulvan vào vị trí địa lý nơi rong sinh trưởng Ngồi chi Ulva, Việt Nam có chi rong lục khác có phương pháp chiết tách chúng từ rong đặc điểm cấu trúc riêng biệt với hoạt tính sinh học phong phú Bằng phương pháp tán xạ tia X góc nhỏ SAXS xác định khác cần tiếp tục nghiên cứu để sử dụng nguồn ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata UR-N có cấu trúc rong biển cách hiệu khơng gian dạng hình que với mạch nhánh dài Đã xây dựng mơ hình phân tử UR-N dựa cấu trúc hóa học Bằng cách so sánh đường tán xạ tính tốn từ mơ hình cấu trúc phân tử với thực nghiệm phép đo SAXS, cấu trúc hóa học UR-N khẳng định Đây phương pháp góp phần giải khó khăn việc nghiên cứu polymer tự nhiên có cấu trúc phức tạp Đã khảo sát ảnh hưởng biến tính hóa học đến cấu trúc bề mặt hoạt tính sinh học ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata Kết cho thấy:  Sự sulfate hóa làm thay đổi cấu trúc bề mặt ulvan khơng làm tăng hoạt tính gây độc tế bào, hoạt tính chống oxy hóa kháng vi sinh vật kiểm định làm tăng đáng kể hoạt tính chống đơng tụ máu tăng khơng tỷ lệ với mức độ sulfate hóa  Sự acetyl hóa làm ảnh hưởng nhiều đến cấu trúc bề mặt khơng làm tăng hoạt tính sinh học thử nghiệm ulvan NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN Đã sử dụng kết hợp phương pháp vật lý đại nghiên cứu cấu trúc polymer bao gồm GPC, phổ IR, NMR, ESI-MS, tán xạ tia X góc nhỏ SAXS để nghiên cứu cấu trúc bao gồm cấu trúc hóa học cấu trúc không gian sulfate polysaccharide từ rong lục thu thập vùng biển Nha Trang – Khánh Hòa Việt Nam Đã phát dạng cấu trúc ulvan so với nghiên cứu công bố giới Đã xây dựng mơ hình cấu trúc phân tử ulvan dựa cấu trúc hóa học so sánh đường tán xạ tính tốn từ mơ hình cấu trúc phân tử với thực nghiệm phép đo SAXS để khẳng định lại cấu trúc hóa học Đây phương pháp góp phần giải khó khăn việc nghiên cứu polymer tự nhiên có cấu trúc phức tạp Bước đầu nghiên cứu mối quan hệ cấu trúc- hoạt tính ulvan Đây hướng nghiên cứu so với nghiên cứu lĩnh vực nước DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 10 Q.T.M Thu, Đ.V Lương, T.T.T Vân, B.M Lý T.T.T Thủy (2014) Ulvan từ rong lục ulva reticulata: chiết tách, thành phần hóa học hoạt tính sinh học Tạp chí Hóa học, 52 (6A), 158-162 Q.T.M Thu, N.T Nu, Đ.V Luong, B.M Ly, T.T.T Van and T.T.T Thuy (2015) Structural characterization of ulvan from green seaweed Ulva reticulata Vietnam Journal of Chemistry, 53 (6e1,2), 386-390 Q.T.M Thu, T.H Bang, N.T Nu, Đ.V Luong, B.M Ly, T.T.T Van and T.T.T Thuy (2015) Structural Determination of Ulvan from Green Seaweed Ulva reticulata Collected at Central Coast of Vietnam Chemistry Letters, 44 (6), 788-790 T.T.T Thuy, Q.T.M Thu, T.T.T Van, D.V Luong and N.T Tai (2015) Ulvan from green seaweed Ulva reticulata: Extraction and structure The 13th Japan – Vietnam Joint Seminar, 29-30 October 2015 Kyoto, Japan, 23 T.T.T Thuy, T.M.T Quach, T.N Nguyen, D.Vu Luong, B.M Ly and T.T.V Tran (2016) Structure and cytotoxic activity of ulvan extracted from green seaweed Ulva lactuca International Journal of Biological Macromolecules 93, 695-703 T.T.T Thuy, Q.T.M Thu, N.T Nu, D.V Luong, N.T Tai, T.T.T Van (2016) Structure and biological activity of sulfated polysaccharide extracted from green seaweed Ulva lactuca The 14th Japan-Vietnam Joint Seminar, Hanoi 22th September 2016, 21 Q.T.M Thu, N.T Nụ, Đ.V Lương, N.T Tài, T.H Bằng, T.T.T Vân, H.Đ Cường, T.T.T Thủy (2016) Nghiên cứu cấu trúc hoạt tính chống oxy hóa ulvan chiết tách từ rong lục Ulva lactuca Tạp chí Hóa học, 54 (6e2), 75-78 Q.T.M Thu, Đ.V Luong, N.T Nu, T.T.T Van, B.M Ly and T.T.T Thuy (2016) Effect of sulfation on the structure and anticoagulant activity of ulvan extracted from green seaweed Ulva reticulata Vietnam Journal of Science and Technology, 54 (2C), 373-379 Thanh T T T, Quach T M T, Nguyen T N, Dang V L, Tran T T V, Bui M L (2017) Structure and cytotoxicity of the green seaweed originated ulvan The 17th Asian Chemical Congress, 23-28 July 2017 Melbourne Australia, 332 T.T.V Tran, H.B Truong, N.H.V Tran, T.M.T Quach, T.N Nguyen, M.L Bui, Yoshiaki Yuguchi & T.T.T Thanh (2017) Structure, conformation in aqueous solution and antimicrobial activity of ulvan extracted from green seaweed Ulva reticulata Natural Product Research, DOI: 10.1080/14786419.2017.1408098  ... cứu " Nghiên cứu cấu trúc ulvan có hoạt tính sinh học từ rong lục Ulva lactuca Rong lục biết đến nguồn nguyên liệu để tách chiết Ulva reticulata , để nghiên cứu cấu trúc ulvan- một chất có hoạt. .. đích nghiên cứu cấu trúc là: - Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva reticulata (kí hiệu: UR-N) - Ulvan chiết acid từ rong lục Ulva reticulata (kí hiệu: UR-H) - Ulvan chiết nước từ rong lục Ulva lactuca. .. đòi lactuca - Nghiên cứu thành phần hóa học khảo sát hoạt tính sinh học ulvan chiết tách từ lồi rong lục hỏi phải có kết hợp cách hợp lý nhiều phương pháp Mặt - Nghiên cứu cấu trúc ulvan có hoạt