U nguyên bào thần kinh (NBTK) là u đặc ác tính thường gặp ở trẻ em. Việc nghiên cứu phân loại mô học theo phân loại u NBTK quốc tế và biểu hiện gen MYCN trong u có ý nghĩa quan trọng trong chẩn đoán, tiên lượng và điều trị bệnh. Bài viết trình bày đánh giá mối liên quan giữa đặc điểm phân loại mô học với kiểu biểu hiện gen MYCN trên U nguyên bào thần kinh.
phần nghiên cứu MỐI LIÊN QUAN GIỮA PHÂN LOẠI TYP MÔ BỆNH HỌC VỚI KIỂU BIỂU HIỆN GEN MYCN TRÊN 139 TRƯỜNG HỢP U NGUYÊN BÀO THẦN KINH TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG Hồng Ngọc Thạch*; Vũ Đình Quang*; Phó Hồng Điệp*; Trần Văn Hợp** * Bệnh viện Nhi Trung ương; ** Bộ môn GPB, Đại học Y Hà Nội Tóm tắt U nguyên thần kinh (NBTK) u đặc ác tính thường gặp trẻ em Việc nghiên cứu phân loại mô học theo phân loại u NBTK quốc tế biểu gen MYCN u có ý nghĩa quan trọng chẩn đốn, tiên lượng điều trị bệnh Mục tiêu: Đánh giá mối liên quan đặc điểm phân loại mô học với kiểu biểu gen MYCN U nguyên thần kinh Đối tượng: 139 trường hợp U NBTK chẩn đốn phân tích gen MYCN Bệnh viện Nhi Trung ương Phương pháp: Mô tả cắt ngang Kết quả: Hầu hết u NBTK xuất trước tuổi (93,5%) phần lớn u (87%) thuộc typ u NBTK nghèo mô đệm Schwann Khuếch đại gen MYCN biểu 20,9% trường hợp bệnh, u NBTK nghèo mô đệm Schwann Biểu khuếch đại gen MYCN khơng có khác biệt giới Kết luận: U NBTK phức tạp, cần phân loại mô học phân tích gen trung tâm đủ điều kiện để có chẩn đốn tốt cho bệnh nhân Từ khóa: U nguyên thần kinh, khuếch đại MYCN ABSTRACT THE RELATION BETWEEN HISTOLOGICAL TYPES AND MYCN GENE EXPRESSION ON 139 NEUROBLATOMA CASES IN NATIONAL CHILDREN’S HOSPITAL Neuroblastoma is the frequent malignant solid tumour in children Applying International Neuroblastoma Pathology Classification and study MYCN gene expression state plays an important role in diagnosis, prognosis and treatment Objective: Evaluate the relation between histologic classification and MYCN gene status of neuroblastoma Subject: 139 neuroblastoma cases that were diagnosed and analysed for MYCN gene in National children’s hospital Method: Descriptive sectional study Result: Large propotion of neuroblastomas (93,5%) occur under yeaars of age, almost cases (87%) are Neuroblastoma schwanian stroma poor MYCN aplification expression in 20,9% of cases and all of those presented in Neuroblastoma schwanian stroma poor There was no different in sex of MYCN amplification status Conclusion: Neuroblastoma is a complexity solid tumour, it is need to had histologycal classification and genetic analysis for MYCN status in eligible centre to bring good treatment result for pateint Keywords: Neuroblastoma, MYCN amplification Nhận bài: 25-8-2017; Thẩm định: 20-9-2017 Người chịu trách nhiệm chính: Hồng Ngọc Thạch Địa chỉ: Bệnh viện Nhi Trung ương 65 tạp chí nhi khoa 2017, 10, Đặt vấn đề U NBTK u hệ thần kinh (TK) giao cảm có nguồn gốc từ tế bào thần kinh nguyên thủy mào thần kinh U thấy vị trí chứa mơ thần kinh giao cảm gồm tủy thượng thận, hệ thống hạch thần kinh giao cảm cạnh sống Phần lớn u NBTK (90%) chẩn đoán trẻ tuổi, nguyên nhân tử vong 15% trẻ ung thư nói chung Hàng năm có vào khoảng 30 – 40 trẻ chẩn đoán điều trị u NBTK Bệnh viện Nhi Trung ương Tỷ lệ tử vong chung trường hợp u NBTK điều trị thống kê sau năm lên tới 60% [1] U NBTK có biểu lâm sàng đa dạng, tự thối triển, biệt hóa lành tính, tiến triển ác tính mạnh, số typ mơ học u có độ ác tính cao, đáp ứng với điều trị [1] Các nghiên cứu gần khác biệt độ ác tính có liên quan đến đặc điểm sinh học phân tử khối u gồm biến đổi NST gen dự báo độ ác tính tiến triển u, đặc biệt khuyếch đại gen MYCN có tiên lượng xấu [3] Tại Việt Nam, nghiên cứu u NBTK cịn ít, đặc biệt nghiên cứu phân loại mô bệnh học u NBTK đặc điểm biểu biến đổi gen u NBTK Vì nghiên cứu tiến hành nhằm mục tiêu: Đánh giá mối liên quan đặc điểm phân loại mô học với kiểu biểu gen MYCN U nguyên thần kinh Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Tất bệnh nhận sinh thiết cắt u Bệnh viện Nhi Trung ương có chẩn đoán giải phẫu bệnh u NBTK làm phân tích gen MYCN 2.2 Phương pháp nghiên cứu 66 - Thiết kế nghiên cứu: Hồi cứu tiến cứu, mơ tả cắt ngang - Chọn mẫu tiện ích - Các phương pháp kỹ thuật nghiên cứu + Hồi cứu 76 trường hơp từ 2010 – 2012; Tiến cứu 63 trường hợp từ 2013 – 2014 Tổng số 139 trường hợp + Kỹ thuật mô học: Mẫu sinh thiết cắt 3-4 milimet, cố định, chuyển đúc, cắt nhuộm H-E (Hematoxylin - Eosin) theo quy trình thường quy, đọc kính hiển vi quang học Những trường hợp khó nhuộm thêm hố mơ miễn dịch để chẩn đốn xác định Phân loại mô bệnh học theo phân loại u NBTK quốc tế 2003 [4] + Nghiên cứu biểu gen MYCN: Áp dụng kỹ thuật lai huỳnh quanh chỗ (FISH), thực khoa Di truyền Sinh học phân tử, Bệnh viện Nhi Trung ương Sử dụng đầu dò đặc hiệu màu LSI N-MYC (2p24) phổ xanh phổ da cam: màu xanh đánh dấu vào vị trí gen MYCN (2p24), màu đỏ da cam đánh dấu vào tâm động NST số Khơng có khuếch đại gen, MYCN (-): tế bào có tín hiệu xanh Khuếch đại gen, MYCN (+): số tín hiệu xanh nằm rải rác tập trung thành cụm lớn, xác định số tín hiệu ≥ 10 2.3 Xử lý số liệu Xử lý số liệu theo phương pháp thống kê y học, sử dụng phần mềm SPSS 16.0 Kết 3.1 Một số đặc điểm tuổi giới Tổng số trường hợp: 139 - Giới: Nam: 73 (53%); Nữ: 66 (47%); Nam/Nữ: 1,1/1 - Tuổi: Lớn nhất: 11 tuổi; Nhỏ nhất: ngày; Trung bình: 26 tháng Tỷ lệ mắc bệnh tuổi: 37,4%; tuổi: 93,5%; tuổi: 98,6% 3.2 Phân loại mô học U NBTK kiểu biểu gen MYCN phần nghiên cứu 3.2.1 Phân loại mô học Bảng Phân bố bệnh theo typ mô học Typ mô học Số lượng Tỷ lệ % 121 87,1 U hạch NBTK thể nốt 6,5 U hạch NBTK thể hỗn hợp 4,3 U hạch thần kinh 2,2 139 100% U NBTK (nghèo mô đệm Schwann) Tổng số Nhận xét: U NBTK (nghèo mô đệm Schwan) typ có tỷ lệ cao chiếm 87% trường hợp 3.2.2 Biểu gen MYCN MYCN (+): 29 trường hợp (20,9%); MYCN (-): 110 trường hợp (79,1%) Bảng Liên quan biểu gen MYCN với typ mô học Typ mô học MYCN (-) MYCN (+) Số lượng 92 (76%) 29 (24%) 121 (100%) U hạch NBTK, nốt 9 U hạch NBTK, hỗn hợp 6 U hạch TK 3 110 29 139 U NBTK (nghèo mô đệm Schwann) Tổng số Nhận xét: Tất trường hơp MYCN (+) thấy xuất typ U NBTK nghèo mô đệm Schwann, tỷ lệ xuất MYCN (+) nhóm 24% (p0,05) Bàn luận 4.1 Đặc điểm phân bố bệnh theo tuổi giới Tỷ lệ mắc bệnh có thay đổi theo lứa tuối Trong nghiên cứu này, tỷ lệ phát bệnh nhóm trẻ tuổi chiếm 37,4%, tuổi 93,5% tuổi 98,6% Kết cao kết nghiên cứu Phùng Tuyết Lan với tỷ lệ mắc bệnh trẻ tuổi 23,7%, tuổi 85,6% tuổi 93,8% [1] Tuy nhiên đặc điểm chung nghiên cứu hầu hết trẻ mắc U NBTK độ tuổi thấp tuổi, gặp sau 10 tuổi Kết nghiên cứu phù hợp với tác giả Berstein với tỷ lệ trẻ bệnh tuổi 38% tuổi 95% [5] Tuổi trung bình vào viện 26 tháng, nhỏ ngày, theo nghiên cứu Stiller, tuổi trung bình mắc bệnh 23 tháng [6] U NBTK gặp trẻ trai nhiều trẻ gái Trong nghiên cứu tỷ lệ Nam/nữ 1,1/1 Một số nghiên cứu khác có tỷ lệ nam nhiều nữ, tỷ lệ nghiên cứu Berstein 1,2/1 [5] 67 tạp chí nhi khoa 2017, 10, 4.2 Đặc điểm phân loại mô học biểu gen MYCN 4.2.1 Đặc điểm phân loại u theo typ mô học U nguyên bào thần kinh nghèo mơ đệm Schwann nhóm có biến đổi phức tạp, khả tiến triển ác tính mạnh đặc trưng u, typ có tỷ lệ cao chiếm 87,1% (bảng 1) Ba typ lại có tỷ lệ thấp khơng vượt qua 7%, u Hạch NBTK thể hỗn hợp u hạch TK typ có độ biệt hóa cao mang đặc điểm u lành tính Tỷ lệ khơng có nhiều khác biệt so với nghiên cứu Shimada cộng sự, u NBTK nghèo mơ đệm Schwann có tỷ lệ 84,5%; U hạch NBTK thể nốt 10,2%; u hạch NBTK thể hỗn hợp 4,0%; u hạch TK 1,3% [7] Điều cho thấy trường hợp U NBTK có khả biệt hóa trưởng thành có tỷ lệ khơng cao, phần lớn trường hợp độ biệt hóa thấp tiến triển phức tạp Đây đặc điểm hướng nhà nghiên cứu sâu tìm hiểu thêm trình biệt hóa u làm cho chúng biệt hóa chí thối triển thay phải điều trị hóa chất, xạ trị phức tạp nhiều biến chứng cho bệnh nhân U NBTK nghèo mơ đệm Schwann có ba typ khơng biệt hóa; Ít biệt hóa; Đang biệt hóa, u NBTK khơng biệt hóa khó chẩn đốn nhất, thường phải kết hợp nhuộm hóa mơ miễn dịch để chẩn đoán xác định Các trường hợp có tiên lượng tiên lượng khơng thuận lợi Typ u Hạch NBTK thể nốt có tỷ lệ không cao INPC trọng, lý mà INPC phải sửa đổi phân loại tiên lượng vào năm 2003 [4],[8] u chứa đựng nhiều thành phần mức độ biệt hóa khác nhau, đặc biệt nốt chứa thành phần u NBTK nghèo mô đệm Schwann 4.2.2 Đặc điểm biểu gen MYCN Gen MYCN biểu trạng thái: có khuếch đại khơng khuếch đại Đây oncogene thuộc vùng 24, cánh ngắn, NST số (2p24) gen phát tăng số lượng 25% - 30% trường hợp u NBTK Với u NBTK giai đoạn giai đoạn 4, khuếch đại gen MYCN có tỷ lệ 30% - 40% Tuy nhiên khuếch đại gen biểu 5% u khu trú hay u NBTK giai đoạn 4S Các u NBTK có khuếch đại đại gen MYCN 68 thường có biểu lâm sàng ác tính mạnh, nhóm u khơng thuận lợi [9],[10] Giá trị tiên lượng khuếch đại gen MYCN chí xếp không thuận lợi trường hợp u NBTK khu trú phẫu thuật cắt bỏ hoàn toàn và trường hợp u NBTK giai đoạn 4S Khuếch gen MYCN coi yếu tố tiên lượng mạnh u NBTK Trong nghiên cứu chúng tôi, tỷ lệ khuếch đại gen MYCN 20,9% (24% nhóm u NBTK nghèo mơ đệm Schwann) Tỷ lệ thấp so với kết hai tác giả Brauder [9] Maris [10] nêu Phải quần thể u NBTK Việt Nam có khác biệt?, điều cần tiếp tục nghiên cứu tìm hiểu thêm Một điều đáng ý tất 29 trường hợp khuếch đại gen MYCN thuộc typ u NBTK nghèo mô đệm Schwann (bảng 2), điều đóng góp thêm cho vai trị quan trọng tiên lượng bệnh MYCN phân loại mô học Mặc dù trường hợp u hạch NBTK thể nốt hồn tồn có khả biểu khuếch đại gen MYCN tồn nốt NBTK nghèo mô đệm Schwann, nghiên cứu khơng có biểu khuếch đại, lượng mẫu nhỏ U hạch NBTK thể hỗn hợp u hạch TK typ biệt hóa cao biệt hóa trưởng thành hồn tồn, giải thích MYCN khơng có khuếch đại Các típ có tiên lượng tốt, điều trị cần phẫu thuật u đơn Biểu gen MYCN nhiều khác biệt theo giới, chênh lệch nam nữ ít, khơng có ý nghĩa thống kê với tỷ lệ biểu có khơng khuếch đại gen nam nữ tương đương 50% (bảng 3) Kết luận - Hầu hết u NBTK xuất trước tuổi (93,5%), có chênh lệch giới với tỷ lệ Nam/ nữ ≈ 1,1/1 - Phần lớn u NBTK thuộc typ mô học u NBTK nghèo mơ đệm Schwann (87%) Ba typ u cịn lại có tỷ lệ thấp 6,5%, có đặc điểm mơ học biệt hóa so với u NBTK nghèo mô đệm Schwann phần nghiên cứu - Khuếch đại gen MYCN có tỷ lệ 20,9 thấy typ u NBTK nghèo mô đệm Schwann Biểu gen MYCN u NBTK khơng có khác biệt giới TÀI LIỆU THAM KHẢO Phùng Tuyết Lan Nghiên cứu phân loại nhận xét kết điều trị u nguyên bào thần kinh trẻ em Bệnh viện Nhi Trung ương (2002 2006) Luận án tiến sĩ y học, chuyên ngành Nhi khoa, 2007, mã số 3.01.43 Brodeur G.M, Maris J.M Neuroblastoma, Principles and pratice of Paeditrics Oncology Philip A Pizzo, David G Poplack, Williams and Wlkins, 2002,895-937 Schwab M, Westermann F, Hero B, Berthold F Neuroblastoma: biology and molecular and chromosomal pathology Lancer oncol, 2003,4:472 – 80 Sternberg’s Diagnostic Surgical Pathology, Fourth edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadenphia, 2004,1:643-55 Berstein M.L., et al, “A Population Base Study of Neuroblastoma Incidence, Survival and Mortality in North America”, J Clin Oncol; 1992,10, 323-29 Stiller CA Parkin D.M International variation in the incidence of neuroblastoma Int J cancer, 1992,52 (4): 538-43 Shimada H., et al International neuroblastoma pathology classification for prognotic evaluation of pateints with peripheral neuroblastic tumours A report from the children’s cancer group Cancer, 2001,92, 2451-2461 Peuchmaur M, d’Amore E.S, Jochi V.V, et al Revision of the international neuroblastoma Pathology classification: confirmation of favorable and unfavorable prognostic subsets in ganglioneuroblastoma, nodular Cancer, 2003,98(10):2274-81 Brodeur GM Neuroblastoma: biological insides into a clinical enigma Nat Rev Cancer; 2003,3(3): 203-16 10 Maris J.M The biology basis for neuroblastoma heterogeneity and risk stratification Curr Opin Pediatr, 2005,17,7-13 69 ... ti? ?u: Đánh giá mối liên quan đặc điểm phân loại mô học với ki? ?u bi? ?u gen MYCN U nguyên thần kinh Đối tượng phương pháp nghiên c? ?u 2.1 Đối tượng nghiên c? ?u Tất bệnh nhận sinh thiết cắt u Bệnh viện. .. học U NBTK ki? ?u bi? ?u gen MYCN phần nghiên c? ?u 3.2.1 Phân loại mô học Bảng Phân bố bệnh theo typ mô học Typ mô học Số lượng Tỷ lệ % 121 87,1 U hạch NBTK thể nốt 6,5 U hạch NBTK thể hỗn hợp 4,3 U. .. (20,9%); MYCN (-): 110 trường hợp (79,1%) Bảng Liên quan bi? ?u gen MYCN với typ mô học Typ mô học MYCN (-) MYCN (+) Số lượng 92 (76%) 29 (24%) 121 (100%) U hạch NBTK, nốt 9 U hạch NBTK, hỗn hợp 6 U hạch