THÔNG TIN TÀI LIỆU
Tr- ờng đại học s- phạm hà nội Khoa sinh - ktnn - - trần thị hồng thắm Nghiên cứu ảnh h- ởng nguồn cacbon tới khả tạo màng Bacteria cellulose chủng Acetobacter xylinum BHN2 CH14 ứng dụng tạo màng trị bỏng khóa luận tốt nghiệp đại học Chuyên ngành: Vi sinh v h Ng- êi h- íng dÉn khoa häc: PGS TS ĐINH THị KIM NHUNG Hà NộI 2010 M CL C Trang M đ u Lý ch n đ tài ầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầầầ M c tiêu c a đ tài ầầầầầầầầầầầầầầầầầ.ầầ N i dung nghiên c u ầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầ Ý ngh a lý lu n th c ti n c a đ tài ầầầầầầầầầầ ầầ N i dung Ch ng T ng quan tài li u 1.1 V trí đ c m phân lo i c a Acetobacter xylinum ầầầ ầ 1.1.1 V trí phân lo i c a Acetobacter xylinum ầầầầầầ ầầ 1.1.2 Các đ c m phân lo i vi khu n Acetobacter xylinumầầ 1.1.3 Nhu c u dinh d nh h ng c a ngu n cacbon ầầầầầầầầầ ầ 1.1.3.2 Hàm l ng ethanol dung d ch lên men ầầ ầầ 1.1.3.1 1.2 ng c a vi khu n Acetobacter xylinumầ.ầ B ng đ c m nhóm thu c tr b ng ầầầầầầầầầ 1.2.1 B ng sinh b nh h c t n th 1.2.2 ng b ng ầầầầầầ ầầ c m nhóm thu c tr b ng ầầầầầầ ầầ.ầầ 10 1.2.3 Thành ph n tác d ng c a ngh thu c m maduxin u tr b ng ầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầầ 11 1.3 Bacterial cellulose ầầầầầầầầầầầầầầầầầ.ầ 13 1.3.1 C u trúc c a màng bacterial cellulose ầầầầầầầ ầ 13 1.3.2 C ch t ng h p bacterial cellulose ầầầầầầầầ.ầầ 13 1.3.3 ng d ng c a màng bacteril cellulose ầầầầầầầầ.ầ 15 1.3.4 Tình hình nghiên c u c a Acetobacter xylinum th gi i Vi t Nam ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ ầ 16 1.3.4.1 Tình hình nghiên c u Acetobacter xylinum th gi i 16 1.3.4.2 Tình hình nhiên c u Acetobacter xylinum Ch ng pháp nghiên c u ng Ph it 2.1 2.2 Ph ng nghiên c u hoá ch t ầầầầầầầầầầ ầ 18 ng pháp nghiên c u ầầầầầầầầ.ầầầầầầầ 20 2.2.1 Ph b ng ph Vi t Nam 16 ng pháp phân bi t t bào vi khu n Acetobacter xylinum ng pháp nhu m Gram ầầầầầầầầầầầầầầầầ 20 2.2.2 Ph ng pháp b o qu n ch ng gi ng th ch nghiêng ầ ầ20 2.2.3 Ph ng pháp ho t hoá gi ng ầầầầầầầầầầầ ầ 20 2.2.4 Ph ng pháp lên men t o màng ầầầầầầầầ.ầầầ 21 2.2.5 Ph ng pháp x lí màng ầầầầầầầầầầầầầầ 21 2.2.6 Ki m tra tính kích ng c a màng bacteria cellulose ầầầầ 21 2.2.7 Ph ng pháp gây b ng tr b ng th ầầầầầầầ 22 2.2.8 Ph ng pháp x lí s li u b ng th ng kê toán h c ph n m m Microsoft Excel v i ch s th c nghi m ầầầầầầầầầầầầ 22 ng K t qu nghiên c u th o lu n Ch 3.1 M t s đ c tính sinh thái, sinh hố c a hai m u vi khu n Acetobacter xylinum BHN2và CH14 ầầầầầầầ ầầầầầầầầầầ.ầầ 24 3.2 nh h ng c a ngu n cacbon t i kh n ng t o màng BC ầầ.ầ 25 3.2.1 nh h 3.2.2 nh h ng c a ngu n cacbon t i kh n ng t o màng BC 25 ng c a hàm l ng ethanol n ng đ khác t i kh n ng t o màng BC ầầầầầầầầầầầầầầầầầầ.ầầ 28 3.3 K t qu ki m tra tính kích ng c a màng BC th ầầầ.ầ 32 3.4 K t qu th nghi m tác d ng c a màng BC lên v t b ng ầ ầầ 33 K t lu n vƠ đ ngh K t lu n ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ 39 ngh ầầầầầầầầầầầầầầ ầầầầầầầầầ 39 TƠi li u tham kh o ầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầầ 40 Ph l c Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Hồng Thắm M U TV N Lý ch n đ tƠi Ngày công ngh sinh h c ngày m t phát tri n v i s phát tri n c a KHKT, d n tr thành m t ngành k thu t ch đ o c a nhi u qu c gia th gi i G n li n v i cơng ngh vi sinh v i nh ng thành t u l n có ý ngh a đ i s ng, ngành công nghi p, y h cầ t p trung s ý c a nhà khoa h c toàn th gi i Vi khu n A xylinum thu c nhóm vi khu n Gram âm hi u khí b t bu c, hoá d ng thu c chi Acetobacter, h Acetobacteraceae Vi khu n A xylinum tìm th y gi m, d ch r môi tr u, n c ép hoa qu Khi nuôi c y vi khu n ng d ch l ng, chúng s hình thành b m t m t l p màng Bacterial cellulose (BC), t p h p t bào vi khu n liên k t v i phân t cellulose Màng BC c u t o b i nh ng chu i polimer--1,4 glucopyranose không phân nhánh đ môi tr c t ng h p t m t s lồi vi khu n ni c y chúng ng d ch l ng H u h t nghiên c u đ u ch r ng A xylinum loài vi khu n t ng h p màng BC có hi u qu cao nh t Hi n m i ch đ Vi t Nam nh ng nghiên c u s n xu t s d ng màng BC c quan tâm vài n m g n m i đ t đ Các lo i màng dùng đ đ p lên v t th d c k t qu b c đ u ng h màng dùng đ đ p m t n ng da cho ph n đ u ph i nh p ngo i v i giá đ t đ Ch riêng Vi n b ng Qu c gia Hà N i m i n m ph i ti p nh n h n 6.000 ca b ng, v i b nh nhân b b ng n ng chi phí cho t m màng đ p lên v t b ng r t cao Trong màng BC có th hồn tồn s n xu t n lên men t nh c a vi khu n A xylinum mơi tr Kho¸ ln K32 cư nh©n sinh tèt c b ng ph ng pháp ng l ng Hi n nay, vi c nghiÖp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Hồng Thắm nghiờn c u ng d ng màng BC tr b ng n c ta v n đ m i m , g n b t đ u có m t s r t nghiên c u v t o màng BC dùng tr b ng T lý tơi đ n ch n đ tài nghiờn c u: Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn cacbon tới khả tạo màng bacteria cellulose chủng Acetobacter xylinum BHN2 CH ứng dụng tạo màng trị bỏng M c tiêu c a đ tƠi - Nghiên c u m t s đ c tính sinh h c c a ch ng A xylinum BHN2 CH14 ó n ch n - Nghiên cứu ảnh h- ởng nguồn cacbon tới khả tạo màng BC - B- ớc đầu nghiên cứu ứng dụng tạo màng tr b ng trªn thá N i dung nghiên c u - Nghiên c u m t s đ c tính sinh h c c a ch ng A xylinum BHN2 CH14 n ch n - Nghiên cứu môi tr- ờng dinh d- ỡng thích hợp cho trình lên men tạo màng hai chủng A xylinum BHN2 v CH14 tuyển chọn + Nghiên cøu ¶nh h- ëng cđa ngn cacbon (fructose, glucose, saccarose, sobitol, ethanol) tới khả tạo màng BC + Nghiên cøu ¶nh h- ëng cđa hàm l ng ethanol tíi khả tạo màng BC - Thử nghiệm tr b ng th : kiĨm nghiƯm t¸c dơng sinh häc cđa mµng BC Ý ngh a lý lu n vƠ th c ti n c a đ tƠi - Nghiên c u sâu vào tìm hi u u ki n, mơi tr t i u hóa u ki n môi tr đ a đ c hàm l ng đ ng dinh d ng, ng lên men hai ch ng vi khu n n ch n, ng t i u - Nghiên c u góp ph n t o màng tr b ng ph c v đ i s ng, nhu c u c a xã h i v i giá thành r h n Khoá luận K32 cử nhân sinh tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Hồng Thắm N I DUNG CH NG T NG QUAN TÀI LI U 1.1 V trí vƠ đ c m phơn lo i c a Acetobacter xylinum 1.1.1 V trí phơn lo i c a Acetobacter xylinum Tên g i: Acetobacter xylinum m t tên g i chính th c theo h th ng danh pháp qu c t 1990 Vi khu n acetic nói chung, A xylinum nói riêng thu hút đ c s quan tâm c a r t nhi u nhà khoa h c th gi i t x a t i Ngay t th k XIX nhà khoa h c ti n hành phân l p phân lo i chúng Tuy nhiên cho đ n vi c phân lo i vi khu n v n nhi u tranh cãi N m 1950, Frateur x p A xylinum vào nhóm Meroxydans N m 1957, theo “Bergey’s manual of determinative bacteriology” [16], ông x p A xylinum vào chi Acetobacter, thu c h Pseudomonadaceae, b Pseudomonadales, l p Schizomycetes n n m 1974, theo manual “Bergey’s bacteriology”[19] A xylinum l i đ c coi nh Acetobacter aceti, thu c chi Acetobacter đ of determinative m t loài ph c a c nhóm vào nh ng chi khơng rõ ngu n g c Cùng v i th i gian loài vi khu n l i đ khác Nh c s p x p vào nh ng v trí theo “Applied and Envitromene microbiology” [25] “Bergey’s manual of systematic bacteriology” [29] h Acetobacteraceae g m hai chi vi khu n acetic quan tr ng Acetobacter Gluconobacter Vi khu n A xylinum đ c x p vào chi Acetobacter Khoá luận K32 cử nhân sinh tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Hồng Thắm T i nay, t n t i nhi u quan m khác vi c phân lo i vi khu n acetic nói chung A xylinum nói riêng V n đ v n gây nhi u tranh cãi, đòi h i c n có nhi u h n nh ng nghiên c u ti p theo 1.1.2 Các đ c m phơn lo i vi khu n Acetobacter xylinum * c m hình thái - t bƠo h c c m A xylinum tr c khu n hình que, kích th c kho ng m, đ ng riêng l ho c x p thành t ng chu i, khơng có kh n ng di đ ng Các t bào đ c bao b c b i màng nh y có b n ch t cellulose Màng b t màu xanh nhu m v i thu c nhu m iot dung d ch acid sulfuric 60% Chúng tích lu kho ng 4,5% acid acetic, n ng đ acid acetic cao v gi i h n cho phép, s t c ch ho t đ ng c a vi khu n ảình 1.1 T bào vi khu n Acetobacter xylinum A xylinum th ng s ng chung v i n m chè m t lo i n khát dân gian làm t n c chè lỗng g i “Thu hồi sâm ”, Ng Qu c g i “H i b o” hay “V b o”, ng c gi i i Trung i Nga g i “N m chè”, ng Pháp g i “Champignon De Longue Vie - n m tr ng sinh”, ng i i Nh t g i chúng l Kombucha [35] Khoá luận K32 cử nhân sinh tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Hồng Thắm Vi khu n A xylinum thu c nhóm vi khu n Gram âm, hi u khí b t bu c, hoá d ng T bào c a chúng th ng tìm th y gi m, d ch r u, n c ép hoa qu , đ t [21] * c m nuôi c y - Trên môi tr ng th ch đ a, vi khu n A xylinum hình thành khu n l c nh n ho c xù xì, rìa mép khu n l c b ng ph ng hay g n sóng, màu tr ng ho c su t, khu n l c b ng ph ng ho c l i lên d tách kh i môi tr - Trên môi tr ng [15] ng d ch th , u ki n ni c y t nh, chúng s hình thành b m t môi tr ng m t l p màng cellulose Màng cellulose t p h p nh ng bó s i cellulose liên k t v i nhau, chúng đ c hình thành t t p h p s i microfibril [14], [34] Nó bao b c xung quanh t bào vi khu n có ch c n ng b o v chúng kh i tác đ ng bên ngồi mơi tr có th t n t i nh ng vùng n ng Vì v y, Chúng c th i [10] Ng c l i u ki n ni l c, cellulose hình thành d ng h t nh v i kích th c không đ u phân tán môi tr ng dinh d ng t o nh ng đ c tính hình thái khác h n cellulose u ki n nuôi c y t nh nh : s phân nhánh c a s i cellulose nhi u h n, đ * ng kính bó s i l n h n (0,05-0,1 m) [11] c m sinh lý - sinh hóa Theo Bergey, pH t i thích cho vi khu n A xylinum 5,4-6,2, nhi t đ t i thích h p 25-300C M t s nghiên c u ch A xylinum có th sinh tr ng nhi t đ 12-350C pH t đ n 8, pH t i thích [22] N m 1947, Hestrin cs tìm môi tr BC bao g m 2% đ ng nuôi c y A xylinum t o màng ng glucose, 0,5% Pepton, 0,5% Cao men, 0,27% Na2HPO4; 0,115% Citric acid monohydrate, pH t i thích h p 4,5 [27] Tuy nhiên v n nh ng ý ki n khác nhi u tranh cãi v u ki n nhi t đ , pH t i thích cho ch ng vi khu n A xylinum sinh tr Khoá luận K32 cử nhân sinh tốt ng v t o mng nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Hång Th¾m B ng1.1 c m sinh hố c a ch ng vi khu n Acetobacter xylinum (theo Frateur (1950)) [26] c m STT Hi n t Oxy hoá ethanol Chuy n thành acid acetic hoá ng môi tr K t qu ng ch a Bromphenol Blue 0,04% t màu xanh + sang màu vàng Ho t tính catalase Sinh tr mơi tr Hi n t ng s i b t khí + ng Sinh kh i không phát tri n _ ng Hoyer Chuy n hoá T o k t t a đ g ch d ch sau lên glycerol thành men + dihydroxyaceton Chuy n hố Vòng sáng xu t hi n xung quanh glucose thành acid khu n l c môi tr Ki m tra kh n ng Khơng hình thành s c t nâu _ sinh s c t nâu Ki m tra kh n ng Váng vi khu n xu t hi n màu lam + t ng h p cellulose 1.1.3 Nhu c u dinh d ng c a vi khu n Acetobacter xylinum Trong trình sinh tr đ i v i m t s ch t dinh d th đ tr + ng ch a CaCO3 ng phát tri n vi khu n A xylinum có nhu c u ng sinh tr c cung c p t h p ch t đ ng, r ng phong phú Ngu n cacbon có u etylic axit h u c sinh ng nh acid amin, -amino benzoic, acid nicotinic, biotin, đ u có vai trò quan tr ng sinh tr ng c a vi khu n [6] Vi khu n có kh n ng t t ng h p polisaccarit phân t l n nh cellulose, detran, Khoá luận K32 cử nhân sinh tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Hång Th¾m 1.1.3.1 nh h ng c a ngu n cacbon đ m b o ho t đ ng s ng bình th n ngồi r u, n ngu n nit d ng c a vi khu n, môi tr ng th c c ph i cung c p thêm mu i khoáng, ngu n cacbon, h p th nh : CaHPO4, (NH4)2SO4, (NH4)2HPO4, KHPO4, MgSO4.7H2Oầ Tu nhu c u c th c a t ng lo i vi khu n sinh tr ng phát tri n t t h n c n cung c p ngu n cacbon phù h p Tu nhóm vi sinh v t mà ngu n cacbon đ c hay h u c Giá tr dinh d c cung c p vô ng kh n ng h p th cacbon ph thu c vào hai y u t : thành ph n hố h c tính ch t sinh lý c a ngu n th c n Hai đ c m sinh lý c a t ng lo i vi sinh v t Ng d d i ta s d ng đ ng ng đ n ng làm th c n nuôi c y ph n l n vi sinh v t nhi t đ cao có th b chuy n hố thành lo i h p ch t có màu t i khó h p th Trong môi tr ng ki m sau kh trùng, đ b chuy n hoá làm bi n đ i pH môi tr ng tránh hi n t i ta th ng ch h p trùng môi tr ng có ch a đ ng ng 1100 30 phút T lo i đ h p gián đo n (ph ng dùng 0,5-0,2% đ đ ng ng kh áp l c 0,5atm ng đ n t t nh t nên s d ng ph ng pháp Tyndal) i ta s d ng n ng đ đ ng d ng pháp ni c y lo i vi sinh v t khác ng không gi ng nhau, v i vi khu n th ng H u h t vi sinh v t ch đ ng hoá đ ng c lo i d ng đ ng phân D [1] Các h p ch t h u c ch a c cacbon c nit (pepton, n chi t ngô, n c chi t n m men, n c th t, n c c chi t đ i m ch, ) có th v a s d ng làm ngu n cacbon, v a s d ng làm ngu n nit đ i v i vi sinh v t [1] * Con đ ng chuy n hóa cacbon V s chuy n hố cacbon nhi u tác gi đ n th ng nh t vi khu n A xylinum có kh n ng oxy hố glucose theo nh ng h Kho¸ ln K32 cư nhân sinh tốt ng sau: nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m Ethanol 0,2% 0,4% 0,6% 0,8% 1,0% 1,2% 1,4% 1,6% 1,8% 2,0% CH14 n 3 3 3 3 3 M 2,08 2,19 2,35 2,82 3,99 4,66 4,21 3,87 3,09 3,01 0,43 0,25 0,16 0,08 0,93 0,94 0,37 0,89 0,58 0,13 Hång BHN2 m 0,25 0,14 0,09 0,05 0,53 0,54 0,21 0,51 0,33 0,07 Cv n 20,67 11,42 6,81 2,84 23,31 20,17 8,79 22,99 18,77 4,32 M 2,35 2,46 2,80 2,94 3,24 3,81 3,36 2,66 3,57 3,10 T b ng 3.4 bi u đ 3.1 ta th y hàm l 0,74 0,41 0,41 0,24 0,25 0,22 0,14 0,25 0,42 0,22 m 0,43 0,24 0,24 0,14 0,14 0,12 0,08 0,14 0,24 0,13 Cv 31,49 16,67 16,64 8,16 7,72 5,77 4,17 9,40 11,76 7,10 ng ethanol t t nh t 1,2% đ i v i c ch ng A xylinum CH14 BHN2 S t ng h p cellulose t ng d n t 0,2% t i 0,8% t ng m nh t i 1,2% gi m d n hàm l ethanol t ng ti p L ng ng ethanol b sung cao kh n ng sinh cellulose c a A xylinum m nh, nhiên hàm l ng ethanol v t 1,2% ng dinh d ng nuôi c y ng cellullose sinh gi m d n l Có th đ c gi i thích nh sau: mơi tr t bào vi khu n thành ph n oxi đ môi tr ng nuôi c y, làm môi tr c c ng vào D n t i vi c tích l y acid ng có đ pH th p c ch s t ng h p cellulose H n n a ethanol ch t sát khu n n ng đ cao làm c ch ho t đ ng c a vi khu n A xylinum ã có nhi u k t qu đ ng nh t v i nghiên c u nh Scharmm M., hay inh Th Kim Nhung [38], [8] Ngoài m t s tác gi khác nh Hong- Joo Son công b hàm l [30] Theo Nodes, l ng ethanol có th thay đ i t 0,2-1% t t nh t ng ethanol trì mơi tr [33] Các tác gi Ebner Heirich, cho l ng gi 0,6% 3-3,5% ng ethanol dùng t 7-10% V [23], [28] Kho¸ ln K32 cư nhân sinh 31 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m Hång K t qu đ ng nh t v i nghiên c u c a tác gi khác: s n l cellulose t ng d n v i s tr ng, s t ng hàm l t ng hàm l ng đ ng đ ng ng kh i đ u đ a vào môi ng t i m t m c s làm gi m ch m s t ng h p cellulose nh h ng c a hm l Khoá luận K32 cử nhân sinh ng ethanol 32 ch ng A xylinum Cả14 tèt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Thắm nh h ng c a hàm l Hình 3.3 nh h ng ethanol ng c a hƠm l Hång ch ng A xylinum BảN2 ng ethanol đ n mƠng BC 3.3 K t qu ki m tra tính kích ng c a mƠng BC th Màng BC đ c x lý, ti n hành phá nghi n nát màng thu d ch chi t t màng BC, sau chúng tơi ti n hành tiêm d i da th v i đ i ch ng dung d ch mu i NaCl 0,9% Kho¸ ln K32 cư nhân sinh 33 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m Hång K t qu cho th y d ch chi t màng BC tiêm da th khơng gây tri u ch ng kích ng nh phù, ban đ , khơng gây kích ng da, nh k t qu hình 3.4 Hình 3.4 Th tính kích ng c a mƠng 1: v t tiêm dung d ch mu i NaCl 0,9% 2: v t tiêm d ch chi t màng BC 3.4 K t qu th nghi m tác d ng c a mƠng BC lên v t b ng Nguyên t c c b n u tr v t th khu n g n li n ph c h i bi u mô ng b ng ph i u tr nhi m b ng nông, lo i tr t ch c ho i t t o u ki n cho phát tri n t ch c h t, bi u mơ hố ph kín li n s o t t Trên c s nghiên c u v màng BC, k t h p m t s ch t có ngu n g c t nhiên th ng đ c s d ng u tr b ng nh ngh v cao s n làm t ng kh n ng lành v t th ng, h n ch viêm, nhi m trùng, t o màng sinh h c có tác d ng t t, h giá thành u tr b ng Ch ph m màng BC có đ ng kính 4,5 cm, n ng 1-2 g Màng sinh h c có màu tr ng d quan sát tình tr ng v t th ng Ti n hành gây b ng th kho m nh, sau ngày v t th ng ho i t b t đ u ti n hành th nghi m tác d ng c a màng BC Ti n hành thay màng g c sau 24 gi Khoá luận K32 cử nhân sinh 34 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m Hình 3.5 V t b ng v a gơy b ng Hång Hình 3.6 V t b ng sau ngƠy Ban đ u gây b ng th y v t b ng cháy đen t o v y đen c ng, sau m t t i hai ngày xung quanh v t b ng th y có hi n t đ V t th ng b t đ u có hi n t ng ph ng r p, t y ng ho i t lan r ng T i ngày th ti n hành đ p màng g c theo lô: Hình 3.7 Lơ 1: p mƠng BC vƠ g c tr b ng i ch ng, không u tr Lô 5: G c t m n c ngh t i Lô 2: G c vô trùng Lô 6: BC t m thu c maduxin Lô 3: BC sau x lý Lô 7: G c t m thu c maduxin Lô 4: BC t m n c ngh t i Khoá luận K32 cử nhân sinh 35 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Thắm Hồng Ti n hnh th nghi m th sau 10 ngày, theo dõi ti n tri n c a v t b ng ta th y: Sau ngày th v t th th y h u h t v t th ng b t đ u co l i t o v y, đ n ngày th ng đ u t o v y, riêng lô th y có m tr ng v t ng b loét Nh n th y h u h t di n tích v t th th T i ngày th th y v t th ng co l i đáng k ng b t đ u lành, đ c bi t đ p màng BC (lô 3, lô 4, lơ 6) v t th lơ có ng lành rõ nh t Khơng th y có m , không b ph ng r p không mùi hôi th i Ngày th 10, th y v t th ng lành rõ r t, c th lô lành t i 93,74%, v t đ i ch ng c ng ch lành t i 78,43% có xu t hi n d ch m màu tr ng K t qu th hi n qua b ng sau: B ng 3.5 Di n tích v t b ng c a th lô theo th i gian Di n tích trung bình v t b ng th theo th i gian (cm2) NgƠy Lô Lô Lô Lô Lô Lô Lô 6,154 6,154 6,154 6,154 6,154 6,154 6,154 5,307 4,906 3,140 2,269 5,306 3,799 3,140 3,799 2,543 2,269 1,766 4,153 1,539 2,009 3,140 2,009 2,009 1,327 3,799 1,539 1,766 1,539 2,009 1,130 0,785 2,543 1,130 1,766 10 1,327 1,130 0,636 0,385 1,130 0,502 0,950 Kho¸ luËn K32 cử nhân sinh 36 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m Hång B ng 3.6 T l lành ( % theo di n tích ban đ u) NgƠy Lô T l lƠnh v t th ng (% theo di n tích) Lơ Lơ Lơ Lô Lô Lô 0 0 0 13,76 20,28 48,97 63,13 13,78 38,27 48,97 38,27 58,67 63,13 71,30 32,52 74,99 67,35 48,97 67,35 67,35 78,44 38,27 74,99 71,30 74,99 67,35 81,64 87,24 58,68 81,64 71,30 10 78,44 81,64 89,66 93,74 81,64 91,84 84,56 ng 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Ch ng G c BC BC + N G+N BC + Ma Ng ày 10 ày Ng ày Ng Ng ày3 Ng Ng ày G + Ma ày1 T l lƠnh (% theo di n tích) T l lƠnh v t th Th i gian (ngƠy) Bi u đ 3.2 T l lành v t th Kho¸ ln K32 cư nh©n sinh 37 ng lơ u tr tèt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Thắm Hỡnh 3.8 p mƠng BC vƠ g c tr b ng Kho¸ ln K32 cư nh©n sinh 38 Hång ngƠy th 10 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Thắm Qua b ng th ng kê đ th cho th y i cho k t qu t t nh t, t l v t th ngh t g c đ v t th Hång lô màng BC t m n c ng lành nhanh h n so v i dùng ng t lành, đ c tính c a màng có kh n ng kháng khu n v i tác d ng c a h p ch t curcumin ngh làm li n s o nhanh Sau lô màng BC t m thu c maduxin maduxin (hay cao s n) có hàm l ng tanin flavonoid cao, có tác d ng di t khu n m xanh Nh v y, v t th ng, v t b ng không b nhi m khu n Ngoài ra, ho t ch t s n m t có tác d ng tái t o mô, làm li n v t th t o màng che ph v t th ng b ng nơng nhanh chóng, ng Các lơ thí nghi m có s d ng màng BC cho k t qu t l lành v t th ng cao h n so v i dùng g c có t m ch t t ng ng Do v t th ng đ i ch ng khơng có v t che ph nên d b y u t khác xâm nh p, d nhi m trùng h n V t th ng dùng g c không b nhi m trùng nh ng th i gian lành lâu h n Màng BC t m n th ng t ng đ ng ngày th 10 Nh n th y v t th v t th c ngh t ngày th có t l lành v t i lơ đ i ch ng ng s d ng màng BC có th quan sát tr c ti p ng, có kh n ng che ph v t th y u t bên ngoài, giúp v t th ng, ng n c n s xâm nh p c a ng khơ ráo, có tính th m cao, làm mát v t ng, tránh nhi m trùng, làm v t th ng mau lành thúc đ y trình tái t o mơ h t, dính ch t lên v t th ng nên màng d thay th Do đ c th tính mà màng BC có kh n ng làm lành v t th K t qu t ng mau h n đ p g c ng đ i gi ng v i k t qu nghiên c u c a tác gi Tr n Nh Qu nh, Hu nh Th Ng c Lan đ u đ a đ c k t lu n v t th ng có s d ng màng BC t m thu c tr b ng lành nhanh h n [7], [8] Tuy nhiên đ tài tơi có t m m t s lo i thu c khác lên màng BC đ u tr nh ngh thu c m maduxin (cao s n) Lo i thu c d tìm mi n B c h n đ c bi t giá thành l i th p h n Kho¸ luËn K32 cử nhân sinh 39 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m K T LU N VÀ Hång NGH K t lu n - Ngu n cacbon t t nh t đ i v i kh n ng t o màng BC c a hai ch ng gi ng Acetobacter xylinum BHN2 CH14 ethanol 1,2% - Màng BC t m n c ngh t i t t nh t, màng BC có tác d ng t t h n g c đ t lành trình u tr b ng th ngh Do th i gian nghiên c u có h n nên tơi ch nghiên c u đ c a lo i đ c nh h ng ng đ n kh n ng t o màng c a vi khu n Acetobacter xylinum CH14 BHN2 m i b c đ u th nghi m th có đ c k t qu t t h n, đ a ng d ng s n xu t quy mô công nghi p c n có nh ng nghiên c u c th h n v m t s ch tiêu đ c tính sinh h c c a màng BC, t i u hóa u ki n mơi tr c n thi t đ lành v t th ng c bi t ngu n d ng ch t b sung ng đ làm màng tr b ng cho b nh nhõn b b ng Khoá luận K32 cử nhân sinh 40 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m Hång TÀI LI U THAM KH O Nguy n Lơn D ng, Nguy n ình Quy n, Ph m V n Ty (1998) Vi sinh v t h c Nxb giáo d c, tr.149-150 Nguy n ThƠnh t (1999) C s vi sinh v t h c T p 1, Nxb HSP Hà N i, tr 52-55, 62-102, 185-309 Nguy n ThƠnh t, Nguy n Duy Th o, V ng Tr ng HƠo (1990) Th c hành vi sinh v t Nxb giáo d c, tr 17-34, 63-74, 89-92 V Th Minh c (2001) Th c t p vi sinh v t Nxb HQG Hà N i, tr 1- 50 Tr ng Th Ng c Hoa, Tr hố mơi tr ng Nguy n Qu nh H ng (2005) a d ng ng s n xu t Natadecoco t vi khu n Acetobacter xylinum S 2, T p chí khoa h c k thu t Nông Lâm nghi p ng Th H ng (2007) Phân l p, n ch n nghiên c u m t s đ c tính sinh h c c a vi khu n Acetobacter xylinum ch t o màng sinh h c Lu n v n th c s sinh h c HSP Hà N i Hu nh Th Ng c Lan, Nguy n V n Thanh (2006) Nghiên c u đ c tính màng cellulose vi khu n t Acetobacter xylinum s d ng làm màng tr b ng, T p chí d c h c, s 361 inh Th Kim Nhung (1996) Nghiên c u m t s đ c m c a vi khu n Acetobacter ng d ng lên men acetic theo ph PTS khoa h c sinh h c ng pháp chìm Lu n án HSP Hà N i inh Th Kim Nhung, Tr n Nh Qu nh, Nguy n Th Thu Vơn (2009) Nghiên c u vi khu n Acetobacter xylinum t o màng bacterial celulose ng d ng u tr b ng Báo cáo khoa h c 10 Abbas Rezaee, Sanaz Solimani, Mehdi Forozandemogadam (2005) Role of plasmid in production of Acetobacter xylinum biofilms Vol 1, Khoá luận K32 cử nhân sinh 41 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Thắm Hång N o 3, American Journal of Biochemistry and Biotechnology ISSN 1553- 3468, p 121-125 11 Alexander Steinbuchel, Sang Ki Rhee (2005) Polysaccharides and polyamides in the food industry, www.wiley vch De p 31-85 12 Alina Krystynowicz, Marianna Turkiewicz, Stanislaw Bielecki, Emilia Klemenska, Aleksander Masny, Andrzej Plucienniczak (2005) Molecular basis of cellulose biosynthesis disappearance in submerged culture of Acetobacter xylinum, Acta biochimica polonica, Vol 52, pp 691-698 13 Alina Krystynowicz, Maria Koziołkiewicz, Agnieszka WiktorowskaJezierska, Stanisław Bielecki, Emilia Klemenska, Aleksander Masny, Andrzej Płucienniczak (2005) Molecular basis of cellulose biosynthesis disappearance in submerged culture of Acetobacter xylinum Vol 52, N o 3, http://www.actabp.pl p 691-698 14 Ben-Hayyim G, Ohad I, Ph.D (1965) Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum: VIII On the formation and orientation of bacterial cellulose fibrils in the presence of acidic polysaccharides Vol 25, The Journal of Cell Biology p 191-207 15 Bergey H, John G Holt (1992) Bergey’s manual of dererminativa bacteriology Wolters kluwer health, p.71-84 16 Breed R.S., Murray E.G.D, Smith N.R (1957) Bergey’s manual of determinative bacteriology The Williams and Wilkins company, Baltimore 17 Brown M R (1999) Cellulose structure and biosynthesis Vol 71, N o 5, Pure appl Chem p 767-775 Kho¸ luËn K32 cử nhân sinh 42 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m Hång 18 Brown R.M (1989) Microbial cellulose as a building block resource for specialty products and processes there fore PCT Int Appl Wo 8912107 Al 19 Buchanan R.E., Gibbons N.E (1974) Bergey’s manual of determinative bacteriology The Williams and Wilkins company, Baltimore 20 Canon, R.E and Anderson, S.M (1991) Biogenesis of Bacterial cellulose Critical Reviews in Microbiology, Vol 17, pp 435-447 21 Cli'ng H C, Muhamad I (2000) I Evaluation and optimization of microbial cellulose (Nata) production using pineapple waste as substract Chemical Engineering Department, Faculty of Chemical and Natural Resource Engineering, University Technology Malaysia, 81310 skuda, Johor p 1-9 22 David R Boone, Richard W Castenholz, Don J Brenner, George M Garrity, Noel R Krieg, James T Staley (1980) Bergey's manual of systematic bacteriology p 41-81 23 Ebner H (1989) Process for the production of vinegar with more than 12GMS/100 g MS/100ml acetic acid vol 67 N0 5, pp 471-481 24 Elvie Escoro Brown (2007) Bacterial cellulose thermoplastic polymer nanocompositer Master of science in chemical engneering, Washington state university, Department of chemical engineer, pp.1-6 25 Forng E.R., Anderson S.M., Canon R.E (1989) Synthetic medium for Acetobacter xylinum that can be used for isolation of auxotrophic mutants and study cellulose Biosynthesis Applied and Enviromene microbiology pp 1317-1319 26 Frateur J (1950) Essai sur la systématique des Acétobacter La cellule, Vol 53, pp 278-398 Kho¸ ln K32 cư nhân sinh 43 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Th¾m Hång 27 Gromet Z., Hestrin S (1962) Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum J Bacteriol, Vol 85, No 2, pp 284-292 28 Heirich E (1987) Process of producing vinegar P patent N0 2090717 29 Holt J.G., Krieg N.R (1984) Bergey’s manual of systematic bacteriology The Williams and Wilkins company, Baltimore 30 Hong Joo Son, Moon Su Heo, Young Gyun Kim, Sang Joon Lee (2001) Optimization of fermentation conditions for the production of bacterial cellulose by a newly isolated Acetobacter sp A9 in shaking cultures Biotechnol Appl Biochem, Vol 33, pp 1-5 31 Hong Joo Son, Hee Goo Kim, Keun Ki Kim, Han Soo Kim, Young Gyun Kim, Sang Joon Lee (2002) Increased production of bacterial cellulose by Acetobacter sp V6 in synthetic media under shaking culture conditions Bioresourse technology, Vol 86, pp 215-219 32 Neelobon Suwannapinunt, Jiraporn Burakorn, Suwanncee Thaenthanee (2007) Effect of culture conditions on bacterial cellulosee (BC) production from Acetobacter xylinum TISTR976 and physical properties of BC parchment paper Vol 14, N o 4, Suranaree J.Sci Technol p 357-365 33 Nodes E (1986) Process for the batch wine preparation of vinegar P patent USA N0, 4.596.845 34 Ohad I., Danon D (1964) On the dimensions of cellulose microfibrils Brief Notes, www.jcb.rupress.org, pp 302-305 35 Sam - Pin Lee, Chan - Shick Kim (2000) Characteriation of Kombucha beverages fermented with variour teas and tea fungus Vol 5, N o 3, J food sci nutr p 165-169 36 Saxena M., Krystyna Kudlicka, Kazuo Okuda, Brown R.M (1995) Characterization of genes in the cellulose - synthasizing operon (acs Khoá luận K32 cử nhân sinh 44 tốt nghiệp Trần Thị Khoa Sinh - KTNN Thắm operon) of Acetobacter xylinum: Implications for Hång Cellulose Crystallization Journal of bacteriology, pp 5735-5752 37 Schramm M., Gromet Z., Hestrin S (1957) Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum, Vol 67, pp 284-292, 699-679 38 Schramm M., Hestrin S (1954) “Factor affecting production of cellulose at the air/liquid interface of a culture of Acetobacter xylinum”, J.gen Microbiol, Vol 11, pp 123-129 39 Stanislw Bielecki, Alina Krystynowicz, Marianna Turkiewicz, Halina Kalinowska (1981) Bacterial cellulose, Institute of Technical Biochemistry, Technical University of Ldz Stefnowskiego, Poland, pp 901-924 40 Tomonori N., Naoto I., Teruko K., Yukiko K., Takayasu T., Fumihiro Y., Fukumi S., Takahisa H (1999) Enhancement of cellulose production by expression of sucrose synthase in Acetobacter xylinum Applied Biological sciences Vol 96, pp 14-18 41 Trygve Brautaset, Rune Standal, Espen Fjarvik, Svein Valla (1994) Nucleotide sequence and expression analysis of the Acetobacter xylinum phosphoglucomutase gene Microbiology, Vol 140, pp 1183-1188 42 USP25, p 1895-1896 43 Wan, WK & Millon E (2005) Poly (vinyl alcohol) - bacterial cellulose nanocomposite V S Pat Appl Publ US 2005037082 Al, 16 44 Zaar K (1979) Visualization of pores (export sites) correlated with cellulose production in the envelope of the gram-negative bacterium Acetobacter xylinum J Cell Biology, Vol 80, pp 773-777 TL62 45 http://www.esf.edu/cellulose/conferences/cel-phf/saxena.pdf 46 http://www.google.com Khoá luận K32 cử nhân sinh 45 tèt nghiÖp ... ởng nguồn cacbon tới khả tạo màng BC - B- ớc đầu nghiên cứu ứng dụng tạo màng tr b ng thỏ N i dung nghiên c u - Nghiên c u m t s đ c tính sinh h c c a ch ng A xylinum BHN2 CH14 n ch n - Nghiên cứu. .. bacteria cellulose chủng Acetobacter xylinum BHN2 CH ứng dụng tạo màng trị báng” M c tiêu c a đ tƠi - Nghiên c u m t s đ c tính sinh h c c a ch ng A xylinum BHN2 CH14 ó n ch n - Nghiên cứu ảnh h-... trình lên men tạo màng hai chđng A xylinum BHN2 CH14 ®· tun chän + Nghiên cứu ảnh h- ởng nguồn cacbon (fructose, glucose, saccarose, sobitol, ethanol) tới khả tạo màng BC + Nghiên cứu ảnh h- ởng
Ngày đăng: 27/06/2020, 11:19
Xem thêm: