Nghiên cứu đa hình gen TNF α 308 g a và TGF β1 509c t ở bệnh nhân UTBMTBG có HBsAg dương tính

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư biểu mô tế bào gan (Hepatocellular carcinoma - HCC, UTBMTBG) bệnh lý ác tính hay gặp hàng đầu giới Bệnh đứng hàng thứ 10 loại ung thư hay gặp, nguyên nhân thứ ba gây tử vong ung thư Theo GLOBOCAN ước tính riêng năm 2018 có 841.00 trường hợp mắc 782.000 bệnh nhân tử vong UTBMTBG [1] Các nghiên cứu ghi nhận nhiễm virus viêm gan B (HBV) mạn ngun nhân gây UTBMTBG Việt Nam có tỷ lệ nhiễm HBV cao tương ứng có số người mắc UTBMTBG tương đối lớn Đây loại ung thư có tiên lượng xấu với thời gian sống thêm ngắn, liên quan đến khả chẩn đốn sớm cịn nhiều hạn chế Do vậy, giới nghiên cứu sinh bệnh học UTBMTBG nhằm mục tiêu nhận diện dấu ấn sinh học có giá trị chẩn đoán, điều trị tiến hành rộng rãi Với phát triển mạnh mẽ sinh học phân tử, nhiều nghiên cứu ghi nhận vai trò kiểu gen, đặc biệt đa hình gen (SNP: Single nucleotide polymorphism) vật chủ đóng vai trị quan trọng đáp ứng miễn dịch thể nhiễm HBV, ảnh hưởng đến trình hình thành viêm gan mạn, xơ gan, phát triển UTBMTBG Như vậy, nghiên cứu đa hình gen giúp phân tầng đối tượng nguy cơ, cải thiện phát sớm kết điều trị bệnh [2], [3] Gen TNF - α nằm nhánh ngắn nhiễm sắc thể số (NST 6p21) Đây gen có nhiều điểm đa hình đơn, điểm đa hình vị trí -308 đánh giá có liên quan đến nguy UTBMTBG Các nghiên cứu cho thấy alen A điểm đa hình liên quan đến tăng cường sản xuất TNF – α in vitro in vivo Ngoài ra, người mang alen A có tăng nguy UTBMTBG cao so sánh với người mang alen G [4], [5] Gen TGF – β1 nằm nhánh dài nhiễm sắc thể số 19 (19q13.1-13.3), có nhiều điểm đa hình, điểm đa hình vị trí -509 C>T đánh giá có liên quan đến nồng độ TGFβ huyết tương Hơn nữa, phân tích điểm đa hình TGF – β1-509 C>T thấy cá thể có alen T tăng nguy UTBMTBG so với cá thể mang alen C [6] Nhiều nghiên cứu cho thấy điểm đa hình TNF - α -308 TGF - β1509 ảnh hưởng đến tiến triển viêm gan mạn, xơ gan, hình thành, phát triển di UTBMTBG thông qua việc kiểm soát nồng độ cytokine tương ứng [3], [7], [8] TNFα TGFβ cytokine đa chức năng, đóng vai trị kiểm sốt nhiều q trình tế bào tăng trưởng, biệt hóa, hình thành mạng lưới gian bào, đáp ứng miễn dịch, sinh mạch máu, chết theo chương trình Bên cạnh đó, vi mơi trường sinh u cytokine tương tác, hỗ trợ lẫn làm tăng cường trình hình thành tiến triển UTBMTBG [5],[3], [9] Việt Nam quốc gia có tỷ lệ nhiễm HBV mắc UTBMTBG cao với hậu vô nặng nề Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng đa hình hai gen với nguy bị UTBMTBG Vì vậy, chúng tơi tiến hành đề tài “Nghiên cứu đa hình gen TNF-α-308 TGF-β1-509 bệnh nhân ung thư biểu mơ tế bào gan có HBsAg dương tính” với mục tiêu: Xác định tỷ lệ kiểu gen alen điểm đa hình gen TNF - α - 308, TGF - β1 - 509 bệnh nhân UTBMTBG có HBsAg (+) Phân tích mối liên quan đa hình gen TNF- α - 308, TGF- β1- 509 với nguy UTBMTBG số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng bệnh nhân UTBMTBG có HBsAg (+) CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 UNG THƯ BIỂU MÔ TẾ BÀO GAN Ung thư biểu mô tế bào gan (UTBMTBG) bệnh ác tính khởi phát từ tế bào gan (HCC: hepatocellular carcinoma), chiếm đa số bệnh ác tính gan (> 90%) [10] 1.1.1 Dịch tễ ung thư biểu mô tế bào gan giới Ung thư biểu mô tế bào gan loại ung thư đứng hàng thứ 10 loại ung thư phổ biến toàn cầu (thứ với nam, thứ nữ) Đặc điểm dịch tễ UTBMTBG khác vùng giới, vùng có tỷ lệ mắc cao bao gồm Sahara châu Phi, Đông Á, Đông Nam Á, Trung Quốc, Đài Loan, Hàn Quốc, Nhật Bản, nơi lưu hành dịch tễ HBV, loại virus có mối liên quan chặt chẽ với UTBMTBG [11] Theo Tổ chức Y tế Thế giới, ước tính riêng năm 2018 có tới 841.000 trường hợp mắc UTBMTBG toàn cầu, chịu trách nhiệm cho 782.000 trường hợp tử vong năm Số trường hợp tử vong gần số mắc, phản ánh UTBMTBG bệnh có tiên lượng nặng, thời gian sống thêm ngắn [12] Nam giới có mắc bệnh cao nữ, gấp từ 2-4 lần Tỷ lệ mắc tăng dần theo tuổi, cao khoảng 65-70 tuổi, vùng lưu hành dịch tễ HBV, đỉnh mắc bệnh thấp từ 55-60 tuổi [10], [13], [14] Vài thập kỷ gần đây, xu hướng mắc UTBMTBG thay đổi nhiều Trong vùng có tỷ lệ mắc thấp (Mỹ, trung tâm châu Âu) bệnh có xu hướng gia tăng liên quan đến béo phì nhiễm HCV, vùng trước có tỷ lệ mắc cao lại có xu hướng giảm áp dụng chương trình tiêm phịng HBV [2] Hình 1.1 Tỷ lệ mắc ung thư biểu mô tế bào gan chuẩn theo tuổi giới giới * Nguồn: Singal, A.(2020) [15] 1.1.2 Dịch tễ ung thư biểu mô tế bào gan Việt Nam Nằm khu vực Đông Nam Á, điểm nóng giới UTBMTBG, Việt Nam có tỷ lệ mắc bệnh cao Tổng kết số nghiên cứu tiến hành nhiều địa phương toàn quốc, thời điểm khác cho thấy UTBMTBG thực gánh nặng với y tế Báo cáo Nguyễn Văn Vy cs cơng tác phịng chống ung thư kéo dài 10 năm Hải Phịng (2003) cho thấy UTBMTBG có mức độ phổ biến đứng hàng thứ loại ung thư [16] Một nghiên cứu khác tiến hành Nguyễn Đình Tùng (2010) Thừa Thiên Huế thời gian từ 2001 – 2009 với 7234 trường hợp mắc ung thư mới, ghi nhận 10 loại ung thư hay gặp, UTBMTBG đứng hàng đầu nam với ASRI (Age Standardised Incidence Rate – tỷ lệ mắc chuẩn hóa theo tuổi)/ 100.000 người 34,8 đứng thứ nữ [17] Năm 2018, GLOBOCAN công bố tỷ lệ mắc UTBMTBG chuẩn theo tuổi (ASIR) tính chung cho hai giới Việt Nam 23,2 xếp thứ tồn cầu sau Mơng Cổ (93,7), Ai Cập (32,2) Giambia (23,9) [1] Theo Cơ quan Nghiên cứu Ung thư Quốc tế (IARC), UTBMTBG loại ung thư phổ biến nhất, có xu hướng phát triển nhanh nguyên nhân chủ yếu gây tử vong ung thư hai giới Việt Nam Dựa vào số liệu thống kê công bố từ 2010 - 2018 cho thấy UTBMTBG có tốc độ phát triển nhanh thứ nam thứ nữ Tính riêng năm 2018 Việt Nam, có tới 25.335 trường hợp mắc UTBMTBG có tới 20.710 trường hợp tử vong năm [18] Tương ứng với tình trạng UTBMTBG có tỷ lệ mắc tử vong cao, thực trạng nhiễm HBV đáng lo ngại, theo Robert G cs (2011) tiến hành nghiên cứu 12 bệnh viện toàn quốc từ 2005 – 2008 cho thấy Việt Nam quốc gia có tỷ lệ nhiễm HBV cao giới với gần 12% người có HBsAg (+), khoảng 10 triệu người chung sống với HBV mạn Tình hình nhiễm HBV khác vùng: thành phố Hồ Chí Minh, Hà Nội khoảng 10-14%, Thái Bình, Thanh Hóa chiếm 18,8-19% Tỷ lệ nhiễm HBV chí cịn cao bệnh nhân có biểu bệnh lý gan, ước tính lên tới 31,2 - 47% Nhóm nghiên cứu tính tốn đưa ước lượng với tình hình nhiễm HBV vào năm 2025, HBV nguyên nhân gây nên 56.650 bệnh nhân xơ gan, 25.000 người bị UTBMTBG 40.000 người tử vong [19] Rõ ràng Việt Nam, gánh nặng UTBMTBG nhiễm HBV lớn, thực cần có biện pháp hỗ trợ sàng lọc giúp chẩn đoán, điều trị sớm cho bệnh nhân, nhằm cải thiện tiên lượng bệnh 1.1.3 Các yếu tố nguy ung thư biểu mô tế bào gan Các yếu tố nguy chủ yếu UTBMTBG bao gồm nhiễm HBV, HCV, bệnh gan rượu, bệnh gan nhiễm mỡ không rượu, xơ gan Các yếu tố nguy khác gặp ứ sắt huyết di truyền, thiếu hụt alpha 1antitrypsin, bệnh gan tự miễn, nhiễm aflatoxin B (AFB1), đái tháo đường typ 2, béo phì Trong yếu tố nguy gây UTBMTBG, HBV HCV nguyên nhân hàng đầu chiếm tới 80% trường hợp, nguyên nhân HBV chiếm 75-80%, HCV chiếm 10-20% Yếu tố nguy vùng có tỷ lệ bị UTBMTBG cao quốc gia châu Á, châu Phi nhiễm HBV tiếp xúc với aflatoxin, ngược lại vùng có tỷ lệ bị UTBMTBG thấp gồm Mỹ, châu Âu lại nhiễm HCV, nghiện rượu, đái tháo đường béo phì Nhiễm HBV chiếm khoảng 60% nguyên nhân gây UTBMTBG nước phát triển, nước phát triển tỷ lệ khoảng 23% [20] 1.1.4 Chẩn đoán ung thư biểu mơ tế bào gan Chẩn đốn xác định Trên giới khuyến cáo chẩn đoán UTBMTBG chủ yếu dựa vào kích thước khối u tính chất ngấm thuốc, thải thuốc khối u - phương pháp chẩn đốn hình ảnh [21] Khuyến cáo AASLD, EASL khối u có kích thước khối u (>1cm), cần tiến hành chụp CT MRI có tiêm thuốc Nếu khối có hình ảnh điển hình UTBMTBG ngấm thuốc nhanh, rõ động mạch thải thuốc nhanh tĩnh mạch muộn khẳng định chẩn đốn Sinh thiết chẩn đốn mô bệnh học đặt phương pháp chẩn đốn hình ảnh khơng - thấy hình ảnh điển hình Khuyến cáo APASL JSH khối tăng sinh mạch pha động mạch sau thải thuốc nhanh pha tĩnh mạch chẩn đoán UTBMTBG Những khối tăng sinh mạch pha động mạch khơng có thải thuốc pha tĩnh mạch pha muộn cần đánh giá thêm SPIO-MRI MRI sử dụng chất đặc hiệu với tế bào, siêu âm sử dụng Levovist Sonazoid Trường hợp tổn thương mạch máu pha động mạch CT MRI, theo APASL cần đánh giá thêm SPIO-MRI siêu âm cản âm để khẳng định chẩn đoán, JSH cần thêm Gd-EOB-DTPA-MRI để chẩn đoán xác định, kết có phương pháp điển hình cần thêm sinh thiết để chẩn đốn Tại Việt Nam, năm 2012 Bộ Y tế đưa hướng dẫn chẩn đốn xác định UTBMTBG có tiêu chuẩn sau: [22] - Có chứng giải phẫu bệnh - Hình ảnh điển hình chụp CT có tiêm thuốc cản quang MRI có thuốc cản từ + αFP ≥ 400 ng/ml - Hình ảnh điển hình chụp CT ổ bụng có cản quang MRI có cản từ + αFP tăng cao bình thường (< 400 ng/ml) + nhiễm HBV HCV Chẩn đoán giai đoạn Hiện nay, giới có nhiều bảng phân loại giúp đánh giá giai đoạn UTBMTBG phân loại TNM, CLIP, Barcelona, Okuda Trong đó, phân loại Barcelona sử dụng rộng rãi tính ưu việt lựa chọn phương pháp điều trị tiên lượng thời gian sống cho bệnh nhân [21] 1.1.5 Mối liên quan nhiễm HBV ung thư biểu mơ tế bào gan UTBMTBG có mối liên quan chặt chẽ với nhiễm HBV, nghiên cứu dịch tễ cho thấy vùng có tỷ lệ dân số bị nhiễm HBV mạn tính > 8% châu Á, Sahara, châu Phi song hành với tỷ lệ mắc UTBMTBG cao [20] Hơn nữa, khoảng 80% trường hợp UTBMTBG giới xẩy nước phát triển, nơi có tỉ lệ nhiễm HBV cao [23] Trên thực tế nguy UTBMTBG tăng trường hợp nhiễm HBV không hoạt động Một nghiên cứu 20.000 người mang HBV không hoạt động thấy nguy tương đối bị ung thư tăng với RR 4,6, nguy tử vong liên quan đến bệnh gan tăng với RR 2,1 [24] HBV gây UTBMTBG qua chế trực tiếp gián tiếp, chế gián tiếp gây tổn thương gan kéo dài, tăng tái tạo tế bào gan dẫn đến tích lũy đột biến, tượng HBV có khả tích hợp vào gen người, gây giảm hoạt động methyl hóa DNA, kết làm ổn định nhiễm sắc thể vật chủ, từ phát triển ung thư chế đường trực tiếp [25] Tổng kết nghiên cứu cho thấy bệnh nhân nhiễm HBV có nguy UTBMTBG cao có kèm nhiều yếu tố sau: HBeAg (+) kéo dài, nồng độ HBV DNA tăng cao (≥ 10 copies/ml), HBV genotype C (gấp 2-3 lần so với genotype B), xuất đột biến virus viêm gan B đột biến tiền nhân, vùng nhân hay đoạt pre S [13], [24], [26] Hình 1.2 Liên quan tỷ lệ nhiễm virus viêm gan B ung thư biểu mô tế bào gan * Nguồn: Kew M.C (2010) [23] Tuy nhiên, thực tế lâm sàng bệnh nhân nhiễm HBV phát triển thành UTBMTBG Do đó, thân HBV thể vật chủ có vai trị quan trọng, tương tác với gây nên bệnh cảnh cuối Tổn thương gan HBV cho thông qua đáp ứng miễn dịch trung gian chủ yếu hoạt động đặc hiệu tế bào lympho T với HBV Khi thể bị nhiễm HBV, vi môi trường viêm làm tăng tần số đột biến virus thơng qua tác dụng cảm ứng tế bào Tính nhạy cảm di truyền quy định yếu tố viêm, cytokine chemokin tế bào viêm tiết kèm theo cân cytokine Th1 Th2 góp vai trò quan trọng vào phản ứng viêm, hoại tử, tái tạo tế bào gan phát triển ung thư Bên cạnh đó, đường gây viêm bao gồm đường dẫn tín hiệu NF-κB, STAT3, Wnt/β catenin TGF-β1 góp phần vào hình thành ung thư Nghiên cứu yếu tố có ý nghĩa việc giám sát tích cực đối tượng nhiễm HBV, người có nhiều khả phát triển UTBMTBG, từ giúp phân tầng đối tượng nguy cơ, phục vụ chẩn đoán sớm, cải thiện hiệu điều trị bệnh Do vậy, giới có nhiều nghiên cứu tiến hành đánh giá di truyền đa hình quy định cytokine TNF-α, TGF- β1, IL-6, IL-10 với nguy UTBMTBG [26] 1.2 GEN TNFα, TGFβ VÀ ĐIỂM ĐA HÌNH GEN TNFα-308 G>A, TGFβ1-509 C>T 1.2.1 Khái niệm đa hình nucleotide đơn (SNP) Bộ gen người, phần lớn bảo tồn trình tiến hóa, 99,5% số gen hai cá thể giống hệt nhau, khác biệt chiếm 0,1% - 0,5% Đây điểm mấu chốt tạo cá thể có đặc điểm, tính trạng khác (hình dạng, bệnh di truyền …) Nhiều yếu tố hệ gen góp phần tạo nên khác biệt trên, SNP đóng vai trị quan trọng Thuật ngữ polymorphisms nghĩa nhiều dạng (poly: nhiều, morphisms: dạng) Single nucleotide polymorphism (SNP) đọc “snip”, định nghĩa thay đổi base đơn lẻ chuỗi trình tự DNA, thay đổi chiếm tỉ lệ ≥ 1% cộng đồng lớn tiếp tục di truyền [27] Do có loại nucleotide nên vị trí SNP gen có tối đa đa hình tương ứng với bốn loại nucleotide A, C, G T SNP xẩy gen người với tần số 1/250 đôi nucleotide Điều có nghĩa có khoảng 11 triệu SNP tỷ nucleotide gen người Hầu hết, SNP không ảnh hưởng đến sức khỏe phát triển thể Tuy nhiên, nhà nghiên cứu thấy số SNP giúp dự đốn ảnh hưởng yếu tố môi trường nguy phát triển bệnh SNP sử dụng để theo dõi di truyền gen bệnh gia đình [28], [29], [30] 10 Hình 1.3 Đa hình gen thay nucleotid * Nguồn: Aguiar-Pulido V CS (2010) [31] Cơ chế tác dụng SNP SNP nằm vùng khác gen vùng khởi động, exon, intron vùng không phiên mã (UTR: untranslated regions) 5’và 3’ Các điểm đa hình ảnh hưởng đến hoạt động gen chế khác nhau, phụ thuộc vào vị trí chúng gen Hình 1.4 Các vùng gen * Nguồn: Huang W.L CS (2014) [32] Vùng khởi động gen (promoter) đóng vai trị quan trọng giúp kiểm soát bắt đầu mức độ chép gen, SNP vùng tác động đến gen thông qua hai chế Thứ ảnh hưởng đến hoạt động vùng khởi động tác dụng lên hộp chức TATA (một đoạn DNA nằm cách vị trí phiên mã khoảng 30 nucleotid có trình tự phổ biến TATAAAT) hoạt động gắn yếu tố chép Thứ hai chúng tác động đến biểu gen thơng qua tác động lên q trình methyl hóa DNA thay đổi số lượng vị trí methyl hóa, 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 Science, W.I.o TNF Gene (Protein Coding) 2018 accessed on 18 June 2108]; Available from: https://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=TNF&keywords=TNFalpha Sookoian, S.C., C Gonzalez, and C.J Pirola, Meta-analysis on the G-308A tumor necrosis factor alpha gene variant and phenotypes associated with the metabolic syndrome Obes Res, 2005 13(12): p 2122-31 Steven C Hoffmann, et al., Ethnicity Greatly Influences Cytokine Gene Polymorphism Distribution American Journal of Transplatation 2002 2: p 560-567 Alison L Van Dyke, et al., Cytokine SNPs: Comparision of Allele Frequencies by Race & Implication for Future Studies Cytokine, 2009 46(2): p 236-244 G.Kaur, et al., Frequency distribution of cytokine gene polymorphisms in the healthy North Indian population Journal compilation, 2007 69: p 113-120 Alhamad, E.H., et al., Cytokine gene polymorphisms of TNFα, IL-6, IL-10, TGFβ and TFNγ in the Saudi population Bristish Journal of Biomedical Science 2013 70(3): p 104 109 Dejan Trajkov, et al., Cytokine Gene Polymorphisms in Population of Ethnic Macedonians Molecular Medicine, 2005 46(4): p 685-692 Ashley Meenagh, et al., Frequency of Cytokine Polymorphisms in Populations From Western Europe, Africa, Asia, the Middle East and South America Human Immunology 2002 63: p 1055-1061 L.S Torres, et al., Frequencies of - 308G/A (TNFA) and - 509C/T (TGFB1) polymorphisms in sickle cell aneamia patients from Brazil Genetics and Molecular Research, 2013 12(4): p 6762-6766 SJ Dunstan, et al., Variation in human genes encoding adhesion and proinflamatory molecules are associated with sevese malaria in the Vietnamese Genes and Immunity, 2012 13: p 503-508 Reference, G.H TGFB1 gene 2017 Access July 24 2018]; Lister Hill National Center for Biomedical Communications:[Available from: https://ghr.nlm.nih.gov/gene/TGFB1 Science, W.I.o TGFB1 Gene (Protein Coding) 2018 accessed on 18 June 2018]; Available from: https://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl? gene=TGFB1&keywords=TGFB1 Pradeep Kumar, et al., Transforming growth factor - β1 (C509Tt, G800A, and T869C) gene polymorphism and risk of ischemic stroke in North Indian population: A hospital based case - control study Official Journal of Indian Academy of Neurology, 2017 20(1): p 5-12 Heidari, Z., et al., Association of TGF-β1 −509 C/T, 29 C/T and 788 C/T gene polymorphisms with chronic periodontitis: A case–control study Gene, 2013 518(2): p 330-334 Xun Li, Lin Shen, and H Tan, Polymorphisms and Plasma Level of Transforming Growth Factor - Beta and Risk of Preeclampsia: A Systematic Review PLOS ONE, 2014 9(5): p e97230 Rathod, S.B and A.S Tripathy, TGF-β1 gene − 509C > T promoter polymorphism modulates TGF-β1 levels in hepatitis E patients Meta Gene, 2015 6: p 53-58 Masoud Karimi -Googheri, et al., Important Roles Played by TGF-β in Hepatitis B Infection Journal of Medical Virology, 2014 86: p 102-108 Hans - Theo Schon and R Weiskirchen, Immunomodulatory effects of transforming growth factor - β in the liver Hepatobiliary Surg Nutr, 2014 3(6): p 386-406 Oliver J, et al., Polymorphisms in the transforming growth factor - β1 gene (TGF-β1) and the risk of advanced alcoholic liver diesase Liver International 2005 25: p 935939 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 Liu, H.-J., et al., TGF-β1-509C/T polymorphism and the risk of ESCC in a Chinese Han population International Journal of Clinical and Experimental Medicine, 2015 8(7): p 11524-11528 Feizollahzadeh, S., et al., Promoter region polymorphisms in the transforming growth factor beta-1 (TGFβ1) gene and serum TGFβ1 concentration in preeclamptic and control Iranian women Journal of Reproductive Immunology, 2012 94(2): p 216-221 F., S., et al., Transforming growth factor‐β1 gene polymorphism modifies the histological and clinical manifestations in Japanese patients with IgA nephropathy Tissue Antigens, 2004 64(1): p 35-42 Heather, J.M and B Chain, The sequence of sequencers: The history of sequencing DNA Genomics, 2016 107(1): p 1-8 Dey, P., Sanger Sequencing and Next-Generation Gene Sequencing: Basic Principles and Applications in Pathology, in Basic and Advanced Laboratory Techniques in Histopathology and Cytology 2018, Springer Singapore: Singapore p 227-231 Slatko, B.E., A.F Gardner, and F.M Ausubel, Overview of Next-Generation Sequencing Technologies Current protocols in molecular biology, 2018 122(1): p e59-e59 Xia Wang and Y Lin, Tumor necrosis factor and cancer, buddies or foes? Acta Pharmacol Sin, 2008 29(11): p 1275-1288 J-P Bayley, THM Ottenhoff, and C Verweij, Review: Is there a future for TNF promoter polymorphisms Genes and Immunity 2004 5: p 315-329 Sethi, G., B Sung, and B Aggarwal, TNF: A master switch for inflammation to cancer Vol 13 2008 5094-107 Roderburg, C., J Gautheron, and T Luedde, TNF-dependent signaling pathways in liver cancer: promising targets for therapeutic strategies? Dig Dis, 2012 30(5): p 500-7 Xingrui -Kou, et al., Tumor necrosis factor -α attennuates starvation - induced apoptosis through upregulation of ferritin heavy chain in hepatocellular carcinoma cells BMC Cancer 2013 13(438) Wu, Y and B.P Zhou, TNF-α/NF-κB/Snail pathway in cancer cell migration and invasion British Journal of Cancer, 2010 102(4): p 639-644 Wei Li and Y.-B Jian, Antitumor necrosis factor - α antibodies as a novel therapy for hepatocellular carcinoma Experimental and Therapeutic Medicine, 2018 16: p 529 -536 Wilson, A.G., et al., Effects of a polymorphism in the human tumor necrosis factor alpha promoter on transcriptional activation Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1997 94(7): p 3195-3199 Roba M Talaat, et al., Tumor necrosis factor - alpha - 308 G/A polymorphism and risk of hepatocellular carcinoma in hepatitis C virus - infected patients Chinese Journal of Cancer, 2012 31(1) Azar, S.S., et al., Tumor Necrosis Factor Alpha 308 G/A Single Nucleotide Polymorphism and Susceptibility to Hepatocellular Carcinoma Via Hepatitis B Infection Asian Pac J Cancer Prev, 2016 17(7): p 3381-4 Teixeira, A.C., et al., Alleles and genotypes of polymorphisms of IL-18, TNF-α and IFN-γ are associated with a higher risk and severity of hepatocellular carcinoma (HCC) in Brazil Human Immunology, 2013 74(8): p 1024-1029 Pierre Nahon and J.Z.- Rossi, Single nucleotide polymorphisms and risk of hepatocellular carcinoma in cirrhosis Journal of Hepatology, 2012 57: p 663-674 Yang, M.D., et al., Tumor Necrosis Factor-alpha Genotypes Are Associated with Hepatocellular Carcinoma Risk in Taiwanese Males, Smokers and Alcohol Drinkers Anticancer Res, 2015 35(10): p 5417-23 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 Jung - Fa Tsai, et al., Independent and additive interaction between polymorphisms of tumor necrosis factor α - 308 and lymphotoxin α+252 on risk of hepatocellular carcinoma related to hepatitis B Kaohsiung Journal of Medical Sciences 2017 33: p 453 - 457 Xiao, Q., et al., Three polymorphisms of tumor necrosis factor-alpha and hepatitis B virus related hepatocellular carcinoma: A meta-analysis Medicine, 2016 95(50): p e5609 Ozaki, I., et al., Regulation of TGF-β1-Induced Pro-Apoptotic Signaling by Growth Factor Receptors and Extracellular Matrix Receptor Integrins in the Liver Frontiers in Physiology, 2011 2: p 78 So Ya Paik, M.D., et al., Expression of Transforming Growth Factor -β1 and Transforming Growth Factor - β Receptor in Hepatocellular Carcinoma and Dysplastic Nodules Modern Pathology, 2003 16(1): p 86-96 Hao Jian, C.D., TGF-β signaling in hepatocellular carcinoma suppression and progression Traditional Medicine Research, 2018 3(1): p 10-21 Zhi - Zhen Dong, et al., Clinical impact of plasma TGF-β1 and circulating TGF-β1 mRNA in diagnosis of hepatocellular carcinoma Hepatobiliary Pancreat Dis Int, 2008 7(3): p 288-295 Mohamed Ahmed Samy Kohla, et al., Association of serum levels of transforming growth factor β1 with disease severity in patients with hepatocellular carcinoma Hepatitis Research, 2017 3: p 294-301 Edmondo Falleti, Carlo Fabris, and Pierluigi Toniutto, TGF-β1 genotypes in cirrhosis: Relationshipp with the occurrence of liver cancer Cytokine, 2008 44: p 256 - 261 Gaia Cantelli, et al., TGFB-induced transcription in cancer Seminars in Cancer Biology 2017 42: p 60-69 Massague, J., TGFβ in Cancer Cell, 2008 134: p 215 - 230 Yun Lu, et al., Expression of transforming growth factors in hepatocellular carcinoma and its relations with clinicopathological parameters and prognosis Hepatobiliary Pancreat Dis Int, 2008 7(2): p 174 -178 Ken Yamazaki, Yohei Masugi, and M Sakamoto, Molecular Pathogenesis of Hepatocellular Carcinoma: Altering Transforming Growth Factor - β Signaling in Hepatocarcinogenesis Dig Dis, 2011 29: p 284-288 Sridurongrit, S., Tumor-suppressive and tumor-promoting role of Tgf-Beta in Hepatocellular Carcinoma Vol 2016 41 Grainger, D.J., et al., Genetic Control of the Circulating Concentration of Transforming Growth Factor Type β1 Human Molecular Genetics, 1999 8(1): p 93-97 Peng Qi, et al., - 509 C>T polymorphism in the TGF - β1 gene promoter, impact on the hepatocellular carcinoma risk in Chinese patients with chronic hepatits B virus infection Cancer Immunol Immunother 2009 58: p 1433 - 1440 Wei - Qun LU, et al., Enhanced circulating transforming growth factor beta is causally asscociated with an increased risk of hepatocellular carcinoma: a mendelian randomization meta - analysis Oncotarget, 2016 7(51): p 84695- 84704 Hosseini Razavi, A., et al., Lack of Association Between Transforming Growth Factor Beta -509C/T and +915G/C Polymorphisms and Chronic Hepatitis B in Iranian Patients Hepatitis Monthly, 2014 14(4): p e13100 Bei, C.-H., et al., Combined Effects of Six Cytokine Gene Polymorphisms and SNP-SNP Interactions on Hepatocellular Carcinoma Risk in Southern Guangxi, China Vol 15 2014 6961-7 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 Noha G.Bader El Din, Sally Farouk, and R.E.- Shenawy, The Synergictic Effect of TNF α308 G/A and TGFβ1 - 509 C/T Polymorhisms on Hepatic Fibrosis Progression in Hepatitis C Virus Genotype Patients Viral Immunology 2017 30(2): p 127-135 Thành, Đ.V., Nghiên cứu đột biến gen PRE-S HBV tính đa hình gen IFNAR1 bệnh nhân nhiễm virus viêm gan B 2012, Viện nghiên cứu khoa học y dược lâm sàng 108: Hà nội Đạt, T.Q., Nghiên cứu kiểu gen TP53 MDM2 ung thư tế bào gan nguyên phát 2017, Trường Đại học Y Hà Nội Hà nội Trí, T.Đ., Nghiên cứu đặc điểm nội soi, mô bệnh học týp cagA, vacA HELICOBACTER PYLORI tính đa hình IL-1β, IL-1RN, IL-8, TNF-α bệnh nhân ung thư dày 2017, Viện nghiên cứu khoa học Y dược lâm sàng 108 Tế, B.Y., Siêu âm can thiệp sinh thiết nhu mô gan, tổn thương u gan súng Hướng dẫn quy trình kỹ thuật nội khoa, chuyên ngành tiêu hóa 2016: Nhà xuất Y học 256266 Tế, B.Y., Quyết định việc hướng đẫn chẩn đoán, điều trị viêm gan vi rút B số 5448/QĐ-BYT, 2014: p 2-3 Hoạt, P.T.L.N., Phương pháp viết đề cương nghiên cứu khoa học Nghiên cứu khoa học Y học Vol 2016: Nhà xuất Y học Qing Hu, et al., The Tumor Necrosis Factor - α - 308 and - 238 Polymorphisms and Risk of Hepatocellular Carcinoma for Asian Populations: A Meta - Analysis Current Therapeutic Research 2014 76: p 70-75 (IARC), T.I.A.f.R.o.C., Pathology and Genetics of Tumors of the Digestive System IARC WHO Classification of Tumours, ed M.D Paul Kleihues and L.H.S M.D 2000, Lyon, France: IARCPress D Goodman, Z., Grading and staging systems for inflammation and fibrosis in chronic liver diseases Vol 47 2007 598-607 GS.TS Trịnh Văn Bảo and P.T.T.T.T Hương, Di truyền y học 2011: Nhà xuất giáo dục Việt Nam Ebrahim Eskandari, Malihe Metanat, and Elham Pahlevani, Association between TGFβ1 polymorphisms and chronic hepatitis B infection in an Iranian population Rev Soc Bras Med Trop, 2017 50(3): p 301 - 308 Thắng, V.M., Nghiên cứu hiệu điều trị ung thư biểu mô tế bào gan phương pháp tắc mạch hóa dầu kết hợp miễn dịch trị liệu TFX 2015, Học viện quân Y Kỳ, T.D., Nghiên cứu kết điều trị ung thư biểu mô tế bào gan kích thước cm phương pháp tác mạch với hạt vi cầu tải hóa chất 2015, Viện nghiên cứu khoa học Y dược lâm sàng 108 Anh, N.T.V., Nghiên cứu gen PRES, gen X virus viêm gan B mô, huyết số dấu ấn huyết bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan 2009, Trường Đại học Y Hà Nội Hà nội Hùng, T.X., Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng mơ bệnh học hóa mơ miễn dịch ung thư biểu mơ tế bào gan có huyết khối tĩnh mạch cửa, in Viện nghiên cứu khoa học Y dược lâm sàng 108 2018 Montella, M., et al., Role of Sex Hormones in the Development and Progression of Hepatitis B Virus-Associated Hepatocellular Carcinoma International Journal of Endocrinology, 2015 2015: p Hằng, Đ.V., Đánh giá kết điều trị ung thư biểu mô tế bào gan đốt nhiệt sóng cao tần với loại kim lựa chọn theo kích thước khối u 2016, Đại học Y Hà Nội 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 Hikmet Akkiz, et al., G-308 A TNF-α polypmorphism is associated with an increased risk of hepatocellular carcinoma in the Turkish population: Case - control study Cancer Epidemiology 2009 33: p 261-264 Hai - Zhou Shi, Peng Ren, and Q.-J Lu, Association Between EGF, TGF - β and TNF - α Gene Polymorphisms and Hepatocellular Carcinoma Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 2012 13: p 6217 - 6220 Zhaoxia Li, et al., The Association between tumor necrosis factor - alpha - 308 G/A polymorphism and hepatocellular carcinoma risk: An updated meta - analysis Acta Medica Mediterranea, 2017(33): p 1007-1015 Hua Feng, et al., Tumor necrosis factor - alpha gene - 308G>A polymorphism alters the risk of hepatocellular carcinoma in a Han Chinese population Diagnotic Pathology 2014 9(199) Soheil Tavakolpour and S Sali, Tumor Necrosis Factor - α - 308 G/A Polymorphisms and Risk of Hepatocellular Carcinoma: A Meta - Analysis Hepatitis Monthly, 2016 16(4): p e33537 Qing Sun, et al The association of TNF -308(G/A) gene polymorphisms and hepatocellular carcinoma risks: a meta - analysis Chinese Journal of Cancer Research 2015 [cited 2015 Jul 07]; Available from: www.thecjcr.og Jeng, J.E., et al., Independent and additive interactive effects among tumor necrosis factor-alpha polymorphisms, substance use habits, and chronic hepatitis B and hepatitis C virus infection on risk for hepatocellular carcinoma Medicine (Baltimore), 2009 88(6): p 349-57 Costa, F.S.d., et al., IL-18, TNF, and IFN-γ alleles and genotypes are associated with susceptibility to chronic hepatitis B infection and severity of liver injury Journal of Medical Virology, 2015 87(10): p 1689-1696 Ruchi Shukla, et al., Proinflammatory cytokine TNF - α increases the stability of hepatitis B virus X protein through NF- κB signaling Carcinogenesis, 2011 32(7): p 978-985 Tarhuni, A., et al., Impact of cytokine gene variants on the prediction and prognosis of hepatocellular carcinoma in patients with cirrhosis Journal of Hepatology, 2014 61(2): p 342-350 Jin Ju Kim, M.D., et al., Analysis of the tranforming growth factor β1 gene - 509 C/T polymorphism in patients with advanced - stage endometriosis Fertility and Sterility, 2010 93(7): p 2121 -2124 Roli Saxena, et al., Effect of IL-12 B, IL-12B, TGF - β1, and IL-4 Polymorphism and Expression on Hepatitis B Progression Journal of Interferon & Cytokine Research, 2013: p 1-11 Bataller, R and D.A Brenner, Liver fibrosis The Journal of Clinical Investigation, 2005 115(2): p 209-218 Ying Guo, et al., Association Between TGF - β1 polymorphisms and Hepatocellular Carcinoma Risk: A Meta - Analysis Genetics Testing and Molecular Biomarkers, 2013 17(11): p 814 - 820 MỤC LỤC TRANG PHỤ BÌA LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ DANH MỤC CÁC ẢNH PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang ... -30 8G> A gen TGF- β1 -509C> T Gen Trình t? ?? Kích thước (bp) TNF- α 30 8G> A F 5′-AGGCAACAATTCTTGAGGGCCAT3′ 331 bp R 5′-TCCTGGTGGCATAACTAAATTGC3′ TGF- β1 F 5’-GGAGAGTAGGTTTTACAGGTG-3’ 377 bp -509C> T R 5’-TAGGAGAAGGAGGGTCTGTC-3’... thu? ?t TNF- α- 308 giải trình t? ?? chiều R (5′-TCCTCCCTGCTCCGATTCCG-3′), chiều F (5′-AGGCAACAATTCTTGAGGGCCAT-3′), TGF- β1- 509 giải trình t? ?? theo chiều F (5’-GGAGAGCAATTCTTACAGGTG-3’) chiều R (5’-TAGGAGAAGGAGGGTCTGTC-3’)... TT 47 - Phối hợp gen TNF- α – 308 G> A, TGF- β1 – 509 C >T + T? ?? lệ xu? ?t kiểu kiểu gen phối hợp: GGCC, GGTT, GGCT, GACC, GATT, GACT, AACC, AATT, AACT 2.2.5.3 Mối t? ?ơng quan ? ?a hình gen TNF- α – 308,