Nghiên cứu mối quan hệ giữa trạng thái gen MYCN với tuổi và kết quả mô bệnh học trên 41 bệnh nhân u nguyên bào thần kinh

Bài viết xác định mối quan hệ giữa giữa trạng thái gen MYCN với tuổi và kết quả mô bệnh học (MBH) trong số 41 bệnh nhân UNBTK trong năm 2014.

TẠP CHÍ NHI KHOA 2016, 9, NGHIÊN CỨU MỐI QUAN HỆ GIỮA TRẠNG THÁI GEN MYCN VỚI TUỔI VÀ KẾT QUẢ MÔ BỆNH HỌC TRÊN 41 BỆNH NHÂN U NGUYÊN BÀO THẦN KINH Vũ Đình Quang1, Nguyễn Thị Hồng Vân2, Phùng Tuyết Lan3, Trần Ngọc Sơn4, Lê Đình Cơng5, Hồng Ngọc Thạch6, Nguyễn Xn Huy1, Ngơ Diễm Ngọc1 Khoa Di truyền Sinh học phân tử, 3Ung bướu, 4Ngoại, Chẩn đốn hình ảnh, 6Giải phẫu bệnh - Bệnh viện Nhi Trung ương; Bộ môn Di truyền học, Khoa Sinh học Trường ĐHKHTN - ĐHQG Hà Nội TÓM TẮT U nguyên bào thần kinh (UNBTK) dạng khối u ác tính ngồi sọ phổ biến trẻ em, đặc trưng không đồng mặt sinh học, dẫn đến kết điều trị khác Có nhiều yếu tố tiên lượng sử dụng bệnh UNBTK tuổi, giai đoạn, giải phẫu bệnh, dấu ấn sinh hóa đặc điểm di truyền Khuếch đại gen MYCN (MYCNA) xem yếu tố tiên lượng đặc hiệu Mục tiêu: Xác định mối quan hệ giữa trạng thái gen MYCN với tuổi kết mô bệnh học (MBH) số 41 bệnh nhân UNBTK năm 2014 Phương pháp: Sử dụng kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ, trạng thái gen MYCN xác định so sánh với yếu tố lâm sàng khác Kết quả: Kết cho thấy, MYCNA tìm thấy 9/41 bệnh nhân UNBTK Tỷ lệ MYCNA theo nhóm tuổi 01 bệnh nhân 12 tháng (11%), 02 bệnh nhân từ 12-18 tháng (22%) 06 bệnh nhân 18 tháng (67%) Kết MYCNA 02 bệnh nhân nhóm mơ bệnh học thuận lợi (25%) 06 bệnh nhân nhóm khơng thuận lợi (75%) Bàn luận: Như vậy, MYCNA có quan hệ mật thiết với tuổi chẩn đốn 18 tháng mơ bệnh học khơng thuận lợi Mặc dù, tuổi MBH dấu ấn có giá trị chẩn đốn, trạng thái gen MYCN xác định kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ công cụ quan trọng cho việc lựa chọn phác đồ điều trị tối ưu Từ khóa: U nguyên bào thần kinh, MYCN, độ tuổi chẩn đốn, mơ bệnh học MỞ ĐẦU U nguyên bào thần kinh (neuroblastoma), u bào thai hệ thần kinh giao cảm nguyên nhân gây khoảng 15% số trẻ tử vong ung thư [1] Một đặc điểm đáng ý u nguyên bào thần kinh (UNBTK) có biểu lâm sàng đa dạng, từ dạng tự thoái triển đến khối u tiến triển nhanh nguy kịch Việc tiên lượng bệnh trước dựa vào số đặc điểm đặc trưng tuổi 46 chẩn đoán, giai đoạn, số VMA/HVA niệu, LDH, hay kết mô bệnh học [2] Tuổi chẩn đoán yếu tố tiên lượng quan trọng, có nhiều cơng bố cho thấy rằng, trẻ nhỏ (ít 12 tháng) thường có tiên lượng tốt so với trẻ lớn [3] Giai đoạn bệnh, theo Hệ thống phân loại UNBTK quốc tế (INSS), yếu tố tiên lượng có giá trị Bên cạnh đó, kết mơ bệnh học sử dụng PHẦN NGHIÊN CỨU để khẳng định chẩn đoán UNBTK để phân biệt nhóm mơ bệnh học thuận lợi hay khơng thuận lợi (dựa vào biệt hóa, số nhân chia/nhân tan…) theo phân loại mô bệnh học UNBTK quốc tế (INPC) [4] Có nhiều biến đổi di truyền UNBTK, có khuếch đại gen MYCN, ghi nhận sử dụng chẩn đoán, tiên lượng bệnh [1] [1] Khuếch đại gen MYCN (MYCNA) coi biến đổi có giá trị hàng đầu tiên lượng phân loại bệnh nhân MYCNA thường gặp giai đoạn muộn (giai đoạn III, IV) UNBTK tiên phát bệnh nhân chưa điều trị, phát u NBTK có độ ác tính cao, với tỷ lệ gặp khoảng 20-25% Đối với UNBTK có MYCNA, dù lứa tuổi hay giai đoạn bệnh nào, có tiên lượng xấu, tỷ lệ sống năm bệnh nhân khoảng 30% [1] Tại Bệnh viện Nhi Trung ương (BVNTƯ), hàng năm có khoảng 40-50 trường hợp chẩn đốn mắc UNBTK giai đoạn độ tuổi khác Việc đánh giá khuếch đại gen MYCN kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ thực khoa Di truyền Sinh học phân tử năm gần Tuy nhiên nay, chưa có nghiên cứu đánh giá mối liên hệ MYCNA với yếu tố tiên lượng khác Vì vậy, thực nghiên cứu với mục tiêu xác định mối quan hệ trạng thái gen MYCN với số yếu tố tiên lượng khác 41 bệnh nhân u nguyên bào thần kinh VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 41 bệnh nhân đến khám chẩn đoán mắc UNBTK BVNTƯ năm 2014 Các bệnh nhân sinh thiết lấy mẫu bệnh phẩm u phẫu thuật mở sinh thiết kim siêu âm để phân tích mơ bệnh học đánh giá MYCNA 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Mẫu bệnh phẩm Mảnh u đặc thu thập nghiên cứu sau sinh thiết mẫu cố định khối nến để bảo quản 2.2.2 Kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ (FISH) Tiêu u lai với đầu dò hai màu LSI N-MYC (2p24) Spectrum Green/ CEP Spectrum Orange (Vysis) để đánh dấu vào hai vị trí nhiễm sắc thể số 2: màu xanh đánh dấu vào vị trí gen MYCN (2p24) tín hiệu đối chứng màu đỏ đánh dấu vào tâm động nhiễm sắc thể số Kết phản ứng lai phân tích phần mềm ISIS (Metasystem) hệ thống kính hiển vi huỳnh quang M1 (Zeiss) MYCNA phát có nhiều 10 tín hiệu xanh (nằm rải rác hay tập trung thành cụm lớn) 2.2.3 Các xét nghiệm cận lâm sàng khác Phân tích mơ bệnh học thực khoa Giải phẫu bệnh, BVNTƯ KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Khuếch đại gen MYCN 41 bệnh nhân UNBTK đánh giá khuếch đại gen MYCN khoa Di truyền Sinh học phân tử Kết có 9/41 bệnh nhân UNBTK phát có khuếch đại gen MYCN, chiếm tỷ lệ 22% Tỷ lệ tương ứng với tỷ lệ MYCNA công bố giới [1] 47 TẠP CHÍ NHI KHOA 2016, 9, → → MYCN → → A B → → → MYCNA CEP2 Hình A khuếch đại gen MYCN; B không khuếch đại gen MYCN (MYCNN) 3.2 Quan hệ khuếch đại gen MYCN tuổi chẩn đoán bệnh nhân Độ tuổi chẩn đoán yếu tố tiên lượng bệnh nhân UNBTK Chúng xếp tuổi bệnh nhân vào nhóm: 12 tháng, từ 12-18 tháng 18 tháng tương ứng với tiên lượng bệnh khác [3] Hình Quan hệ khuếch đại gen MYCN với độ tuổi chẩn đoán bệnh nhân Các bệnh nhân 18 tháng tuổi thường có tiên lượng bệnh xấu Ở nhóm này, tỷ lệ MYCNA 67% số bệnh nhân, cao hẳn so với nhóm tuổi cịn lại Kết tương đối khác biệt với nghiên cứu Mary Lou Schmidt năm 2005 với nhóm tuổi có tỷ lệ MYCNA cao 12-24 tháng [5]; song lại tương đồng với nghiên cứu năm 2013 Mohammad Pedram với nhóm tuổi có tỷ lệ MYCNA cao 2,5 tuổi [6] 48 3.3 Quan hệ khuếch đại gen MYCN kết mô bệnh học Kết giải phẫu bệnh vừa dùng để khẳng định chẩn đoán cho bệnh nhân UNBTK, vừa đưa thông tin cho việc tiên lượng phân loại bệnh nhân Có 36/41 bệnh nhân UNBTK đánh giá mơ bệnh học (MBH) thuận lợi hay không thuận lợi PHẦN NGHIÊN CỨU Hình Quan hệ trạng thái gen MYCN với kết mơ bệnh học Nhóm tiên lượng xấu yếu tố nhóm MBH không thuận lợi Kết di truyền gen MYCN ủng hộ kết luận Tỷ lệ MYCNA nhóm MBH khơng thuận lợi cao gấp lần nhóm MBH thuận lợi Sự phân bố phù hợp với nghiên cứu năm 2001 R.E George cộng [7] Như vậy, thấy MYCNA có mối quan hệ chặt chẽ với số yếu tố tiên lượng xấu khác tuổi chẩn đoán 18 tháng hay mô bệnh học không thuận lợi Tuy nhiên, cần phải lưu ý tỷ lệ nhỏ bệnh nhân có tiên lượng tốt dựa vào tuổi chẩn đốn, kết mơ bệnh học lại có MYCNA Có khoảng 11% số bệnh nhân 12 tháng 25% bệnh nhân có mơ bệnh học thuận lợi Do vậy, nhà lâm sàng dựa vào yếu tố mà khơng có kết đánh giá gen MYCN việc phân loại bệnh nhân đơi khơng xác, dẫn đến kết điều trị thấp, hay chí thất bại KẾT LUẬN Có nhiều yếu tố tiên lượng phân loại bệnh nhân sử dụng UNBTK tuổi chẩn đốn, giai đoạn, kết mơ bệnh học, số dấu ấn sinh hóa hay trạng thái gen MYCN Mặc dù yếu tố có vai trị khác việc chẩn đoán trạng thái gen MYCN xác định kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ công cụ quan trọng cho việc lựa chọn phác đồ điều trị tối ưu TÀI LIỆU THAM KHẢO Thorner, P.S., The molecular genetic profile of neuroblastoma Diagnostic Histopathology, 2014 20(2): p 76-83 Ambros, P.F., et al., International consensus for neuroblastoma molecular diagnostics: report from the International Neuroblastoma Risk Group (INRG) Biology Committee British journal of cancer, 2009 100(9): p 1471-82 Evans, A.E and G.J D’Angio, Age at diagnosis and prognosis in children with neuroblastoma Journal of Clinical Oncology, 2005 23(27): p 6443-4 Sano, H., et al., International neuroblastoma pathology classification adds independent prognostic information beyond the prognostic contribution of age European journal of cancer, 2006 42(8): p 1113-9 Schmidt, M.L., et al., Favorable prognosis for patients 12 to 18 months of age with stage nonamplified MYCN neuroblastoma: a Children’s Cancer Group Study Journal of clinical oncology, 2005 23(27): p 6474-80 49 TẠP CHÍ NHI KHOA 2016, 9, Pedram, M., et al., Impact of N-myc Amplification on Median Survival in Children With Neuroblastoma Journal of Comprehensive Pediatrics, 2012 3(1): p 29-33 George, R.E., et al., Relationship Between Histopathological features, MYCN Amplification, and Prognosis: A UKCCSG Study Medical and Pediatric Oncology, 2001 36: p 169–176 ABSTRACT STUDY ON THE RELATIONSHIP BETWEEN MYCN STATUS AND PATIENT’S AGE, HISTOPATHOLOGY IN 41 PATIENTS WITH NEUROBLASTOMA Vũ Đình Quang1, Nguyễn Thị Hồng Vân2, Phùng Tuyết Lan3, Trần Ngọc Sơn4, Lê Đình Cơng5, Hồng Ngọc Thạch6, Nguyễn Xn Huy1, Ngơ Diễm Ngọc1 Departments of 1Human Genetics, 3Oncology, 4Surgery, Radiology, and 6Pathology, National Hospital of Pediatrics, Hanoi, Vietnam Department of Genetics, Faculty of Biology, VNU University of Science, Hanoi, Vietnam Brief background: Neuroblastoma (NBL) is the most common extracranial solid cancer of childhood and is characterized by a remarkable biological heterogeneity, resulting in favorable or unfavorable outcomes There are many prognostic factors like age, stage, histopathology, plasma and urinary markers and the molecular characteristics of tumor cells Amplification of the MYCN gene (MYCNA) is established as the most powerful prognostic factor, Objectives: to investigate, in a series of 41 NBL patients ascertained in 2014, the relationship between amplification of MYCN and some other prognostic factors: patient’s age and histopathology Methods: MYCNA was identified by FISH The MYCN status was compared with the other clinic-biological factors Results: MYCNA is found on 9/41 NBL patient The proportion of MYCNA according to the age group is 11% (18 months) The favorable and unfavorable histology cases show a different frequency of MYCNA, 25% and 75%, respectively Conclusions: The MYCNA is strongly associated with age at diagnosis >18 months, unfavourable histology The patient’s age and histopathology could be valuable markers for diagnosis, however, the MYCN status determined by FISH is one of the most important tools for treatment stratification Keywords: Neuroblastoma, MYCN, age of diagnosis, histopathology 50 ... thực nghiên c? ?u với mục ti? ?u xác định mối quan hệ trạng thái gen MYCN với số y? ?u tố tiên lượng khác 41 bệnh nhân u nguyên bào thần kinh VẬT LI? ?U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C? ?U 2.1 Đối tượng nghiên c? ?u. .. loại bệnh nhân Có 36 /41 bệnh nhân UNBTK đánh giá mô bệnh học (MBH) thuận lợi hay khơng thuận lợi PHẦN NGHIÊN C? ?U Hình Quan hệ trạng thái gen MYCN với kết mơ bệnh học Nhóm tiên lượng x? ?u y? ?u tố... mơ bệnh học thực khoa Giải ph? ?u bệnh, BVNTƯ KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Khuếch đại gen MYCN 41 bệnh nhân UNBTK đánh giá khuếch đại gen MYCN khoa Di truyền Sinh học phân tử Kết có 9 /41 bệnh nhân UNBTK