Mục tiêu nghiên cứu của đề tài là xây dựng được quy trình chiết tách các hợp chất polyphenol từ lá chè xanh. Tính chất hóa lý, định tính, định lượng polyphenol trong lá chè. Đánh giá được khả năng oxy hóa và kháng khuẩn của polyphenol trong lá chè Ứng dụng cao polyphenol trong các sản phẩm làm đẹp da. Mời các bạn tham khảo
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÀ RỊA - VŨNG TÀU BÁO CÁO ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH HỢP CHẤT POLYPHENOL TRONG LÁ CHÈ XANH TRỒNG TẠI TỈNH BÀ RỊA VŨNG TÀU VÀ NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG TRONG DƯỢC MỸ PHẨM Chủ nhiệm đề tài: Sinh viên: Tống Thị Ngọc Bé, lớp DH15HC GVHD: TS Tống Thị Minh Thu đồng hướng dẫn TS Nguyễn Thị Tuyết BÀ RỊA - VŨNG TÀU, tháng 07, năm 2019 Tên đề tài: Nghiên cứu chiết tách hợp chất polyphenol chè xanh trồng tỉnh Bà Rịa - Vũng Tàu nghiên cứu ứng dụng Dược Mỹ Phẩm Mã số: 1459/HD-BVU Chủ nhiệm đề tài: Tống Thị Ngọc Bé, sinh viên lớp DH15HC, Viện: Kỹ thuật – Kinh Tế biển, Trường: Đại học Bà Rịa – Vũng Tàu Nội dung chính: - Chiết tách polyphenol chè xanh dung môi, Enzym kỹ thuật khác - Định tính thành phần hóa học polyphenol Thuốc thử, sắc ký lớp mỏng (TLC), UV-VIS - Định lượng phương pháp Folin-Denis Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Hoạt tính chống oxi hóa xác định dựa theo mơ hình phospho molybdenum - Xác định hoạt tính kháng khuẩn polyphenol theo phương pháp xác định đường kính vòng vơ khuẩn Kết đạt được: - Đã tìm điều kiện tối ưu cho trình chiết polyphenol từ chè xanh là: Nồng độ dung môi ethanol 70%, tỉ lệ Nguyên liệu/Dung môi 1/25, nhiệt độ chiết 65 OC, thời gian: 35 phút - Hàm lượng polyphenol tổng cao chè (Loại thứ 2, 3, 4) 20,79%, có hỗ trợ enzym Cenlulozo 2,5% v/w hàm lượng polyphenol tổng 22,07% với hiệu suất chiết tăng 1,1 lần; pectinase 3% hàm lượng polyphenol tổng 20,79% hiệu suất tăng 1,04 lần Hàm lượng polyphenol cao nụ 21,94% thấp chè già 17% Khi sấy cao chiết chè nhiệt độ 120 oC hàm lượng polyphenol thấp 1,41% - Sử dụng phương pháp sấy thăng hoa nhằm hạn chế ảnh hưởng nhiệt độ cao tới hàm lượng polyphenol tổng đồng thời giữ mà mùi vị ban đầu chè - Hoạt tính oxy hóa dịch chiết polyphenol chè cao nhiều so với loại khác (Lá neem, lơ hội, xồi) tăng dần theo nồng độ - Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết chè kháng chủng vi khuẩn Escherichia coli, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhi dù nồng độ thấp (100 – 800 mg/ml) - Sau mẫu chiết đo HPLC ta nhận thấy dịch chiết lẫn tạp chất khơng đáng kể, nên tách Polyphenol chế phẩm dạng tinh khiết để ứng dụng số lĩnh vực nhằm đạt giá trị cao mặt kinh tế - Xây dựng quy trình điều chế Kem dưỡng da từ Cao polyphenol (quy mơ phòng thí nghiệm) Thời gian nghiên cứu: Từ 12/03/2018 đến 12/06/2019 Chữ ký CNĐT:…………………… MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC SƠ ĐỒ iv MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung chè 1.1.1 Nguồn gốc phân bố chè 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Tình hình sản xuất chè Việt Nam 1.1.4 Thành phần hóa học chè 1.1.5 Dược tính chè 1.2 Polyphenol chè 1.2.1 Nguồn gốc chuyển hóa phân loại hợp chất phenolic thực vật 1.2.2 Các hợp chất Polyphenol có chè 10 1.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến hàm lượng polyphenol/catechin chè 16 1.2.4 Phương pháp định tính, định lượng polyphenol chè 17 1.2.5 Hoạt tính sinh học polyphenol chè 22 1.3 Một số khái niệm trích ly phương pháp trích ly polyphenol chè 24 1.3.1 Bản chất q trình trích ly 24 1.3.2 Các phương pháp trích ly 24 1.4 Ảnh hưởng yếu tố công nghệ đến hiệu suất trích ly chất lượng sản phẩm 28 1.4.1 Ảnh hưởng dung môi nồng độ dung môi 28 1.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly 30 1.4.3 Ảnh hưởng thời gian trích ly 30 1.4.4 Ảnh hưởng pH 31 1.4.5 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi/nguyên liệu 31 1.4.6 Quy trình trích ly polyphenol từ chè xanh 32 1.5 Giới thiệu số loài vi khuẩn phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn 33 1.5.1.Giới thiệu số loài vi khuẩn 33 1.5.2 Các phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn 42 1.5 Phương pháp Sấy thăng hoa 44 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 46 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu 46 2.1.1 Nguyên liệu chè 46 2.1.2 Chủng vi sinh vật 46 2.1.3 Hóa chất, thiết bị 46 2.2 Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin-Denis 47 2.2.1 Phương pháp xác định hàm lượng polyphenol tổng số 47 2.2.2 Phương pháp xây dựng đường chuẩn axit gallic 48 2.3 Khảo sát quy trình chiết tách polyphenol từ chè 49 2.3.1 Khảo sát ảnh hưởng thông số công nghệ 49 2.3.2 Một số quy trình khảo sát khác 52 2.3.3 Khảo sát quy trình chiết tách polyphenol chè dung mơi có hỗ trợ enzym 52 2.3.4 Ảnh hưởng độ ẩm độ già 53 2.3.5 Quy trình tinh chế polyphenol từ cao chiết chè 53 2.4 Định tính, định lượng polyphenol cao chiết chè 54 2.4.1 Định tính số hợp chất hữu có dịch chiết chè thuốc thử 54 2.4.2 Định tính polyphenol phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 56 2.4.3 Định tính UV-VIS 56 2.4.4 Định tính định lượng polyphenol HPLC 57 2.5 Xác định hoạt tính sinh học dịch chiết chè 57 2.5.1 Xác định hoạt tính kháng oxi hóa dịch chiết chè 57 2.5.2 Xác định hoạt tính kháng khuẩn 58 2.6 Khảo sát quy trình quy trình sấy 61 2.6.1 Sấy nhiệt độ cao 61 2.6.2 Sấy thăng hoa 61 2.7 Nghiên cứu ứng dụng cao chè sản phẩm kem dưỡng da 62 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 64 3.1 Kết tối ưu hóa điều kiện chiết tách polyphenol chè 64 3.1.1 Xây dựng phương trình đường chuẩn gallic khảo sát yếu tố công nghệ 64 3.1.2 Xây dựng phương trình đường chuẩn gallic khảo sát ảnh hưởng enzym 65 3.1.3 Xây dựng phương trình đường chuẩn gallic khảo sát hoạt tính oxy hóa 65 3.2 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố công nghệ đến hiệu suất thu hồi polyphenol 66 3.2.1 Ảnh hưởng nồng độ dung môi đến hàm lượng polyphenol tổng 66 3.2.2 Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng polyphenol tổng 67 3.2.3 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi đến hàm lượng polyphenol tổng 68 3.2.4 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng polyphenol tổng 69 3.2.5 Ảnh hưởng PH đến hàm lượng polyphenol tổng 70 3.3 Ảnh hưởng độ ẩm độ non già tới hàm lượng polyphenol tổng cao chiết chè 71 3.4 Ảnh hưởng số quy trình chiết khác 72 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng enzym hiệu chiết tách polyphenol 73 3.5.1 Ảnh hưởng enzym cenlulozo trình chiết tách polyphenol 73 3.5.2 Ảnh hưởng enzym pectinase trình chiết tách polyphenol 74 3.6 Ảnh hưởng trình tinh chế polyphenol đến hàm lượng polyphenol tổng 75 3.7 Kết định tính, định lượng polyphenol chè 76 3.7.1 Định tính hợp chất chè thuốc thử 76 3.7.2 Định tính TLC 77 3.7.3 Định tính UV – VIS 78 3.7.4 Định lượng polyphenol chè HPLC 79 3.8 Kết khảo sát hoạt tính sinh học chè 80 3.8.1 Kết hoạt tính oxy hóa 80 3.8.2 Hoạt tính kháng khuẩn 82 3.9 Kết khảo sát quy trình lưu mẫu sấy cao chiết chè 85 3.9.2 Ảnh hưởng sấy nhiệt độ cao tới hàm lượng polyphenol tổng cao chiết chè 86 3.9.3 Sấy thăng hoa cao chiết chè 87 3.10 Ứng dụng sản phẩm kem dưỡng da 89 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 92 4.1 Kết luận 92 4.2 Kiến nghị 93 TÀI LIỆU THAM KHẢO 94 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT C Catechin CG Catechingallate CK Chất Khô DPPH 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl EC Epicatechin ECG Epicatechingallate EGC Epigallocatechin EGCG Epigallocatechingallate GC Gallocatechin GCG Gallocatechingallate HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao MIC Minimum inhibitory concentration TLC Sắc ký lớp mỏng UV Vùng tử ngoại VIS Khả kiến i DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Sự hấp thụ dung dịch theo màu 21 Bảng 1: Phương trình đường chuẩn axit gallic 64 Bảng 2: Phương trình đường chuẩn axit gallic 65 Bảng 3: Phương trình đường chuẩn axit gallic 65 Bảng 4: Ảnh hưởng nồng độ dung môi đến hàm lượng polyphenol tổng 66 Bảng 5: Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng polyphenol tổng 67 Bảng 6: Ảnh hưởng tỷ lệ Nguyên liệu/Dung môi đến hàm lượng polyphenol tổng 68 Bảng 7: Ảnh hưởng tỷ lệ nhiệt độ đến hàm lượng polyphenol tổng 69 Bảng 8: Ảnh hưởng PH đến hàm lượng polyphenol tổng 70 Bảng 9: Khảo sát Ảnh hưởng độ ẩm độ non già 71 Bảng 10: Khảo sát số quy trình chiết khác 72 Bảng 11: Khảo sát Ảnh hưởng enzym cenlulozo trình chiết tách polyphenol .73 Bảng 12: Khảo sát Ảnh hưởng enzym pectinase trình chiết tách polyphenol .74 Bảng 13: Khảo sát Ảnh hưởng trình tinh chế polyphenol 76 Bảng 14: Kết khảo sát định tính nhóm chất 77 Bảng 15: Biểu đồ ảnh hưởng trình tinh chế polyphenol 78 Bảng 16: Kết đo bước sóng dịch chè sau tinh chế 78 Bảng 17: Hàm lượng chất polyphenol .79 Bảng 18: Kết sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 80 Bảng 19: Độ hấp thụ quang cao loại nồng độ 81 Bảng 20: Kết lực kháng oxy hoá theo nồng độ 81 Bảng 21: Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết chè .83 Bảng 22: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng polyphenol 86 Bảng 23: Chỉ tiêu đánh giá cảm quan kem dưỡng da 90 ii DANH MỤC HÌNH Hình 1: Lá chè Xã Suối Nghệ, Tân Thành, tỉnh BR-VT Hình 2: Cơng thức cấu tạo catechin 11 Hình 3: Công thức cấu tạo (-)-EGCG 11 Hình 4: Công thức cấu tạo ECG 13 Hình 5: Cơng thức cấu tạo C(A) EC(B) 13 Hình 6: Cơng thức cấu tạo Anthoxanthin 14 Hình 7: Cơng thức cấu tạo hợp chất Leucoanthocyanin 16 Hình 9: Vi khuẩn Escherichia coli kính hiển vi .34 Hình 10: Vi khuẩn Bacillus cereus kính hiển vi .35 Hình 11: Vi khuẩn Salmonella kính hiển vi 37 Hình 12: Vi khuẩn Staphylococcus aureus kính hiển vi 38 Hình 13: Vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa kính hiển vi 41 Hình 1: Lá chè sau xử lý .50 Hình 2: Thiết bị chiết tách 51 Hình 3: Mẫu đo UV - VIS 51 Hình 4: Hệ thống quay chân khơng 51 Hình 5: Mẫu chè ủ với enzyme 53 Hình 6: Thiết bị phân tích sắc ký lỏng hiệu cao .57 Hình 7: Mẫu chè thử hoạt tính oxy hố .58 Hình 8: Cao chè thử hoạt tính kháng khuẩn 59 Hình 9: Tủ sấy nhiệt độ cao .61 Hình 10: Thiết bị sấy thăng hoa 62 Hình 1: Biểu đồ phương trình đường chuẩn axit gallic .64 Hình 2: Đường chuẩn axit gallic .64 Hình 3: Biểu đồ phương trình đường chuẩn axit gallic .65 Hình 4: Biểu đồ phương trình đường chuẩn axit gallic .66 Hình 5: Biểu đồ ảnh hưởng nồng độ tới hàm lượng polyphenol tổng 66 iii Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học 3.9.3 Sấy thăng hoa cao chiết chè Sản phẩm sấy thăng hoa cao chiết chè giữ màu mùi thơm đặc trưng chè so với sấy nhiệt độ cao Hình 25: Bột chiết chè sau sấy thăng hoa So sánh hàm lượng polyphenol tổng tính oxy hóa bột polyphenol sau sấy thăng hoa cao polyphenol sau chiết thu kết sau: Cao polyphenol Bột sấy thăng hoa PP tổng (%) 19,45 18,75 Tính oxy hóa 3,025 2,88 Qua bảng kết ta thấy hàm lượng polyphenol tổng tính oxy hóa bột sấy thăng hoa giảm không nhiều so với cao polyphenol (từ 19,45 xuống 18,75 3,025 xuống 2,88) cho thấy tính ổn định polyphenol trước sau sấy thăng hoa GVHD: Tống Thị Minh Thu 87 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn bột sấy thăng hoa loại vi khuẩn E.coli; B cereus; S typhi; P.aeruginosa; S aureus, kết thu bảng sau: Bảng 24: Hoạt tính kháng khuẩn bột sấy thăng hoa Đường kính vòng kháng khuẩn STT E.coli B cereus S typhi S aureus Nồng…… D (mm) độ ……………… (mg/ml)…………… Dịch chè 800 7,0 8,0 7,0 7,0 Dịch chè 400 6,0 7,0 6,5 6,5 Dịch chè 200 5,0 6,0 6,0 6,0 Dịch chè 100 3,0 4,0 6,0 5,0 Chloramphenicol 11,0 12 13,0 14,0 Tetracycline 7,3 8,0 6,0 8,0 Hình 26: Biểu đồ thể hoạt tính kháng khuẩn bột sấy thăng hoa GVHD: Tống Thị Minh Thu 88 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học Hình 27: Khả kháng chủng vi khuẩn Bột sấy thăng hoa Chú thích: 1: 800 mg/ml 2: 400 mg/ml 3: 200 mg/ml 4: 100 mg/ml 5: chứng (+) tetracyline 6: chứng (+) Ampicyline7: chứng (-) DMSO 5% Kết thu cao polyphenol sau sấy thăng hoa có khả kháng khuẩn cao so với trước sấy thăng hoa dù giảm nồng độ xuống 100 mg/ml cho thấy q trình sấy thăng hoa khơng làm ảnh hưởng đến khả kháng khuẩn cao polyphenol chè Từ ta rút kết luận sau: Cao polyphenol sau sấy thăng hoa hàm lượng polyphenol tổng, tính oxy hóa khả kháng khuẩn ổn định cho thấy phương pháp sấy thăng hoa nhằm bảo quản polyphenol có tính khả thi cao, áp dụng thực tế 3.10 Ứng dụng sản phẩm kem dưỡng da Kem tan dùng ban ngày để bảo vệ da làm đẹp da tẩy sạch, làm lớp dầu da để mỹ phẩm khác dễ dàng bám lên da Khi sử dụng, kem phải lan nhanh da dường biến sau bơi lên da Kem có tác dụng GVHD: Tống Thị Minh Thu 89 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học giữ ẩm làm mềm mại da Chất lượng kem dưỡng da đánh giá tiêu cảm quan sau: Bảng 25: Chỉ tiêu đánh giá cảm quan kem dưỡng da (i) Cảm quan (35%) Trên sản phẩm Trên đối tượng sử dụng Dạng màu tự nhiên Độ gây chỉnh da Độ phân pha Độ gây mát Độ bóng có ánh bạc Độ gây mùi lạ Độ linh động (ii) Định lượng (45%) Trên sản phẩm Độ pH Trên đối tượng sử dụng Độ lún kim (mm) Độ tan da (giây) Sai biệt độ lún kim (mm) Điểm bắt đầu chảy (oC) (iii) Tính an tồn cho người sử dụng (10.0%) Gây dị ứng cho da (iv) Tính an tồn cho mơi trường (5.0%) (v) Tính tiện dụng (5.0%) Hình 28: Kem dưỡng da từ cao chiết chè GVHD: Tống Thị Minh Thu 90 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học Kem dưỡng da làm từ cao chiết chè có màu xanh nhạt bơi lên da rửa được, màu xanh khơng bám lâu vào da, kem bôi lên mát mịn, không kích ứng da GVHD: Tống Thị Minh Thu 91 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua trình nghiên cứu, thu kết sau: Về mặt lý thuyết - Tìm hiểu tình hình trồng trọt, tiêu dùng thương mại hóa chè Việt Nam giới - Tìm hiểu cơng trình nghiên cứu chiết tách polypheno, ưu nhược điểm phương pháp chiết tách nước giới - Tìm hiểu chủng vi khuẩn, lựa chọn chủng vi khuẩn phù hợp để nghiên cứu Về mặt thực nghiệm - Đã tìm điều kiện tối ưu cho trình chiết polyphenol từ chè xanh là: Nồng độ dung môi ethanol 70%, tỉ lệ Nguyên liệu/Dung môi 1/25, nhiệt độ chiết 65 oC, thời gian: 35 phút - Hàm lượng polyphenol tổng cao chè (Loại thứ 2, 3, 4) 20,79%, có hỗ trợ enzym Cenlulozo 2,5% v/w hàm lượng polyphenol tổng 22,07% với hiệu suất chiết tăng 1,1 lần; pectinase 3% hàm lượng polyphenol tổng 20,79% hiệu suất tăng 1,04 lần Hàm lượng polyphenol cao nụ 21,94% thấp chè già 17% Khi sấy cao chiết chè nhiệt độ 120 oC hàm lượng polyphenol thấp 1,41% cho thấy ảnh hưởng nhiệt độ cao tới hàm lượng polyphenol tổng Vì chúng tơi sử dụng phương pháp sấy thăng hoa nhằm hạn chế ảnh hưởng nhiệt độ cao tới hàm lượng polyphenol tổng đồng thời giữ mà mùi vị ban đầu chè - Hoạt tính oxy hóa dịch chiết polyphenol chè cao nhiều so với loại khác (Lá neem, lơ hội, xồi) tăng dần theo nồng độ Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết chè kháng chủng vi khuẩn Escherichia coli, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhi dù nồng độ thấp (100 – 800 mg/ml) - Sau mẫu chiết đo HPLC ta nhận thấy dịch chiết lẫn tạp chất khơng đáng kể, nên tách Polyphenol chế phẩm dạng tinh khiết để ứng dụng số lĩnh vực nhằm đạt giá trị cao mặt kinh tế GVHD: Tống Thị Minh Thu 92 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học - Cao polyphenol sau sấy thăng hoa hàm lượng polyphenol tổng, tính oxy hóa khả kháng khuẩn ổn định cho thấy phương pháp sấy thăng hoa nhằm bảo quản polyphenol có tính khả thi cao, áp dụng thực tế - Xây dựng quy trình điều chế Kem dưỡng da từ Cao polyphenol (quy mơ phòng thí nghiệm) Đào tạo khoa học - Đề tài tham gia thi nghiên cứu khoa học học sinh sinh viên 2018 – 2019 - Đã tham dự Triển lãm Khoa học & Cơng nghệ 2019 4.2 Kiến nghị Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết chè thể chủng vi khuẩn dù nồng độ thấp, cần nghiên cứu thêm nồng độ tối thiểu (MIC) khả kháng khuẩn loại khuẩn nhằm ứng dụng cho sản phẩm thuốc đánh răng, nước súc miệng ngừa sâu răng, chống viêm khớp răng, khử mồm, thơm thở… Mở rộng nghiên cứu thêm ảnh hưởng điều kiện nhiệt độ, PH, Thời gian tới hiệu suất chiết polyphenol có hỗ trợ enzym hoạt tính sinh học Điều cho phép tạo sở liệu tổng quát để sử dụng enzym cho mục đích khai thác hợp chất có hoạt tính sinh học cao chè cung cấp giải pháp thay thân thiện môi trường cho việc chiết dung môi hữu thông thường Mở rộng nghiên cứu sử dụng chế phẩm polyphenol chè cho Dược Mỹ phẩm thực phẩm chức năng, sản phẩm làm đẹp, bánh kẹo…và nghiên cứu chuyển giao cho sản xuất công nghiệp Hợp chất polyphenol có tính Oxy hóa cao nên dễ bị oxy hóa ngồi mơi trường, cần bảo quản nghiên cứu xây dựng quy trình bảo quản hợp chất polyphenol đễ dễ dàng vận chuyển sử dụng Cao polyphenol sau tinh chế số tạp chất nên cần nghiên cứu xây dựng quy trình quy trình tinh chế phân tách hợp chất polyphenol tinh khiết GVHD: Tống Thị Minh Thu 93 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Mai Thanh Nga, Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học,tách chiết hợp chất poliphenol chè xanh Thái Nguyên, tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ, 80(04): 159-161 Nguyễn Văn Chung Trương Hương Lan (2007), Nghiên cứu công nghệ sản xuất polyphenol từ chè xanh Việt Nam Trong: cơng trình nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh học – công nghệ thực phẩm giai đoạn 2001 – 2005, NXB Lao động – Xã hội, tr 256 – 260 Trần Chí Hải, Nguyễn Tấn Dân, Nguyễn Đình Nam, Lê Thị Hồng Ánh, Mẫn Phan Vãn Mẫn (2016), Ảnh hưởng sóng siêu âm đến q trình trích ly polyphenol từ trà già, Tạp chí KHCN ĐHĐN, 9(106), tr 69-72 Ngơ Hữu Hợp (1983), Hóa sinh chè, Đại học Bách Khoa Hà Nội Nguyễn Tiến Lực (2016), Công nghệ chế biến thịt thủy sản, NXB ĐH Quốc gia HCM Đỗ Ngọc Quỹ, Nguyễn Kim Phong (1997), Cây chè Việt Nam, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Vũ Hồng Sơn, Hà Duyên Tư (2008), Khảo sát hàm lượng polyphenol số giống chè vùng trung du miền núi tỉnh phía bắc thu hái vào vụ đơng, Tạp chí hóa học, 46 (5A), tr 198-202 TCVN 9745-1-2013, Chè – Xác định chất đặc trưng chè xanh chè đen – Phần 1: Hàm lượng polyphenol tổng số chè – Phương pháp đo màu dùng thuốc thử Folin – Ciocalteu Nguyễn Duy Thịnh (2004), Giáo trình cơng nghệ chế biến chè, ĐH Bách Khoa Hà Nội 10 Vũ Thị Thư, Lê Doãn Diên, Nguyễn Thị Gấm, Giang Trung Khoa (2001), Các hợp chất có chè số phương pháp phân tích thơng dụng sản xuất chè Việt Nam, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 11 Lê Bạch Tuyết (1996), Q trình trích ly, trong: Các q trình cơng nghệ sản xuất thực phẩm, NXB Giáo dục, tr 93-101 GVHD: Tống Thị Minh Thu 94 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học Tài liệu tiếng Anh 12 A.O.C.S Official Method Cd 18-90, P-Anisidine value In AOCS officicial method Cd 18-90 1998, Official methods and recommended practices of the American oil chemists’society: Champaign, IL, USA 13 Alupului, A (2012), Microwave extraction of active principles from medicinal plants, U.P.B Science Bulletin, Series B, 74(2), pp 129-142 14 Amir, H G., Barzegar, M., Sahari, M A (2005), Antioxidant activity and total phenolic compounds of pistachio (Pistachiavera) hull extracts, Food Chemistry, 92, pp 521–525 15 Aoshima, H., Hirata, S., Ayabe, S (2007), Antioxidative and anti-hydrogen peroxide activities of various herbal teas, Food Chemistry, 103, pp 617–622 16 Arakawa, H., Maeda, M., Okubo, S., Shimamura, T (2004), Role of hydrogen peroxide in bactericidal action of catechin Biol Pharm Bull., 27, pp 277 –281 17 Ashray Gupta (2012), Extraction, Purification, Identification and Estimation of Catechins from Camellia sinensis 18 Astill, C., Birch, M R., Dacombe, C., Humphrey, P G., Martin, P T (2001), Factors Affecting the Caffeine and Polyphenol Contents of Black and Green Tea Infusions, J Agric Food Chem., 49, pp 5340−5347 19 Atoui, A K., Mansouri, A., Boskou, G., & Kefalas, P (2005), Tea and herbal infusions: Their antioxidant activity and phenolic profile, Food Chemistry, 89, pp 27– 36 20 Azmir, J Zaidul, I.S.M., Rahman, M.M., Sharif, K.M., Mohamed, A.F., Sahena, Jahurul, M.H.A., Ghafoor,K., Norulaini, N.A.N., Omar, A.K.M (2013), Techniques for extraction of bioactive compounds from plant materials: A review, Journal of Food Engineering, 117, pp 426–436 21 Bansal, S., Choudhary, S., Sharma, M., Sharad Kumar, S., Lohan, S., Bhardwaj, V., NavneetSyan, N., Jyoti, S (2013), Tea: A native source of antimicrobial agents, Food Research International, 53, pp 568–584 22 Baptista, J., Lima, E., Paiva, L., Castro, A.R (2014), Value of off-season fresh Camellia sinensis leaves Antiradical activity, total phenolics content and catechin profiles, Food science and technology, 59, pp 1152-1158 GVHD: Tống Thị Minh Thu 95 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học 23 Barhe´, T.A., Tchouya, G.R.F (2016), Comparative study of the anti-oxidant activity of the total polyphenols extracted from Hibiscus Sabdariffa L., Glycine max L Merr., yellow tea and red wine through reaction with DPPH free radicals, Arabian Journal of Chemistry, 9, pp 1–8 24 Bradshaw, M.P., Scollary, G.R., and Prenzler, P.D (2001), Ascorbic acidinduced browning of (+)-catechin in a model wine system, Journal of Agriculture and Food Chemistry, 49, pp 934-939 25 Cacace, J.E., Mazza, G (2003), Mass transfer process during extraction of phenolic compounds from milled berries, Journal of Food Engineering, 59, pp 379389 26 Caturla, N., Vera-Samper, E., Villalain, J., Mateo, C R., Micol, V (2003), The relationship between the antioxidant and the antibacterial properties of galloylatedcatechins and the structure of phospholipid model membranes, Free Radic., Biol Med., 34, pp 648–662 27 Chen, C-N., Liang, C-M., Lai, J-R., Tsai, Y-J., Tsay, J-S., Lin J-K (2003), Capillary Electrophoretic Determination of Theanine, Caffeine, and Catechins in Fresh Tea Leaves and Oolong Tea and Their Effects on Rat Neurosphere Adhesion and Migration, J Agric Food Chem., 51, pp.7495−7503 28 Chen, Z.Y., Chan, P.T (1996), Antioxidativeacitivity of green tea catechins in canola oil, Chemistry and physics of lipids, 82, pp 163 – 172 29 Choung, M-G.and Lee, M-S (2011), Optimal Extraction Conditions for Simultaneous Determination of Catechins and Caffeine in Green Tea Leaves, Food Sci Biotechnol., 20(2), pp 327-333 30 Diker, K S., Akan, M., Hascelik, G., Yurdakok, M (1991), The bacterial activity of tea against Campylobacter jejuni and Campylobacter coli, Lett Appl Microbiol, 12, pp 34–35 31 Elgawisha, R.A.R., Rahman, H.G.A., Abdelrazek, H.M.A (2015), Green tea extract attenuates CCl4-induced hepatic injury in male hamsters via inhibition of lipid peroxidation and p53-mediated apoptosis, Toxicology, 2, pp 1149–1156 GVHD: Tống Thị Minh Thu 96 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học 32 Escribano-Bailón, M.T., Santos-Buelga, C (2003), Polyphenol extraction from foods In: Williamson, and Santos-Buelga, C., Methods in Polyphenol Analysis, Cambridge: The Royal Society of Chemistry 33 Fernaandez, P.L., Pablos, F., Martian, M.J and Gonzaalez, A.G (2002), Study of Catechin and Xanthine Tea Profiles as Geographical Tracers, J Agric Food Chem., 50, pp.1833-1839 34 Fukai, K., Tadashi I., Hara Y (1991), Antibacterial activity of tea polyphenol against phytopathogenic bacteria, Agric Biol Chem., 55(7), pp 1895-1897 35 Fumio, N., Goto, K., Seto, R., Suzuki, M., Sakai, M., Hara Y (1996), Scavenging effects of tea catechins and their derivatives on DPPH, Free Radical Biology& Medicine, 11(6), pp 895-902 36 Gadkari, P.V., Balaraman, M (2015), Catechins: Sources, extraction and encapsulation: A review, food and bioproducts processing, 93, pp 122–138 37 Gertenbach, D.D (2002), Solid-Extraction technologies for manufacturing nutraceuticals In: Shi, J., Mazza G and Le Moguer, M Functional Foods Biochemical and processing aspect Vol Boca Raton: CRC press LLC 38 Hu, C-J., Gao, Y., Liu, Y., Zheng, X-Q., Ye, J-H., Liang, Y-R., Lu, J-L (2016), Studies on the mechanism of efficient extraction of tea components by aqueous ethanol, Food Chemistry, 194, pp 312–318 39 Hundhausen, C., Bosch-Saadatmandi, C.K., Augustin, R., Blank, S., Wolffram, R G (2005), Effect of vitamin E and polyphenols on ochratoxin Ainduced cytotoxicity in liver (HepG2) cells Journal of Plant Physiology, 162, pp.818—822 40 Ibanez, E., Herrero, M., Mendiola, J.A., Castro-Puyana, M (2012), Extraction and characterization of bioactive compounds with health benefits from marine resources: macro and micro algae, cyanobacteria, and invertebrates In: Hayes, M (Ed.), Marine Bioactive Compounds: Sources, Characterization and Applications Springer, pp 55– 98 41 Katalinic, V., Milos, M., Kulisic, T., &Jukic, M (2006), Screening of 70 medicinal plant extracts for antioxidant capacity and total phenols, Food Chemistry, 94(4), pp 550–557 GVHD: Tống Thị Minh Thu 97 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học 42 Komatsu, Y., Suematsu, S., Hisanobu, Y., Saigo, H., Matsuda, R., & Hara, K (1993), Studies on preservation of constituents in canned drinks Effects of pH and temperature on reaction-kinetics of catechins in green tea infusion, Bioscience Biotechnology and Biochemistry, 57(6), pp 907–910 43 Labbé, D., Tremblay, A and Bazinet L (2006), Effect of brewing temperature and duration on green tea catechinsolubilization: Basis for production of EGC and EGCGenriched fractions, Separation and Purification Technology, 49, pp.1-9 44 Lin, Y-L., Juan, I-M., Chen, Y-L., Liang, Y-C and Lin, J-K (1996), Composition of Polyphenols in Fresh Tea Leaves and Associations of Their Oxygen-RadicalAbsorbing Capacity with Antiproliferative Actions in Fibroblast Cells, J Agric Food Chem., 44, pp 1387-1394 45 Lin, Y-S., Tsai, Y-J., Tsay, J-S., Lin J-K.(2003), Factors Affecting the Levels of Tea Polyphenols and Caffeine in Tea Leaves, Agric Food Chem., 51, pp 1864−1873 46 Liu, F.F, Ang, C.Y.W., and Springer, D (2000), Optimization of extraction conditions for active components in Hypericumperforatum using surfacemethodology, Journal of Agriculture and Food Chemistry, 48, pp 3364-3371 47 Luczaj, W., Skrzydlewska, E (2005), Antioxidative properties of black tea, Preventive Medicine, 40(6), pp 910–918 48 Malgorzata, M., Szymuslak H., Gliszczyn, A., Wiglo, S-S., Rietjens, I.M.C.M., Tyrakowska B E (2008), pH-Dependent Radical Scavenging Capacity of GreenTeaCatechins, J Agric Food Chem., 56, pp 816–823 49 Mendel, F (2007), Overview of antibacterial, antitoxin, antiviral, and antifungal activities of tea flavonoids and teas, Mol Nutr Food Res., 51, pp 116-134 50 Naczk, M., Shahidi, F (2004), Extraction and analysis of phenolics in food, Journal of Chromatography A (1054), pp 95-111 51 Naczk, M., Shahidi, F and Sullivan, A (1992), Recovery of rapeseed tannins by various solvent systems, Food Chemistry, 45, pp 51–54 52 Nanjo, F., Goto, K., Seto, R., Suzuki, M., Sakai, M., Hara, Y (1996), Scavenging effects of tea catechins and their derivatives on DPPH, Free Radical Biology& Medicine, 11 (6), pp 895-902 GVHD: Tống Thị Minh Thu 98 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học 53 Nihal, T., Sari, F., Velioglu Y S (2006), Effects of extraction solvents on concentration and antioxidant activity of black and black mate tea polyphenols determined by ferrous tartrate and Folin–Ciocalteu methods, Food Chemistry, 99, pp 835–841 54 Nihal, T., Velioglu, Y S., Sari, F and Polat, G (2007), Effect of Extraction Conditions on Measured Total Polyphenol Contents and Antioxidant and Antibacterial Activities of Black Tea, Molecule, 12, pp 484-496 55 Perva-Uzunalic, A., Sˇkerget, M., Knez, Z., Weinreich, B., Otto, F., Gruner S (2006), Extraction of active ingredients from green tea (Camellia sinensis): Extraction efficiency of major catechins and caffeine, Food Chemistry, 96, pp 597-605 56 Pilar Prieto, Manuel Pineda,2and Miguel Aguilar, Spectrophotometric Quantitation of Antioxidant Capacity through the F ormation of a P hosphomolybdenum C omplex: Specific Application to the Determination of Vitamin E1 57 Pham Thanh Quan, Tong Van Hang, Nguyen Hai Ha, Nguyen Xuan De, Truong Ngoc Tuyen (2006), Microwave – assisted extraction of polyphenols from fresh tea shoot Tạp chí Phát triển KH&CN, (8), pp.69-75 58 Qilong, R., Huabin, X., Zongbi, B., Baogen, S., Qiwei, Y., Yiwen, Y.andZhiguo, Z (2013), Recent Advances in Separation of Bioactive Natural Products, Chinese Journal of Chemical Engineering, 21(9), pp.937-952 59 Raza, H., John A (2005), Green tea polyphenol epigallocatec hin-3-gallate differentially modulatesoxidativ e stress in PC12 cell compartments, Toxicology and Applied Pharmacology, 207, pp 212–220 60 Rice-Evans, C.A., Miller, N.J., and Paganga, G (1997), Antioxidants properties of phenolic compounds, Trends in Plant Science, 2, pp 152-159 61 Rodriguez-Saona, L.E., Wrolstad, R.E (2001), Anthocyanins: Extraction, isolation and purification of anthocyanins In: R.E Wrolstad, Current Protocols in Food Analytical Chemistry New York: John Wiley & Sons 62 Row, K.H., Jin Y (2006), Recovery of catechin compounds from Korean tea by solvent extraction, Bioresource Technology, 97, pp.790-793 63 Rozzi, N L., Singh R.K (2002), Supercritical fluids and the food industry, Comprehensive reviews in food science and food safety, 1, pp 33-44 GVHD: Tống Thị Minh Thu 99 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học 64 Sari, F., Nihal, T., Polat, G and SedaVelioglu, Y (2007), Total polyphenol, antioxidant and antibacteria activities of black mate tea, Food Sci Technol Res, 13 (3), pp 265 – 269 65 Shahidi, F., Alexander D M (1998), Green tea catechins as inhibitors of oxidation of meat lipids, Journal of Food Lipids, 5, pp 125-133 66 Soussi A., Crouteb, F., Soleilhavoup, J-P., Kammoun, A., Feki A E (2006), Impact du thé vert sur l’effet oxydatif du métavanadate d’ammoniumchez le rat male pubère, C R Biologies, 329, pp.775–784 67 Stalikas, C.D (2007), Extraction, separation, and detectionmethods for phenolic acids and flavonoids, J Sep Sci., 30, pp 3268–3295 68 Taguri, T., Tanaka, T., Kouno, I (2004), Antimicrobial activity of 10 different plant polyphenols against bacteria causing foodborne disease, Biol Pharm Bull., 27, pp 1965–1969 69 Tao, X., Shi, S., Wan, X (2006), Impact of ultrasonic-assisted extraction on the chemical and sensory quality of tea infusion, Journal of Food Engineering 74, pp 557– 560 70 Tsai, T-H., Chien, Y-C., Lee, C-W., Tsai, P-J (2008), In vitro antimicrobial activities against cariogenic streptococci and their antioxidant capacities: Acomparative study of green tea versus different herbs, Food Chemistry, 110, pp 859–865 71 Wu, C., Xu, H., Héritier, J., Andlaue, W (2012), Determination of catechins and flavonol glycosides in Chinese tea varieties, Food Chemistry, 132, pp 144–149 72 Yam, T S., Shah, S., Hamilton-Miller, J M (1997), Microbiological activity of whole and fractionated crude extracts of tea (Camellia sinensis), and of tea components, FEMS Microbiol Lett., 152, pp 169–174 73 Yamaki, S (1984), Isolation of vacuoles from immature apple fruit flesh and compartmentation of sugars, organic acids, phenolic compounds and amino acids, Plant and Cell Physiology, 25, pp 151-166 74 Yao L., Caffin, N., D’arcy, B., Jiang, Y., Shi, J., Singanusong, R., Liu, X., Datta, N., Kakuda, Y., Xu Y (2005), Seasonal Variations of Phenolic Compounds in Australia-GrownTea (Camellia sinensis), J Agric Food Chem., 53, pp 6477−6483 GVHD: Tống Thị Minh Thu 100 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé Trường Đại Học Bà Rịa – Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành Công Nghệ KTHH Nghiên Cứu Khoa Học 75 Zhang, Y and Charles O R (2004), Evaluation of EpigallocatechinGallate and Related Plant Polyphenols as Inhibitors of the FabG and FabIReductases of Bacterial Type II Fatty-acid Synthase, The journal of Biological chemistry, 279 (30), pp 30994– 31001 76 Zhao, Y., Asimi, S., Wu, K., Zheng, J., Li, D (2015), Black tea consumption and serum cholesterol concentration: Systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials, Clinical Nutrition, 34, pp 612 – 619 Tài liệu Internet 77 Kim ngạch xuất chè Việt Nam tăng 11,8% 24/07/2017, trích từ URL: CHÈ VIỆT The Essence Vietnam 78 Những công dụng hay chè xanh với sức khoẻ 28/05/2017, trích từ URL: Chexanh.vn 79 FAOSTAT, (2015) GVHD: Tống Thị Minh Thu 101 SVTH: Tống Thị Ngọc Bé ... Nghiên cứu chiết tách hợp chất POLYPHENOLS ứng dụng Dược - Mỹ Phẩm Thực phẩm từ Chè Xanh trồng xã Suối Nghệ - huyện Châu Đức - tỉnh Bà Rịa Vũng Tàu nhằm tìm phương pháp chiết tách polyphenol phù hợp. ..1 Tên đề tài: Nghiên cứu chiết tách hợp chất polyphenol chè xanh trồng tỉnh Bà Rịa - Vũng Tàu nghiên cứu ứng dụng Dược Mỹ Phẩm Mã số: 1459/HD-BVU Chủ nhiệm đề tài: Tống Thị Ngọc... chè - Ứng dụng cao polyphenol sản phẩm làm đẹp da PHẠM VI NGHIÊN CỨU Trong nghiên cứu nội dung giới hạn sau: - Đối với chè khảo sát: sử dụng chè trồng xã Suối Nghệ, huyện Tân Thành, tỉnh Bà Rịa